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黑曲霉糖化酶高产菌株的糖化酶结构基因的分离及其序列分析

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微生物学报 1994年第3期34卷 184-190页

作者：钟丽婵唐国敏杨开宇中国科学院微生物研究所北京100080

从糖化酶高产菌株(Aspergills niger)T21中分离出染色体***印跡分析表明糖化酶结构基因位于约2.5kb的EcoRⅠ-EcoRV片段中.该染色体DNA经EcorⅠ、EcoRⅤ完全酶切后,用琼脂糖凝胶电泳分离,回收2.0—3.0kb的片段,与载体pBR322连接后转化宿... 详细信息

从糖化酶高产菌株(Aspergills niger)T21中分离出染色体***印跡分析表明糖化酶结构基因位于约2.5kb的EcoRⅠ-EcoRV片段中.该染色体DNA经EcorⅠ、EcoRⅤ完全酶切后,用琼脂糖凝胶电泳分离,回收2.0—3.0kb的片段,与载体pBR322连接后转化宿主菌大肠杆菌DH5,获得转化子.通过原位杂交,从转化子中筛选出4个阳性克隆.阳性克隆的进一步酶切鉴定及序列分析表明,黑曲霉T21糖化酶结构基因大小为2.3kb,含有4个内含子.

关键词：黑曲霉糖化酶结构基因序列分析

草莓果实花色苷合成途径相关结构基因及FaMYB10表达模式差异分析

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果树学报 2020年第11期37卷 1636-1646页

作者：宋盼赵凤莉宋艳红赵倩倩李刚赵霞刘丽锋周厚成中国农业科学院郑州果树研究所郑州450009

【目的】分析不同颜色草莓果实中花色苷合成相关结构基因与FaMYB10的表达差异,以及FaMYB10转录调控的功能验证。【方法】以栽培草莓‘红颜’‘小白’和‘白雪公主’为试材,利用RNA-seq技术筛选花色苷合成差异表达基因并进行qRT-PCR验证... 详细信息

【目的】分析不同颜色草莓果实中花色苷合成相关结构基因与FaMYB10的表达差异,以及FaMYB10转录调控的功能验证。【方法】以栽培草莓‘红颜’‘小白’和‘白雪公主’为试材,利用RNA-seq技术筛选花色苷合成差异表达基因并进行qRT-PCR验证,利用同源重组法构建35S::FaMYB10过表达载体,通过离体果实瞬时转化验证其在果实花色苷合成调控中的作用。【结果】从3个品种不同时期果实转录组数据中筛选到8个参与果实花色苷合成的候选基因,包括FaPAL、FaCHI、FaCHS、FaDFR、FaANS、FaUFGT、Fa3GT和FaGST,这8个候选基因在‘红颜’和‘小白’成熟过程中表达量逐渐升高,且均显著高于‘白雪公主’,基因表达模式与3个品种果实花色苷的合成积累模式相一致。qRT-PCR结果表明,果实发育成熟期FaMYB10在‘白雪公主’和‘小白’果实中的表达量均显著高于‘红颜’,其表达模式与转录水平变化一致。‘小白’FaMYB10-XB基因编码区序列存在2种类型,其中FaMYB10-XB-2插入序列GA;‘白雪公主’FaMYB10-SW编码区序列具有ACTTATAC插入。果实瞬时过表达结果证明FaMYB10可增加花色苷的合成和积累。【结论】不同表型果实在各个时期,果实总花色苷含量水平有显著差异;8个候选基因中,FaCHI、FaDFR、FaANS和FaGST在果实发育成熟中,白果类型的表达水平显著低于红果类型,推测其可能是参与果实花色苷合成途径的关键结构基因;然而,白果类型FaMYB10的表达水平却显著高于红果类型;果实瞬时转化证明FaMYB10是不同颜色果实花色苷合成的关键正调控因子,但FaMYB10序列突变使其调控功能丧失,可能是白果类型花色苷积累缺失的原因。

关键词：草莓花色苷合成结构基因转录因子基因表达

地中海拟无枝菌酸菌U32中生物素羧基载体蛋白结构基因的克隆、表达及转录

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微生物学报 2003年第1期43卷 56-64页

作者：卢捷姚玉峰姜卫红焦瑞身中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所微生物次生代谢分子调控开放实验室上海200032

