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经口感染绿僵菌后德国小蠊肠道菌群和免疫系统的响应机制及生防利用

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经口感染绿僵菌后德国小蠊肠道菌群和免疫系统的响应机制及生防利...

作者：杨荣爱山东师范大学

学位级别：硕士

德国小蠊(Blattella germanica)属节肢动物门昆虫纲蜚蠊目,是常见的世界性家居卫生害虫。作为一种病原媒介昆虫,它能够携带多种细菌、病毒及寄生虫卵,导致人类疾病的传播,其分泌物或死亡虫体还能导致人体产生严重的过敏反应。化学杀虫... 详细信息

德国小蠊(Blattella germanica)属节肢动物门昆虫纲蜚蠊目,是常见的世界性家居卫生害虫。作为一种病原媒介昆虫,它能够携带多种细菌、病毒及寄生虫卵,导致人类疾病的传播,其分泌物或死亡虫体还能导致人体产生严重的过敏反应。化学杀虫剂大量应用于蟑螂防治,造成德国小蠊的抗药性问题日渐突出,研究高效环保的生物防治杀虫剂显得尤为重要。绿僵菌作为一种常见的真菌制剂,因专一性强、安全性高在防治蟑螂等多种害虫上都得到广泛应用,其主要特征是通过穿透表皮感染昆虫,经口感染途径研究较少,仅在少数昆虫中有报道。由于蟑螂害虫普遍为咀嚼式口器且食性复杂,在蟑螂防治中绿僵菌制剂多以食用毒饵方式应用,绿僵菌经口进入蟑螂消化道中几率很高,肠道内侵染效率的高低直接影响绿僵菌制剂的生防效果,此外,德国小蠊肠道内存在大量的微生物,在保护宿主免受昆虫病原菌入侵方面发挥着重要的作用。因此,对德国小蠊的肠道菌及其抑真菌的相互作用机制进行研究,对于蟑螂的生物防治具有重要的理论意义和应用价值。本论文以实验室培育的德国小蠊和高毒力绿僵菌(Metarhizium anisopliae)为研究对象,从德国小蠊对经口感染绿僵菌的毒力测定、组织切片观察、肠道菌群的组成以及免疫应答等多个层面揭示宿主昆虫的肠道菌抗绿僵菌的感染机制,寻找新的杀虫剂作用靶标或途径,为开发新型高效环保的复配型真菌杀虫饵剂奠定基础。该实验研究主要获得了以下实验结果:1.德国小蠊经口饲喂绿僵菌后的毒力测定首先测定了德国小蠊经口饲喂不同浓度的绿僵菌分生孢子(1×10,1×10,1×10,1×10和1×10cfu/m L)后15 d内的毒力,发现德国小蠊死亡率高低与分生孢子浓度大小成正比,在最高浓度1×10cfu/m L浓度时可达50±2.89%的死亡率,初步证实绿僵菌可经口感染德国小蠊并造成一定的致死率,但显著低于同体积同浓度下体表感染绿僵菌所造成的死亡率(75±5.47%,P经口感染绿僵菌(1×10cfu/m L)7d内的病理发展过程。结果表明德国小蠊感染绿僵菌1-6 d内孢子的萌发受到抑制,感染致死前未发现肠道及马氏管等其他周围组织中孢子萌发或菌丝,绿僵菌成功感染宿主昆虫后濒临死亡的虫体组织中肠道的外壁处开始出现菌丝,试虫死亡1 d后菌丝蔓延到各个组织,肠道部位的菌丝主要集中于肠道的外壁,孢子从血腔中繁殖穿透肠道外壁并溶解肠道内壁导致消化道中布满菌丝;在其他各组织,如肌肉、精巢、马氏管等处都发现了菌丝,且组织均出现一定程度的溶解。取食绿僵菌6 d内未观察到绿僵菌孢子在德国小蠊肠道内萌发和穿透的现象。3.德国小蠊肠道菌群对经口感染绿僵菌的作用研究绿僵菌悬液经口饲喂德国小蠊后24 h内有超过的41%孢子随粪便排出,将含孢子的粪便悬液经清洗分离后培养与未清洗培养比较发现孢子萌发率显著回升(P经口饲喂不同浓度(1×10,1×10,1×10,1×10和1×10cfu/m L)的绿僵菌,正常德国小蠊的死亡率显著低于无肠道菌德国小蠊的死亡率(P经口感染德国小蠊的肠道菌群进行Mi Seq测序分析显示德国小蠊均主要以Firmicutes、Bacteroidetes、Proteobacteria与Fusobacteria为主,但感染绿僵菌后Bacteroidetes的相对丰度显著下降(29.82%感染绿僵菌后Alistipes的相对丰度显著下降(4.92%1.41%,P>0.05)。通过进一步的物种组成分析表明,实验组所含有的独特的14个OUT中,包括Proteobacteria、Firmicutes、Bacteroidetes和Actinobacteria,所包含的菌属例如Perlucidibaca、Ralstonia、Flavobacterium和Granulicatella等多为条件性致病菌。此外,实验共筛选鉴定出肠道中所含的铜绿假单胞菌类和芽孢杆菌类共9株具有抗病原真菌活性菌。4.免疫基因的动态变化德国小蠊经口感染绿僵菌后免疫系统受到挑战,通过荧光定量PCR(q RT-PCR)的方法,检测到相关免疫基因的表达量在感染期7 d内较正常对照发生上调或下调。当绿僵菌经口感染德国小蠊时,Akirin基因在24-72 h的表达量显著上调(P感染中后期表达量下调后又逐渐上调。Bg TPS基因在宿主摄入绿僵菌后其表达量在48 h时显著下调(P<0.0

