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体外扩增过程中造血细胞生理状态和遗传稳定性研究

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体外扩增过程中造血细胞生理状态和遗传稳定性研究

作者：葛剑云华东理工大学

学位级别：硕士

体外扩增技术是解决新鲜脐血中造血干/祖细胞数量稀少问题的有效策略,而扩增后细胞的质量和安全性是影响其临床应用的重要因素。本文以脐血CD34+细胞为对象,分别采用有或无血清培养体系,对体外培养细胞的生理状态、遗传稳定性、染色体... 详细信息

体外扩增技术是解决新鲜脐血中造血干/祖细胞数量稀少问题的有效策略,而扩增后细胞的质量和安全性是影响其临床应用的重要因素。本文以脐血CD34+细胞为对象,分别采用有或无血清培养体系,对体外培养细胞的生理状态、遗传稳定性、染色体核型和克隆形成能力进行了系统的分析,获得下列结果：（1）无论细胞培养基有无血清,细胞的比生长速率、S/G2/M期细胞比例、以及细胞内端粒酶活性均有相似的变化趋势,存在一定的相关性;（2）与CD34-细胞相比,在培养过程中CD34+细胞的凋亡率始终维持在较低水平上,低于新鲜分离的CD34+细胞中的凋亡率,表明CD34+细胞具有很强的抗凋亡特性;（3）在细胞培养过程中,与遗传稳定性相关基因Bmil、hTERT和Survivin mRNA的表达水平随培养时间延长均有不同程度的上调,但与K562细胞中的稳定高表达不同,提示细胞培养没有产生细胞恶化的信号;（4）6个脐血样本用含血清培养体系扩增,染色体核型异常比例较高,达2/3。但是这些异常的发生不具有定向性和稳定遗传性,且未表现出异常增殖的特征,提示有血清培养体系扩增的脐血造血干/祖细胞可能有临床安全性风险,但没有足够证据显示培养细胞出现了恶性转化。这些研究对确保培养细胞移植的安全性与有效性具有重要意义。

关键词：脐血造血干/祖细胞体外扩增细胞状态遗传稳定性

剑桥大学等成功使人多能干细胞复原到未分化状态

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生物产业技术 2015年第1期 68-69页

作者：大西淳子

英国剑桥大学的高岛康弘等通过使NANOG和KLF2两个基因同时表达使人PS细胞复原（reset），接近于小鼠ES细胞状态。

关键词：英国剑桥大学多能干细胞细胞状态复原分化 NANOG 基因小鼠

BMP4对SVZa神经干细胞增殖和分化的调控

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科学通报 2004年第8期49卷 759-768页

作者：刘仕勇杨辉张治元宋业纯邱克军张可成安宁周政蔡文琴第三军医大学新桥医院神经外科重庆400037 第三军医大学神经生物学教研室重庆400038

为了解BMPs在SVZa神经干细胞增殖和分化过程中的作用，在使用不同浓度BMP4诱导SVZa神经干细胞增殖分化的基础上，利用启动子活体荧光标记技术，动态显示BMP4的表达．结果表明，低浓度(1～5ng／mL)BMP4促进SVZa神经干细胞的增殖，而高浓... 详细信息

为了解BMPs在SVZa神经干细胞增殖和分化过程中的作用，在使用不同浓度BMP4诱导SVZa神经干细胞增殖分化的基础上，利用启动子活体荧光标记技术，动态显示BMP4的表达．结果表明，低浓度(1～5ng／mL)BMP4促进SVZa神经干细胞的增殖，而高浓度BMP4(10—100ng/mL)抑制其增殖；BMP4在分化的早期(10d)促进神经元的分化，而在4d以后抑制神经元的分化；加入BMP4的拮抗剂Noggin可以阻断其作用．在嗅球，BMP4的主要作用可能是促使神经元祖细胞退出细胞周期启动分化，在RMS可能为促进其增殖并维持神经元祖细胞状态，而在SVZa，BMP4则主要促进神经干细胞向星形胶质细胞分化．

关键词：细胞增殖神经干细胞调控荧光标记技术 Noggin 神经元分化过程 BMPs 增殖分化动态显示细胞周期细胞状态细胞分化启动子低浓度拮抗剂祖细胞 RMS 抑制活体表达嗅球