乙酰辅酶A羧化酶 (AcetylCoACarboxylaseEC 6.4.1 .2 ,ACC)催化依赖于ATP的乙酰辅酶A羧化形成丙二酸单酰辅酶A ,该反应是脂肪酸生物合成途径中的第一步 ,也是受到调控的关键一步。根据结核分枝杆菌 (M .tuberculosis)和天蓝色链霉菌 (S ... 详细信息

乙酰辅酶A羧化酶 (AcetylCoACarboxylaseEC 6.4.1 .2 ,ACC)催化依赖于ATP的乙酰辅酶A羧化形成丙二酸单酰辅酶A ,该反应是脂肪酸生物合成途径中的第一步 ,也是受到调控的关键一步。根据结核分枝杆菌 (M .tuberculosis)和天蓝色链霉菌 (S .coelicolor)中ACC -α亚基的氨基酸保守序列和地中海拟无枝菌酸菌U32对氨基酸密码子的使用偏好 ,设计简并引物以U32基因组DNA为模板扩增出一条约 2 5 0bp的片段 ,并以此片段作探针成功地从U32基因组cosmid文库中克隆到相应的ACC -α亚基的编码基因accA。该基因对应的ORF长1 797bp,编码一个 5 98个氨基酸的蛋白 ,推算出的分子量是 63,71 4Da ;基因G +Cmol%含量为70 .1 % ,符合U32基因结构特征 ,距起始密码子GTG上游 6个碱基处有链霉菌典型的RBS序列AGGAGG ,并有生物素羧化酶特征的ATP结合区。利用pET2 8(b)系统构建表达载体 ,在E .coliBL2 1 (DE3)中实现了accA的诱导表达 ,产物大部分以可溶形式存在 ,并通过WesternBlot证明该蛋白上确有共价结合的生物素。NorthernBlot分析了各种氮源对accA基因转录水平的不同影响。

关键词：地中海拟无枝菌酸菌U32 生物素羧基载体蛋白结构基因克隆表达转录

利用结构基因法研究非线性周期性板结构的等效力学性能

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计算力学学报 2021年第5期38卷 631-637页

作者：贾贻然韩灵芝雷金成刘子顺西安交通大学航天航空学院机械结构强度与振动国家重点实验室国际应用力学中心西安710049

非线性周期性板结构是一类在智能复合材料领域具有巨大应用潜力的结构,因其构成材料的非线性特性,以及结构中经常包含增强纤维、肋板和空洞等复杂微结构导致的材料几何非线性,利用常规的有限元方法进行建模和分析较为困难。本文提出了... 详细信息

非线性周期性板结构是一类在智能复合材料领域具有巨大应用潜力的结构,因其构成材料的非线性特性,以及结构中经常包含增强纤维、肋板和空洞等复杂微结构导致的材料几何非线性,利用常规的有限元方法进行建模和分析较为困难。本文提出了一种结构基因法,通过提取非线性周期性板结构的最小模型单元作为其结构基因,将异质周期性板结构等效为均质板结构,便捷地求解了非线性周期性板结构的微观力学性能和整体等效力学性能。算例表明,结构基因方法可用来分析复杂非线性复合材料结构问题,计算结果精度足够,为复合材料微观力学研究提供了有价值的参考。

关键词：周期性复合材料板等效力学性能结构基因

中国HIV-1 CRF01_AE流行株结构基因和调节／辅助基因DNA疫苗的构建和免疫原性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第4期30卷 355-359页

作者：袁松华万延民仇超张聪优黄杨乔勇叶芮琪邱趁丽张晓燕徐建青上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心 201508 复旦大学生物医学研究院

目的构建表达gag—env融合基因和tat-rev-integrase（c-half）-vif-nef融合基因的DNA疫苗，并评价其免疫原性。方法按人源密码子使用频率对AE2f株的gag、env、tat、rev、integrase、vif和nef基因序列进行优化，构建真核表达质粒。用West... 详细信息

