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长链非编码RNA KCNIP4-IT1通过靶向miR-181c-5p对喉癌细胞增殖和迁移的影响

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中国耳鼻咽喉头颈外科 2022年第3期29卷 146-150页

作者：郭洁张杨徐帅范崇盛张勇郑州大学附属洛阳中心医院耳鼻咽喉头颈外科河南洛阳471000

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)KCNIP4-IT1/miR-181c-5p分子轴对喉癌TU177细胞增殖和迁移的调控作用。方法采用qPCR检测30对喉癌组织和癌旁组织、喉癌细胞系(TU159、TU686、AMC-NH-8、TU177、TU138)和支气管上皮细胞系(16HBE)中KCNIP4-IT1表达水平。通过RNA干扰技术将KCNIP4-IT1的小干扰RNA转染到TU177细胞(si-KCNIP4-IT1组),建立KCNIP4-IT1低表达细胞系,另设置阴性Ctrl组(Ctrl组,转染阴性对照序列)。MTT法、划痕愈合实验检测敲低KCNIP4-IT1后TU177细胞增殖和迁移的变化。双荧光素酶报告基因实验验证KCNIP4-IT1与miR-181c-5p之间的靶向调控关系。qPCR检测细胞中miR-181c-5p和人纤溶酶原激活物抑制剂1(SERPINE1)mRNA的表达水平。Western blotting检测细胞迁移蛋白(β-catenin、N-Cadherin)和增殖蛋白(CDK3、PCNA)的表达水平。结果 KCNIP4-IT1在喉癌组织中表达水平高于癌旁组织(t=9.297,P细胞系中表达水平高于16HBE细胞(t分别为4.620、7.502、4.944、8.665、9.139,P均细胞中KCNIP4-IT1表达水平最高(F=17.819,P 细胞增殖(P均迁移(t=3.740,P细胞迁移蛋白(β-catenin、N-Cadherin)和增殖蛋白(CDK3、PCNA)的表达水平。结论 KCNIP4-IT1在喉癌组织和细胞系中呈高表达状态,敲低KCNIP4-IT1抑制喉癌TU177细胞的增殖和迁移,其分子机制可能与靶向调控miR-181c-5p并抑制SERPINE1表达有关。

关键词：喉肿瘤细胞增殖细胞迁移分析长链非编码RNA KCNIP4-IT1 miR-181c-5p

上皮膜蛋白1调控人鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭

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中国耳鼻咽喉头颈外科 2022年第4期29卷 247-251页

作者：张虹张春肖志勇林梦兰唐典厦门大学附属福州市第二医院耳鼻咽喉头颈外科福建福州福建福州350007 福建医科大学附属福建省肿瘤医院头颈放疗科福建福州350014

目的探讨上皮膜蛋白1(epithelial membrane protein 1,EMP1)对人鼻咽癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法通过脂质体介导,对人鼻咽癌细胞CNE-1(简称CNE-1)分别进行pcDNA3.1(+)空载体质粒和pcDNA3.1(+)-EMP1过表达重组质粒转染。... 详细信息

目的探讨上皮膜蛋白1(epithelial membrane protein 1,EMP1)对人鼻咽癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法通过脂质体介导,对人鼻咽癌细胞CNE-1(简称CNE-1)分别进行pcDNA3.1(+)空载体质粒和pcDNA3.1(+)-EMP1过表达重组质粒转染。采用实时荧光定量PCR、免疫印记技术检测转染CNE-1与人鼻黏膜上皮细胞HNEpC(简称HNEpC)中EMP1的表达水平。后续实验分3组,分别为CNE-1组(对照组)、pcDNA3.1(+)空载体质粒转染CNE-1(空载体组)和pcDNA3.1(+)-EMP1过表达重组质粒转染CNE-1(过表达组),进行CCK8、集落形成实验、Transwell迁移与侵袭实验,比较3组中EMP1的表达对肿瘤细胞活力、细胞增殖、细胞迁移与侵袭的影响。结果EMP1 mRNA和EMP1在对照组中的相对表达量均显著低于过表达组和HNEpC组,差异均有统计学意义(P均0.05)。细胞活力、集落形成率、细胞迁移及侵袭数,对照组均显著高于过表达组,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论 EMP1在CNE-1和HNEpC中表达有差异,体外实验证实了上调EMP1表达可抑制肿瘤细胞增殖、迁移与侵袭的生物学行为。

