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结核杆菌抗原对人γδT细胞体外增殖影响

中国公共卫生 2008年第6期24卷 670-671页

作者：佟伟李宏伟潘兴瑜辽宁医学院免疫与病原生物学教研室锦州121001 中国医科大学免疫学教研室

目的观察结核杆菌抗原(Mtb-Ag)对人γδT细胞体外增殖的影响,以解决医学研究中γδT细胞来源不足问题。方法应用酸性改良罗氏培养基分离培养结核杆菌及丙酮酸钠液体培养基进行扩增,通过85℃水浴灭活,超声波细胞破碎制备Mtb-Ag。在体外... 详细信息

目的观察结核杆菌抗原(Mtb-Ag)对人γδT细胞体外增殖的影响,以解决医学研究中γδT细胞来源不足问题。方法应用酸性改良罗氏培养基分离培养结核杆菌及丙酮酸钠液体培养基进行扩增,通过85℃水浴灭活,超声波细胞破碎制备Mtb-Ag。在体外以不同的剂量刺激人外周血单个核细胞(PBMC),采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测增殖程度,应用流式细胞仪检测γδT细胞增殖的百分率。结果在一定范围内随着刺激剂量的增加PBMC增殖亦增加。流式细胞仪分析增殖结果显示,7μg/ml刺激组γδT细胞的增殖率最高(约为49.08%)。但当刺激剂量增加至9μg/ml时,γδT细胞增殖比率开始降低(约为32.62%),而αβT细胞增殖比率增加明显(约为36.76%)。结论Mtb-Ag在合适刺激剂量时,可对人γδT细胞发挥优势扩增;当剂量过大时则对αβT细胞发挥优势扩增。

关键词：结核杆菌抗原 γδT细胞增殖

结核杆菌抗原诱导的人γδT细胞表达L-选择素的调控机制

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现代免疫学 2006年第5期26卷 413-417页

作者：武文娟李柏青蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室(蚌埠医学院)

采用CD62L生物素-链霉亲和素染色流式细胞术检测L-选择素在细胞表面表达的方法，分别观察新鲜PBMC和刺激后培养3～21d的γδT细胞表面L-选择素的表达，并研究培养6～7d的MtbAT预先用LY294002（PI3K途径抑制剂）、SB203580（p38途径抑制... 详细信息

采用CD62L生物素-链霉亲和素染色流式细胞术检测L-选择素在细胞表面表达的方法，分别观察新鲜PBMC和刺激后培养3～21d的γδT细胞表面L-选择素的表达，并研究培养6～7d的MtbAT预先用LY294002（PI3K途径抑制剂）、SB203580（p38途径抑制剂）、PD98059（MEK抑制剂）分别处理20min，然后用Mtb-Ag再刺激3h时γδT细胞表面L-选择素的表达情况。结果显示新鲜PBMC中γδT细胞L-选择素的表达率为（43．9％±6．7％），γδT细胞L-选择素的表达率为（76．6％±7．9％），有显著差异（P〈0．05）。用Mtb-Ag激活后培养第6天时L-选择素在γδT细胞的表达达到高峰（90．7％）；以后L-选择素表达逐渐下降，15～21dγδT细胞L-选择素的表达在低水平（16．2％～10．6％）维持；Mtb—Ag再刺激MtbAT诱导γδT细胞L-选择素表达下调为69．5％，预先加入LY294002或PD98059，则L-选择素表达率分别为83．1％和78．7％；而加入SB203580未见明显影响。提示γδT细胞活化时L-选择素表达调控与PI3K、Ras／Erk途径有关，但与p38MAPK途径无关。

关键词： L-选择素 γδT细胞结核杆菌抗原信号转导

结核杆菌抗原诱导活化的人γδT细胞L-选择素的表达规律及调控机制

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结核杆菌抗原诱导活化的人γδT细胞L-选择素的表达规律及调控机制

作者：武文娟安徽医科大学

学位级别：硕士

目的 (1)探讨L-选择素(CD62L)在结核杆菌抗原(Mtb-Ag)诱导人γδT细胞表达的动力学特征;(2)观察不同细胞因子对活化人γδT细胞表达L-选择素的调节作用;(3)应用信号分子阻断剂初步探讨PKC，P13K，MAPK等信号途径在人γδT细胞活化过程中... 详细信息

