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经血源子宫内膜干细胞资源库建立标准专家共识

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新乡医学院学报 2020年第9期37卷 801-812页

作者：无曹毓琳林俊堂河南省细胞生物学会干细胞专业委员会中国研究型医院学会临床数据与样本资源库专业委员会北京臻溪谷医学研究中心新乡医学院

干细胞以其显著的修复再生能力和免疫调控作用,赋予了人类医学新的希望,给很多难治性疾病带来了新的选择。作为干细胞家族的主要成员,间充质干细胞的基础研究和临床应用研究最为深入,已经被广泛应用到再生医学的临床疾病治疗领域。女性... 详细信息

干细胞以其显著的修复再生能力和免疫调控作用,赋予了人类医学新的希望,给很多难治性疾病带来了新的选择。作为干细胞家族的主要成员,间充质干细胞的基础研究和临床应用研究最为深入,已经被广泛应用到再生医学的临床疾病治疗领域。女性经血来源的子宫内膜干细胞作为众多间充质干细胞中的一种,其高增殖能力、多分化潜能、免疫学特性、遗传稳定性、取材方便性、来源广泛且同一优质的供体可连续多次采集、不受采集时间、地点及医疗条件的限制等特性,使之成为了具有广阔应用前景的干细胞资源。这类干细胞的制备和储存可极大地丰富干细胞库的种类,增强我国干细胞领域的研发实力,提高我国干细胞研究技术水平及我国干细胞和生物治疗技术的国际竞争力,为干细胞基础与临床应用研究提供可靠和丰富的细胞资源。因此,河南省细胞生物学会干细胞专业委员会联合中国研究型医院学会临床数据与样本资源库专业委员会组织细胞治疗、伦理、生物样本库等学科专家反复调研、论证,编写此共识。经血源干细胞的命名不一致,为规范名称,共识建议统一命名为经血源子宫内膜干细胞(MenSCs)。此共识内容涵盖了成年健康女性志愿者MenSCs的收集、处理、存储、应用等相关技术流程、规范和标准及相关伦理、法规等问题,旨在推动以公益捐赠为导向的“MenSCs资源库”的建立,为干细胞技术研究、产品开发、临床应用奠定良好的物质基础,积极推动干细胞在临床医学上的转化应用,服务全民健康,助力健康中国。

关键词：干细胞间充质干细胞经血源子宫内膜干细胞干细胞资源库共识

经血源子宫内膜干细胞生物学特性及临床应用研究进展

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新乡医学院学报 2020年第9期37卷 885-889页

作者：刘彦礼曹毓琳林俊堂新乡医学院干细胞与生物治疗技术研究中心河南新乡453003 新乡市高新区中源干细胞研究院河南新乡453003 北京臻溪谷医学研究中心北京100034

尽管药物和外科手术在疾病治疗领域取得了重大进展,但对某些疾病(如糖尿病、关节炎及卵巢早衰等)临床仍然缺乏有效的改善与治疗。大量基础和临床试验研究已证实,间充质干细胞(MSCs)移植对上述难治性疾病具有良好的改善效果,从骨髓、脐... 详细信息

尽管药物和外科手术在疾病治疗领域取得了重大进展,但对某些疾病(如糖尿病、关节炎及卵巢早衰等)临床仍然缺乏有效的改善与治疗。大量基础和临床试验研究已证实,间充质干细胞(MSCs)移植对上述难治性疾病具有良好的改善效果,从骨髓、脐带和脂肪组织中分离获得的MSCs是移植的主要候选细胞,但其来源受限。近年来,经血源子宫内膜干细胞(MenSCs)因其无创伤的样本采集方式、同一供体可多次采集、可获得大量遗传背景一致的种子细胞及自体移植等方面的优势,逐渐成为干细胞疗法中重要的细胞来源,并已在相关疾病的治疗中展示出良好的治疗效果。因此,本文在明确MenSCs生物学特性的基础上,对临床应用MenSCs改善相关疾病的研究进展进行总结,并结合现有基础及临床研究结果,对MenSCs移植后改善疾病的机制进行探讨。