关键词：鼻咽肿瘤细胞增殖细胞迁移分析侵袭上皮膜蛋白1

甲状腺癌相关基因1在喉癌组织中的表达及对喉癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

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中国耳鼻咽喉头颈外科 2023年第10期30卷 613-618页

作者：任刚马兵良徐珏王建秋兰龙江湖州市第一人民医院(湖州师范学院附属第一医院)耳鼻咽喉科浙江湖州313000

目的探讨甲状腺癌相关基因1(thyroid cancer gene-1,TC-1)在喉癌组织中的表达及对喉癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用免疫组织化学方法检测48例喉癌患者的喉癌组织及对应癌旁正常喉黏膜中TC-1的表达水平。Lenti-GFP-Puro(对... 详细信息

目的探讨甲状腺癌相关基因1(thyroid cancer gene-1,TC-1)在喉癌组织中的表达及对喉癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用免疫组织化学方法检测48例喉癌患者的喉癌组织及对应癌旁正常喉黏膜中TC-1的表达水平。Lenti-GFP-Puro(对照质粒)、Lenti-TC-1-GFP-Puro、siRNA N-CTL(阴性对照)及siRNA TC-1转染喉癌细胞,分别命名为Control组、TC-1组、siRNA-Control组及siRNA-TC-1组。采用CCK-8法、划痕实验及Transwell实验检测喉癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。采用Western blot检测β-catenin、c-Myc及MMP-7蛋白表达的变化。结果TC-1在喉癌组织中的阳性表达率高于正常喉黏膜组织(χ^(2)=15.875,P细胞的增殖、迁移及侵袭能力增强(t=-4.671、-8.179、-26.130,P细胞的增殖、迁移及侵袭能力减弱(t=9.144、4.213、6.684,P细胞的增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能为TC-1调节Wnt/β-catenin信号通路靶基因的表达有关。

关键词：喉肿瘤细胞增殖细胞迁移分析甲状腺癌相关基因1 侵袭

BK(Ca)通道对衰老小鼠耳蜗血管纹毛细血管周细胞迁移的作用

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2021年第12期56卷 1319-1327页

作者：徐少然夏满莉邓双李雪蕊司军强李丽石河子大学医学院生理教研室新疆维吾尔自治区石河子市832002 嘉兴学院医学院基础医学部浙江省嘉兴市314000 石河子大学第一附属医院中心实验室新疆维吾尔自治区石河子市832002