加拿大科学家绘就酵母核小体三维图，对了解和预测细胞生理状态十分有用

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生物学教学 2008年第7期33卷 74-74页

据东方网2007年11月30日消息，加拿大多伦多大学的科学家成功绘就了酵母的7万个核小体图。核小体是细胞状态的主要指示器和调节器，由多伦多大学教授克里·尼斯洛带领的研究小组，将他们绘制出的酵母基因三维图上信息编制成了计算机软... 详细信息

据东方网2007年11月30日消息，加拿大多伦多大学的科学家成功绘就了酵母的7万个核小体图。核小体是细胞状态的主要指示器和调节器，由多伦多大学教授克里·尼斯洛带领的研究小组，将他们绘制出的酵母基因三维图上信息编制成了计算机软件，可用以预测核小体的走向和位置。核小体在DNA上的定位对细胞日常功能的发挥起重要作用。知道核小体的位置，就可以初步了解细胞内部究竟处于什么状况以及细胞下一步的动向。这种信息可以作为疾病诊断的一个重要依据。

关键词：细胞状态酵母基因核小体三维图科学家加拿大生理状态预测

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影响细胞ELISA结果的主要因素

第三军医大学学报 2001年第7期23卷 871-872页

作者：李蓉芬陈敏康运生钟小林何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

细胞ELISA（酶联免疫吸附试验）是用细胞代替可溶性抗原包被于96孔酶联板（或细胞培养板）进行免疫学检测的一种有效方法，该方法特别适用于抗原位于细胞膜上而相应抗原的特性又不十分清楚或抗原难于纯化等情况［1～3］。我们在实际操... 详细信息

细胞ELISA（酶联免疫吸附试验）是用细胞代替可溶性抗原包被于96孔酶联板（或细胞培养板）进行免疫学检测的一种有效方法，该方法特别适用于抗原位于细胞膜上而相应抗原的特性又不十分清楚或抗原难于纯化等情况［1～3］。我们在实际操作过程中体会到细胞ELISA的结果理想与否与多种因素有关，概括起来包括以下几方面。

关键词： ELISA 影响因素细胞状态细胞固定封闭液

多种酶消化法分离培养气管上皮细胞方法的比较

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中华实验外科杂志 2005年第7期22卷 780-781,i001页

作者：李小飞邓三明汪健连耀国第四军医大学唐都医院胸外科西安710038 空军总医院肾内科

目的比较4种不同的酶消化法在培养气管上皮细胞中的异同,改进气管上皮细胞的培养技术,为组织工程气管提供理论种子细胞。方法Dispase冷消化法(使用0.1%Dispase4℃消化18h后使用0.25%的胰酶37℃消化10min)、胰酶冷消化法(0.25%胰酶4℃消... 详细信息

目的比较4种不同的酶消化法在培养气管上皮细胞中的异同,改进气管上皮细胞的培养技术,为组织工程气管提供理论种子细胞。方法Dispase冷消化法(使用0.1%Dispase4℃消化18h后使用0.25%的胰酶37℃消化10min)、胰酶冷消化法(0.25%胰酶4℃消化18h)、Dispase温消化法(0.25%Dispase37℃消化10min后使用0.25%胰酶37℃消化5min)及胰酶温消化法(0.25%的胰酶37℃消化10min),用4种消化法分离、培养兔气管上皮细胞,测定分离细胞的数量、纯度及成活率。结果4种方法所得细胞数量分别为:(430600.00±628.49、430780.00±580.52、430900.00±200.00、430640.00±931.67),差异无统计学意义(P细胞纯度高,细胞状态好。结论Dispase冷消化法较其他3种方法所得细胞纯度高、细胞成活率高,是一种较好的气管上皮细胞体外分离培养方法。

关键词：气管上皮细胞酶消化法 Dispase 冷消化法多种分离培养方法培养技术种子细胞组织工程分离细胞细胞数量细胞状态成活率胰酶 18h 纯度统计学

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疾病细胞之美

科技创业 2012年第1期 60-65,60页

作者：艾米利.辛格王玉

日本科学家山中申弥（Shinya Yamanaka）等人研究发的技术可以将已分化的人类皮肤细胞诱导成未分ft的干细胞状态。科学家们利用这项技术，用患有糖尿病、唐氏综合症、帕金森等疾病的患者体细胞培育干细胞，再诱导干细胞分化成受疾病影... 详细信息

