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基于NF-κB信号通路的高通量药物筛选细胞炎症模型的建立

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中国现代应用药学 2019年第4期36卷 397-402页

作者：王楠楠童晔玲刘霞黄飞华朱婉萍浙江省中医药研究院杭州310007

目的建立均相时间分辨荧光(homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF)测定炎症细胞模型中NF-κB的方法,为高通量筛选呼吸道炎症药物提供实验依据。方法采用HTRF检测细胞中Total-NF-κB及Phospho-NF-κB比率来确定NF-κB磷酸化程度... 详细信息

目的建立均相时间分辨荧光(homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF)测定炎症细胞模型中NF-κB的方法,为高通量筛选呼吸道炎症药物提供实验依据。方法采用HTRF检测细胞中Total-NF-κB及Phospho-NF-κB比率来确定NF-κB磷酸化程度。观察不同细胞密度(每孔5,25,50,100,150 k)、不同刺激因子(TNF-α、LPS)、不同作用时间(10,30,60 min)等条件对支气管平滑肌细胞(BSMC)、支气管上皮细胞(HBE) NF-κB磷酸化的影响,建立炎症细胞模型及HTRF测定NF-κB的方法。结果采用HBE细胞,细胞密度为每孔10 k,刺激因子TNF-α(10 ng·mL^(-1))刺激细胞,刺激10 min建立炎症细胞模型,可使细胞中NF-κB磷酸化水平达到52.6%,与正常对照组(14.2%)相比,有明显升高。结论成功建立了快速、特异性高、操作简便的HTRF测定细胞炎症模型中NF-κB磷酸化程度的方法,为气道炎症药物筛选研究提供了依据。

关键词：均相时间分辨荧光细胞炎症模型 NF-κB

黄芩苷黄芩素小檗碱对LLC-PK1细胞炎症模型中TNF-α IL-1β及IL-6表达的影响

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中国兽医杂志 2015年第4期51卷 55-58页

作者：任浩文丛霞李华涛姜忠玲王新曹荣峰田文儒青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109

研究中药黄芩苷、黄芩素、小檗碱对细菌脂多糖(LPS)诱导的猪肾小管上皮细胞(LLC-PK1)中肿瘤坏死因子-α(TNG-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6)表达的影响。用噻唑蓝比色法(MTT法)筛选LPS、黄芩苷、黄芩素和小檗碱对细... 详细信息

研究中药黄芩苷、黄芩素、小檗碱对细菌脂多糖(LPS)诱导的猪肾小管上皮细胞(LLC-PK1)中肿瘤坏死因子-α(TNG-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6)表达的影响。用噻唑蓝比色法(MTT法)筛选LPS、黄芩苷、黄芩素和小檗碱对细胞作用的最佳浓度,用RT-PCR检测TNF-α、IL-1βmRNA表达,以确定细胞炎症模型是否建立成功;炎症模型建立后,用最佳浓度的黄芩苷、黄芩素和小檗碱分别作用细胞24h,用qPCR检测TNF-α、IL-1β及IL-6mRNA的表达量。结果LPS刺激组细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达量极显著高于正常对照组(P细胞TNF-α、IL-1β及IL-6mRNA表达量比LPS刺激组显著降低(P0.05)。上述结果表明,黄芩苷、黄芩素和小檗碱通过抑制炎症细胞TNF-α、IL-1β及IL-6 mRNA的表达,从而发挥抗炎作用。

关键词：细胞炎症模型 TNF-α IL-1β 黄芩苷黄芩素小檗碱

槐定碱、苦参碱和苦豆碱对LPS诱发结肠上皮细胞炎症模型中细胞因子IL-6和TNF-α水平的影响

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中国实验方剂学杂志 2014年第8期20卷 133-136页