目的探讨大电导钙激活钾离子通道[large conductance calcium-activated potassium channel,BK(Ca)]是否参与衰老小鼠耳蜗血管纹毛细血管周细胞(pericytes,PC)的迁移。方法将C57BL/6J小鼠分为3月龄(n=10)组和12月龄组(n=10),听性脑干反应(ABR)检测各组听力阈值;免疫荧光检测各组耳蜗血管纹毛细血管PC上β-BK(Ca)通道和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达变化;透射电镜(transmission electron microscope,TEM)观察各组耳蜗血管纹PC的形态改变。细胞实验:原代培养耳蜗血管纹PC并鉴定;D-半乳糖(D-gal)制备细胞衰老模型,CCK8确定D-gal干预浓度;β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色评估细胞衰老水平;全细胞膜片钳技术记录PC上BK(Ca)通道激活电流变化;免疫荧光技术检测PC上β-BK(Ca)通道蛋白表达变化;划痕实验和Transwell实验检测2组细胞迁移侵袭能力;Western blot技术检测β-BK(Ca)通道和OPN蛋白表达水平。采用SPSS 22.0软件对数据进行统计学分析。结果动物实验:12月龄组小鼠较3月龄组ABR阈值升高(t=12.66,P细胞紧密相连,12月龄组PC与内皮细胞连接疏松或PC胞体从毛细血管壁分离。细胞实验:耳蜗血管纹原代培养的耳蜗血管纹PC阳性率在95%以上,15 mg/ml D-gal干预的PC较对照组的SA-β-gal染色细胞阳性率高,差异有统计学意义(t=36.90,P细胞膜片钳BK(Ca)通道电流减小(t=12.18,P迁移能力增加(t=7.91,P迁移能力增加(t=5.88,P迁移能力增加,β-BK(Ca)通道表达降低,给予BK(Ca)通道特异性阻断剂IBTX可使迁移能力增加,提示BK(Ca)通道可能参与衰老小鼠耳蜗血管纹毛细血管PC的迁移。

关键词：血管纹衰老周细胞大电导钙激活钾通道细胞迁移分析

Klotho蛋白对人脐静脉内皮细胞增殖迁移黏附及血管内皮生长因子表达的影响

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中华医学杂志 2014年第28期94卷 2207-2211页

作者：王芳娟胡巨龙熊力陈文赵晓辉第三军医大学新桥医院心血管内科全军心血管研究所重庆400037 解放军第一八医院第三军医大学人体解剖教研室

目的研究抗衰老Klotho蛋白在人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖、迁移、黏附能力中的作用及对血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响.方法采用不同浓度的Klotho蛋白（0.1、1、10 nmol/L）处理HUVEC24h,同时设置空白对照组、阳性对照VEGF组... 详细信息

目的研究抗衰老Klotho蛋白在人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖、迁移、黏附能力中的作用及对血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响.方法采用不同浓度的Klotho蛋白（0.1、1、10 nmol/L）处理HUVEC24h,同时设置空白对照组、阳性对照VEGF组（10 nmol/L）和AKT信号通路抑制组（10 nmol/L Klotho蛋白＋AKT抑制剂）.通过MTT方法、划痕实验、Transwell方法、细胞黏附实验分别检测Klotho蛋白对HUVEC细胞的增殖、迁移、黏附能力的影响;并通过蛋白印迹（Westernblot）检测Klotho蛋白对HUVEC中VEGF表达的诱导作用.结果 MTT方法检测0.1、1、10 nmol/LKlotho蛋白组A值与空白对照组（0.59±0.03）相比,分别增加0.63±0.03、0.71±0.04、0.80±0.04,差异有统计学意义（F=9.32,P＜0.05）;划痕实验0.1、1、10 nmol/L Klotho蛋白组细胞迁移率与空白对照组（9.40 ±2.07）％相比,分别增加（12.28±0.62）％、（31.66±1.50）％、（36.69 ±0.79）％,差异有统计学意义（F=9.50,P＜0.05）;Transwell方法发现与空白对照组细胞迁移数（80.13±12.19）相比,0.1、1、10 nmol/L Klotho蛋白组增加95.88±9.54、143.13 ±7.83、178±12.77,差异有统计学意义（F=11.51,P＜0.05）;细胞黏附实验0.1、1、10 nmol/L Klotho蛋白组和空白对照组细胞的黏附数分别为59.60±5.13、78.40 ±7.16、114.60±5.55和49.40±6.23,差异有统计学意义（F=9.75,P＜0.05）;Western blot检测发现Klotho蛋白同样能够诱导VEGF表达,与空白对照组表达比值（0.35±0.08）相比,0.1、1、10 nmol/L Klotho蛋白组增加0.46±0.02、0.71 ±0.12、0.81 ±0.16,差异有统计学意义（F=8.95,P＜0.05）.结论 Klotho蛋白能促进HUVEC的增殖、迁移、黏附能力,显著诱导VEGF的表达,并且其发挥功能与AKT信号通路有关.