关键词：德国小蠊绿僵菌经口感染组织切片肠道菌群免疫基因硼酸

三带喙库蚊和致倦库蚊经口感染乙型脑炎病毒疫苗SA14-14-2株的研究

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中国人兽共患病杂志 2005年第7期21卷 584-586,591页

作者：章域震张海林俞永新冯云董关木杨卫红贾丽丽姚亚夫云南省地方病防治所云南省病毒立克次体研究中心大理671000 中国药品生物制品检定所北京100050 成都生物制品研究所成都610063

目的通过实验,确定被SA14-14-2乙脑减毒活疫苗免疫的宿主动物和人在被媒介蚊虫叮咬后,是否存在感染和传播的可能.方法建立三带喙库蚊和致倦库蚊的实验室种群,用乙型脑炎SA14-14-2疫苗株病毒和乙脑野毒株经口感染两种库蚊,感染后不同时... 详细信息

目的通过实验,确定被SA14-14-2乙脑减毒活疫苗免疫的宿主动物和人在被媒介蚊虫叮咬后,是否存在感染和传播的可能.方法建立三带喙库蚊和致倦库蚊的实验室种群,用乙型脑炎SA14-14-2疫苗株病毒和乙脑野毒株经口感染两种库蚊,感染后不同时间取一定数量的蚊,研磨制成悬液,应用空斑试验方法检测感染后不同时间蚊体内的病毒存在情况和病毒滴度.结果在用6.06logPFU/ml SA14-14-2病毒经口感染的两种库蚊中,没有检测到病毒空斑,即没发现蚊虫的感染;在用较高的6.18logPFU/ml病毒经口感染的三带喙库蚊和致倦库蚊中,分别有一组蚊虫出现低滴度感染,空斑形成单位分别是1.24和1.11log10PFU/ml;在用野毒株经口感染的两种库蚊,共计19组蚊虫中,有14组发生感染,空斑形成单位在3.18～4.79log10PFU/ml.结论作为乙脑主要传播媒介的三带喙库蚊和致倦库蚊对SA14-14-2疫苗株病毒的经口感染和病毒在体内的复制严重受限,当叮咬接种疫苗的人后,不具备发生乙脑病毒感染和传播的能力.

关键词：乙型脑炎SA14—14—2疫苗株三带喙库蚊致倦库蚊经口感染空斑试验

昆虫包涵体衍生型病毒经口感染相关蛋白的研究进展

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生物技术通报 2014年第11期30卷 40-47页

作者：相兴伟周宇芳浙江省海洋开发研究院舟山316000

了解昆虫杆状病毒包涵体衍生型病毒(Occlusion-derived virus,ODV)的经口感染相关蛋白对揭示杆状病毒建立原发感染的机制、明确昆虫的先天免疫系统,以及研究控制昆虫新策略等方面具有重要意义。目前已鉴定的经口感染因子(Per osinfectiv... 详细信息

了解昆虫杆状病毒包涵体衍生型病毒(Occlusion-derived virus,ODV)的经口感染相关蛋白对揭示杆状病毒建立原发感染的机制、明确昆虫的先天免疫系统,以及研究控制昆虫新策略等方面具有重要意义。目前已鉴定的经口感染因子(Per osinfectivity factors,PIF)包括P74、PIF1、PIF2、PIF3、PIF4、PIF5(ODV-E56)和PIF6。此外,与ODV病毒粒子经口感染有关的蛋白有ODV-E66、VP91、Ac108、ORF 145和ORF 150。综述近年来关于上述经口感染相关蛋白的结构和功能等研究成果,分析了这些蛋白的分子生物学特征。

