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丙型肝炎病毒的细胞入侵和相关受体

生命的化学 2008年第1期28卷 36-39页

作者：刘媛丁惠戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)入侵细胞的过程由多种细胞受体介导,目前已鉴定出人CD81、SR-BI、LDLr、L-SIGN、DC-SIGN、ASGPR、Claudin-1等为HCV的受体。对HCV入侵机制的研究,有助于对HCV入侵的各个环节进行阻断和干预,从而达到... 详细信息

丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)入侵细胞的过程由多种细胞受体介导,目前已鉴定出人CD81、SR-BI、LDLr、L-SIGN、DC-SIGN、ASGPR、Claudin-1等为HCV的受体。对HCV入侵机制的研究,有助于对HCV入侵的各个环节进行阻断和干预,从而达到预防或/和治疗的目的。近年来,HCVpp及HCVcc模型的建立为HCV入侵细胞的研究提供了重要平台。该文从HCV细胞入侵的研究模型、HCV的细胞受体和HCV入侵细胞的影响因素三方面,综述HCV细胞入侵的研究进展。

关键词：丙型肝炎病毒细胞入侵受体 HCVpp HCVcc

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埃博拉病毒入侵宿主细胞的可视化研究

埃博拉病毒入侵宿主细胞的可视化研究

作者：车彬中国疾病预防控制中心

学位级别：硕士

埃博拉病毒(Ebolavirus)是一种烈性出血热病毒,其在人类中引起的埃博拉出血热,病死率可高达90%。[1]埃博拉病毒属于丝状病毒科(Flaviviridae)埃博拉病毒属(Ebolavirus),是一种不分节段的单股负链RNA病毒,病毒在电子显微镜下呈现丝状结构... 详细信息

埃博拉病毒(Ebolavirus)是一种烈性出血热病毒,其在人类中引起的埃博拉出血热,病死率可高达90%。[1]埃博拉病毒属于丝状病毒科(Flaviviridae)埃博拉病毒属(Ebolavirus),是一种不分节段的单股负链RNA病毒,病毒在电子显微镜下呈现丝状结构,直径约80nm,长度在300nm～1500nm之间。埃博拉病毒结构蛋白包括核蛋白NP、包膜蛋白GP、VP30、VP35、基质蛋白VP24和VP40以及L(RNA依赖的RNA聚合酶),NP是核衣壳的主要成分,与VP30、VP35和L共同组成核蛋白复合物(RNP complex),负责病毒的复制与转录。病毒样颗粒(Virus-like particals)是不含病毒基因组的空壳或包膜状颗粒结构。本实验通过构建和表达埃博拉病毒样颗粒(Ebola Virus like particals,VLP)和复制型埃博拉病毒样颗粒(Replication and transcription-competent virus like particles,trVLP),并分别对埃博拉病毒样颗粒(VLP)和复制型埃博拉病毒样颗粒(trVLP)进行荧光标记(VLP使用插入荧光蛋白的方法,trVLP使用蛋白质荧光标记试剂盒),使其带有荧光,为下一步实时动态研究埃博拉病毒入侵细胞的机制提供了基础。[2]本研究的主要内容包括:1.埃博拉病毒VLP/trVLP的表达和鉴定本部分研究工作通过表达埃博拉病毒的结构蛋白并瞬时转染细胞来组装不含有病毒核酸的病毒样颗粒,其中埃博拉病毒样颗粒(VLP)是利用埃博拉病毒的基质蛋白VP40和包膜糖蛋白GP共同转染293T细胞所得,复制型埃博拉病毒样颗粒(trVLP)是以基质蛋白VP40、VP24以及糖蛋白GP作为包装主体,在其他蛋白如VP35、VP30、NP、L等的帮助下表达组装具有转录和复制能力的病毒样颗粒,称为复制型埃博拉病毒样颗粒(trVLP)。病毒样颗粒表达后,利用透射电子显微镜观察确定VLP/trVLP类似于天然埃博拉病毒的丝状结构,从形态学上证明了病毒样颗粒表达的成功。对于trVLP,由于其基因组中含有一个报告基因,利用海肾荧光素酶检测系统对报告基因的表达进行检测,阳性检测值证明trVLP的成功表达。此外,埃博拉VLP中由于插入了绿色荧光蛋白,表达成功后在488nm激光下能够发出绿色荧光,在荧光显微镜下可以观察到明显的绿色荧光信号。而对于trVLP使用蛋白质标记试剂盒对其进行荧光标记,使其带有绿色荧光标记。将VLP或者标记后的trVLP加入到Vero细胞中吸附一段时间,在荧光显微镜下可见病毒样颗粒可以吸附以及进入细胞,证明了表达的VLP和trVLP具有进入细胞的能力,为进一步研究埃博拉病毒入侵细胞的机制提供了基础。2.研究埃博拉病毒与细胞膜脂筏的相互作用在本实验中,对埃博拉病毒样颗粒(VLP)和复制型埃博拉病毒样颗粒(trVLP)分别采用重组插入荧光蛋白技术和蛋白质标记方法进行荧光标记,对细胞膜脂筏进行脂筏特异性荧光染料的标记,运用PEUltraVIEW VoX双碟片活细胞荧光共聚焦显微镜设置包括明场在内的多个通道,在同一视野下观察不同通道激发的荧光信号。通过应用这些技术,可以实现埃博拉病毒入侵细胞过程的可视化研究。本研究发现埃博拉病毒样颗粒(VLP)和复制型埃博拉病毒样颗粒(trvLP)都可以吸附并进入细胞内,而且两者都与细胞膜的脂筏结构存在共定位现象。通过实时动态研究还发现细胞膜脂筏参与了埃博拉病毒进入细胞的过程,证明埃博拉病毒进入细胞的过程中存在与脂筏的相互作用。进一步对细胞进行脂筏抑制剂(甲基-β-环糊精)处理,发现经过相同吸附时间,病毒进入细胞的效率呈现明显下降,从而证明脂筏在埃博拉病毒入侵细胞的过程中发挥了重要作用。提示埃博拉病毒可能通过脂筏途径进入细胞,为研究鉴定新型药物靶点提供了新的思路。

