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组织蛋白酶k在酒精性心肌病小鼠心功能不全中的作用及其损伤机制研究

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陆军军医大学学报 2022年第13期44卷 1330-1337页

作者：唐一锋刘志江许官学赵然尊陈文明石蓓六盘水市人民医院心血管内科贵州六盘水553001 遵义医科大学附属医院心血管内科贵州遵义563000

目的探讨组织蛋白酶k(cathepsin k,Catk)在酒精性心肌病(alcoholic cardiomyopathy,ACM)小鼠心功能不全中的作用及其损伤机制。方法48只8周龄C57BL/6J雄性小鼠按随机数字表法分为对照组(n=12,等热量麦芽糖糊精对照液体饲料喂养)和模型组... 详细信息

目的探讨组织蛋白酶k(cathepsin k,Catk)在酒精性心肌病(alcoholic cardiomyopathy,ACM)小鼠心功能不全中的作用及其损伤机制。方法48只8周龄C57BL/6J雄性小鼠按随机数字表法分为对照组(n=12,等热量麦芽糖糊精对照液体饲料喂养)和模型组(n=36,4%乙醇Lieber-DeCarli液体饲料喂养)。8周后,以超声心动图心脏收缩功能下降的模型组小鼠为ACM,按随机数字表法分为:ACM组、sh-NC组、sh-Catk组,每组12只。分别向sh-NC组和sh-Catk组小鼠鼠尾静脉注射1×10^(9) vg(100μL)Scramble-shRNA和Catk-shRNA的重组腺病毒。在第12周末,采用M型超声心动图测量心功能。免疫组织化学检测Catk和Nox4蛋白表达。体外实验以H9c2心肌细胞为研究对象,评价Catk-shRNA介导的Catk沉默对乙醇诱导的心肌细胞损伤的影响。采用蛋白质印迹法分析AMPk/Nox4信号通路蛋白表达;采用流式细胞仪分析H9c2细胞凋亡情况。应用荧光染料二氢乙胺测定小鼠心肌组织和体外培养的H9c2细胞的活性氧水平。结果ACM组心肌细胞表面积,心肌纤维化面积,心肌组织中Catk、Nox4蛋白表达和超氧化物的产生均较对照组显著增加(Pk组心肌细胞表面积,心肌纤维化面积,心肌组织中Catk、Nox4蛋白表达和超氧化物的产生均显著降低(Pk蛋白表达不断增加(Pk抑制处理显著降低了H9c2细胞凋亡和氧化应激水平(Pk磷酸化(P蛋白、纤维细胞胶原COL-1和TGF-β表达降低(Pk参与ACM小鼠心功能不全的病理过程,其机制与促进AMPk/Nox4信号通路介导的氧化应激有关。

关键词：组织蛋白酶k 小鼠酒精性心肌病心功能 AMPk/Nox4信号

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组织蛋白酶k对大鼠空间学习记忆功能的影响

中国应用生理学杂志 2022年第5期38卷 412-417页

作者：陈丽陈金信王心怡李香兰姜海英浙江中医药大学杭州310000 嘉兴学院嘉兴314000 三亚学院三亚572000 延边大学延吉136200

目的:探讨组织蛋白酶k(Catk)对大鼠海马空间学习和记忆功能的影响及其神经化学机制。方法:SD雄性大鼠随机分为对照组(Control组)和Catk阻断组(CatkⅡ组)每组各10只,分别于海马DG区微量注射组织蛋白酶k特异性阻断剂(0.5μg/μl)和等量人... 详细信息