目的 (1)探讨L-选择素(CD62L)在结核杆菌抗原(Mtb-Ag)诱导人γδT细胞表达的动力学特征;(2)观察不同细胞因子对活化人γδT细胞表达L-选择素的调节作用;(3)应用信号分子阻断剂初步探讨PKC，P13K，MAPK等信号途径在人γδT细胞活化过程中对L-选择素表达的调控作用。方法 (1)正常人外周血单个核细胞分别用Mtb-Ag和CD3单抗(CD3mAb)刺激并加IL-2培养扩增，分别获得Mtb-Ag激活的T细胞(MtbAT)(γδT细胞为主)和CD3mAb激活的T细胞(CD3AT)(αβT细胞为主)。(2)取新鲜PBMC和刺激后培养3～21天的γδT细胞和αβT细胞，用多色荧光抗体标记，在流式细胞仪上检测γδT细胞表面L-选择素的表达，并与αβT细胞作比较。(3)Mtb-Ag初次与再次刺激人γδT细胞分别培养7天，在培养同时分别按组加入IFN-γ、anti-IFN-γ、IL-12、anti-IL-12，并与培养的不同时间分别收集细胞，检测L-选择素表达情况。(4)培养6d～8d的MtbAT分别加入PMA、Ionomycin(IMN)、PMA+IMN培养3h、6h、12h、24h后，应用流式细胞术(FCM)分别检测L-选择素的表达率。(5)培养8天的γδT细胞分别加入Mtb-Ag、Rotterin+Mtb-Ag、PMA、Rotterin+PMA刺激4h，收集细胞并检测L-选择素表达。(6)MtbAT或CD3AT预先用LY294002(P13K途径抑制剂)、SB203580(p38途径抑制剂)、

关键词： L-选择素 γδT细胞 αβT细胞结核杆菌抗原 IL-12 IFN-γ PMA IMN 信号转导

结核杆菌抗原激活MEK-ERK信号通路延迟中性粒细胞自发性凋亡的作用

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现代免疫学 2006年第6期26卷 504-507页

作者：宋传旺刘琦唐洁葛晓松吕合作蚌埠医学院免疫学教研室蚌埠233003

探讨结核杆菌抗原(Mtb-Ag)对中性粒细胞自发性凋亡的影响。取健康成人外周血分离中性粒细胞,加Mtb-Ag培养24 h,或用Mek抑制剂PD98059预处理30 min,Annexin V染色流式细胞术观察细胞凋亡;并用Western blot印迹法检测Mek活化情况。与中性... 详细信息

探讨结核杆菌抗原(Mtb-Ag)对中性粒细胞自发性凋亡的影响。取健康成人外周血分离中性粒细胞,加Mtb-Ag培养24 h,或用Mek抑制剂PD98059预处理30 min,Annexin V染色流式细胞术观察细胞凋亡;并用Western blot印迹法检测Mek活化情况。与中性粒细胞体外培养24 h后自发凋亡(55%±6%)相比,加入Mtb-Ag(1.125 mg/ml)后,中性粒细胞凋亡率(31%±3%)明显降低;并且Mtb-Ag可诱导Mek的激活;而PD98059(50μmol/L)预处理可阻断Mtb-Ag的抑制凋亡作用。Mtb-Ag对中性粒细胞自发凋亡有抑制作用,这一作用涉及Mek-Erk途径。

关键词：中性粒细胞凋亡结核杆菌抗原

PKCθ在结核杆菌抗原刺激人γδT细胞NFκB活化中的作用

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免疫学杂志 2010年第12期26卷 1034-1038页

作者：孙大康安新业宋向芹滨州医学院附属医院临床医学实验中心 266603

目的初步探讨PKCθ在结核杆菌抗原(MtbAg)刺激γδT细胞转录因子NFκB活化中的作用。方法 MtbAg刺激健康人外周血单个核细胞(PBMC),获得γδT细胞优势扩增细胞群。PKCθ选择性阻断剂rottlerin(粗糠柴毒素)预处理,MtbAg刺激γδT细胞,通... 详细信息

