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不同细菌学与病理学检查技术对骨关节结核诊断的效能研究

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中国防痨杂志 2022年第4期44卷 362-367页

作者：苏丹车南颖欧喜超赵颖丽李琨陈学敬林海峰穆晶黄海荣首都医科大学附属北京胸科医院病理科北京101149 中国疾病预防控制中心结核病预防控制中心北京102206 首都医科大学附属北京胸科医院国家结核病临床实验室北京101149

目的:回顾性分析脓液标本细菌学检测技术和组织标本病理学检测技术诊断骨关节结核的检测效能。方法:以2016年1月至2018年12月在北京胸科医院住院治疗的213例送检同部位脓液和组织标本进行检测的疑似骨关节结核患者作为研究对象,取新鲜... 详细信息

目的:回顾性分析脓液标本细菌学检测技术和组织标本病理学检测技术诊断骨关节结核的检测效能。方法:以2016年1月至2018年12月在北京胸科医院住院治疗的213例送检同部位脓液和组织标本进行检测的疑似骨关节结核患者作为研究对象,取新鲜脓液标本进行涂片染色镜检、GeneXpert MTB/RIF(GeneXpert)检测、实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测和BACTEC MGIT 960液体培养(MGIT 960液体培养);组织标本经石蜡包埋后进行抗酸染色镜检和FQ-PCR检测。结果:根据骨结核临床诊断综合参考标准(CRS),186例纳入患者诊断为骨关节结核,其中124例为确诊结核患者,23例为高度疑似结核患者,39例为疑似结核患者;27例患者排除骨关节结核。与CRS比较,脓液标本涂片镜检、MGIT 960液体培养、FQ-PCR、GeneXpert以及组织标本抗酸染色和FQ-PCR检测的敏感度分别为28.7%(49/171)、49.0%(48/98)、58.1%(25/43)、87.5%(161/184)、48.6%(90/185)和85.4%(146/171);特异度分别为100.0%(26/26)、11/11、8/9、96.2%(25/26)、96.3%(26/27)和100.0%(27/27)。结论:脓液标本GeneXpert检测和组织标本FQ-PCR检测的敏感度高,检测用时短,可用于骨关节结核的早期诊断。

关键词：结核,骨关节病理学细菌学技术诊断

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细菌性眼内炎的玻璃体手术与病原学诊断

中华眼科杂志 2012年第11期48卷 995-1000页

作者：叶俊杰郭立斌王淑然王伟伟闵寒毅中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院眼科 100730 北京崇文光明医院北京军区空军司令部门诊部眼科

目的探讨细菌性眼内炎的玻璃体手术疗效与病原学诊断的重要性。方法回顾性系列病例研究。收集20例（20只眼）经临床诊断的细菌性眼内炎患者临床资料，进行回顾性分析。20例患者中，男性12例，女性8例；年龄3～83岁，平均（40．5±23．9... 详细信息

