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绿僵菌分解昆虫外壳蛋白酶MAP-21的纯化与特性

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微生物学报 2000年第3期40卷 306-311页

作者：裴炎冀志霞杨星勇卢晓风夏玉先西南农业大学生物技术研究中心重庆400716

以蝉蜕为底物诱导绿僵菌产生分解昆虫外壳蛋白酶。发酵液经超滤、UltrogelAcA54凝胶层析、制备IEF电泳 ,纯化了一种蛋白酶MAP - 2 1 ,SDS -PAGE电泳后经银染色呈单带。该酶的Mr为 2 7kD左右 ,pI为 7 6。它的特异识别氨基酸为Arg,其活性... 详细信息

以蝉蜕为底物诱导绿僵菌产生分解昆虫外壳蛋白酶。发酵液经超滤、UltrogelAcA54凝胶层析、制备IEF电泳 ,纯化了一种蛋白酶MAP - 2 1 ,SDS -PAGE电泳后经银染色呈单带。该酶的Mr为 2 7kD左右 ,pI为 7 6。它的特异识别氨基酸为Arg,其活性可被PMSF和TLCK抑制 ,表明其活性中心有Ser和His残基。它还可被胰蛋白酶的典型抑制剂Leu peptin、Antipain及STI等所抑制 ,而胰凝乳蛋白酶抑制剂TPCK和胰凝乳弹性蛋白酶抑制剂TEI对其活性无影响。专一底物和抑制剂特性试验结果表明MAP - 2 1是类胰蛋白酶。此外 ,该酶还可被EDTA所抑制 ,表明金属离子为其活性所必需。另外还研究了MAP - 2 1的最适作用温度和 pH ,以及温度耐受性等特性。

关键词：绿僵菌蛋白酶纯化昆虫病原真菌生物防治

3种绿僵菌对筛胸梳爪叩甲幼虫的毒力及保护酶活性的影响

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林业科学 2018年第6期54卷 100-108页

作者：叶碧欢张亚波舒金平吴鸿王浩杰中国林业科学研究院亚热带林业研究所杭州311400 浙江省林业科学研究院杭州310023

【目的】探索绿僵菌侵染后竹林筛胸梳爪叩甲幼虫保护酶系统的应答反应,为筛选高致病力的绿僵菌菌株提供依据。【方法】生物测定平沙绿僵菌WP08菌株、金龟子绿僵菌WTKH菌株及蝗虫绿僵菌菌株3种菌株在不同浓度条件下对该幼虫的致病力,同... 详细信息

【目的】探索绿僵菌侵染后竹林筛胸梳爪叩甲幼虫保护酶系统的应答反应,为筛选高致病力的绿僵菌菌株提供依据。【方法】生物测定平沙绿僵菌WP08菌株、金龟子绿僵菌WTKH菌株及蝗虫绿僵菌菌株3种菌株在不同浓度条件下对该幼虫的致病力,同时测定不同侵染时期幼虫超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)及过氧化氢酶(CAT)3种保护酶含量及活性变化情况。【结果】3株绿僵菌对筛胸梳爪叩甲幼虫均具有致死性,WP08菌株最优,WTKH菌株次之,蝗虫绿僵菌最低。不同菌株的致病力随着浓度的增加而提高,WP08菌株在108spore·g^(-1)干土浓度条件下的致病效果最好,16天时供试幼虫已经全部死亡,但与107spore·g^(-1)干土浓度条件下的致病效果无显著差异。幼虫的3种保护酶在抗绿僵菌侵染过程中其活性变化趋势不同,SOD活性变化无显著差异,CAT活性变化则表现为先下降后上升再下降的趋势,POD活性波动虽与CAT相似,但其后期(5~7天)差异不显著。【结论】平沙绿僵菌WP08菌株对筛胸梳爪叩甲幼虫的致病性优于其他2种菌株,可作为林间应用的首选菌株。绿僵菌可对竹林金针虫体内的3种保护酶活性产生不同程度的影响,且在本次取样时间内CAT的活性变化较明显。