日本科学家山中申弥（Shinya Yamanaka）等人研究发的技术可以将已分化的人类皮肤细胞诱导成未分ft的干细胞状态。科学家们利用这项技术，用患有糖尿病、唐氏综合症、帕金森等疾病的患者体细胞培育干细胞，再诱导干细胞分化成受疾病影响的特定细胞类型，据此来探寻疾病的分子机理异常。这些发现给上述疾病的治疗带来希望，并可作为新疗法的检测工具。

关键词：细胞状态疾病日本科学家细胞分化皮肤细胞细胞培育细胞类型分子机理

pMaxGFP导入人肝癌HepG_2细胞中磷酸钙转染法的应用条件优选

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山东医药 2014年第35期54卷 23-26页

作者：徐慧龚霞彭剑雄中南大学湘雅医学院长沙410013

目的优选出pMaxGFP导入人肝癌HepG2细胞中磷酸钙转染法的应用条件。方法取对数生长期的人肝癌HepG2细胞,采用磷酸钙转染法将pMaxGFP导入HepG2细胞,转染前1 h换不同血清浓度的新鲜培养液培养HepG2细胞,血清浓度分别为无血清、1%、2%、5%... 详细信息

目的优选出pMaxGFP导入人肝癌HepG2细胞中磷酸钙转染法的应用条件。方法取对数生长期的人肝癌HepG2细胞,采用磷酸钙转染法将pMaxGFP导入HepG2细胞,转染前1 h换不同血清浓度的新鲜培养液培养HepG2细胞,血清浓度分别为无血清、1%、2%、5%、10%、15%。转染48 h后以倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,评估转染效率,同时以原位台盼蓝染色检测转染后的细胞存活率,优选出最适血清浓度。在最适血清浓度条件下,磷酸钙转染法将pMaxGFP转染贴壁状态和悬浮状态的HepG2细胞,共分为A、B、C、D、E 5组,分别代表转染贴壁状态、悬浮状态3×104细胞/孔、4×104细胞/孔、5×104细胞/孔、6×104细胞/孔。转染48 h后在荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,评估转染效率,同时以原位台盼蓝染色检测转染后的细胞存活率,优选出最适的细胞状态和细胞密度。结果 48 h后,无血清组HepG2细胞大量死亡,而其他组有较少部分细胞死亡。1%、2%、5%、10%、15%血清浓度的转染效率分别为30.92%±1.29%、30.10%±1.05%、21.27%±0.63%、19.10%±0.51%、10.44%±1.42%,血清浓度为1%、2%时的转染效率明显高于其他血清浓度,P细胞存活率分别为76.01%±0.94%、89.68%±0.68%、92.38%±1.02%、93.36%±1.35%、93.49%±0.91%,血清浓度为2%时的细胞存活率明显高于1%血清浓度。在转染培养基血清浓度为2%条件下,A、B、C、D、E组转染效率分别为30.74%±0.50%、6.38%±0.28%、31.41%±0.42%、30.94%±0.47%、1.41%±0.27%,A、C、D组转染效率明显高于B、E组,P﹤0.05;A、B、C、D、E组细胞存活率分别为91.76%±0.99%、88.40%±1.29%、88.38%±1.08%、87.48%±0.78%、64.45%±0.55%,A、B、C、D组细胞存活率明显高于E组。结论优选出pMaxGFP导入人肝癌HepG2细胞中的磷酸钙转染法应用条件为转染培养基中血清浓度2%、悬浮状态下细胞密度为4×104细胞/孔或5×104细胞/孔。

关键词：磷酸钙转染法细胞转染细胞存活率细胞状态

PNAS：非转基因原态人类胚胎干细胞研究获进展

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现代生物医学进展 2014年第14期14卷 I0002-I0003页

一直以来，科学家们都无法有效地将胚胎干细胞维持在它们的原始干细胞状态。这影响了胚胎干细胞在临床上的应用。来自华盛顿大学的研究人员报道了非转基因，初始原态人类多能干细胞的产生。并详细介绍了两种实验方法路径。这将有助于干... 详细信息

一直以来，科学家们都无法有效地将胚胎干细胞维持在它们的原始干细胞状态。这影响了胚胎干细胞在临床上的应用。来自华盛顿大学的研究人员报道了非转基因，初始原态人类多能干细胞的产生。并详细介绍了两种实验方法路径。这将有助于干细胞多能状态的基础研究和临床研究。

关键词：人类胚胎干细胞非转基因细胞状态华盛顿大学多能干细胞研究人员基础研究科学家