目的探讨细菌性眼内炎的玻璃体手术疗效与病原学诊断的重要性。方法回顾性系列病例研究。收集20例（20只眼）经临床诊断的细菌性眼内炎患者临床资料，进行回顾性分析。20例患者中，男性12例，女性8例；年龄3～83岁，平均（40．5±23．9）岁；14只眼为外伤性眼内炎，6只眼为内眼手术后感染性眼内炎。初诊视力：眼前指数2只眼；眼前手动6只眼；眼前光感11只眼，光定位均不确定；无光感1只眼。13只眼前房积脓，7只眼前房炎性反应较重。20只眼的眼底红光反射均消失，眼底不能窥人。B超显示20只眼玻璃体均呈中至重度混浊，12只眼玻璃体、视网膜表面有机化条索，2只眼视网膜脱离。对18只眼行玻璃体切除联合抗生素注入术，其中9只眼行硅油填充术；2只眼单纯行抗生素玻璃体注药术。20只眼均于手术开始即取玻璃体液进行涂片和革兰染色。根据革兰染色结果即刻选择抗生素，阳性者选用万古霉素1mg，玻璃体注射或加入灌注液中；阴性者使用头孢他啶2mg玻璃体注射，或4mg加入灌注液中。同时行细菌培养和药物敏感试验，根据检测结果继续或调整眼部及全身用药。患者随诊1—102个月，平均16．6个月。结果玻璃体脓液涂片革兰染色阳性13只眼（65％），革兰染色阴性3只眼（15％），另有4只眼（20％）未发现细菌。15只眼细菌培养结果阳性，病原体检出率75％，其中金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌各3只眼，芽孢杆菌2只眼，肺炎链球菌、草绿色链球菌、英志贺邻单胞菌、洋葱假单胞菌、产酸克雷伯菌、洛菲不动杆菌及荧光假单胞菌各1只眼。另外5只眼细菌培养显示无菌生长。术后20只眼感染均得到控制，眼内炎症消退。视力均有提高，视力≥0．3者4只眼，0．1—0．2者4只眼，0．02～0．09者6只眼，眼前指数2只眼，眼前手动3只眼，眼前光感1只眼。17只眼视网膜在位，3只眼再次发生视网膜脱离。结论玻璃体切除术联合应用抗生素及抗生素玻璃体注药术是治疗细菌性眼内炎的有效方法。手术开始即取玻璃体液涂片行革兰染色可快速、准确得到病原学诊断结果，并能即刻准确选用敏感的抗生素对因治疗，

关键词：眼感染,细菌性眼内炎玻璃体切除术玻璃体内注射细菌学技术

多色组合探针实时PCR技术在检测食源性病原菌中的应用

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中华预防医学杂志 2009年第3期43卷 210-214页

作者：张建梅黄建炜朱玉梅温慧欣陈泽辉李庆阁牛建军厦门市疾病预防控制中心 361021 厦门大学生命科学院

目的探讨多色组合探针编码技术实时PCR（MCPC—PCR）检测食品标本中的沙门菌和金黄色葡萄球菌等病原细菌的检测限，并应用于食物中毒标本的检测。方法配制系列浓度（10^1～10^9CFU／ml）的菌悬液，以鲜肉样品和蛋糕制备模拟样本各11份... 详细信息

目的探讨多色组合探针编码技术实时PCR（MCPC—PCR）检测食品标本中的沙门菌和金黄色葡萄球菌等病原细菌的检测限，并应用于食物中毒标本的检测。方法配制系列浓度（10^1～10^9CFU／ml）的菌悬液，以鲜肉样品和蛋糕制备模拟样本各11份，应用MCPC—PCR方法检测22份模拟标本中沙门菌和金黄色葡萄球菌；101份冻存的食物中毒标本营养肉汤增菌液，以及某次食物中毒事件的5例首批患者肛拭营养肉汤增菌液提取DNA后进行MCPC—PCR检测。结果MCPC—PCR技术在食品标本中沙门菌和金黄色葡萄球菌检测的检测限为10^2copies／test（每个PCR测试管含有的拷贝数）；101份冻存的食物中毒标本营养肉汤增菌液以MCPC—PCR检测，结果阳性23份，其中18份经细菌学方法分离菌株证实，MCPC—PCR和细菌学方法检测结果均相同的为96份，结果符合率达95．05％；采自某次食物中毒事件的5个首批患者肛拭标本MCPC-PCR检测结果提示为副溶血性弧菌，与细菌学分离结果完全符合。结论MCPC—PCR技术灵敏度高、特异度好，可应用于多种食源性病原菌的快速筛查和快速检测。

关键词：分子探针技术沙门菌属葡萄球菌金黄色细菌学技术

准分子激光原位角膜磨镶术中使用的角膜刀片及吸血棉签细菌培养结果分析

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中华眼科杂志 2012年第5期48卷 394-397页

作者：庞辰久王丽娅孙声桃韩磊李翔河南省眼科研究所河南省角膜病重点实验室郑州450003

目的探讨准分子激光原位角膜磨镶术（LASIK）中使用的角膜板层刀片及吸血棉签细菌对手术后感染的风险影响。方法前瞻性研究。2009年3月至4月，河南省眼科研究所准分子激光治疗中心106例近视眼患者行LASIK手术者，对手术中使用的板层角... 详细信息