目的:探讨组织蛋白酶k(Catk)对大鼠海马空间学习和记忆功能的影响及其神经化学机制。方法:SD雄性大鼠随机分为对照组(Control组)和Catk阻断组(CatkⅡ组)每组各10只,分别于海马DG区微量注射组织蛋白酶k特异性阻断剂(0.5μg/μl)和等量人工脑脊液5 d;原代培养海马神经元细胞,设对照组(CON组)、阴性对照组(NC组)和siRNA干扰组(siCatk组),每组设3个复孔,siRNA导入18~20 h后收集样本。应用Morris水迷宫评估大鼠空间学习和记忆功能,同时在大鼠清醒、自由活动状态下,结合脑部微量透析法和高效液相色谱法观察学习记忆过程中DG区细胞外液中谷氨酸(Glu)含量的动态变化;采用蛋白免疫印迹法检测海马组织和神经元细胞中c-Notch1、Notch1、p-CREB、BDNF等相关信号蛋白的表达情况。结果:动物实验显示,与Control组相比,CatkⅡ组空间学习记忆能力明显减弱,并伴随着海马组织的c-Notch1、p-Akt、p-CREB和BDNF蛋白表达明显下降(Pk II组DG区Glu含量均随水迷宫训练天数的增加而明显升高,但CatkⅡ组升高幅度均明显弱于Control组(Pk组Catk、c-Notch1、p-CREB和BDNF蛋白表达明显减少(Pk可通过激活海马Notch1及其记忆相关信号蛋白,影响大鼠空间学习记忆功能。

关键词：组织蛋白酶k Notch1 学习和记忆海马大鼠细胞培养

组织蛋白酶k在人椎间盘中的表达及意义(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第7期14卷 1319-1321页

作者：刘雅王宗亮蔡明王敏王尚南阳市骨科医院脊柱外科河南省南阳市473000

背景:研究证实,椎间盘内酶类的激活与基质成分的降解密切相关。已知基质金属蛋白酶和金属蛋白酶组织抑制剂两个酶系统在椎间盘细胞外基质改变过程中发挥着重要作用,除两者外,其他对细胞外基质有降解作用的蛋白酶是否也参与了椎间盘的退... 详细信息

背景:研究证实,椎间盘内酶类的激活与基质成分的降解密切相关。已知基质金属蛋白酶和金属蛋白酶组织抑制剂两个酶系统在椎间盘细胞外基质改变过程中发挥着重要作用,除两者外,其他对细胞外基质有降解作用的蛋白酶是否也参与了椎间盘的退变过程?目的:检测正常和退变人椎间盘细胞中组织蛋白酶k的表达,探讨组织蛋白酶k与椎间盘退变的相关性。方法:应用免疫组化S-P法和ELISA法对30例腰椎间盘突出症患者椎间盘组织中组织蛋白酶k进行检测,并取15例健康成人(尸体)和脊柱骨折手术患者正常椎间盘组织作对照,观察组织蛋白酶k在正常和退变人椎间盘细胞中的蛋白表达。结果与结论:正常椎间盘和退变椎间盘中均有组织蛋白酶k表达,退变椎间盘中组织蛋白酶k表达水平明显高于正常组,差异有显著性意义(P组织蛋白酶k可能参与了椎间盘退变的病理改变。

关键词：组织蛋白酶k 椎间盘退变基质骨组织工程

组织蛋白酶k、S与动脉粥样硬化及其斑块不稳定性的关系

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临床心血管病杂志 2008年第11期24卷 867-869页

作者：吴建芳金沂李国元青海大学医学院实验诊断教研室西宁810001 青海大学医学院附属医院

目的:探讨组织蛋白酶k、S(Cat-k,Cat-S)与动脉粥样硬化及其斑块不稳定性的关系。方法:原代培养小鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC),传代后用白细胞介素-1(IL-1β)(10μg/L)诱导细胞12、24、36h,免疫荧光检测VSMC Cat-k、Cat-S的表达变化,ELISA... 详细信息

目的:探讨组织蛋白酶k、S(Cat-k,Cat-S)与动脉粥样硬化及其斑块不稳定性的关系。方法:原代培养小鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC),传代后用白细胞介素-1(IL-1β)(10μg/L)诱导细胞12、24、36h,免疫荧光检测VSMC Cat-k、Cat-S的表达变化,ELISA试剂盒检测细胞培养基Cat-k、Cat-S的浓度。结果:原代培养的细胞VSMC-a-actin阳性,细胞纯度达96以上。对照组Cat-k、Cat-S免疫荧光染色均为阴性;经IL-1β诱导后Cat-k弱阳性,而Cat-S则呈阳性,并随着诱导时间的延长荧光强度不断增强。对照组培养基Cat-k、Cat-S浓度微量;经IL-1β诱导后,Cat-k无明显增加,但Cat-S增加明显,与对照组相比,差异有统计学意义(Pk、Cat-S,以后者显著,提示Cat-S在动脉硬化的发生、发展及斑块不稳定性中起着重要作用。