关键词：杆状病毒包涵体衍生型病毒经口感染分子特征

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经口感染无菌小鼠中沙门氏菌的生长

国外医学(微生物学分册) 1979年第2期 90-91页

作者：胡纯达

鉴于伤寒杆菌是专性对人致病的病原体,不能在下常小鼠中引起进行性疾病,作者试图在无菌动物中建立经口感染的模型。作者用伤寒杆菌Ty2,鸡沙门氏菌9240和肠炎沙门氏菌5694分别经胃肠道,静脉或腹腔途径感染无菌小鼠及普通小鼠。将业经振... 详细信息

鉴于伤寒杆菌是专性对人致病的病原体,不能在下常小鼠中引起进行性疾病,作者试图在无菌动物中建立经口感染的模型。作者用伤寒杆菌Ty2,鸡沙门氏菌9240和肠炎沙门氏菌5694分别经胃肠道,静脉或腹腔途径感染无菌小鼠及普通小鼠。将业经振摇培养并浓缩的Trypticase肉汤菌液,活菌

关键词：小鼠经口感染肠炎沙门氏菌小家鼠肠炎杆菌伤寒杆菌鸡沙门氏菌

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经口感染弓形虫在小鼠组织内的动态分布

热带医学杂志 2008年第6期8卷 533-535页

作者：申金雁杨莎莎殷国荣马广源孟晓丽刘红丽山西医科大学医学寄生虫学研究所寄生虫学教研室太原030001

目的观察经口感染弓形虫速殖子在小鼠小肠组织、实质器官内的动态分布。方法BALB/c小鼠96只,随机分为8组,0 d组用0.5 ml PBS/只灌胃,其余组用RH株弓形虫速殖子1×104个灌胃感染,感染后2、4、6、8、10、12、14 d处死小鼠,每次处死12只,... 详细信息

目的观察经口感染弓形虫速殖子在小鼠小肠组织、实质器官内的动态分布。方法BALB/c小鼠96只,随机分为8组,0 d组用0.5 ml PBS/只灌胃,其余组用RH株弓形虫速殖子1×104个灌胃感染,感染后2、4、6、8、10、12、14 d处死小鼠,每次处死12只,取十二指肠、空肠、回肠、肝脏、脾、肾、肺、心和脑做组织印片,吉-瑞氏染色,镜检。结果感染后2 d在十二指肠、空肠、回肠、肺和心,4 d在脾,6 d在肾和肝脏发现虫体,脑内未发现虫体。十二指肠、空肠、回肠组织内虫体数量呈上升趋势,第6天达高峰后稍有下降。肝内虫体数量呈上升趋势,第6天最多;脾内虫体数量在6 d达峰值后保持较高水平;实验期间肾、肺和心内虫体数量保持较低水平。结论弓形虫经口感染小鼠后2 d,小肠组织出现大量速殖子;同时肺和心内有少量速殖子;4 d在脾、6 d在肾和肝脏发现虫体;速殖子在上述组织内增殖,并形成假包囊,脑内未发现虫体。

关键词：弓形虫组织内分布经口感染

不同地理株的埃及伊蚊经口感染登革病毒的敏感性测定

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华南预防医学 1981年第1期 49-57页

作者：张冠群广东医药学院

用病毒—红细胞—糖悬液经口感染埃及伊蚊13个地理株以比较它对登革热病毒的敏感性。观察到不同地理株对四种登革热血清型的敏感性有显著差异,蚊株对某一种血清型较敏感,同样地对另一些血清型也较敏感,从而提示控制敏感性因素对所有四... 详细信息

用病毒—红细胞—糖悬液经口感染埃及伊蚊13个地理株以比较它对登革热病毒的敏感性。观察到不同地理株对四种登革热血清型的敏感性有显著差异,蚊株对某一种血清型较敏感,同样地对另一些血清型也较敏感,从而提示控制敏感性因素对所有四型是相同的,地理株的敏感性与经口感染蚊需要的病毒数目是相反的关系,对登革热的1～4型的感染阈是不同的,新近分离的登革热1型和3型株与原型株之间在敏感性上没有什么不同,用4个地理株进行杂交试验结果,杂种子一代具有象杂交复壮的相同敏感性,观察到蚊株的敏感性和抗性之间在比率、用肠胃外途径感染后病毒复制的数目或用经口途径感染后传播登革热2型病毒的能力上是不同的。

关键词：埃及伊蚊地理株经口感染伊蚊属登革热病毒登革病毒虫媒病毒敏感性