关键词：内皮细胞细胞增殖细胞迁移分析血管内皮生长因子类

雷帕霉素对人表皮细胞株HaCaT迁移的影响及其分子机制

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中华烧伤杂志 2016年第1期32卷 40-45页

作者：张均辉张东霞赵利平闫甜甜张琼贾杰只黄跃生第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的探讨雷帕霉素对人表皮细胞株HaCaT迁移的影响，并初步分析其分子机制。方法采用含体积分数10％FBS的RPMI1640培养液（简称培养液）常规培养HaCaT细胞。（1）取对数生长期细胞，按照随机数字表法将其分为对照组及1、5、50、100、200n... 详细信息

目的探讨雷帕霉素对人表皮细胞株HaCaT迁移的影响，并初步分析其分子机制。方法采用含体积分数10％FBS的RPMI1640培养液（简称培养液）常规培养HaCaT细胞。（1）取对数生长期细胞，按照随机数字表法将其分为对照组及1、5、50、100、200nmol／L雷帕霉素组，每组6孔。5个雷帕霉素组细胞分别加入含相应质量浓度雷帕霉素的培养液，对照组细胞加入含二甲基亚砜（DMSO）的培养液。常规培养4h后，采用酶标仪检测细胞增殖活性（以吸光度值表示）。（2）取对数生长期细胞，同实验（1）分组培养，每组l孑L。常规培养4h后，在活细胞工作站下观察各组细胞3h内运动范围，计算细胞曲线运动速度，筛选雷帕霉素适宜实验浓度。（3）取对数生长期细胞，按随机数字表法将其分为雷帕霉素组和对照组，每组1孔。雷帕霉素组细胞加入含50nmol／L雷帕霉素的培养液，对照组细胞加入含DMSO的培养液。常规培养4h后行划痕实验，观察划痕后0（即刻）、5、10、15h的划痕面积并计算后3个时相点的细胞迁移率。（4）取对数生长期细胞，同实验（3）分组培养，每组1孔。用蛋白质印迹法检测细胞黏着斑激酶（FAK）活性（以磷酸化FAK与FAK灰度值比值表示）。上述实验重复3次或5次。对数据行单因素方差分析、LSD检验、t检验。结果（1）对照组及1、5、50、100、200nmol／L雷帕霉素组细胞增殖活性分别为1．22±0．28、1．29±0．38、1．12±0．27、1．20±0．29、1．15±0．30、1．39±0．40，组间比较差异无统计学意义（F=2．112，P=0．068）。（2）1、5nmol／L雷帕霉素组细胞的运动范围与对照组接近，其余3个雷帕霉素组细胞的运动范围明显小于对照组。组间细胞曲线运动速度总体比较，差异有统计学意义（F=3．525，P=0．004）。l、5nmol／L雷帕霉素组细胞曲线运动速度分别为（0．8±0．4）、（0．8±0．8）μm／min，与对照组[（0．9±0．5）μm／min]相近（P值均大于0．05）；50、100、200nmol／L雷帕霉素组细胞曲线运动速度分别为（0．7±0．5）、（0．7±0．4）、（0．7±0．4）μm／min，明显慢于对照组（P值均小于0．01）。选择50nmol／L雷帕霉素用于后续实验。（3）划痕后0、5h，雷帕霉素组细胞划痕面积与对照组相近；划痕后10、15h，雷帕霉素组细胞划痕面积较对照组大。划痕后5h，对照组及雷帕霉素组的细胞迁移率分别为（17．5±2．6）％、（15．8±3．5）％，组间比较差异无统计学意义（t=1．951，P〉0．05）。雷帕霉素组划痕后10、15h的细胞迁移率分别为（42．5±4．0）％、（71．3±9．2）％，明显低于对照组的（46．9±6．7）％、（88．0±7．7）％，t值分别为2．732、6．746，P值均小于0．01。（4）雷帕霉素组细胞FAK活性为O．16±0．08，明显低于对照组的0．46±0．14，t=4．967，P〈0．01。结论在HaCaT细胞中，FAK信号通路对雷帕霉素敏感，FAK活性下降可能参与介导雷帕霉素对HaCaT细胞迁移的抑制效应。