目的初步探讨PKCθ在结核杆菌抗原(MtbAg)刺激γδT细胞转录因子NFκB活化中的作用。方法 MtbAg刺激健康人外周血单个核细胞(PBMC),获得γδT细胞优势扩增细胞群。PKCθ选择性阻断剂rottlerin(粗糠柴毒素)预处理,MtbAg刺激γδT细胞,通过凝胶电泳迁移率变动分析(EMSA)检测γδT细胞NFκB活性,流式细胞术(FCM)检测γδT细胞活化分子CD69的表达。结果 MtbAg刺激30min,γδT细胞NFκB活性逐渐增加,刺激60min时NFκB活性显著增强;rottlerin使Mt-bAg激发的γδT细胞NFκB活性明显减弱。Rottlerin可显著抑制MtbAg诱导的γδT细胞活化分子CD69的表达(P<0.01)。结论 PKCθ参与MtbAg诱导的γδT细胞转录因子NFκB活化。

关键词：结核杆菌抗原 γδT细胞蛋白激酶Cθ 核因子κB

脑脊液单核细胞内结核杆菌抗原检测对结核性脑膜炎的诊断价值

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脑脊液单核细胞内结核杆菌抗原检测对结核性脑膜炎的诊断价值

作者：常晓琳第四军医大学

学位级别：硕士

由于多重耐药结核菌的流行、人类免疫缺陷病毒的感染及贫穷等多种因素的影响,结核病发病率呈日益回升的严重趋势,结核性脑膜炎(TBM)的发病率亦逐渐升高。TBM是严重的中枢神经系统感染性疾病,病死率和病残率均较高,而早期诊断、早期治疗... 详细信息

由于多重耐药结核菌的流行、人类免疫缺陷病毒的感染及贫穷等多种因素的影响,结核病发病率呈日益回升的严重趋势,结核性脑膜炎(TBM)的发病率亦逐渐升高。TBM是严重的中枢神经系统感染性疾病,病死率和病残率均较高,而早期诊断、早期治疗是降低病死率、病残率的关键。目前尚无一种可靠实用的诊断方法能够满足临床诊断的需要。结核分支杆菌(MTB)是胞内寄生菌,侵入机体后主要寄生于宿主单核巨噬细胞内。机体感染MTB后体内首先出现的是结核抗原,而结核抗原的检出不受宿主免疫状态的影响。故本实验欲评价检测脑脊液(CSF)单核细胞内结核抗原对TBM诊断的价值,试图为TBM的诊断提供一种有效的方法。本实验以临床诊断为中枢神经系统感染的85例患者为研究对象,运用免疫细胞化学方法检测了其CSF和外周血(PB)单核细胞内结核菌素纯化蛋白衍生物(PPD)和早期分泌抗原靶6(ESAT-6),并应用流行病学实验和分析的方法,以受广泛认可的TBM临床诊断标准作为“金标准”,把研究对象分为TBM组(45例)和对照组(非MTB感染的中枢神经系统感染患者40例),评价了检测CSF和PB单核细胞内PPD及ESAT-6抗原诊断TBM的价值。实验结果:1.检测CSF单核细胞内PPD抗原,TBM组39例有阳性染色,对照组10例有阳性染色;检测ESAT-6抗原,TBM组39例有阳性染色,对照组6例有阳性染色。2.检测PB单核细胞内结核抗原,PPD和ESAT-6结果一致,TBM组11例有阳性染色,对照组无阳性染色。3.检测CSF单核细胞内PPD抗原和ESAT-6抗原诊断结脑的敏感度均为86.7%,特异度分别为87.5%和92.5%。4.检测PB单核细胞内PPD抗原和ESAT-6抗原诊断结脑的敏感度均为24.4%,特异度均为100%。5.TBM组CSF和PB的PPD、ESAT-6阳性细胞百分率均显著高于对照组(P结核抗原诊断TBM的灵敏度和特异度均较理想,且容易开展,可用于TBM的诊断,值得推广应用。而检测PB单核细胞内结核抗原诊断TBM的灵敏度较低,价值有限。