作者：郑堰心张丽邓虹珠梁磊南方医科大学中医药学院广州510515 广州军区广州总医院药剂科广州510010

目的:构建结肠上皮细胞炎症模型,探讨槐定碱、苦参碱和苦豆碱对细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法:将细胞接种12孔板中,每孔接种肠上皮细胞株IEC-6 2×105个细胞。细菌脂多糖(LPS,1mg·L-1)干预生... 详细信息

目的:构建结肠上皮细胞炎症模型,探讨槐定碱、苦参碱和苦豆碱对细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法:将细胞接种12孔板中,每孔接种肠上皮细胞株IEC-6 2×105个细胞。细菌脂多糖(LPS,1mg·L-1)干预生长良好的IEC-6细胞12 h,建立细胞炎症模型。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测3种生物碱不同浓度对炎症细胞增殖的影响;ELISA法检测给药后细胞上清中IL-6,TNF-α的变化;免疫印迹法检测细胞内IL-6及TNF-α蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组细胞上清中IL-6,TNF-α水平显著升高,LPS(1 mg·L-1)干预12 h后,IL-6,TNF-α含量分别为(1 899.68±45.80),(148.67±5.93)ng·L-1。苦豆碱、槐定碱和苦参碱均可有效减弱LPS诱导的结肠上皮细胞损伤。当生物碱浓度为100μmol·L-1时,槐定碱、苦参碱和苦豆碱均可提高LPS损伤细胞的活性,细胞存活率分别从80.47%提高为91.96%,92.40%,97.23%。此外,这3种生物碱可降低IL-6和TNF-α的含量及其在细胞内的表达。结论:槐定碱、苦参碱和苦豆碱3种生物碱均可通过降低IL-6和TNF-α活性发挥抗炎作用。其中,苦豆碱的抗炎作用最佳。

关键词：槐定碱苦参碱苦豆碱结肠上皮细胞细胞炎症模型

基于核因子-κB通路研究复方柴芩退热颗粒对脂多糖介导细胞炎症模型的作用

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湖南中医杂志 2018年第7期34卷 177-180页

作者：李洁蔡妙珊李智勇广东省第二中医院广东广州510095

目的:研究复方柴芩退热颗粒对脂多糖介导炎症细胞模型的作用。方法:建立脂多糖介导RAW264.7细胞炎症模型,分为空白组,模型组,复方柴芩退热颗粒高、中、低浓度组,分别使用复方柴芩退热颗粒高、中、低剂量(21.12、10.56、5.28mg/m L)进行... 详细信息

目的:研究复方柴芩退热颗粒对脂多糖介导炎症细胞模型的作用。方法:建立脂多糖介导RAW264.7细胞炎症模型,分为空白组,模型组,复方柴芩退热颗粒高、中、低浓度组,分别使用复方柴芩退热颗粒高、中、低剂量(21.12、10.56、5.28mg/m L)进行药物干预培养。酶联免疫法检测细胞培养上清液肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β、IL-6及IL-10的含量。蛋白印迹法检测核转录因子(NF)-κB P-IκB表达水平。结果:复方柴芩退热颗粒高、中、低浓度组TNF-α、IL-1β及IL-6水平均显著低于模型组,差异有统计学意义(P模型组,差异有统计学意义(P0.05)。复方柴芩退热颗粒高、中、低浓度组P-IκB表达水平均显著低于模型组,差异有统计学意义(P细胞炎症模型P-IκB及TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,同时还能升高IL-10的水平,其作用机制可能通过抑制IκB的磷酸化而阻断NF-κB信号通路有关。

关键词：柴芩退热颗粒核转录因子-κB 脂多糖细胞炎症模型

榆黄菇多糖对体外诱导炎症模型细胞因子的分泌及一氧化氮合酶(NOS)的影响

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现代食品科技 2022年第3期38卷 25-32,194页

作者：罗晓恒赵哲坤高宜赵爽北京市农林科学院农产品加工与食品营养研究所北京市农林科学院植物保护研究所北京100097 河北工程大学生命科学与食品工程学院河北邯郸056038 北京市西城区妇幼保健中心北京100053

