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组织蛋白酶d有助于SRBSdV在白背飞虱体内复制

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生物学杂志 2023年第5期40卷 20-23页

作者：付亚亭郭冬阳吴清发中国科学技术大学生命科学学院合肥230027

在白背飞虱(Sogatella furcifera)获毒过程中,南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black streaked dwarf virus,SRBSdV)与细胞膜上受体结合,借助网格蛋白依赖型内吞作用进入宿主细胞。组织蛋白酶d(Cathepsin d,Cathd)是一种天冬氨酸蛋... 详细信息

在白背飞虱(Sogatella furcifera)获毒过程中,南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black streaked dwarf virus,SRBSdV)与细胞膜上受体结合,借助网格蛋白依赖型内吞作用进入宿主细胞。组织蛋白酶d(Cathepsin d,Cathd)是一种天冬氨酸蛋白酶,参与细胞内体/溶酶体内蛋白降解和病毒释放进入细胞质过程,但Cathd在SRBSdV侵染其介体白背飞虱时是否发挥作用目前尚不明确。通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默白背飞虱体内Cathd基因的表达,发现沉默表达Cathd基因的白背飞虱在饲喂SRBSdV后的存活率与对照组白背飞虱相比无明显差异,但会降低白背飞虱的带毒比率和带毒量;在果蝇细胞中敲低Cathd同源基因的表达并感染果蝇C病毒(drosophila C virus,dCV),细胞内dCV的复制水平与对照组相比也有明显下调。研究结果提示Cathd可能通过一种保守的机制协助病毒在昆虫细胞内增殖,可以作为防控SRBSdV病害的潜在靶标分子。

关键词：白背飞虱 RNA干扰内吞作用南方水稻黑条矮缩病毒组织蛋白酶d

组织蛋白酶d通过上调Cavin2调控脑微血管内皮细胞通透性的机制研究

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组织蛋白酶D通过上调Cavin2调控脑微血管内皮细胞通透性的机制研究

作者：王少岩中国医科大学

学位级别：硕士

目的:血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）通透性增高是脑血管疾病后炎症反应的重要病理基础,BBB通透性增加后引起白细胞-内皮细胞相互作用并跨内皮细胞向脑内迁移,从而加重中枢神经系统炎性损伤并导致神经元破坏。本研究以小鼠脑微血... 详细信息

目的:血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）通透性增高是脑血管疾病后炎症反应的重要病理基础,BBB通透性增加后引起白细胞-内皮细胞相互作用并跨内皮细胞向脑内迁移,从而加重中枢神经系统炎性损伤并导致神经元破坏。本研究以小鼠脑微血管内皮细胞（b End.3）模拟体外BBB模型,观察组织蛋白酶d（cathepsin d,CTSd）对小鼠脑微血管内皮细胞通透性改变的影响,并探讨其作用机制。方法:1.细胞培养及分组:小鼠脑微血管内皮细胞用含10%的胎牛血清的高糖培养基,在37℃、5%CO的孵箱内培养,2-3天·细胞传代一次,取其对数生长期的细胞进行试验。2.研究方法:首先通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法,检测不同CTSd浓度（0ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml、200ng/ml、400ng/ml、800ng/ml）对小鼠脑微血管内皮细胞（b End.3）增殖活性的影响。然后利用小鼠脑微血管内皮细胞模拟体外BBB模型,通过荧光素异硫氰酸酯标记的葡萄糖（Fluorescein isothiocyanate labeled dextrance,FITC-dextrance）渗透实验Transwell方法,检测上述不同CTSd浓度时小鼠脑微血管内皮细胞通透性的变化。采用蛋白质免疫印迹法（western blot,WB）和免疫荧光染色法,检测不同CTSd浓度（0ng/ml、200ng/ml、400ng/ml、800ng/ml）时小凹调节蛋白-2（Cavin-2）、紧密连接蛋白-1（Zonula Occludens-1,ZO-1）、钙粘连蛋白（VE-cadherin）在小鼠脑微血管内皮细胞的表达水平。采用全内反射荧光显微镜（Total Interal Reflection Fluorescenc Microscopy,Tirf）观察对照组和CTSd浓度为800ng/ml时Cavin2蛋白在小鼠脑微血管内皮细胞的定位情况,并通过透射电镜检测细胞膜内囊泡数量的改变。采用免疫荧光染色法和WB方法检测核因子κB（Neuclear factor-κ-gene binding,NFκB）信号通路及小鼠脑微血管内皮细胞Cavin2蛋白的表达。分别以胃抑素A（Pepstatin A,Pep A）及四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯（Pyrrdidine dithiocarbamate,PdTC）作为抑制剂进行实验,观察其能否抑制CTSd对小鼠脑微血管内皮细胞通透性的改变。结果:1.不同CTSd浓度作用下,小鼠脑微血管内皮细胞活性无显著差别。2.随着CTSd浓度的增加,透过Transwell小室的FITC-dextrance明显增加,CTSd浓度与小鼠脑微血管内皮细胞细胞通透性呈正相关。3.免疫荧光结果显示,随着CTSd浓度的增加,小鼠脑微血管内皮细胞Cavin-2蛋白荧光强度增加,ZO-1和VE-cadherin蛋白荧光强度没有改变。***结果显示,随着CTSd浓度的增加,小鼠脑微血管内皮细胞Cavin-2蛋白表达量增加,ZO-1和VE-cadherin蛋白表达量没有改变。***显微镜结果显示,Cavin2蛋白主要定位于小鼠脑微血管内皮细胞膜上,且CTSd浓度为800ng/ml组Cavin2蛋白较对照组表达量增多;6.电镜结果显示CTSd浓度为800ng/ml组小鼠脑微血管内皮细胞膜附近囊泡较对照组数量增多。7.与对照组相比,高CTSd浓度组小鼠脑微血管内皮细胞中NFκB信号通路活化进入细胞核,且这一现象能被PdTC抑制。***和免疫荧光结果显示,高CTSd浓度组小鼠脑微血管内皮细胞Cavin-2蛋白表达增加,能被PdTC抑制而不能被Pep A抑制。9.通过检测Transwell下室中FITC-dextrance浓度的方法发现,说明PdTC能阻断由CTSd导致的小鼠脑微血管内皮通透性升高。结论:***能够导致小鼠脑微血管内皮细胞通透性增高,且呈剂量依赖性。***能够导致小鼠脑微血管内皮细胞Cavin2表达上调,但对紧密连接结构无明显影响。***上调Cavin2蛋白是通过激活小鼠脑微血管内皮细胞NFκB信号通路来实现的。