目的探讨准分子激光原位角膜磨镶术（LASIK）中使用的角膜板层刀片及吸血棉签细菌对手术后感染的风险影响。方法前瞻性研究。2009年3月至4月，河南省眼科研究所准分子激光治疗中心106例近视眼患者行LASIK手术者，对手术中使用的板层角膜刀片（106个）及棉签（212个）进行细菌培养，阳性者进一步进行药物敏感试验，对其结果进行分析。两侧眼间棉签阳性率及刀片与棉签阳性率的差异采用Pearson Chi—square检验，不同性别刀片阳性率及不同药物敏感性的差异采用Fisher精确检验。结果106个刀片8个有细菌生长，阳性率为7．55％，均为表皮葡萄球菌，其中男女各4个，差异无统计学意义（P=1．000）；212个棉签23个培养阳性，阳性率为10．38％，均为表皮葡萄球菌，其中右眼12个，左眼11个，左右眼阳性率差异无统计学意义（P=0．825）。31个培养阳性菌株对加替沙星、妥布霉素、左氧氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星敏感性百分比依次为：100．00％（31／31）、96．77％（30／31）、93．55％（29／31）、90．32％（28／31）和74．20％（23／31）。所有患者手术后6个月均无感染。结论常规LASIK术中角膜刀片及术中使用的棉签可培养出细菌，主要为表皮葡萄球菌，其对三、四代喹诺酮类抗生素（加替沙星）以及妥布霉素滴眼液敏感，手术前后合理使用抗生素滴眼液对预防手术后感染有重要作用。

关键词：细菌学技术角膜磨镶术,激光原位外科器械明胶海绵,吸收性

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青春期龈炎患者牙周可疑致病菌的检测

中华口腔医学杂志 2008年第12期43卷 737-740页

作者：吕绳漪时清杨圣辉首都医科大学口腔医学院儿童口腔科 100050 首都医科大学口腔医学院口腔医学研究所 100050

目的研究青春期龈炎患者龈下菌斑中牙周致病菌的变化特点及其与临床症状的相关性。方法选择2006年6至10月于首都医科大学口腔医学院儿童口腔科及牙周科门诊就诊的11至17岁患者共54例，采集龈下菌斑样本108个，其中牙龈炎组（G组）30例... 详细信息

目的研究青春期龈炎患者龈下菌斑中牙周致病菌的变化特点及其与临床症状的相关性。方法选择2006年6至10月于首都医科大学口腔医学院儿童口腔科及牙周科门诊就诊的11至17岁患者共54例，采集龈下菌斑样本108个，其中牙龈炎组（G组）30例（60个样本，牙龈轻度炎症20个样本，中度炎症19个样本，重度炎症21个样本），健康对照组（H组）15例（30个样本），慢性牙周炎对照组（P组）9例（18个样本），用细菌培养法检测产黑色素菌群、伴放线放线杆菌、放线菌、具核梭杆菌，同时记录取样牙牙周探诊深度（probingdepth，PD）、牙龈指数（gingivalindex，GI）、出血指数（bleedingindex，BI）、附着丧失（mtachmentloss，AL）。结果在H、G、P3组中，产黑色素菌群的检出率分别为：3％、30％和100％；具核梭杆菌的检出率分别为：30％、68％和94％，3组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。牙龈轻、中度炎症组具核梭杆菌和放线菌的菌落计数[分别为（3．8±0．7）和（5．3±0．9）]较H组[分别为（3．1±0．4）和（4．2±0．8）]明显增加（P〈0．叭）；牙龈重度炎症组产黑色素菌群和具核梭杆菌菌落计数[分别为（4．7±1．2）和（4．4±0．8）]较轻度炎症组[分别为（3．1±0．5）和（3．8±0．7）]明显增加（P〈0．01）；而P组产黑色素菌群、具核梭杆菌、伴放线放线杆菌的菌落计数[分别为（6．6±1．0）、（5．5±1．0）和（4．2±1．7）]均比牙龈重度炎症组[分别为（4．7±1．2）、（4．4±0．8）和（2．6±0．9）]明显增加（P〈0．01）。产黑色素菌群、具核梭杆菌、伴放线放线杆菌的检出率和菌落计数均与BI、PD和AL呈正相关（P〈0．01）。结论重度牙龈炎时，牙周致病菌已明显增加，提示牙周组织存在进一步破坏的危险，临床上应给予足够重视。