关键词：埃博拉病毒病毒样颗粒宿主相互作用细胞入侵脂筏

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轮状病毒入侵细胞机制的研究进展

热带农业科学 2005年第5期25卷 81-84页

作者：蔡秀清董永红周鹏中国热带农业科学院热带生物技术研究所海口市571101 西安交通大学第一医院西安市710061

轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起婴幼儿腹泻死亡的主要病原体之一,是一种没有外膜的RNA病毒,由3层同心的蛋白质衣壳包被双链RNA基因组构成。RV入侵宿主细胞是一个有机的多步骤过程,有多种受体参与,其作用机理还不完全清楚,目前认为,病毒... 详细信息

轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起婴幼儿腹泻死亡的主要病原体之一,是一种没有外膜的RNA病毒,由3层同心的蛋白质衣壳包被双链RNA基因组构成。RV入侵宿主细胞是一个有机的多步骤过程,有多种受体参与,其作用机理还不完全清楚,目前认为,病毒与宿主细胞表面受体之间至少存在4种相互作用关系。

关键词：轮状病毒细胞入侵整合素热休克蛋白唾液酸

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乙型脑炎病毒入侵细胞的分子机制研究进展

中国病毒病杂志 2017年第1期7卷 63-66页

作者：张琦朱耐伟朱勇喆戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学学员旅学员10队上海200433

乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是一种蚊媒病毒,能引发严重的病毒性脑炎。JEV入侵细胞是致病的先决条件,因此阐明其机制可为乙型脑炎的治疗提供更多途径。本文就近年来JEV入侵细胞的分子机制研究进展作一综述。

关键词：乙型脑炎病毒细胞入侵分子机制

Irx5基因沉默乳腺癌细胞株的构建及功能分析

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Irx5基因沉默乳腺癌细胞株的构建及功能分析

作者：邓斌淮北师范大学

学位级别：硕士

Irx5基因是伊洛魁同源盒基因家族(Iroquois homeobox gene family)中一员。该家族的编码蛋白均具有一个高度保守的同源结构域,含有63个氨基酸,可与DNA特异结合,具有转录因子活性。有报道表明Irx家族的一些成员与肿瘤的发生有着一定的关... 详细信息