关键词：组织蛋白酶d 小鼠脑微血管内皮细胞血脑屏障囊泡

组织蛋白酶d在脑卒中后炎性反应中的作用及研究进展

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实用药物与临床 2023年第3期26卷 275-279页

作者：王少岩王美琳栾欣田力中国医科大学附属盛京医院老年病科辽宁沈阳110004 国药(大连)船舶康复医院辽宁大连116000

组织蛋白酶d是在溶酶体中起作用的天冬氨酸蛋白酶,并在细胞质中广泛地参与自噬这一过程,参与蛋白质的降解以及诱导细胞凋亡。脑卒中后的炎性反应在脑损伤中发挥重要作用,组织蛋白酶d参与自噬及脑卒中后炎症的级联反应。研究显示,组织蛋... 详细信息

组织蛋白酶d是在溶酶体中起作用的天冬氨酸蛋白酶,并在细胞质中广泛地参与自噬这一过程,参与蛋白质的降解以及诱导细胞凋亡。脑卒中后的炎性反应在脑损伤中发挥重要作用,组织蛋白酶d参与自噬及脑卒中后炎症的级联反应。研究显示,组织蛋白酶d通过增强脑卒中后炎性反应而参与脑卒中后的病理损伤过程。组织蛋白酶d在脑卒中后损伤中的具体机制可以为进一步探索炎性脑损伤治疗措施奠定基础,组织蛋白酶d有望成为临床干预和治疗脑卒中的新靶点,但具体机制仍需进一步探究。本文从组织蛋白酶d的功能及结构、与自噬的关系、组织蛋白酶抑制剂、脑卒中病程中的研究进展方面进行综述。

关键词：组织蛋白酶d 脑卒中炎性反应

组织蛋白酶d在肾癌组织中表达水平及其与临床病理因素、预后相关性

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临床军医杂志 2022年第12期50卷 1297-1299页

作者：贺威张红军刘静刘纪泽臧照辉高万峰武警辽宁省总队医院卫生防疫科辽宁沈阳110000 武警辽宁省总队医院外三科辽宁沈阳110000 武警辽宁省总队医院检验科辽宁沈阳110000 武警辽宁省总队医院麻醉科辽宁沈阳110000 武警后勤学院研究生处辽宁沈阳110000

目的探讨组织蛋白酶d(Cath-d)在肾癌组织中的表达水平及其与临床病理因素、预后的相关性。方法选取武警后勤学院附属医院自2005年2月至2014年12月收治的146例肾癌患者为研究对象。将146例患者的癌组织标本纳入肾癌组;将其中35例患者取... 详细信息