关键词：筛胸梳爪叩甲幼虫绿僵菌致病力保护酶

绿僵菌钙传感蛋白基因克隆及其与致病性的关系

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应用与环境生物学报 2012年第2期18卷 240-244页

作者：李敏曹月青重庆大学生物工程学院基因工程中心、重庆市杀虫真菌生物农药工程中心重庆400044

通过筛选文库获得绿僵菌钙传感蛋白基因MaNcs1基因全长cDNA序列,并对其在致病过程中的作用进行了分析.结果显示,MaNcs1基因cDNA全长792 bp,开放阅读框为573 bp,编码190个氨基酸;采用RNA干扰技术下调该基因的表达后,对东亚飞蝗的生测实... 详细信息

通过筛选文库获得绿僵菌钙传感蛋白基因MaNcs1基因全长cDNA序列,并对其在致病过程中的作用进行了分析.结果显示,MaNcs1基因cDNA全长792 bp,开放阅读框为573 bp,编码190个氨基酸;采用RNA干扰技术下调该基因的表达后,对东亚飞蝗的生测实验表明,绿僵菌毒力显著下降,说明该基因与绿僵菌的致病性有关,为以后深入研究该基因的致病机制奠定了基础.

关键词：绿僵菌 MaNcs1 钙传感蛋白 RNA干扰致病性毒力

4株绿僵菌的鉴定及对松褐天牛成虫致病效果比较

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林业科学 2020年第1期56卷 103-111页

作者：张亚波张威张守科彭瀚孟珂舒金平王浩杰中国林业科学研究院亚热带林业研究所富阳311400 河南科技学院新乡453003

【目的】为筛选对松褐天牛毒力更高的微生物资源,开展生物防治通过培养性状、分生孢子形态及系统发育树鉴定4个绿僵菌菌株,比较测定各自对松褐天牛的毒力。【方法】对4株绿僵菌的培养性状和分生孢子形态特征进行描述,并对4株绿僵菌的EF-... 详细信息

【目的】为筛选对松褐天牛毒力更高的微生物资源,开展生物防治通过培养性状、分生孢子形态及系统发育树鉴定4个绿僵菌菌株,比较测定各自对松褐天牛的毒力。【方法】对4株绿僵菌的培养性状和分生孢子形态特征进行描述,并对4株绿僵菌的EF-1α基因进行克隆和测序,构建系统进化发育树,综合鉴定4株绿僵菌的分类地位。测定了不同孢子浓度及接种方法(浸虫、浸枝和无纺布)对松褐天牛成虫的致病效果,构建4个菌株对松褐天牛的毒力方程。【结果】1)菌株WTKH和WP08鉴定为平沙绿僵菌;菌株LV2鉴定为金龟子绿僵菌;菌株qc1401鉴定为瘿绵蚜绿僵菌。2)平沙绿僵菌WP08菌株和金龟子绿僵菌LV2菌株对松褐天牛校正死亡率较高,瘿绵蚜绿僵菌qc1401菌株次之,平沙绿僵菌WTKH菌株最低。4个菌株对松褐天牛的致死速度依次为WP08>LV2>qc1401>WTKH,LT50分别为5.52、10.38、16.93和20.80天。3)以平沙绿僵菌WP08为供试菌株,在1.0×10^8、1.0×10^7、1.0×10^6个·m L^-1共3个浓度下,孢子浓度越高则松褐天牛校正死亡率越高、半数死亡时间越短,孢子浓度为1.0×10^8、1.0×10^7时,试验期内校正死亡率均达到100%;半数死亡时间LT50分别为11.38、16.44和24.22天。4)以平沙绿僵菌WP08为供试菌株,3种接种方法40天内松褐天牛死亡率均为100%,LT50浸虫法为5.52天,浸枝法为11.38天,无纺布法为17.21天。【结论】4株绿僵菌均可侵染松褐天牛致其死亡,其中,平沙绿僵菌WP08的致死率和致死速度较快,为防治松褐天牛的优良菌株。