Irx5基因是伊洛魁同源盒基因家族(Iroquois homeobox gene family)中一员。该家族的编码蛋白均具有一个高度保守的同源结构域,含有63个氨基酸,可与DNA特异结合,具有转录因子活性。有报道表明Irx家族的一些成员与肿瘤的发生有着一定的关联,其中Irx1是一个潜在的胃癌肿瘤标志物,Irx1的表达能够抑制胃癌细胞生长,入侵和肿瘤形成;Irx2在骨肉瘤中能够促进细胞的增殖和入侵;Irx3在前列腺癌细胞系LNCaP中表达下调;Irx4可以通过与维生素D受体相互作用抑制前列腺癌的生长;Irx5敲除会导致前列腺癌细胞系LNCaP细胞数的减少,增加细胞凋亡。此外,Irx5基因在高转移乳腺癌细胞系中低表达,在低转移乳腺癌细胞系中高表达,且其表达水平与患者癌细胞转移能力呈明显负相关。本实验室通过构建Irx5基因过表达的MDA-MB-231细胞,证实了Irx5基因能够抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的增殖、迁移和入侵。为了进一步研究Irx5基因对乳腺癌细胞的影响,我们利用RNAi技术,构建了三株Irx5基因沉默MCF7乳腺癌细胞株,并利用其中沉默效果最好的一株细胞MCF7-shRNA2与MCF7-对照进行细胞增殖、迁移和入侵等实验,证实Irx5基因沉默可促进乳腺癌细胞MCF7的转移和入侵。研究结果如下:1.根据人Irx5基因(NM05853)序列设计合成出三对shRNA片段,利用T4连接酶将其分别与Bam H(40)和EcoR(40)酶切线性化慢病毒载体连接,转化感受态细胞,获得了三组慢病毒干扰质粒,分别是shRNA1干扰慢病毒质粒(miRZip-shRNA1)、shRNA2干扰慢病毒质粒(mi RZip-shRNA2)和shRNA3干扰慢病毒质粒(miRZip-shRNA3)。将构建的shRNA干扰慢病毒质粒和包装质粒MIX共感染HEK293T细胞,经过慢病毒包装,浓缩以及滴度测定等步骤获得最终的shRNA干扰慢病毒原液。2.利用shRNA1干扰慢病毒、shRNA2干扰慢病毒和shRNA3干扰慢病毒分别感染MCF7细胞,经嘌呤霉素筛选,获得了三组Irx5基因沉默乳腺癌细胞株,分别是MCF7-shRNA1,MCF7-shRNA2,MCF7-shRNA3以及用空载体慢病毒感染的细胞株MCF7-对照。Western blotting检测和qPCR检测结果显示,在MCF7-shRNA1,MCF7-shRNA2,MCF7-shRNA3三组乳腺癌细胞中,Irx5基因都有一定的沉默效果,其中MCF7-shRNA2沉默效果最好,达到49%。3.将MCF7-shRNA2细胞和MCF7-对照用于功能分析实验:MTT法检测细胞增殖实验结果表明,MCF7-shRNA2与MCF7-对照两者差异不大,说明Irx5基因沉默对MCF7乳腺癌细胞的增殖能力没有明显的影响效果;细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验结果表明,MCF7-shRNA2转移能力明显比MCF7-对照强,说明Irx5基因沉默能够促进MCF7乳腺癌细胞转移;Transwell侵袭实验结果表明,MCF7-shRNA2侵袭能力明显比MCF7-对照强,说明Irx5基因沉默能够促进MCF7乳腺癌细胞入侵。本研究进一步证实了Irx5基因对乳腺癌细胞转移能力的抑制作用,不仅为深入了解乳腺癌的发生发展及转移和入侵机制提供一定的理论依据,而且为转移性乳腺癌的分子诊断和靶向治疗奠定坚实的理论基础。

关键词： Irx5基因 RNAi技术乳腺癌细胞迁移细胞入侵

中国旅美学者找到非典病毒入侵细胞的“门户”

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世界科技研究与发展 2004年第1期26卷 68-68页

外膜泡介导酯酶FtlA分泌促进土拉弗朗西斯菌对宿主细胞的侵染

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外膜泡介导酯酶FtlA分泌促进土拉弗朗西斯菌对宿主细胞的侵染