关键词：牙龈炎牙菌斑细菌学技术

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B族链球菌四种筛查方法的比较

中华检验医学杂志 2020年第2期43卷 182-185页

作者：高坎坎关小珊邓秋连邓蕾朱素菲华夏高飞刘海英广州医科大学附属广州市妇女儿童医疗中心检验科广州510180

目的评估B族链球菌肉汤增菌培养法(Todd-Hewitt型,T-H)、直接培养法、液体显色培养法及核酸环介导恒温扩增法(LAMP)在孕晚期妇女筛查中的临床应用。方法回顾性研究。采集2016年10月至2018年4月在广州医科大学附属广州市妇女儿童医疗中... 详细信息

目的评估B族链球菌肉汤增菌培养法(Todd-Hewitt型,T-H)、直接培养法、液体显色培养法及核酸环介导恒温扩增法(LAMP)在孕晚期妇女筛查中的临床应用。方法回顾性研究。采集2016年10月至2018年4月在广州医科大学附属广州市妇女儿童医疗中心产科门诊产检妊娠35~37周孕妇直肠阴道分泌物标本969份,采用双盲法,以T-H肉汤增菌培养法为参考方法,分3个研究阶段先后比较直接培养法、液体显色培养法及LAMP法的检验性能。以敏感度、特异度、符合率、阳性预测值、阴性预测值及尤登指数为评价指标,一致性用Kappa检验。结果增菌培养法共检测标本969份,阳性90份(9.3%)。以增菌培养法为参考,敏感度从高到低依次为LAMP法[100%(25/25)]、直接培养法[81.5%(22/27),95%CI:65.8%~97.1%]、液体显色培养法[71.1%(27/38),95%CI:55.9%~86.2%];特异度则依次为直接培养法[100%(282/282)]、液体显色培养法[98.1%(455/464),95%CI:96.8%~99.3%]、LAMP法[94.0%(125/133),95%CI:89.9%~98.1%];符合率依次为直接培养法[98.4%(22+282)/309]、液体显色培养法[96.0%(27+455)/502]、LAMP法[94.9%(25+125)/158]。而直接培养法(0.889)、LAMP法(0.832)与增菌培养法的一致性Kappa值均≥0.75,液体显色培养法则为0.708。直接培养法有18.5%(5/27)的漏检率,LAMP法漏检率为零、假阳性率为6.0%(8/133),液体显色培养法的漏检率、假阳性率分别为28.9%(11/38)、1.9%(9/464)。结论本研究所比较的几种GBS筛查方法中,仅LAMP法与增菌培养法在敏感度、特异度及符合率上均具较好的一致性,而其他两种方法存在一定的漏检。临床实验室可根据实际条件、技术力量选择使用,或参照欧美指南推荐的孕晚期增菌培养筛查与产时核酸检测相结合,以最大程度满足临床需求。

关键词：妊娠末期无乳链球菌细菌学技术培养基核酸扩增技术敏感性与特异性

脑脊液宏基因组学第二代测序在颅内感染诊断与治疗中的应用

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中国现代神经疾病杂志 2024年第6期24卷 435-441页

