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纤维素类可吸收止血材料的体外细胞毒性评价

材料导报 2018年第6期32卷 874-880,887页

作者：喻炎马凤森陆佳骏陈海波浙江工业大学药学院杭州310014 浙江省医疗器械检验院杭州310018

通过体外细胞毒性试验评价速即纱、英洁尔、泰可聆三种可吸收止血材料的细胞相容性,旨在为纤维素类可吸收止血材料的临床安全应用提供参考。采用四唑盐比色法(MTT比色法)、细胞形态分析、琼脂扩散法以及滤膜扩散法,评价三种材料对L929... 详细信息

通过体外细胞毒性试验评价速即纱、英洁尔、泰可聆三种可吸收止血材料的细胞相容性,旨在为纤维素类可吸收止血材料的临床安全应用提供参考。采用四唑盐比色法(MTT比色法)、细胞形态分析、琼脂扩散法以及滤膜扩散法,评价三种材料对L929成纤维细胞增殖活性的影响及细胞毒性反应。各材料按50.00mg/mL加入不完全细胞培养液浸提24h后,离心得浸提液,此浓度设为100%,依次稀释得50.0%、25.0%、12.5%、6.25%、3.13%、1.56%、0.78%、0.39%材料浸提液。MTT比色法结合细胞形态分析显示:英洁尔材料各浸提液浓度无明显的细胞毒性,速即纱与泰可聆材料浸提液在浓度稀释至25.0%以下时,才不会出现明显的细胞毒性。对于三种材料本身,琼脂扩散法与滤膜扩散法均显示英洁尔材料无明显的细胞毒性,而速即纱与泰可聆材料有明显的细胞毒性。三种不同止血材料的细胞相容性不同,须选择适宜的评价方法。

关键词：细胞毒性试验止血材料 MTT比色法细胞形态分析琼脂扩散法滤膜扩散法

共表达死亡素thanatin与斑点叉尾鮰β-防御素基因重组毕赤酵母的构建及其抑菌效果评价

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共表达死亡素thanatin与斑点叉尾鮰β-防御素基因重组毕赤酵母的...

作者：何敬文天津农学院

学位级别：硕士

抗生素曾挽救了无数生命,但其滥用引发的一系列“细菌耐药性”、“超级耐药菌”、“DNA污染”等问题十分严峻,已对全球生物安全造成巨大威胁,加之减抗、禁抗政策的实行,寻找抗生素替代物、研究新型抗感染药物势在必行。抗菌肽(antimicro... 详细信息