目的构建表达gag—env融合基因和tat-rev-integrase（c-half）-vif-nef融合基因的DNA疫苗，并评价其免疫原性。方法按人源密码子使用频率对AE2f株的gag、env、tat、rev、integrase、vif和nef基因序列进行优化，构建真核表达质粒。用Westernblot法验证体外表达情况；用ELISPOT法检测小鼠的细胞免疫反应。结果限制性酶切及DNA测序结果表明两个融合基因质粒构建正确，可以表达相应的融合蛋白。ELISPOT结果显示，Gag—Env特异性的T细胞反应强度为（3010±566）SFC／10^6脾细胞；Tat-Rev—Integrase（***）-Vif-Nef融合蛋白特异性的T细胞反应为（948±737）SFC／10^6脾细胞，均显著高于空载体组。结论构建的表达HIV-1CRF01_AE流行株gag—env融合基因和tat—rev-integrase（c-half）-vif-nef融合基因的DNA疫苗可以正确表达所编码的融合蛋白并有效地激活机体的T细胞免疫反应。

关键词： HIV-1 艾滋病疫苗结构基因调节基因

编码PAc结构基因的DNA疫苗免疫动物的实验研究

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中华口腔医学杂志 2002年第1期37卷 4-7,T001页

作者：樊明文边专彭志翔郭继华贾荣陈智武汉大学口腔医学院牙体牙髓科 430079

目的　本项研究将已构建的编码pac结构基因A P片段的重组质粒pCIA P免疫Wistar大鼠 ,观察重组表面蛋白抗原PAc在大鼠体内不同组织中的原位表达以及免疫定菌鼠后的防龋效果。方法　重组质粒pCIA P经股四头肌肌肉注射和颌下腺区皮下注射... 详细信息

目的　本项研究将已构建的编码pac结构基因A P片段的重组质粒pCIA P免疫Wistar大鼠 ,观察重组表面蛋白抗原PAc在大鼠体内不同组织中的原位表达以及免疫定菌鼠后的防龋效果。方法　重组质粒pCIA P经股四头肌肌肉注射和颌下腺区皮下注射两种途径免疫大鼠 ,以免疫组化技术观察重组蛋白PAc在免疫部位的表达。采用股四头肌肌肉注射、颌下腺区皮下注射和颊粘膜下注射 3种方法免疫定菌鼠 ,ELISA法检测血清和唾液中特异性抗体水平 ,Keyes计分法评估免疫定菌鼠后鼠磨牙的患龋情况。结果　大鼠股四头肌细胞中可见PAc蛋白不均匀的受限表达 ,双侧颌下腺组织均可检测到PAc蛋白的阳性染色 ,在导管内表达呈强阳性。用重组质粒pCIA P经颌下腺区皮下注射和颊粘膜免疫的方法可显著增加唾液中抗PAc IgA水平和血清中特异性抗PAc IgG水平。重组质粒免疫定菌鼠后能显著降低定菌鼠龋损计分。特别是颌下腺区皮下和颊粘膜注射免疫组 ,大鼠牙本质龋的破坏程度明显低于其他组。结论　重组质粒pCIA P是一种有效的免疫原 ,粘膜免疫是较理想的DNA防龋疫苗的接种途径。

关键词： DNA疫苗变异链球菌龄齿 PAc 编码结构基因动物实验

鹿眼蛱蝶浓核病毒结构基因vp1-4在草地贪夜蛾幼虫体内的转录表达动态分析

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昆虫学报 2024年

作者：彭倩陈彦宁李如玉傅悦谌祖文黄冈师范学院经济林木种质改良与资源综合利用湖北省重点实验室

【目的】鹿眼蛱蝶浓核病毒(Junonia coenia densovirus， JcDV)通过漏扫描方式编码4个结构蛋白VP1， VP2， VP3和VP4。本研究旨在探究JcDV的这4个vp基因在草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda幼虫体内的转录表达特征，为深入研究结构蛋白VP... 详细信息