关键词：虫生真菌绿僵菌松褐天牛毒力测定 EF-1α LT50

基于GC-MS的绿僵菌代谢组学前处理技术研究

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华南农业大学学报 2021年第5期42卷 69-79页

作者：杨华徐金柱赵丹阳邱华龙田龙燕秦长生华南农业大学农学院广东广州510642 广东省林业科学研究院/广东省森林培育与保护利用重点实验室广东广州510520

【目的】基于GC-MS技术对绿僵菌Metarhizium代谢物前处理技术进行优化,以期建立适用于绿僵菌的快速、准确的代谢组检测方法。【方法】优化绿僵菌代谢物的淬灭、提取、衍生和检测方法,测定方法的稳定性。【结果】40%(φ)冷乙醇溶液淬灭... 详细信息

【目的】基于GC-MS技术对绿僵菌Metarhizium代谢物前处理技术进行优化,以期建立适用于绿僵菌的快速、准确的代谢组检测方法。【方法】优化绿僵菌代谢物的淬灭、提取、衍生和检测方法,测定方法的稳定性。【结果】40%(φ)冷乙醇溶液淬灭后核酸和蛋白回收率分别为9.63%和11.61%,淬灭效果优于其他淬灭剂;冷甲醇法可提取到代谢物109种,多于其他方法;衍生的时间越长,获得的代谢物越多,衍生1.5 h效果最好;气相色谱检测起始温度过高不利于代谢物的获得,50℃效果最好。最佳条件如下:40%(φ)冷乙醇溶液淬灭后用2 mL冷甲醇提取,离心后将上清液用N2吹干,加入20 mg/mL的甲氧基胺盐酸盐吡啶溶液80μL,剧烈振荡30 s后,在37℃环境中反应90 min,反应结束后冷却至室温,然后加入含1%(φ)TMCS的BSTFA衍生剂80μL,在70℃条件下反应,衍生1.5 h后冷却至室温。【结论】该方法简单、方便、重复性好。该方法的建立有助于开展更深入的代谢机制相关研究,为农、林领域开展病原微生物代谢组相关研究提供参考。

关键词：代谢组学绿僵菌淬灭提取前处理 GC-MS

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绿僵菌与小檗碱复配制备水分散粒剂

北京化工大学学报（自然科学版） 2022年第1期49卷 79-89页

作者：杨肖葛喜珍刘国新田平芳北京化工大学生命科学与技术学院北京100029 北京联合大学生物化学工程学院北京100023 河北省化工研究院有限公司石家庄050031

将金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)和小檗碱复配为水分散粒剂,可以起到既抗虫又抗病的双重效果,并且可降低田间施药的成本。测得小檗碱对绿僵菌的有效中浓度(EC_(50))为47.2 mg/mL,表明小檗碱对绿僵菌没有明显的抑制作用;根据以... 详细信息

将金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)和小檗碱复配为水分散粒剂,可以起到既抗虫又抗病的双重效果,并且可降低田间施药的成本。测得小檗碱对绿僵菌的有效中浓度(EC_(50))为47.2 mg/mL,表明小檗碱对绿僵菌没有明显的抑制作用;根据以往绿僵菌的田间试验及小檗碱的抗真菌实验,确定小檗碱的最终添加量为3%(质量分数)。在单因素试验的基础上,利用响应面法确定水分散粒剂的配方为:25%绿僵菌孢子粉、3%小檗碱、3%乳化剂NP-10(润湿剂)、2.1%亚甲基双甲基萘磺酸钠(分散剂)、5.3%木质素磺酸钙(分散剂)、18%海藻酸钠(崩解剂)、1.7%羧甲基纤维素钠(黏结剂),用硅藻土(载体)补足100%(均为各成分占制剂的质量分数)。按照此配方在造粒机中制备了水分散粒剂,质量检测结果表明:所制备的水分散粒剂的崩解时间为174 s,孢子萌发率为85.4%,孢子悬浮率为86.34%,含水量为1.88%,杂菌率为2.01%,符合相关行业标准。