关键词：间充质干细胞经血源子宫内膜干细胞干细胞治疗临床应用

经血源子宫内膜干细胞在新型冠状病毒肺炎治疗中的应用前景

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新乡医学院学报 2020年第3期37卷 201-205页

作者：孙钰椋刘彦礼林俊堂新乡医学院干细胞与生物治疗技术研究中心河南新乡453003

2019年12月以来,我国出现了由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染引起的肺炎患者,目前,突发疫情虽然在我国得到了有效控制,但在世界范围内疫情加剧。新型冠状病毒肺炎(COVID-19)目前尚无直接有效的治疗措施。近年来,以干细胞为基础的细胞疗... 详细信息

2019年12月以来,我国出现了由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染引起的肺炎患者,目前,突发疫情虽然在我国得到了有效控制,但在世界范围内疫情加剧。新型冠状病毒肺炎(COVID-19)目前尚无直接有效的治疗措施。近年来,以干细胞为基础的细胞疗法在临床上取得了突破性进展。研究发现,干细胞能够通过旁分泌作用和免疫调节作用显著改善急性肺损伤,为干细胞治疗COVID-19带来希望。经血源子宫内膜干细胞(MenSCs)相比于其他类型的干细胞具有更广泛的来源及应用前景,本文对MenSCs相关研究进展进行综述,并深入分析其用于治疗COVID-19的可行性,为临床治疗COVID-19重症患者提供新的思路。

关键词：新型冠状病毒新型冠状病毒肺炎间充质干细胞经血源子宫内膜干细胞

经血源子宫内膜干细胞分离培养及制备标准操作规程

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新乡医学院学报 2021年第11期38卷 1001-1005页

作者：河南省细胞生物学会干细胞专业委员会中国研究型医院学会临床数据与样本资源库专业委员会林俊堂刘彦礼陈娟杨芬何亚南曹毓琳不详新乡医学院干细胞与生物治疗技术研究中心河南省荣军医院新乡市高新区中源干细胞研究院北京臻溪谷医学研究中心

干细胞移植已为众多难治性疾病提供了新的治疗方法,并获得了良好的疾病改善效果。经血源子宫内膜干细胞(MenSCs)凭借其样本采集的无创伤性、可周期性采集而获得大量遗传背景-致的种子细胞.优良的增殖活性及自体移植等优势,成为干细胞治... 详细信息

干细胞移植已为众多难治性疾病提供了新的治疗方法,并获得了良好的疾病改善效果。经血源子宫内膜干细胞(MenSCs)凭借其样本采集的无创伤性、可周期性采集而获得大量遗传背景-致的种子细胞.优良的增殖活性及自体移植等优势,成为干细胞治疗中非常具有潜力的种子细胞。建立符合药品生产质量管理规范的、标准的、规范化的MenSCs分离、培养及冻存等操作流程,是保证MenSCs制品质量的前提,其不仅决定了MenSCs治疗疾病的效果,同时对MenSCs移植数量、移植时间窗及移植途径等临床使用关键参数的优化提供了支持和保障,为深人探索MenSCs对相关疾病的改善机制奠定了坚实的基础。因此,本研究团队在参考已有间充质干细胞标准操作的基础上,结合MenSCs自身的特性,通过长期的摸索及实践经验,完成了MenSCe分离培养及制备的规范化操作流程,以期为各科研生产单位在制备MenSCs制品过程中提供借鉴,推动MenSCs的临床应用进程。