关键词：西罗莫司细胞增殖细胞迁移分析细胞运动黏着斑激酶 HaCaT细胞

黏着斑激酶相关非激酶对肝星状细胞活化及迁移功能的影响

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中华内科杂志 2021年第4期60卷 362-367页

作者：胡睿涵赵雪珂黄韬邹高亮贵州医科大学附属医院感染科贵阳550004

目的探讨黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)对肝星状细胞(HSCs)活化及迁移功能的影响。方法2019年3—9月,收集贵州医科大学附属医院肝胆外科9例肝纤维化患者肝组织标本。人体肝组织分为健康对照组与纤维化组。C57BL/6实验小鼠分为野生型(WT)、... 详细信息

目的探讨黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)对肝星状细胞(HSCs)活化及迁移功能的影响。方法2019年3—9月,收集贵州医科大学附属医院肝胆外科9例肝纤维化患者肝组织标本。人体肝组织分为健康对照组与纤维化组。C57BL/6实验小鼠分为野生型(WT)、FRNK基因敲除型(FRNK-/-)两组,以四氯化碳(CCl4)进行肝纤维化造模,完成后使用腺病毒载体构建FRNK基因过表达型(Ad-FRNK)。通过HE、Masson染色观察肝组织病理改变,Western蛋白印迹法检测磷酸化黏着斑激酶(PY397-FAK)与α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达;提取小鼠原代HSCs,细胞划痕实验检测FRNK对HSCs迁移功能的影响,及对Rac、Rho活化的影响。结果肝纤维化人体肝组织PY397-FAK蛋白表达量显著高于健康对照组(0.88±0.09比0.73±0.09),FRNK低于健康对照组(0.68±0.09比0.79±0.11),P值均迁移功能[WT︰FRNK-/-︰Ad-FRNK为(339±49)%︰(580±53)%︰(259%±33)%],并抑制Rac和Rho蛋白的活化(Rac为0.54±0.07比0.91±0.10比0.77±0.12,Rho为0.45±0.05比0.64±0.06比0.53±0.07),P值均迁移功能改善肝纤维化,其机制可能与下调PY397-FAK、抑制Rac和Rho的活化有关。

关键词：肝硬化黏着斑蛋白酪氨酸激酶类细胞迁移分析

葡萄糖调节蛋白78对人结直肠癌RKO细胞增殖和迁移能力的影响

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中华病理学杂志 2016年第6期45卷 401-406页

作者：吉秋霞刘丽丽李琳邢晓明青岛大学附属医院病理科 266003 山东省东营市人民医院病理科山东省禹城市人民医院病理科

目的探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）对人结直肠癌RKO细胞增殖和迁移能力的影响。方法构建编码GRP78的shRNA慢病毒表达载体pLV。shRNAGRP78及阴性对照慢病毒表达载体pLV—control，分别转染人结直肠癌细胞系RKO。四甲基偶氮唑盐法实验和... 详细信息