关键词：小檗碱绿僵菌水分散粒剂崩解时间生物农药

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绿僵菌相容性杀虫剂筛选及混用防治椰心叶甲

华南农业大学学报 2008年第2期29卷 44-46页

作者：秦长生徐金柱谢鹏辉许志斌廖仿炎广东省林业科学研究院广东广州510520 南昌大学生命科学院江西南昌330012

根据6种常用杀虫剂的常规使用浓度、亚致死浓度、次亚致死浓度对金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae M09菌株菌落生长的影响结果，筛选了与绿僵菌相容的杀虫剂，并选用适当剂量的杀虫剂与绿僵菌混用，防治椰心叶甲Brontispa longissim... 详细信息

根据6种常用杀虫剂的常规使用浓度、亚致死浓度、次亚致死浓度对金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae M09菌株菌落生长的影响结果，筛选了与绿僵菌相容的杀虫剂，并选用适当剂量的杀虫剂与绿僵菌混用，防治椰心叶甲Brontispa longissima．结果表明，供试的6种杀虫剂对绿僵菌生长有不同程度的抑制作用，其中杀虫单的抑制作用最弱，亚致死剂量药剂5d后对菌落生长的抑制率为15％，10d后下降到5．90％，次亚致死剂量5d和10d对菌落生长的抑制率均低于5％，与绿僵菌有较好的相容性．低剂量杀虫单与绿僵菌混用防治椰心叶甲成虫具有协同作用，亚致死剂量和次亚致死剂量的杀虫单和绿僵菌混用，防治椰心叶甲的致死率分别达93．33％和81．11％，要明显高于单独使用绿僵菌（75．56％）和单独使用亚致死和次亚致死剂量杀虫单（10％～30％），具有较好的应用前景．

关键词：绿僵菌椰心叶甲相容性致死率

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绿僵菌防治烟田主要害虫的研究进展与展望

中国烟草科学 2015年第5期36卷 101-107页

作者：杨华杨恩兰张功营万树青华南农业大学农学院华南农业大学天然农药与化学生物学教育部重点实验室广州510640

综述了国内外利用绿僵菌防治烟田害虫的研究进展,讨论了利用绿僵菌防治害虫存在的问题及解决途径,展望了绿僵菌在烟田害虫的综合防治上具有巨大潜力和将发挥其重要作用。指出通过分子生物学技术以及复配剂的应用等手段,绿僵菌应用可以... 详细信息

综述了国内外利用绿僵菌防治烟田害虫的研究进展,讨论了利用绿僵菌防治害虫存在的问题及解决途径,展望了绿僵菌在烟田害虫的综合防治上具有巨大潜力和将发挥其重要作用。指出通过分子生物学技术以及复配剂的应用等手段,绿僵菌应用可以成为烟田害虫的有效生物防治方法。

关键词：绿僵菌烟草害虫研究进展

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绿僵菌药后草原蝗虫种群空间分布型研究

昆虫学报 2008年第8期51卷 883-888页

作者：宋树人张泽华高松农向群王广君中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100081

综合多个聚集度指标对绿僵菌药后田间蝗虫和僵虫的空间分布型进行了研究。结果表明:施药后不同时间随蝗虫种群密度的减小,处理区残虫的分布型呈现聚集-随机交错变动,僵虫的空间分布型为聚集分布。采用Taylor幂法则和改进的Iwao模型分析... 详细信息

综合多个聚集度指标对绿僵菌药后田间蝗虫和僵虫的空间分布型进行了研究。结果表明:施药后不同时间随蝗虫种群密度的减小,处理区残虫的分布型呈现聚集-随机交错变动,僵虫的空间分布型为聚集分布。采用Taylor幂法则和改进的Iwao模型分析表明,整个调查时段处理区残虫、僵虫的空间分布均为聚集分布。推测认为,药后蝗虫点片状死亡,部分地片相对密度较高,残虫分布型趋向聚集;自然消除作用使僵虫密度很低,低密度下取样产生大量空样本,僵虫的分布型产生聚集假象。

关键词：草原蝗虫生物防治绿僵菌疾病流行种群空间分布聚集分布