关键词：经血源子宫内膜干细胞干细胞治疗标准操作流程

经血源子宫内膜干细胞抑制乳腺癌生长及转移的作用机制研究

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经血源子宫内膜干细胞抑制乳腺癌生长及转移的作用机制研究

作者：陈童彤新乡医学院

学位级别：硕士

背景随着医疗科技的发展,新兴的干细胞技术为解决临床上难治性疾病带来了希望,其对疾病的改善效果已在多种动物疾病模型和临床研究中获得证实。而间充质干细胞(MSCs)在肿瘤治疗中的应用及潜在效果也已初步获得证实,为肿瘤患者的治疗提... 详细信息

背景随着医疗科技的发展,新兴的干细胞技术为解决临床上难治性疾病带来了希望,其对疾病的改善效果已在多种动物疾病模型和临床研究中获得证实。而间充质干细胞(MSCs)在肿瘤治疗中的应用及潜在效果也已初步获得证实,为肿瘤患者的治疗提供了创新的思路。经血源子宫内膜干细胞(MenSCs)凭借其方便且无创伤的采集分离方式,以及良好的增殖活性等方面的优势,在干细胞治疗领域获得了国内外的广泛关注。目的1.通过具有正常免疫系统的小鼠肿瘤模型,验证MenSCs移植对乳腺癌生长及转移的抑制作用;2.通过现代生物学技术从细胞因子分泌、淋巴细胞活化等方面综合分析MenSCs抑制乳腺癌生长和转移的潜在机制。方法1.取EMT-6细胞(乳腺癌细胞)进行正常培养,于第零天(day0)注射入具有正常免疫系统的BABL/c小鼠及裸鼠腋下,day5时可检测到小鼠腋下有明显颗粒状肿物,视为荷瘤小鼠模型建立成功;2.将上述乳腺癌荷瘤小鼠模型随机分成3组,MenSCs处理组:于day 5、day 12及day 19时,模型小鼠尾静脉注射体积为0.1m L的MenSCs悬液(1×10个/m L);CTX处理组:于day5至day11,小鼠连续7天腹腔注射0.1m L PBS溶解的CTX溶液(25mg/kg);PBS组:于day 5、day 12及day 19时,模型小鼠尾静脉注射体积为0.1m L的PBS溶液。实验周期为30天,于day5天起,每隔2天对小鼠腋下的肿瘤体积进行测量记录;实验结束后,处死小鼠,分离血清和相关组织进行后续分析;3.流式细胞术检测小鼠血液中相关淋巴细胞比值及绝对值;常规生化方法检测小鼠肝肾功能变化;蛋白芯片检测小鼠血清中细胞因子表达水平;HE染色检测小鼠脾脏、肾脏、肝脏及肺脏形态学变化,评估乳腺癌细胞潜在的转移的情况;免疫荧光检测小鼠脾脏中不同类型淋巴细胞的数量;4.收集乳腺癌患者血液,密度梯度离心分离提取人外周血单个核细胞(PBMCs),过夜培养后与MenSCs接触式共培养72h,CCK8法检测悬浮PBMCs细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,WB检测相关蛋白变化。结果***能够显著抑制乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤的生长,以及转移至肺脏和肝脏,并且干细胞输入对小鼠主要脏器功能无明显副作用,但MenSCs移植不能明显抑制乳腺癌荷瘤裸鼠模型腋下肿瘤的生长;2.蛋白质芯片结果显示经MenSCs移植后,小鼠血清中IL-6和IFN-γ的表达水平在小鼠体内均显著上调,而促血管再生因子VEGF被显著下调;3.流式细胞术检测结果显示MenSCs移植可显著维持小鼠体内的T淋巴细胞总数;而免疫荧光结果显示MenSCs移植后可显著激活小鼠脾脏中各类型淋巴细胞;4.体外实验结果表明MenSCs能够显著维持肿瘤患者PBMCs的活性。结论***移植能够显著抑制正常小鼠体内乳腺癌细胞的生长及转移;***极有可能是通过活化并维持机体淋巴细胞活性,提高机体免疫力,释放大量抑瘤因子,从而达到显著抑制乳腺癌的生长和转移效果。