目的探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）对人结直肠癌RKO细胞增殖和迁移能力的影响。方法构建编码GRP78的shRNA慢病毒表达载体pLV。shRNAGRP78及阴性对照慢病毒表达载体pLV—control，分别转染人结直肠癌细胞系RKO。四甲基偶氮唑盐法实验和克隆形成实验检测细胞的增殖能力，流式细胞术检测细胞周期的分布情况，划痕实验检测细胞迁移能力，裸鼠皮下成瘤实验检测细胞体内成瘤能力。Affymetrix人全基因组表达芯片检测GRP78表达抑制后RKO细胞中基因表达谱的变化。Westernblot技术验证部分差异基因以确定结果的可靠性。结果转染pLV—shRNAGRP78后，RKO细胞增殖能力及克隆形成数目明显受到抑制（P〈0．05），但迁移能力没有明显变化（P〉0．05）；流式细胞术检测结果显示，沉默GRP78导致G，期细胞比例显著增加，而s期细胞比例显著降低（P〈0．05）；裸鼠成瘤实验结果显示，沉默GRP78导致肿瘤细胞在裸鼠皮下成瘤能力显著减弱（P〈0．05）。基因芯片检测结果显示，GRP78表达抑制后，共有397个基因的表达发生改变（与对照组相比，变化表达倍数≥1．2），其中上调的基因258个，下调139个，这些基因主要涉及信号转导、细胞代谢、细胞凋亡等功能。通过生物信息学分析，筛选3个（CDKN2B、MTOR及BIRC3）特异相关的差异基因进行Westernblot验证，验证结果与芯片结果相符。结论沉默GRP78可通过抑制人结直肠癌RKO细胞周期G，／S期转换，从而抑制细胞的体内外增殖生长能力，但对细胞的迁移能力无显著影响。通过基因芯片技术能够筛选和鉴定与GRP78表达改变相关的基因。GRP78可能通过调控这些基因的表达从而影响结直肠癌细胞的增殖能力。

关键词：结直肠肿瘤细胞增殖细胞迁移分析细胞系,肿瘤葡萄糖调节蛋白78

缺氧诱导因子1α对P311的作用及其对小鼠表皮干细胞迁移的影响

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中华烧伤杂志 2017年第5期33卷 287-294页

作者：徐正东李海胜王淞贺伟峰吴军罗高兴第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的体外条件下模拟缺氧环境，探讨P311和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）相互作用及对小鼠表皮干细胞（ESC）迁移影响。方法取15只C57BL/6J野生型新生小鼠，5只同属来源P311基因敲除新生小鼠，分离培养2种小鼠ESC，取第1代细胞行形态学观... 详细信息