以榆黄菇为原料,采用水提醇沉法提取榆黄菇粗多糖,Sevage法去除蛋白,利用DEAE-Cellulose离子交换和Superdex-75凝胶层析方法纯化获得PSI和PSII两个组分;通过脂多糖(LPS)刺激建立炎症模型;利用MTT法筛选出两个多糖的优势浓度,采用吸光度... 详细信息

以榆黄菇为原料,采用水提醇沉法提取榆黄菇粗多糖,Sevage法去除蛋白,利用DEAE-Cellulose离子交换和Superdex-75凝胶层析方法纯化获得PSI和PSII两个组分;通过脂多糖(LPS)刺激建立炎症模型;利用MTT法筛选出两个多糖的优势浓度,采用吸光度分析法测定一氧化氮合酶(NOS)的活力、酶联免疫吸附试剂盒测定细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平来评价多糖对RAW264.7细胞的抗炎作用。研究结果显示,LPS浓度为5μg/mL时,细胞炎症水平达到最高,在模型的基础上筛选出PSI的优势浓度为500μg/mL、PSII的优势浓度为200μg/mL;与LPS模型组相比较,PSI对NOS活性、IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平抑制率分别为37.54%、28.84%、28.27%和30.25%,PSII对NOS活性、IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平抑制率分别为51.24%、37.56%、31.35%和32.67%。研究证实,榆黄菇多糖PSI和PSII对LPS诱导RAW264.7炎症细胞具有缓解作用,主要表现在抑制炎症细胞因子的分泌水平、促进细胞增殖、降低巨噬细胞的吞噬能力等方面,而对比PSI来说,PSII对于一氧化氮合酶(NOS)以及细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平的抑制力要更强,具有更好的抗炎效果。

关键词：榆黄菇多糖细胞炎症模型荧光分析法抗炎功能

淫羊藿苷对抑郁症模型小胶质细胞表型转化的调控作用

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天然产物研究与开发 2024年第2期36卷 187-195页

作者：曹利华高松王笑雨王真真贺红娟李娜白明苗明三河南中医药大学中医药科学院郑州450046 仲景宛西制药股份有限公司河南省中药固体制剂技术创新中心西峡474550 河南中医药大学药学院郑州450046

探索淫羊藿苷抗抑郁的作用机制,将SPF级KM小鼠分为空白组、模型组、盐酸氟西汀组(10 mg/kg)、淫羊藿苷高(50 mg/kg)、低(25 mg/kg)剂量组。除空白组外,其余各组小鼠采用56 d慢性不可预知温和应激建立抑郁症模型。造模第1 d开始灌胃给予... 详细信息

探索淫羊藿苷抗抑郁的作用机制,将SPF级KM小鼠分为空白组、模型组、盐酸氟西汀组(10 mg/kg)、淫羊藿苷高(50 mg/kg)、低(25 mg/kg)剂量组。除空白组外,其余各组小鼠采用56 d慢性不可预知温和应激建立抑郁症模型。造模第1 d开始灌胃给予各组小鼠相应药物,连续56 d。于给药后第53~56 d,进行行为学测试。末次给药后,取材。酶联免疫吸附剂实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测脑组织匀浆白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)、五羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、多巴胺(dopamine,DA)、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)水平;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-PCR)检测脑组织中IL-6、IL-10、诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、分化簇206(cluster of differentiation 206,CD206)mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)检测脑组织iNOS、CD206蛋白表达。体外培养小鼠小胶质细胞(BV-2),采用细胞增殖与毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测淫羊藿苷的细胞毒性。BV-2细胞暴露于100μg/mL脂多糖及15μg/mL、25μg/mL的淫羊藿苷24 h后,收集细胞。免疫荧光技术检测细胞iNOS、CD206蛋白表达。研究结果表明,慢性不可预知温和应激致抑郁症模型制备成功,淫羊藿苷可降低抑郁症小鼠脑组织IL-6水平及IL-6、iNOS mRNA表达,升高脑组织IL-10、5-HT、DA、NE水平及IL-10、CD206 mRNA表达;降低脑组织iNOS蛋白,升高CD206蛋白表达;改善模型小鼠抑郁症样行为。淫羊藿苷可降低LPS刺激的BV-2细胞iNOS蛋白表达,升高CD206蛋白表达。结果表明,淫羊藿苷抑制小胶质细胞M1表型转化,促进M2表型转化,从而改善模型小鼠抑郁样行为。