关键词：淋巴细胞活化经血源子宫内膜干细胞抗肿瘤乳腺癌细胞治疗

经血源子宫内膜干细胞对子宫内膜损伤的修复作用及机制研究

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经血源子宫内膜干细胞对子宫内膜损伤的修复作用及机制研究

作者：张胜辉新乡医学院

学位级别：硕士

背景宫腔粘连(Intrauterine Adhesion,IUA)又称阿什曼综合征(Asherman综合征),是由于子宫内膜损伤导致宫腔部分或完全闭塞。据报道,多次人工流产、刮宫所致的宫腔粘连发生率高达25%～30%。近年来,干细胞移植在修复受损子宫内膜组织和恢... 详细信息

背景宫腔粘连(Intrauterine Adhesion,IUA)又称阿什曼综合征(Asherman综合征),是由于子宫内膜损伤导致宫腔部分或完全闭塞。据报道,多次人工流产、刮宫所致的宫腔粘连发生率高达25%～30%。近年来,干细胞移植在修复受损子宫内膜组织和恢复子宫内膜完整性方面受到了广泛关注,动物实验显示经血源子宫内膜干细胞(Menstrual blood-derived endometrial stem cells,MenSCs)对IUA展现出良好的治疗效果,但其机制不明,通过本课题实施将阐明MenSCs对IUA的改善作用及潜在机制,并为MenSCs治疗IUA及其他组织损伤提供理论支持。目的1.建立符合临床宫腔粘连特征的小鼠模型。2.动物水平检测MenSCs对子宫内膜损伤的修复作用。3.分子水平检测MenSCs对子宫内膜损伤的修复的潜在机制。方法1.收集健康成年女性经血样本,常规方式分离提取MenSCs,通过免疫表型分析及三系分化潜能鉴定MenSCs;2.使用微创的经宫颈95%乙醇灌注构建宫腔粘连小鼠模型;***染色检测模型组与MenSCs移植后子宫内膜厚度及腺体数量变化;***染色检测MenSCs移植后子宫内膜纤维化程度;5.免疫组化染色及蛋白质免疫印迹检测模型组与MenSCs移植后子宫内膜血管生成,炎症反应,细胞增殖的变化情况;6.蛋白质免疫印迹检测模型组与MenSCs移植后PI3K/Akt信号通路的变化。结果1.免疫表型鉴定结果显示从经血样本中分离获得MenSCs符合国际通用的间充质干细胞的鉴定标准。成脂分化后使用油红O染色成红色,成骨分化后使用茜素红染色成红色,成软骨分化后使用阿尔新蓝染色后成蓝色,提示所分离MenSCs具有多向分化潜能;2.造模后,HE染色结果显示子宫内膜显著变薄,腺体数量减少,Masson染色结果显示子宫内膜纤维化明显;免疫组化染色结果显示:血管相关蛋白CD31表达显著减少,而炎症反应相关的F4/80巨噬细胞数量显著升高;生育率明显下降;***移植后小鼠子宫内膜厚度增加,腺体数量增多,纤维化程度明显下降;***移植后促进小鼠子宫内膜细胞增殖和血管再生,降低子宫内膜炎症反应,进一步提高子宫内膜容受性并增加了其生育率及胚胎数;5.通过蛋白质免疫印迹分析发现MenSCs移植可能通过激活PI3K/Akt信号通路促进子宫内膜细胞增殖,降低细胞凋亡,从而改善了子宫内膜功能。结论1.成功建立了符合临床损伤特征的小鼠宫腔粘连特征;***移植可能通过激活PI3K/Akt信号通路促进子宫内膜再生。

关键词：经血源子宫内膜干细胞宫腔粘连小鼠模型 PI3K/Akt信号通路

经血源子宫内膜干细胞调控糖脂代谢改善非酒精性脂肪肝的作用研究

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经血源子宫内膜干细胞调控糖脂代谢改善非酒精性脂肪肝的作用研究