抗生素曾挽救了无数生命,但其滥用引发的一系列“细菌耐药性”、“超级耐药菌”、“DNA污染”等问题十分严峻,已对全球生物安全造成巨大威胁,加之减抗、禁抗政策的实行,寻找抗生素替代物、研究新型抗感染药物势在必行。抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPs)是生物天然免疫的重要活性分子,易降解、耐酸、耐碱、耐高温,不易使细菌等产生耐药性的特点使其有望成为抗生素的替代品。死亡素thanatin源自刺肩蝽(Podisus maciventris),是从其血液淋巴中分离获得的含21个氨基酸的小分子抗菌肽,具有广谱抗菌活性,但对金黄色葡萄球菌的抗性较低;斑点叉尾鮰(Ietalurus punetaus)属低等鱼类,且底栖生活,生活环境复杂,易遭受病原微生物侵染,β-防御素在其中发挥了重要的免疫作用。本研究选定死亡素thanatin基因和斑点叉尾鮰β-防御素基因(命名为defbl),进行毕赤酵母偏好性密码子的优化后,基因序列两端添加Eco R I、Sal I酶切位点、6×His标签、终止密码子等,构建单基因组及用T2A剪切肽连接的共表达组(命名为TD)至p MD19-T载体上;后将目的基因片段亚克隆至酵母表达载体pPICZɑA上,经Zeocin抗性筛选、PCR、双酶切验证及测序验证,成功获得含目的基因的真核表达载体pPICZɑA-thanatin、pPICZɑA-defbl、pPICZɑA-TD。重组载体经Sac I线性化处理后电转化至毕赤酵母GS115感受态细胞中,通过Zeocin、PCR筛选出可耐受1 000μg/m L Zeocin的重组高抗阳性转化子菌株GS115-pPICZɑA-thanatin、GS115-pPICZɑA-defbl、GS115-pPICZɑA-TD(Mut+)。利用0.5%甲醇诱导目的蛋白的表达,收集培养基上清,冻干浓缩并纯化后进行Western blotting检测,同时收集甲醇诱导0 h、12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h、96 h的蛋白样品用于后续分析。结果显示:在0.5%甲醇诱导下,目的蛋白在培养基上清中得到表达,thanatin组和dbfel组分别在2.3 k Da和7.8 k Da处出现特异性条带,TD组同时出现上述两条带,蛋白大小均与预期相符,纯化后测得thanatin、dbfel和TD组蛋白浓度分别为600μg/m L,300μg/m L和700μg/m L;最佳表达时间分别为:thanatin组72 h,defbl组96 h,TD组96 h。扩大培养收集纯化各重组蛋白进行体外抑菌实验、溶血性试验,结果显示:1.各重组蛋白对试验选用的八种指示菌株包括革兰氏阴性细菌:大肠杆菌K88、奇变形杆菌、肺炎克雷伯菌ATCC700603、多杀性巴氏杆菌;革兰氏阳性细菌:表皮葡萄球菌ATCC 12228、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26001、停乳链球菌、无乳链球菌均有抑菌作用,thanatin组重组蛋白对多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌的抑菌效果优于对停乳链球菌、无乳链球菌以及金黄色葡萄球菌的抑制效果,抑菌率均在80%到95%之间;defbl组重组蛋对各菌株的抑菌率均在90%以上,TD组重组蛋白对肺炎克雷伯菌的抑制效果最好,MIC值为25μg/m L,显著优于thanatin组和defbl组,对金黄色葡萄球菌的抑制效果显著优于thanatin组,对所有菌株的抑制作用均不差于单基因组;2.各重组蛋白在300μg/m L浓度下的溶血率均低于5%,表明本试验所获重组抗菌肽不具备红细胞溶血性。纯化各重组蛋白以最高浓度150μg/m L作用于HEK293细胞12 h、24 h和36 h,CCK-8法分析各组细胞活力结果显示:各重组蛋白作用于HEK293细胞的36 h内,对HEK293细胞均不产生细胞毒性作用;36 h的DAPI染色结果也表明各重组蛋白均不导致细胞凋亡。综上,本试验成功构建了含死亡素thanatin基因和斑点叉尾鮰β-防御素基因及二者共表达基因的重组表达载体,且经酵母表达系统成功获得了目的抗菌肽蛋白,对试验菌株均表现出良好的抑菌活性,不具有红细胞溶血性,不具有细胞毒性作用,不导致细胞凋亡,具有良好的安全性。相较而言,共表达组重组蛋白抑菌效果更优,更具研究价值,本试验为后续对该蛋白的功能和应用研究提供理论和试验基础,为预防和治疗细菌性疾病提供新的思路方法。

关键词：死亡素thanatin 斑点叉尾鮰的β-防御素基因抑菌效果评价溶血性试验细胞毒性试验

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新型含锶硫酸钙的制备及其生物相容性试验

南方医科大学学报 2016年第7期36卷 947-951页

作者：侯毅龙李雪许长鹏宋锦旗黄磊余斌南方医科大学南方医院创伤骨科广东广州510515

目的制备一种新型含锶硫酸钙材料并对其进行生物相容性评价。方法探讨采用水热法制备一种新型的含锶硫酸钙并对制备的材料进行:(1)X线衍射、傅里叶变换红外光谱及差式量热扫描表征检测,以验证材料为目标产物;(2)细胞毒性试验评估材料浸... 详细信息

目的制备一种新型含锶硫酸钙材料并对其进行生物相容性评价。方法探讨采用水热法制备一种新型的含锶硫酸钙并对制备的材料进行:(1)X线衍射、傅里叶变换红外光谱及差式量热扫描表征检测,以验证材料为目标产物;(2)细胞毒性试验评估材料浸提液对L-929小鼠成纤维细胞形态学及相对增殖率的影响;(3)溶血试验评估材料浸提液的血液相容性;(4)体内植入试验评估其对活体组织局部毒性反应。结果 (1)X线衍射结果示:14.63°,25.72°和29.80°处可见α-半水硫酸钙的特征峰,在24.78°处可见锶元素的特征峰;傅里叶变换红外光谱与α-半水硫酸钙标准图谱相似;差式量热扫描结果示:制备材料中结构水含量为6.03%;(2)细胞毒性试验显示被试材料浸提液在不同时间点的毒性反应均为I级,无细胞毒性;(3)溶血试验结果显示溶血率为4.3%,符合溶血试验要求;(4)体内植入结果表明材料和机体达到稳定状态。结论该材料为含锶硫酸钙,生物相容性试验表明其具有良好的生物相容性。