甘露糖-6-磷酸/胰岛素样生长因子Ⅱ受体介导PEDV感染作用的初步验证

中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第六次学术研讨会

作者：陈飞崔国林王淑侠何丽红张敬仁苏敬良中国农业大学动物医学院清华大学医学院

土拉弗朗西斯菌(Francisellatularensis)是一种革兰氏阴性细胞内寄生菌,可感染人和多种动物引起土拉热(tularemia)。作为一种重要的人畜共患的自然疫源性病原,该菌可通过消化道、呼吸道及吸血昆虫叮咬等多种途径感染,侵入宿主的多种细... 详细信息

土拉弗朗西斯菌(Francisellatularensis)是一种革兰氏阴性细胞内寄生菌,可感染人和多种动物引起土拉热(tularemia)。作为一种重要的人畜共患的自然疫源性病原,该菌可通过消化道、呼吸道及吸血昆虫叮咬等多种途径感染,侵入宿主的多种细胞并在其中繁殖,随后扩散至多个脏器而引起系统性感染。前期研究发现,土拉弗朗西斯菌弱毒疫苗株LVS的FTL

关键词：土拉弗朗西斯菌酯酶 FTL0430 细胞入侵

来源： cnki会议评论

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畜牧与兽医 2020年第11期52卷 84-89页

作者：班艳芳董建国范兰兰于林洋刘献辉张鹏飞刘燕玲张乐宜王磊宋长绪华南农业大学动物科学学院广东广州510642 信阳农林学院牧医工程学院河南信阳464000

为进一步研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染细胞的机制,本研究利用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA)和质谱(MS)技术筛选细胞内与PEDV相互作用的蛋白,初步鉴定细胞内源性蛋白甘露糖-6-磷酸/胰岛素样生长因子II受体(M6P/IGF2R)为候选蛋白。结果... 详细信息

为进一步研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染细胞的机制,本研究利用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA)和质谱(MS)技术筛选细胞内与PEDV相互作用的蛋白,初步鉴定细胞内源性蛋白甘露糖-6-磷酸/胰岛素样生长因子II受体(M6P/IGF2R)为候选蛋白。结果证实M6P/IGF2R蛋白与PEDV S2蛋白相互作用且在细胞内存在共定位现象,过表达M6P/IGF2R能够促进PEDV增殖,干扰M6P/IGF2R能够抑制PEDV增殖。PEDV S2蛋白通过与宿主细胞M6P/IGF2R蛋白互作促进PEDV侵入细胞,该结论为进一步开展PEDV与宿主细胞蛋白相互作用机制研究提供了重要理论依据。

关键词：猪流行性腹泻病毒甘露糖-6-磷酸/胰岛素样生长因子Ⅱ受体共定位细胞入侵

鸡白痢沙门氏菌orgC基因缺失株的构建及生物被膜形成特性研究

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中国家禽 2022年第10期44卷 31-37页

作者：冯政王楠全柯吉秦涛陈素娟彭大新扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为探索鸡白痢沙门氏菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白OrgC在生物被膜形成中的作用,试验以鸡白痢沙门氏菌S9及其rpoS基因缺失株S9S为母本,利用Red同源重组系统构建orgC基因缺失株并利用原核表达载体构建回复株,测定其生物被膜形成能力和对鸡肝癌(L... 详细信息

为探索鸡白痢沙门氏菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白OrgC在生物被膜形成中的作用,试验以鸡白痢沙门氏菌S9及其rpoS基因缺失株S9S为母本,利用Red同源重组系统构建orgC基因缺失株并利用原核表达载体构建回复株,测定其生物被膜形成能力和对鸡肝癌(Leghorn male hepatoma,LMH)细胞黏附入侵能力。结果显示:orgC基因缺失株生物被膜形成能力与野生株S9相比无显著变化,rpoS和orgC双基因缺失株生物被膜形成能力与rpoS基因缺失株S9S相比显著降低(P细胞入侵能力与野生株S9相比无显著变化,rpoS和orgC双基因缺失株对LMH细胞入侵能力与rpoS基因缺失株S9S相比显著降低(P细胞入侵能力有关。

关键词：鸡白痢沙门氏菌生物被膜 Ⅲ型分泌系统 OrgC 细胞入侵