作者：刘鑫磊新乡医学院

学位级别：硕士

背景非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是以肝实质细胞脂肪贮积和变性为特征,其过度发展导致肝纤维化和肝硬化,给患者和社会造成严重负担。其发病原因的复杂性和疾病评估的不确定性阻碍了对于治疗NAFLD的药物开... 详细信息

背景非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是以肝实质细胞脂肪贮积和变性为特征,其过度发展导致肝纤维化和肝硬化,给患者和社会造成严重负担。其发病原因的复杂性和疾病评估的不确定性阻碍了对于治疗NAFLD的药物开发。间充质干细胞作为细胞治疗手段在多种疾病展现作用。而经血源子宫内膜干细胞(menstrual blood-derived endometrial stem cells,Men SCs)作为间充质干细胞,具有来源广泛、获取周期短及可重复性强等优势。但关于Men SCs治疗NAFLD的改善作用及相关机制却知之甚少。本课题通过将Men SCs移植及共培养实验,阐明Men SCs对NAFLD的改善效果及潜在机制,并为Men SCs治疗NAFLD及其他代谢疾病提供理论支持。目的1.通过高脂饮食建模NAFLD与ob/ob小鼠模型及FFA(油酸和棕榈酸混合物)刺激脂质贮积模型,探究Men SCs移植对NAFLD的作用;2.阐明Men SCs移植通过调控NAFLD小鼠模型的糖脂代谢来改善NAFLD。方法1.从女性经血中分离、提取、培养Men SCs,培养至P3代进行表面标志物鉴定,以备后续动物实验和细胞实验使用;2.利用高脂饮食(high-fat diet,HFD)构建NAFLD小鼠模型及FFA刺激建立脂质贮积细胞模型;3.对小鼠模型进行血清学生化指标和病理指标检测。血清学指标包括血糖、谷丙/谷草转氨酶和血清甘油三酯等;肝脏病理组织包括H&E染色、油红O染色和PAS染色等以验证小鼠模型构建是否成功以及Men SCs对NAFLD的治疗效果;4.将小鼠分为NCD、HFD、NCD/Men SCs、HFD/Men SCs四组并提取小鼠肝脏组织RNA,进行高通量转录组测序,分析相关的信号通路及差异表达的基因;5.免疫组化染色、蛋白质免疫印迹和实时荧光定量PCR等实验技术证实糖脂代谢相关基因的表达;*** SCs与L02、AML12细胞共培养,证明Men SCs对葡萄糖吸收和脂质合成的作用。结果*** SCs分离提取并验证Men SCs,获取一批为后续开展动物和细胞实验所需要的高质量、数量足的Men SCs;2.动物水平上成功构建了NAFLD小鼠模型;细胞水平上成功建立了肝细胞脂质贮积模型;*** SCs移植后,能够明显改善NAFLD小鼠模型及ob/ob小鼠模型的血清生化指标及肝功能;病理切片染色结果也发现其有明显的治疗作用;4.高通量转录组测序结果显示,炎症信号通路及糖脂代谢信号通路在治疗前后有变化;5.提取小鼠模型肝脏蛋白验证葡萄糖代谢相关基因p-Akt(ser473)/Akt和p-Gsk3β/Gsk3β治疗前后发生改变,另外脂质合成基因Fas、Acc-1和Srebp1等在Men SCs移植前后也发生明显变化。使用实时荧光定量PCR及染色等方法验证糖异生相关基因表达进一步佐证蛋白质免疫印迹的结果;6.通过Men SCs与肝细胞脂质模型共培养后,证实Men SCs对葡萄糖吸收和脂质合成有明显的改善作用。结论*** SCs移植后可以改善NAFLD小鼠生化病理特征;*** SCs通过调控NAFLD小鼠模型的糖脂代谢的改善NAFLD。