关键词：含锶硫酸钙细胞毒性试验溶血试验体内植入试验

采用三维细胞培养的牙本质屏障细胞毒性试验研究

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北京大学学报（医学版） 2015年第2期47卷 330-335页

作者：蒋若丹林红郑刚袁慎坡杜桥张研北京大学口腔医学院.口腔医院口腔医疗器械检验中心口腔材料研究室口腔数字化医疗技术和材料国家工程实验室北京100081 北京市中西医结合医院口腔科北京100039

目的:采用牙本质屏障法对4种常用的牙体充填材料和2种牙本质粘接剂进行细胞毒性试验,并与传统的滤膜扩散法进行比较,从而探讨牙本质屏障法的优势。方法:选取丁香油水门汀、磷酸锌水门汀、粘结用玻璃离子水门汀、复合树脂和两种自酸蚀粘... 详细信息

目的:采用牙本质屏障法对4种常用的牙体充填材料和2种牙本质粘接剂进行细胞毒性试验,并与传统的滤膜扩散法进行比较,从而探讨牙本质屏障法的优势。方法:选取丁香油水门汀、磷酸锌水门汀、粘结用玻璃离子水门汀、复合树脂和两种自酸蚀粘接剂(REMI BOND与Adper Easy One)进行试验。牙本质屏障法中将L929细胞立体培养于聚苯乙烯网状支架上,切取人第三磨牙近髓牙本质片,用液压通透装置测量其通透性,选取试验区域内通透值相近的牙本质片进行试验。将长满细胞的网状支架置于细胞培养分隔灌注小室的"牙髓腔",牙本质片("牙髓面")紧贴网状支架放置其上,试验材料和对照与牙本质片的"牙合面"接触24 h后用MTT法测量细胞的光密度值(D540 nm),试验材料与阴性对照光密度值的百分比为材料的相对细胞存活率。使用非参数检验对结果进行统计学分析。滤膜扩散法中材料与有单层细胞生长的滤膜接触24 h后进行细胞染色、评级。结果:近髓牙本质片的平均通透值为0.293μL/(min·cm2·cm H2O)(1 cm H2O=0.098 k Pa)。牙本质屏障法中,丁香油水门汀降低细胞存活率至82%,REMI BOND与Adper Easy One分别降低细胞存活率至63%和54%,其余材料对细胞无损伤或损伤很低;滤膜扩散法中,光固化复合树脂为中度细胞毒性、牙科粘接用玻璃离子水门汀为轻度细胞毒性,其余材料均为重度细胞毒性;6种材料在牙本质屏障法中表现的细胞毒性明显低于滤膜扩散法的试验结果。结论:使用牙本质屏障法测得材料与三维培养的细胞接触后的细胞毒性比使用滤膜扩散法时的细胞毒性低,结果与临床实际相关性好。

关键词：细胞毒性试验牙本质通透性细胞存活牙本质黏结剂细胞培养技术

Clinical Misdiagnosis of Steatocystoma Simplex of Eyebrow in a Pediatric Patient

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Chinese Medical Journal 2016年第3期129卷 377-378页

作者： Karin Milleni Araujo Rafael Denadai Department of Internal Medicine Hospital Municipal Walter Ferrari Campinas Sao Paulo Brazil Institute of Plastic and Craniofacial Surgery SOBRAPAR Hospital Campinas Sao Paulo Brazil

To the Editor： A 4-year-old girl presented with a 16-month history of swelling of the eyebrow.Pediatricians and general surgeons diagnosed her with sebaceous cyst, and because of unsuccessful treatment with two surgical drainages and antibiotic therapy, she was referred to our unit.On examination, a soft, freely movable, nontender subcutaneous lesion was noted on the lefteyebrow [Figure 1].