作者：苏高健崔倩倩高杰朱栋梁吴楚伟黄贤键广东省深圳市第二人民医院神经外科 518035

目的探讨脑脊液宏基因组学第二代测序(mNGS)在颅内感染诊断与治疗中的应用价值。方法纳入2020年1月至2022年12月广东省深圳市第二人民医院收治的117例颅内感染患者,均于启动经验性广谱抗生素治疗前收集脑脊液行微生物培养(常规培养组,58... 详细信息

目的探讨脑脊液宏基因组学第二代测序(mNGS)在颅内感染诊断与治疗中的应用价值。方法纳入2020年1月至2022年12月广东省深圳市第二人民医院收治的117例颅内感染患者,均于启动经验性广谱抗生素治疗前收集脑脊液行微生物培养(常规培养组,58例)和(或)mNGS测序(mNGS组,59例),并根据结果回报调整抗生素治疗方案,对比两种检测方法的病原体检出率和结果回报时间、抗生素强度分级,以及重症监护病房(ICU)住院时间、总住院时间和病死率。结果本组117例患者经脑脊液微生物培养和(或)mNGS测序共检出65种病原体,尤以病毒占比最高,为49.23%(32/65),其次依次为革兰阴性菌(24.62%,16/65)、革兰阳性菌(18.46%,12/65)和真菌(7.69%,5/65)。脑脊液mNGS测序的病原体检出率高于(χ2=22.781,P=0.000)、结果回报早于(t=⁃32.588,P=0.000)微生物培养;根据结果回报,mNGS组有20例(33.90%)调整抗生素治疗方案,抗生素应用强度降级5例、升级15例,常规培养组有30例(51.72%)调整抗生素治疗方案,抗生素应用强度降级17例、升级13例,组间差异无统计学意义(Z=⁃1.917,P=0.055);两组ICU住院时间(Z=⁃0.716,P=0.474)、总住院时间(Z=⁃0.933,P=0.351)和病死率(Fisher确切概率法:P=0.496)差异亦无统计学意义。结论脑脊液mNGS测序可以有效提高颅内感染病原体检出率,尽可能减少广谱抗生素应用时间、降低抗生素总体应用强度,有助于临床准确诊断与精确治疗。

关键词：中枢神经系统感染脑脊髓液序列分析,DNA 细菌学技术抗菌药

基于细菌16SrRNA基因的PCR扩增与测序分析在临床不常见菌鉴定中的应用

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中华检验医学杂志 2012年第7期35卷 612-619页

作者：陈茶屈平华顾全黄彬张伟铮穆小萍张磊陈默蕊王露霞鄂顺梅叶金艳唐小龙蓝锴罗强戴小波袁慧广东省中医院检验医学部 510006 中山大学公共卫生学院卫生检验检疫专业中山大学附属第一医院检验医学部广东省妇幼保健院检验科广州金域医学检验中心有限公司微生物室潮州市中心医院检验科广州军区广州总医院检验科嘉兴市妇幼保健院检验科广州中医药大学医学检验系

目的探讨细菌16SrRNA基因的广谱PCR扩增与测序分析在临床分离的少见病原菌的鉴定及分类中的价值。方法收集2010年12月至2011年9月来自7家不同医院和机构，常规方法难以鉴定或具有特殊表型的少见菌48株，以及仪器法连续监测报警阳性、但... 详细信息