关键词：淫羊藿苷抑郁症小胶质细胞表型转化细胞炎症模型

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基于网络药理学和实验验证研究柠檬精油缓解焦虑症的作用机制

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天然产物研究与开发 2024年第2期36卷 336-347页

作者：张依萍徐旭吕亿婷黄金琴王盛东奚林芝王丹丹刘畅浙江万里学院生物与环境学院宁波315100 宁波大央科技有限公司宁波315020

基于网络药理学方法探讨柠檬精油(lemon essential oil,LEO)干预焦虑症的作用机制并进行实验验证。GC-MS测定LEO组成,从TCMSP平台挖掘LEO的作用靶点;利用OMIM、GeneCards数据库获得焦虑症靶点;利用Venny获得LEO-焦虑症的交集靶点,进行GO... 详细信息

基于网络药理学方法探讨柠檬精油(lemon essential oil,LEO)干预焦虑症的作用机制并进行实验验证。GC-MS测定LEO组成,从TCMSP平台挖掘LEO的作用靶点;利用OMIM、GeneCards数据库获得焦虑症靶点;利用Venny获得LEO-焦虑症的交集靶点,进行GO和KEGG富集;利用Cytoscape构建“成分-靶点-通路-疾病”网络,利用1-Click Docking对关键成分与靶点进行分子对接。利用细胞炎症模型进行验证。从构建的网络中得到LEO的19种活性成分如柠檬烯、α-松油醇、β-蒎烯、乙酸橙花酯、4-萜品醇等,通过作用于18个疾病靶点(占总靶点78.26%)如GABRA2、MAO、DRD1、GRIA2等,调控20条信号通路如神经活性配体-受体相互作用、羟色胺能突触、多巴胺能突触等。柠檬精油对DPPH、ABTS自由基有抑制作用,能降低由脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导HaCaT细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,降低炎症因子NO、TNF-α及IL-6水平。LEO通过多种有效成分多靶点调控多条信号通路降低细胞氧化应激、抑制炎症反应,从而干预焦虑症。

关键词：柠檬精油焦虑症网络药理学细胞炎症模型

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康复新治疗牙周炎的机制研究

现代医药卫生 2024年第7期40卷 1098-1104页

作者：汤雁利龚斌沈涛李启艳云南省第一人民医院/昆明理工大学附属医院口腔医学中心云南昆明650032 云南省第一人民医院/昆明理工大学附属医院临床医学研究中心云南昆明650032

目的通过研究康复新对牙周组织相关细胞增殖的影响及康复新在细胞炎症反应模型中的抗炎作用,从促进牙周组织再生和抗炎2个方面探讨康复新治疗牙周炎的相关机制。方法(1)采用淋巴细胞增殖检测法(MTS法)检测不同浓度康复新对人牙周膜成纤... 详细信息