【目的】鹿眼蛱蝶浓核病毒(Junonia coenia densovirus， JcDV)通过漏扫描方式编码4个结构蛋白VP1， VP2， VP3和VP4。本研究旨在探究JcDV的这4个vp基因在草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda幼虫体内的转录表达特征，为深入研究结构蛋白VP1-4的功能及其组装机制提供依据。【方法】采用免疫荧光检测在转染pJcDV质粒的Hi5细胞内VP1-4的亚细胞定位；利用RT-PCR检测JcDV侵染草地贪夜蛾2龄幼虫后0， 3， 6， 12， 24， 48， 72， 96和120 h时vp1-4的总体表达量；采用Western blot检测JcDV侵染草地贪夜蛾2龄幼虫后0， 24， 48， 72， 96和120 h时VP1-4的总蛋白量；用免疫组织化学技术检测JcDV侵染草地贪夜蛾2龄幼虫后0， 24和96 h时VP1-4的组织表达特性。【结果】VP1-4主要位于Hi5细胞的细胞质中，少量以多聚体形式分布于细胞核内；JcDV侵染草地贪夜蛾2龄幼虫后3 h时可检测到vp1-4的转录并至少持续至120 h；JcDV侵染后24～120 h时可检测到VP1-4的表达；JcDV侵染草地贪夜蛾2龄幼虫后96 h时在虫体的表皮、气管等组织可检测到VP1-4的表达，而肌肉、脂肪体组织中没有明显表达信号。【结论】JcDV在侵染草地贪夜蛾2龄幼虫后3 h、24 h时可分别检测到结构基因vp1-4的转录与表达，表明VP1-4可能在侵染早期已开始发挥重要功能；JcDV可侵染草地贪夜蛾幼虫的表皮、气管等组织，可能是导致虫体死亡的原因之一。

关键词：草地贪夜蛾鹿眼蛱蝶浓核病毒结构基因转录时相表达时相

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野猪群体结构基因遗传共适应特性的研究

畜牧兽医学报 2008年第3期39卷 262-267页

作者：李晓林潘庆杰闵令江沈伟刘娣青岛农业大学动物科技学院/动物生殖发育与基因工程研究所青岛266109 黑龙江省农业科学院畜牧研究中心哈尔滨150086

本研究对吉林、黑龙江、辽宁3省的东北野猪群体随机采样42个,利用PCR-SSCP和PCR-RFLP技术检测到Nanog、瘦蛋白、胰岛素样生长因子蛋白3、JAK2、肠毒素大肠杆菌受体、心脏脂肪酸结合蛋白、钙蛋白酶抑制蛋白7个具有多态性的基因位点,并进... 详细信息

本研究对吉林、黑龙江、辽宁3省的东北野猪群体随机采样42个,利用PCR-SSCP和PCR-RFLP技术检测到Nanog、瘦蛋白、胰岛素样生长因子蛋白3、JAK2、肠毒素大肠杆菌受体、心脏脂肪酸结合蛋白、钙蛋白酶抑制蛋白7个具有多态性的基因位点,并进行了群体遗传共适应性分析,结果表明:①7个多态性基因位点中有5个处于遗传不平衡状态,占所检测多态性基因位点的71.43%;②位于不同染色体上的基因位点之间的18个组合中有6个处于遗传不平衡状态,其主要原因可能是遗传共适应差异造成;③位于同一条染色体上的3个基因位点之间的3个组合都处于遗传平衡状态,但是Leptin-ECF18R组合处于连锁不平衡状态,这可能是因为遗传共适应和基因间的连锁作用的方向是相反的,两者共同作用使得两位点处于遗传平衡状态。

关键词：遗传共适应遗传不平衡结构基因野猪

扩展青霉碱性脂肪酶结构基因的克隆与原核表达

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中国生物制品学杂志 2010年第5期23卷 485-488页

作者：卜秀娟孟宪梅柳增善代平吉林大学军需科技学院长春130062 吉林工商学院生物工程分院长春130062 吉林大学人兽共患病教育部重点实验室长春130062 长春长生基因药业股份有限公司长春130012

目的克隆并原核表达扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)结构基因。方法提取扩展青霉总RNA,经RT-PCR扩增PEL结构基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28a-PEL,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白的表... 详细信息

目的克隆并原核表达扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)结构基因。方法提取扩展青霉总RNA,经RT-PCR扩增PEL结构基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28a-PEL,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白的表达形式及表达量,包涵体蛋白经变性、复性后,采用NaOH滴定法测定其酶活性。结果经RT-PCR扩增获得约780bp的PEL结构基因;所构建的重组表达质粒pET-28a-PEL经酶切及PCR鉴定正确;目的蛋白的相对分子质量约为28000,以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的10%;发酵液及复性的包涵体蛋白酶活性可达12.44U/ml。结论已成功克隆并原核表达了PEL结构基因,为获得碱性脂肪酶高产基因工程菌株奠定了基础。

关键词：扩展青霉碱性脂肪酶结构基因原核表达