关键词：表皮囊肿细胞毒性试验免疫

May Hips with Inflammatory Synovial Tissue Bands Worsen the Symptoms of Femoroacetabular Impingement Patients？ A Two-case Report

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Chinese Medical Journal 2015年第24期128卷 3387-3388页

作者： Yun-Hao Qin Chang-Qing Zhang Department of Orthopaedics Shanghai Sixth People's Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University Shanghai 200030 China

To the editor： A 29-year-old woman presented with persistent left hip pain. Her pain began about 2 years prior, and she had no history of notable trauma, inflammatory joint disease, or pediatric hip disease.

关键词：创伤和损伤疼痛细胞毒性试验免疫一氧化氮髋

Paraparesis in Coarctation of Aorta： Diagnosis in Disguise

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Chinese Medical Journal 2015年第23期128卷 3262-3263页

作者： Anup Sinoh Annesh Bhattacharya Nilesh Kumar Department of Medicine Institute of Medical Sciences Banaras Hindu University Varanasi Uttar Pradesh India

To the Editor： A 55-year-old woman presented with sudden onset symmetric weakness of both lower limbs along with truncal weakness and urinary retention for 7 days. However, she denied any history of pain trauma, loss of consciousness, or any evidence of upper limb weakness, breathlessness, or cranial nerve involvement. According to history, a provisional diagnosis of acute transverse myelitis was made, for which she was being treated before coming to the Institute of Medical Sciences, Banaras Hindu University.

关键词：脊髓炎横贯性尿潴留轻截瘫四肢疼痛细胞毒性试验免疫意识丧失主动脉

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丁酸乙酯对卷烟烟气的影响

烟草科技 2015年第8期48卷 20-24页

作者：卢斌斌毛健杨陟华曾世通赵乐孙世豪中国烟草总公司郑州烟草研究院军事医学科学院北京市太平路27号100850

为研究丁酸乙酯对卷烟烟气的影响,在模拟卷烟燃烧条件下对其进行热裂解实验;按照不同用量加入空白卷烟,测试主流烟气中7种有害成分(CO、HCN、NNK、B[a]P、巴豆醛、苯酚和氨)的释放量以及烟气粒相物的细菌致突变性、体外细胞毒性和体外... 详细信息

为研究丁酸乙酯对卷烟烟气的影响,在模拟卷烟燃烧条件下对其进行热裂解实验;按照不同用量加入空白卷烟,测试主流烟气中7种有害成分(CO、HCN、NNK、B[a]P、巴豆醛、苯酚和氨)的释放量以及烟气粒相物的细菌致突变性、体外细胞毒性和体外微核率。结果表明:1丁酸乙酯在模拟卷烟燃烧温度条件下的热解行为主要是原形转移;2与空白卷烟相比,加入丁酸乙酯后7种烟气有害成分的释放量无显著增加;33种不同剂量丁酸乙酯分别加入空白卷烟后,烟气粒相物的细菌致突变性、体外细胞毒性及体外微核测定结果均无显著增加。

关键词：丁酸乙酯热裂解有害成分 Ames试验细胞毒性试验微核试验

Pulmonary Thromboembolism Associated with Olanzapine Treatment

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Chinese Medical Journal 2015年第3期128卷 419-420页

作者： Qian Wang Lan Guan Rui-Ming Li Bin Zhao Department of Emergency Medicine Beijing Jishuitan Hospital Beijing 100035 China

To the Editor： A 55-year-old female was admitted to the emergency department of our hospital complaining of dyspnea alter catching a bus for about 5 m during last day. She had a past history of suffering from depression mood disorder recently and could not sleep well at night tbr which she was started on olanzapine tablets 10 rag/d, sertraline hydrochloride tablets 50 mg/d and oxazepam tablets 15 mg/d tbr 28 days by a physician of psychiatric hospital. She was otherwise without receiving any other medicine, including oral contraceptive, illicit drugs or alcohol and had no history of smoking, recent surgery, trauma, peripheral vascular disease, cancer or cardiovascular disease. What＇s more, she did not have a demonstrable lowered activity level or weight change recently.

关键词：奥沙西泮苯二氮|艹卓|类创伤和损伤肺栓塞呼吸困难片剂细胞毒性试验免疫哌仑西平女(雌)性