目的通过研究康复新对牙周组织相关细胞增殖的影响及康复新在细胞炎症反应模型中的抗炎作用,从促进牙周组织再生和抗炎2个方面探讨康复新治疗牙周炎的相关机制。方法(1)采用淋巴细胞增殖检测法(MTS法)检测不同浓度康复新对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)、人牙龈上皮细胞(hGECs)、人单核巨噬细胞(THP-1)和小鼠胚胎成骨细胞(MC3T3-E1)活性的影响;(2)通过细菌脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7建立细胞炎症模型,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测康复新对细胞白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-10、一氧化氮合酶(NOS)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)mRNA表达水平的影响。结果(1)与对照组比较:0.1000、0.0500、0.0250、0.0125 mg/mL的康复新组在24 h和48 h时间点均可刺激hPDLFs、THP-1和MC3T3-E1增殖(P炎症细胞模型中,与对照组比较,0.0500 mg/mL和0.0125 mg/mL的康复新组IL-1β和IL-10 mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05),NOS和MMP-13 mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P细胞炎症反应,其抗炎机制可能是降低NOS和MMP-13 mRNA表达水平。康复新可能是通过促进牙周组织再生和抗感染治疗牙周炎。

关键词：康复新细胞增殖抗炎细胞炎症模型人牙周膜成纤维细胞

基于NLRP3/Caspase-1通路探讨薏苡仁多糖对溃疡性结肠炎体外炎症模型的干预作用及机制

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重庆医科大学学报 2023年第11期48卷 1323-1330页

作者：陈莉娟李彦龙杨维建李宝瑜苟玉琴张早育李莹吴航甘肃省疾病预防控制中心社区卫生与慢性非传染性疾病防制科兰州730010 甘肃省中医院脾胃病诊疗中心兰州730050 甘肃中医药大学中西医结合学院兰州730000

目的:从炎症理论角度出发,探讨薏苡仁多糖(Coixan)对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)体外炎症模型的干预作用及其机制。方法:体外培养NCM460细胞,采用不同剂量(0、2.5、5、10、20和40μg/mL)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导NCM460细胞,筛选出最佳诱导剂量(20μg/mL);用不同浓度(0、5、10、20、40和80μg/mL)的Coixan诱导NCM460,筛选出最佳促增殖浓度(10、20、40μg/mL)。实验随机设为空白组、模型组(LPS诱导)、LPS+Coixan低、中、高剂量(10、20、40μmol/L)组,LPS+柳氮磺吡啶(sulfasalazine,SASP)(200μg/mL)组,除空白组外用LPS(20μg/mL)刺激48 h建立UC体外细胞炎症模型后,分别以薏苡仁多糖及SASP进行48 h干预治疗后,ELISA法检测细胞上清液中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;免疫荧光检测焦亡相关蛋白Caspase-1荧光的表达量;采用qRT-PCR技术检测各组NCM460中NLRP3/Caspase-1通路中焦亡相关NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β基因表达水平的影响;Western blot技术检测各组焦亡相关NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平的影响。结果:与0μg/mL比较(20μg/mL)LPS诱导48 h对NCM460细胞生长抑制较为适中(P炎症因子IL-1β、TNF-α含量明显升高(P细胞存活率增高,特别是Coixan浓度为10、20μmol/L(P模型组中炎症因子IL-1β、TNF-α的含量,NLRP3、Caspase-1β、IL-1β蛋白和NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β基因表达均显著升高(P模型组比较,药物干预组中,中、高剂量组和柳氮磺吡啶组中细胞IL-1β、TNF-α分泌量减少,差异有统计学意义(P模型组比较,药物干预组中,高剂量组和柳氮磺吡啶组中焦亡相关蛋白Caspase-1表达水平明显下调(P模型组比较,药物干预组中,低、中、高剂量组和柳氮磺吡啶组中NLRP3、Caspase-1蛋白和基因表达明显降低(P模型组比较,药物干预组中,中、高剂量组和柳氮磺吡啶组中焦亡相关蛋白(NLRP3,Caspase-1,IL-1β)表达水平明显下调(P细胞的细胞焦亡,发挥人结肠上皮细胞保护作用。

关键词：薏苡仁多糖溃疡性结肠炎细胞炎症模型 NLRP3/Caspase-1 细胞焦亡

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