关键词：白细胞介素1β 平滑肌细胞组织蛋白酶k 组织蛋白酶S 动脉粥样硬化

组织蛋白酶k在大鼠磨牙再植术后牙髓中的表达

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哈尔滨医科大学学报 2013年第4期47卷 321-323,328页

作者：金星爱吕晶薛欣王锐刘英群哈尔滨医科大学口腔医学院儿童口腔科黑龙江哈尔滨150001

目的探讨组织蛋白酶k在大鼠磨牙再植术后不同时间段牙髓细胞内的表达分化及其分布。方法 20只8周Wistar雄性大鼠,分为4组,每组5只。单侧上颌第一磨牙脱位后即刻再植,对侧同名牙为自身对照。用原位杂交方法检测组织蛋白酶k在大鼠磨牙再... 详细信息

目的探讨组织蛋白酶k在大鼠磨牙再植术后不同时间段牙髓细胞内的表达分化及其分布。方法 20只8周Wistar雄性大鼠,分为4组,每组5只。单侧上颌第一磨牙脱位后即刻再植,对侧同名牙为自身对照。用原位杂交方法检测组织蛋白酶k在大鼠磨牙再植术后14天、21天和28天牙髓细胞内的mRNA表达情况。结果牙髓细胞、成牙本质细胞中组织蛋白酶k原位杂交染色阳性,表达比对照组高(P组织蛋白酶k表达差异有统计学意义(P组织蛋白酶k表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论组织蛋白酶k参与了牙再植术后牙根的吸收过程,组织蛋白酶k可能促进了破牙细胞分化成熟。

关键词：组织蛋白酶k 牙再植术原位杂交

墨旱莲组分中组织蛋白酶k非活性位点抑制剂研究

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药学学报 2017年第6期52卷 936-942页

作者：蒋益萍吴岩斌秦路平张巧艳辛海量 Dieter Bromme 薛黎明中国人民解放军第二军医大学药学院上海200433 福建中医药大学中西医结合研究院福建福州350108 加拿大不列颠哥伦比亚大学上海市疾病预防控制中心化学品毒性检定所上海200336

组织蛋白酶k(CTSk)是抗骨质疏松药物的关键靶标。CTSk活性位点抑制剂能抑制胶原蛋白降解活性,同时抑制CTSk降解其他蛋白的水解活性,存在较大的不良反应,CTSk非活性位点(exosite)抑制剂具有抑制骨胶原降解活性且不影响活性位点(active si... 详细信息

组织蛋白酶k(CTSk)是抗骨质疏松药物的关键靶标。CTSk活性位点抑制剂能抑制胶原蛋白降解活性,同时抑制CTSk降解其他蛋白的水解活性,存在较大的不良反应,CTSk非活性位点(exosite)抑制剂具有抑制骨胶原降解活性且不影响活性位点(active site)的生物活性。本研究通过毕赤酵母表达系统表达出重组CTSk,进一步通过N端正丁基琼脂糖凝胶柱和SP-琼脂糖凝胶柱分离,得到高纯度有活性的重组CTSk。利用所得CTSk考察筛选了中药墨旱莲不同提取物及化学成分对CTSk的胶原降解活性和对CTSk与Z-FR-MCA底物结合的抑制作用,明确了墨旱莲的正丁醇部位为理想的潜在非活性位点活性部位,从中提取的墨旱莲皂苷IX为潜在的非活性位点抑制剂。

关键词：组织蛋白酶k 墨旱莲活性位点抑制剂非活性位点抑制剂正丁醇部位墨旱莲皂苷IX

敲除组织蛋白酶k基因改善高脂饮食小鼠缺血性血管生成

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生理学报 2024年第1期76卷 45-51页

作者：王心怡王旭何震杰陈士票李伟健崔仁善姜海英浙江中医药大学基础医学院杭州310000 嘉兴大学医学院嘉兴314000 延边大学生理学教研室延吉133000

本文旨在探讨组织蛋白酶k(cathepsin k,Cat k)对高脂饮食小鼠缺血性血管生成的作用及机制。利用高脂饮食Cat k基因敲除(Cat k^(-/-))小鼠制备单侧下肢缺血模型,利用激光多普勒血流测定仪观察缺血后不同时间段血流恢复程度;免疫组织化学... 详细信息