目的探讨细菌16SrRNA基因的广谱PCR扩增与测序分析在临床分离的少见病原菌的鉴定及分类中的价值。方法收集2010年12月至2011年9月来自7家不同医院和机构，常规方法难以鉴定或具有特殊表型的少见菌48株，以及仪器法连续监测报警阳性、但二次传代无细菌生长的液体增菌培养瓶7个，采用细菌16S核糖体核糖核酸（rRNA）基因MicroSeq500试剂盒、通用引物27f-1492r、27f-1525r进行广谱PCR扩增及目的片段的基因测序。运用美国国立生物信息中心“基于局部比对算法的搜索工具（Blast）”，结合“具有法定分类学地位的原核生物名称目录（http：／／W^***／）”提供的分类学信息，比较待鉴定细菌与近缘种模式菌株基因序列的相似程度；参考美国临床与实验室标准化协会（CLSI）MM18-A的解释标准，以确定待鉴定细菌的种属及分类学位置。结果采用广谱PCR测定，7份假阳性血培养瓶中，2份扩增到细菌的16SrRNA基因，经序列分析鉴定均为肺炎链球菌。48株不同来源、不同种属的少见菌，均扩增到16SrRNA基因目的片段并成功测序，参考CLSIMM18-A的解释标准，35株（72．9％）直接鉴定到“种”，11株（22．9％）鉴定到“属”，另2株鉴定为可能的新属新种。进一步结合细菌的生化反应特征及其他管家基因序列分析结果，则可鉴定到“种”的细菌可增加到42株（87．5％），其中包括链杆菌、嗜二氧化碳噬纤维菌、玫瑰单胞菌、奴卡菌、弯曲菌、分枝杆菌等具有明确临床意义的少见菌，以及多株近十年内命名的新细菌，如小不动杆菌、富西亚分枝杆菌、黏液玫瑰单胞菌、Halomonasjohnsoniae等。此外，还发现了1个新亚型的胎儿弯曲菌。结论16SrRNA基因测序鉴定能明确提供细菌的遗传学信息，且无种属选择性，对临床少见菌、苛养菌、以及固体培养基不生长的纯培养物等具有独特的优势，是病原微生物鉴定的发展责向.

关键词： RNA,核糖体,16S 聚合酶链反应序列分析细菌学技术

实时荧光定量聚合酶链式反应检测百日咳鲍特菌的效能研究

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中国全科医学 2019年第23期22卷 2815-2819页

作者：王青刘莹袁林孟庆红姚开虎国家儿童医学中心首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所国家呼吸系统疾病临床医学研究中心教育部儿科重大疾病研究重点实验室儿童呼吸道感染性疾病研究北京市重点实验室

背景百白破疫苗效价不足事件引发公众对百日咳的关注,但目前各种百日咳实验室检测方法均具有一定的局限性,无法满足快速进行病原学诊断的临床需求。目的评价一种商品化的实时荧光定量聚合酶链式反应(Q-PCR)试剂盒对百日咳鲍特菌(BP)感... 详细信息

背景百白破疫苗效价不足事件引发公众对百日咳的关注,但目前各种百日咳实验室检测方法均具有一定的局限性,无法满足快速进行病原学诊断的临床需求。目的评价一种商品化的实时荧光定量聚合酶链式反应(Q-PCR)试剂盒对百日咳鲍特菌(BP)感染的临床检测效果。方法2016年11月-2017年4月在首都医科大学附属北京儿童医院采集无热咳嗽患儿鼻咽拭子302例,以及临床诊断为百日咳患儿鼻咽拭子50例。采用Q-PCR与细菌培养方法筛查302例无热咳嗽患儿是否存在BP感染,并比较两种方法检测50例临床诊断百日咳病例的阳性率,综合评估Q-PCR的临床应用价值。结果302例无热咳嗽患儿中,以细菌培养为金标准时,Q-PCR检测的灵敏度为78.6%(11/14),特异度为95.8%(276/288),阳性预测值为47.8%(11/23),阴性预测值为98.9%(276/279)。在50例临床诊断百日咳病例的鼻咽拭子标本中,Q-PCR检测的阳性率为34.0%(17/50),细菌培养的阳性率为22.0%(11/50),两者比较,差异无统计学意义(χ^2=3.125,P=0.077)。结论以细菌培养结果为金标准,Q-PCR筛查百日咳的灵敏度及特异度较高;在为临床诊断百日咳患儿提供病原学证据中,Q-PCR与细菌培养方法检测阳性率相当。

关键词：百日咳百日咳鲍特菌实时聚合酶链反应细菌学技术灵敏度特异度