目的探讨组织蛋白酶d(Cath-d)在肾癌组织中的表达水平及其与临床病理因素、预后的相关性。方法选取武警后勤学院附属医院自2005年2月至2014年12月收治的146例肾癌患者为研究对象。将146例患者的癌组织标本纳入肾癌组;将其中35例患者取自距离癌灶≥3 cm处的正常肾组织标本作为对照纳入正常组。比较正常组和肾癌组的Cath-d表达情况,分析Cath-d表达情况与患者临床病理因素、5年生存率的相关性。结果正常组和肾癌组Cath-d表达阳性率分别为11.43%(4/35)和79.45%(116/146),差异有统计学意义(Pd阳性表达与患者TNM分期、Ki-67表达及5年生存情况相关(Pd(+)患者5年生存率低于Cath-d(-)患者(Pd会在肾癌组织中过度表达,其可能在癌细胞的增殖和转移中发挥重要作用,影响患者预后。Cath-d可能成为肾癌新的治疗靶点,为临床制定个性化治疗方案提供方向。

关键词：肾癌组织蛋白酶d 病理预后

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组织蛋白酶d在涎腺腺样囊性癌表达的研究

中华口腔医学杂志 2000年第3期35卷 206-208页

作者：彭歆俞光岩高岩武登诚北京医科大学口腔医学院 100081

目的　探讨组织蛋白酶d(cathepsin d ,Cath d)与涎腺腺样囊性癌 (salivaryadenoidcysticcarcinoma ,SACC)预后的关系。方法　采用免疫组织化学链亲和素法分析 5 2例SACC的Cath d表达 ,并统计学分析Cath d与SACC病理学分型、临床分期、... 详细信息

目的　探讨组织蛋白酶d(cathepsin d ,Cath d)与涎腺腺样囊性癌 (salivaryadenoidcysticcarcinoma ,SACC)预后的关系。方法　采用免疫组织化学链亲和素法分析 5 2例SACC的Cath d表达 ,并统计学分析Cath d与SACC病理学分型、临床分期、局部复发、远处转移和患者生存率的关系。结果　Cath d表达与SACC病理学分型、局部复发和患者生存率无明显相关 (P >0 0 5 ) ,而与临床分期和远处转移呈正相关关系 (P d能通过溶解基底膜、细胞外间质和结缔组织 ,从而促进SACC的远处转移 ;Cath d可作为预后指标来预测SACC的远处转移。

关键词：组织蛋白酶d 免疫组织化学涎腺腺样囊性癌

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组织蛋白酶d对乳腺癌预后的意义

中国肿瘤临床 1997年第2期24卷 85-88页

作者：张荣新李同度刘德纯蚌埠医学院附属医院蚌埠市233004

用免疫组化法检测了55例乳腺癌患者的组织蛋白酶d（Cathd）。肿瘤实质Cathd阳性者16例（29．09％），间质高表达者26例（47．27％），Cathd实质表达与组织学分级低（P＜0．025）、增殖细胞核抗原（PCNA）低表达（P＜0．025）相关，与无... 详细信息

用免疫组化法检测了55例乳腺癌患者的组织蛋白酶d（Cathd）。肿瘤实质Cathd阳性者16例（29．09％），间质高表达者26例（47．27％），Cathd实质表达与组织学分级低（P＜0．025）、增殖细胞核抗原（PCNA）低表达（P＜0．025）相关，与无病生存（P＞0．10）和总生存期（P＞0．10）无显著关系；Cathd间质高表达与组织学分级高（P＜0．025）、淋巴结转移（P＜0．025）、PC-NA高表达（P＜0．025）及短的无病生存期（P＜0．005）和总生存期（P＜0．005）相关。提示Cathd间质表达能预测复发和总生存期，检测Cathd对乳腺癌的辅助治疗可有帮助。

关键词：组织蛋白酶d 乳腺癌预后

组织蛋白酶d、P糖蛋白及Her-2与贲门癌预后关系的研究

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中华医学杂志 1997年第2期77卷 100-102页

作者：张力建何络文黄信孚北京医科大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所

探讨组织蛋白酶Ｄ（Ｃａｔｈ－Ｄ）、Ｐ糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）及Ｈｅｒ－２与贲门癌治疗预后的关系。方法应用免疫组织化学的方法，检测了４３例贲门癌经手术切除的新鲜癌组织标本中的Ｐ糖蛋白、组织蛋白酶Ｄ及Ｈｅｒ－２的表达水平，并结... 详细信息