关键词：经血源子宫内膜干细胞糖脂代谢非酒精性脂肪肝

经血源子宫内膜干细胞对糖尿病足溃疡的改善及作用机制研究

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经血源子宫内膜干细胞对糖尿病足溃疡的改善及作用机制研究

作者：孙钰椋新乡医学院

学位级别：硕士

背景糖尿病足溃疡(Diabetic foot ulcer,DFU)作为一种严重的糖尿病并发症,其中50%患者溃疡会被感染,增加潜在的截肢风险,并且69%的糖尿病截肢患者的存活时间不超过5年。尽管新的治疗方法已取得长足的进展,但目前对于糖尿病足溃疡反复感... 详细信息

背景糖尿病足溃疡(Diabetic foot ulcer,DFU)作为一种严重的糖尿病并发症,其中50%患者溃疡会被感染,增加潜在的截肢风险,并且69%的糖尿病截肢患者的存活时间不超过5年。尽管新的治疗方法已取得长足的进展,但目前对于糖尿病足溃疡反复感染尚无有效治疗方法,给患者和家庭带来了沉重的生理和心理负担。近年来,干细胞移植被认为是治疗糖尿病足溃疡的有效方法。经血源子宫内膜干细胞(Menstrual blood derived endometrial stem cell,MenSCs)凭借其来源丰富,分离获得方法无创性,增殖速度快,逐渐成为干细胞治疗的研究热点。目的1.体内外检测MenSCs促血管及促肉芽形成的能力;2.检测MenSCs对糖尿病以及伤口愈合的影响。方法1.通过蛋白质芯片从分子水平检测MenSCs条件培养基促血管再生因子的表达;构建MenSCs与人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)共培养体系,分别通过Transwell迁移实验和粘附实验,检测MenSCs对HUVECs增殖、迁移和粘附的影响;通过小管形成实验,体外检测MenSCs条件培养基促小管形成的能力;通过基质胶栓实验,体内检测MenSCs促血管形成情况。2.通过MTT法、Transwell迁移实验和粘附实验,检测MenSCs条件培养基对皮肤成纤维细胞(BJ细胞)增殖、迁移和粘附的影响;构建MenSCs与BJ细胞的共培养体系,并在高糖及LPS存在的条件下,检测MenSCs对BJ细胞内活性氧产生的影响。3.构建糖尿病足溃疡大鼠模型,检测模型鼠MenSCs移植后1d、3d、5d、7d和9d的空腹血糖变化、伤口愈合情况;随后检测9d时实验动物糖耐量变化,并对模型鼠胰腺切石蜡片后进行HE和Ki67染色,对肝脏石蜡切片后进行PAS染色。结果1.蛋白质芯片结果显示MenSCs可以分泌多种促血管再生因子;并且MenSCs可以增强HUVECs的迁移和粘附能力,在小管形成实验中经MenSCs条件培养基作用的HUVECs所形成的的小管具有更多的节点、结点、分支数,且小管长度明显增加;随后,基质胶栓实验结果表明MenSCs处理组所形成的血管密度明显增大。***法、Transwell迁移实验和粘附实验结果显示MenSCs可显著促进BJ细胞的增殖、迁移和粘附;并在共培养体系中MenSCs的存在可显著抑制BJ细胞内活性氧的产生。3.成功构建了糖尿病足溃疡大鼠模型,在MenSCs移植后5d,移植组大鼠空腹血糖开始下降,且在9d时移植组大鼠的糖耐量能力也明显提升;随后HE和Ki67染色结果亦显示移植组大鼠的胰岛得到明显恢复,且移植组大鼠肝脏中糖原合成与储存能力显著增强;进一步在9d移植组大鼠足部伤口面积和对照组相比具有统计学差异,移植组大鼠伤口面积比对照组缩小约35%。结论1.体内外结果显示MenSCs可以促进血管及肉芽的形成;***移植可缓解糖尿病症状,并促进糖尿病足溃疡伤口愈合。