本文旨在探讨组织蛋白酶k(cathepsin k,Cat k)对高脂饮食小鼠缺血性血管生成的作用及机制。利用高脂饮食Cat k基因敲除(Cat k^(-/-))小鼠制备单侧下肢缺血模型,利用激光多普勒血流测定仪观察缺血后不同时间段血流恢复程度;免疫组织化学染色法观察缺血下肢新生毛细血管数量;免疫印迹法检测胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate 1,IRS-1)、p-Akt、Akt及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等信号蛋白表达。首先观察高脂饮食对野生型小鼠缺血性血管生成的影响。野生型小鼠随机分为对照组和高脂饮食组,分别以普通饲料或60%高脂肪饲料饲养16周。结果表明,与对照组相比,高脂饮食组小鼠体重明显增加,缺血下肢血流恢复程度明显减弱,血浆Cat k浓度及缺血侧骨骼肌中Cat k基因表达显著升高(Pk^(-/-)高脂饮食小鼠进一步观察Cat k对高脂肪负荷下缺血性血管生成的作用及机制。结果表明,Cat k^(-/-)小鼠缺血下肢的血流恢复程度明显强于野生型小鼠,缺血14天后缺血下肢的CD31阳性细胞显著增多(Pk^(-/-)小鼠缺血侧骨骼肌IRS-1、p-Akt及VEGF蛋白表达水平显著增加(Pk基因可能通过IRS-1-Akt-VEGF信号通路改善高脂饮食小鼠缺血性血管生成过程。

关键词：组织蛋白酶k 高脂肪血管生成胰岛素受体底物-1

组织蛋白酶k、胱抑素C与冠心病及其危险因素的相关性

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中国老年学杂志 2015年第23期35卷 6725-6727页

作者：袁琳类延娜李玉子金基永成宪武李香延边大学附属医院心内科吉林延吉133000

目的探讨组织蛋白酶k(Cat k)、胱抑素C(Cys C)与冠心病(CHD)发病、冠脉狭窄程度以及CHD危险因素之间的关系。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定252例CHD患者和135例对照组血清Cat k水平,同时测定Cys C、血脂、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、... 详细信息

目的探讨组织蛋白酶k(Cat k)、胱抑素C(Cys C)与冠心病(CHD)发病、冠脉狭窄程度以及CHD危险因素之间的关系。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定252例CHD患者和135例对照组血清Cat k水平,同时测定Cys C、血脂、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、糖化血红蛋白(Hb A1c)以及肌酐(Cr)水平;所有受试者均行冠脉造影,以Syntax评分评估冠脉狭窄程度。结果 CHD组血清Cat k水平(130.8±24.5)ng/dl与对照组〔(86.9±23.5)ng/dl〕比较显著升高(Pk水平〔(137.2±24.9)ng/dl〕与稳定型心绞痛(SAP)组〔(100.8±12.8)ng/dl〕比较显著升高(Pk水平与冠脉狭窄的Syntax评分呈显著正相关(r=0.236,Pk、Cys C可能与CHD的发病独立相关,其血清水平可反映CHD患者冠状动脉病变狭窄程度,可作为诊断及判断预后的新的生物标志物。

关键词：组织蛋白酶k 胱抑素C 冠心病

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组织蛋白酶k在口腔疾病中的研究进展

口腔医学研究 2011年第9期27卷 832-833页

作者：杨秀玲姜秋吉林大学口腔医院儿童口腔科吉林长春130021

组织蛋白酶k（cathepsin k）是一种半胱氨酸蛋白酶,主要存在于破骨细胞、破牙细胞中,该酶主要降解胶原纤维、骨连接素等多种骨基质蛋白。

关键词：组织蛋白酶k 口腔疾病半胱氨酸蛋白酶骨基质蛋白破骨细胞破牙细胞胶原纤维骨连接素