关键词：结核性脑膜炎脑脊液单核细胞结核杆菌抗原纯化蛋白衍生物早期分泌抗原靶6

结核杆菌抗原对中性粒细胞自发性凋亡的抑制作用

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蚌埠医学院学报 2007年第2期32卷 127-129页

作者：宋传旺葛晓松李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室(蚌埠医学院) 安徽蚌埠233030

目的:探讨结核杆菌抗原(Mtb-Ag)对体外培养中性粒细胞自发性凋亡的影响。方法:取健康成人外周血分离中性粒细胞,加Mtb-Ag培养24 h,或用Mek抑制剂PD98059预处理30 min后,Wright-Giemsa染色形态学方法和Annexin-V染色流式细胞术观察细胞... 详细信息

目的:探讨结核杆菌抗原(Mtb-Ag)对体外培养中性粒细胞自发性凋亡的影响。方法:取健康成人外周血分离中性粒细胞,加Mtb-Ag培养24 h,或用Mek抑制剂PD98059预处理30 min后,Wright-Giemsa染色形态学方法和Annexin-V染色流式细胞术观察细胞凋亡。结果:与中性粒细胞体外培养24 h后自发凋亡(55±10)%相比,加入Mtb-Ag(1.125 mg/ml)后,中性粒细胞自发凋亡率(31±3)%明显降低(P<0.01);Mek抑制剂PD98059(50μmol/L)可阻断Mtb-Ag的抑制凋亡作用(P<0.01)。结论:Mtb-Ag对中性粒细胞自发性凋亡有抑制作用,这一作用可能涉及Mek-Erk途径。

关键词：结核中性粒细胞细胞凋亡结核杆菌抗原

探讨ELISA法检测血清结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值

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实验与检验医学 2010年第6期28卷 537-538页

作者：张周云熊国亮江西省胸科医院检验科江西南昌330006

目的探讨检测结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值。方法应用酶联免疫吸附试验检测血清中的结核杆菌分泌蛋白desA抗原。结果 139例活动性肺结核患者血清结核抗原的阳性检出率为84.1%;64例非结核性肺部疾病组结核抗原阳性率7.81%,29例健康... 详细信息

目的探讨检测结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值。方法应用酶联免疫吸附试验检测血清中的结核杆菌分泌蛋白desA抗原。结果 139例活动性肺结核患者血清结核抗原的阳性检出率为84.1%;64例非结核性肺部疾病组结核抗原阳性率7.81%,29例健康对照者均为阴性。特异性为92.19%。结论检测血清中结核杆菌分泌蛋白desA抗原对诊断肺结核病有较高的应用价值。

关键词：肺结核酶联免疫吸附试验结核杆菌抗原

检测结核杆菌抗原的双抗体夹心间接ELISA法的建立及其应用

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细胞与分子免疫学杂志 1991年第4期 64-64页

作者：朱中元湖北医学院微生物学教研室武昌 430077

作者建立了一种检测结核分枝杆菌抗原的双抗体夹心间接ELISA的方法并介绍了其应用情况。用鼠源性抗结核杆菌单克隆抗体包被酶标反应板,依次加入经0.5％胰蛋白酶消化的肺结核病人痰液标本,人免抗结核杆菌超免疫血清和酶标羊抗兔IgG孵育后... 详细信息

作者建立了一种检测结核分枝杆菌抗原的双抗体夹心间接ELISA的方法并介绍了其应用情况。用鼠源性抗结核杆菌单克隆抗体包被酶标反应板,依次加入经0.5％胰蛋白酶消化的肺结核病人痰液标本,人免抗结核杆菌超免疫血清和酶标羊抗兔IgG孵育后(每步均经孵育,洗涤),加底物显色。试验中采用结核杆菌Ho7RV株聚合OT免疫家兔制备的超免疫血清作为桥联抗体,既为试验的特异性奠定了基础,也避免了标记IgG的繁冗操作,减少了IgG的活性损失。

关键词：双抗体结核杆菌抗原痰液标本 ELISA