关键词：经血源子宫内膜干细胞糖尿病足溃疡促血管再生肉芽

经血源子宫内膜干细胞改善顺铂诱导的卵巢颗粒细胞损伤的研究

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经血源子宫内膜干细胞改善顺铂诱导的卵巢颗粒细胞损伤的研究

作者：付晓飞新乡医学院

学位级别：硕士

背景随着癌症诊断和治疗水平的不断提高,癌症患者的长期生存率显著提高。年轻癌症幸存者的生活质量及生育能力保持越来越受到关注。辅助化疗可能会导致卵巢功能障碍和不孕,干细胞疗法在各种疾病治疗中表现出了潜力,不同类型的干细胞已... 详细信息

背景随着癌症诊断和治疗水平的不断提高,癌症患者的长期生存率显著提高。年轻癌症幸存者的生活质量及生育能力保持越来越受到关注。辅助化疗可能会导致卵巢功能障碍和不孕,干细胞疗法在各种疾病治疗中表现出了潜力,不同类型的干细胞已被用于卵巢功能障碍治疗的研究,经血源子宫内膜干细胞(Menstrual blood-derived endometrial stem cells,Men SCs)可以无创、周期性地从废弃的经血样本中获得,具有高增殖能力、低免疫原性和自体移植等优势。目的1.本研究旨在评估Men SCs治疗对顺铂损伤的人卵巢颗粒细胞(Granulosa cells,GCs)的改善作用效果。2.进一步探讨Men SCs治疗对顺铂损伤的人卵巢GCs的改善作用机制。方法1.收集10例年龄小于45岁的女性乳腺癌患者的性激素化验报告,分析化疗对女性激素水平的影响。***8检测不同浓度顺铂对人卵巢GCs增殖的抑制作用,确定最适浓度,建立顺铂诱导的人卵巢GCs损伤模型。3.通过细胞凋亡检测和活死染色观察顺铂处理不同时间对人卵巢GCs凋亡的影响。4.制备Men SCs条件培养基(Conditioned medium from Men SCs,Men SC-CM);建立Men SCs与靶细胞非接触式共培养体系。***8检测Men SC-CM对顺铂处理的人卵巢GCs活性的影响;Men SC-CM和Men SCs非接触式共培养干预后,流式细胞仪检测顺铂损伤的人卵巢GCs凋亡率的变化,Western blot检测顺铂损伤的人卵巢GCs中凋亡相关蛋白以及自噬相关蛋白表达水平的变化。6.在Men SC-CM干预后加入自噬抑制剂MHY1485和Spautin-1,CCK8检测顺铂损伤的人卵巢GCs活性的变化;流式细胞仪检测凋亡率的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白以及自噬相关蛋白表达水平的变化。结果*** SCs和Men SC-CM处理有效地提高了顺铂损伤的卵巢GCs的生存能力,并显著上调了它们的抗凋亡能力,而且Men SC-CM治疗显示出更好的改善效果。*** SC-CM处理显著上调顺铂损伤的卵巢GCs的自噬活性,自噬激活程度与卵巢GCs的生存能力改善呈正相关,而自噬抑制剂显著降低了Men SC-CM对顺铂损伤的卵巢GCs生存能力改善的效果。*** SC-CM处理还可以通过激活PI3K/Akt信号通路显著促进正常卵巢GCs的增殖。结论Men SCs治疗可通过上调自噬活性增强了顺铂损伤的卵巢GCs的抗凋亡能力和存活率,通过激活PI3K/Akt信号通路提高正常卵巢GCs的存活率。该结果为Men SCs在改善化疗所致卵巢损伤和延缓卵巢衰老中的临床应用提供了理论和实验依据。

关键词：经血源子宫内膜干细胞卵巢早衰颗粒细胞自噬