目的体外条件下模拟缺氧环境，探讨P311和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）相互作用及对小鼠表皮干细胞（ESC）迁移影响。方法取15只C57BL/6J野生型新生小鼠，5只同属来源P311基因敲除新生小鼠，分离培养2种小鼠ESC，取第1代细胞行形态学观察，采用流式细胞仪检测细胞表面标志物CD71、CD49f表达后行以下实验。（1）取2种小鼠ESC划痕处理后，立即按随机数字表法（下同）将P311基因敲除小鼠ESC分为常氧组（将细胞加入完全培养基置于常氧二氧化碳培养箱培养，常氧处理下同）和缺氧组（将细胞置于含体积分数1%氧气的缺氧二氧化碳培养箱培养，缺氧处理下同），每组12个插件；将野生型小鼠ESC分为常氧组、单纯缺氧组、二甲基亚砜（DMSO）对照组（用2 μL DMSO溶剂常氧处理1 h后行缺氧培养）、HIF-1α抑制剂组（加入11 μmol/L HIF-1抑制剂2 μL常氧培养1 h后行缺氧培养）、HIF-1α稳定剂组（加入2 μmol/L FG-4592 2 μL常氧处理1 h后行缺氧培养），每组12个插件。每组各时相点取3个插件分别于划痕后0（即刻）、12 、24、48 h在100倍倒置相差显微镜下测量划痕剩余宽度。（2）取野生型小鼠ESC行缺氧培养，蛋白质印迹法检测缺氧0（即刻）、12、24、48 h HIF-1α蛋白表达。（3）取野生型小鼠ESC同实验（1）分为单纯缺氧组、DMSO对照组、HIF-1α抑制剂组、HIF-1α稳定剂组并行相应处理，分别在缺氧0、12、24、48 h采用实时荧光定量RT-PCR法检测P311 mRNA表达，免疫细胞化学染色法观测P311表达（样本数均为12）。（4）取第2代人胚胎肾293（HEK-293）细胞分为空载缺氧组（转染空载质粒后进行缺氧培养）、P311常氧组（转染P311报告基因质粒后进行常氧培养）、P311缺氧组（转染P311报告基因质粒后进行缺氧培养）、P311缺氧＋HIF-1α抑制剂组（HIF-1抑制剂处理后转染P311报告基因质粒然后进行缺氧培养），分别于培养0、12 h检测荧光素酶活性，采用生物信息学方法预测HIF-1α对P311转录调节的结合位点并查找P311启动子序列。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD检验以及Bonferroni校正。结果（1）ESC结果。细胞呈现铺路石样改变，细胞由于增殖潜能不同而呈现不同克隆状态。CD71－CD49f＋细胞占85%左右，说明ESC的干性较强、纯度较高。与P311基因敲除小鼠常氧组比较，单纯缺氧组细胞划痕后12、24 h划痕剩余宽度较小（P值均小于0.05），缺氧组、野生型小鼠常氧组、DMSO对照组、HIF-1α抑制组、HIF-1α稳定剂组细胞划痕后12 h划痕剩余宽度较小（P值均小于0.05）。与野生型小鼠常氧组比较，缺氧组、单纯缺氧组、DMSO对照组细胞划痕后12、24 h划痕剩余宽度较小（P值均小于0.05），HIF-1α稳定剂组细胞划痕后12 h划痕剩余宽度较小（P〈0.05）。与单纯缺氧组比较，缺氧组细胞划痕后12、24 h划痕剩余宽度较大（P值均小于0.05），HIF-1α抑制剂组细胞划痕后12 h划痕剩余宽度较大（P〈0.05），HIF-1α稳定剂组细胞划痕后12、24 h划痕剩余宽度较小（P值均小于0.05）。7组小鼠细胞间划痕后48 h划痕剩余宽度总体比较差异不明显（F＝19.02，P〉0.05）。野生型小鼠ESC缺氧0、12、24、48 h的HIF-1α蛋白表达量分别为1.02±0.05、2.56±0.09、1.60±0.17、1.17±0.03。与缺氧0 h比较，HIF-1α蛋白表达量缺氧12 h明显增加（P〈0.01），缺氧24 h开始下降但仍高于缺氧0 h（P〈0.05），缺氧48 h后降至常氧水平（P〉0.05）。与单纯缺氧组比较，HIF-1α抑制剂组细胞缺氧各时相点P311 mRNA表达量均明显下降（P值均小于0.05），HIF-1α稳定剂组细胞P311 mRNA表达量则在缺氧12、24 h明显升高（P值均小于0.05）。与HIF-1α抑制剂组比较，DMSO对照组和HIF-1α稳定剂组细胞在缺氧0、12、24 h P311 mRNA表达量均明显升高（P值均小于0.05）。与单纯缺氧组比较，HIF-1α抑制剂组细胞缺氧各时相点P311表达量均明显下降（P值均小于0.05），而HIF-1α稳定剂组细胞P311表达量则在缺氧12、24 h明显升高（P值均小于0.05）。与HIF-1α抑制剂组比较，DMSO对照组和HIF-1α稳定剂组细胞P311表达量在缺氧12、24 h明显升高（P值均小于0.05）。（2）HEK-293细胞结果。培养0 h，空载缺氧组、P311常氧组、P311缺氧组、P311缺氧＋HIF-1α抑制剂组细胞荧光素酶活性差异无统计学意义（F＝13.33，P〉0.05）。培养12

关键词：缺氧诱导因子1 细胞迁移分析伤口愈合表皮干细胞 P311