探讨组织蛋白酶Ｄ（Ｃａｔｈ－Ｄ）、Ｐ糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）及Ｈｅｒ－２与贲门癌治疗预后的关系。方法应用免疫组织化学的方法，检测了４３例贲门癌经手术切除的新鲜癌组织标本中的Ｐ糖蛋白、组织蛋白酶Ｄ及Ｈｅｒ－２的表达水平，并结合其病理类型及淋巴结转移进行了综合判定。结果Ｐ糖蛋白及Ｈｅｒ－２的表达与贲门癌的淋巴结转移无统计学意义，（Ｐ＞０．０５），而组织蛋白酶Ｄ的表达与贲门癌的淋巴结转移有显著相关（Ｐ＜０．０１），同时组织蛋白酶Ｄ阳性者其Ｐ糖蛋白及Ｈｅｒ－２的表达也明显高于组织蛋白酶Ｄ阴性者。贲门癌的分化程度与Ｐ糖蛋白及组织蛋白酶Ｄ的表达无显著差异，而与Ｈｅｒ－２的表达却有显著相关（Ｐ＜０．０５）。结论组织蛋白酶Ｄ阳性的贲门癌易发生淋巴结转移，Ｈｅｒ－２阳性者恶性度高且预后差，临床上对上述病人应给予特殊针对性的治疗方案。

关键词：组织蛋白酶d 糖蛋白类淋巴转移贲门癌 Her-2

组织蛋白酶d、表皮生长因子受体在分化性甲状腺癌中的表达及临床意义

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中国肿瘤临床 1998年第5期25卷 357-359页

作者：吴毅许良中王卓颖沈强黄彩平朱伟萍上海医科大学肿瘤医院

目的：研究组织蛋白酶Ｄ、表皮生长因子受体在分化性甲状腺癌中的表达。方法：应用免疫组织化学方法对６６例分化性甲状腺癌及３７例甲状腺良性病变的组织蛋白酶Ｄ、表皮生长因子受体癌基因蛋白的表达进行研究。结果：组织蛋白酶Ｄ在分... 详细信息

目的：研究组织蛋白酶Ｄ、表皮生长因子受体在分化性甲状腺癌中的表达。方法：应用免疫组织化学方法对６６例分化性甲状腺癌及３７例甲状腺良性病变的组织蛋白酶Ｄ、表皮生长因子受体癌基因蛋白的表达进行研究。结果：组织蛋白酶Ｄ在分化性甲状腺癌阳性表达者５３例（８０．３％），阴性者１３例（１９．７％）；伴有淋巴结转移者其阳性率高达９３．５％，无淋巴结转移者其阳性率７１．４％（Ｐ＜０．０５），组织蛋白酶Ｄ与表皮生长因子受体在分化性甲状腺癌中共同表达为５３％，在甲状腺良性病变组织中仅２７％（Ｐ＜０．０１），在伴有淋巴结转移的甲状腺癌中组织蛋白酶Ｄ、表皮生长因子受体共同表达为６７．７％，无淋巴结转移者为３７．１％（Ｐ＜０．０５）。

关键词：甲状腺肿瘤分化性组织蛋白酶d EGFR

组织蛋白酶d调控皮肤成纤维细胞降解晚期糖基化终末产物的研究

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中华皮肤科杂志 2018年第9期51卷 647-652页

作者：许新雅许庆芳郑跃黎钰莹黄云芬龚子鉴陆春赖维中山大学附属第三医院皮肤科广州510630

目的探究组织蛋白酶d（Catd）对皮肤成纤维细胞降解吞入胞内的晚期糖基化终末产物（AGE）的调控作用。方法分别以CatB＋CatL、Catd以及20S蛋白酶体的酶活性抑制剂CA074Me、天冬氨酸酶抑制剂（pepstatin A）、MG-132处理皮肤成纤维细胞，... 详细信息

目的探究组织蛋白酶d（Catd）对皮肤成纤维细胞降解吞入胞内的晚期糖基化终末产物（AGE）的调控作用。方法分别以CatB＋CatL、Catd以及20S蛋白酶体的酶活性抑制剂CA074Me、天冬氨酸酶抑制剂（pepstatin A）、MG-132处理皮肤成纤维细胞，CCK8和荧光法检测细胞活性及蛋白酶活性。CA074Me、pepstatin A、MG-132组分别加入AGE—BSA孵育8 h，而对照组加入磷酸盐缓冲液（PBS）。孵育8 h后，置换含相应抑制剂的新鲜培养基继续培养24 h，流式细胞仪检测各时间点胞内AGE—BSA平均荧光强度。以不同浓度pepstatin A（37．5、75、150 μmol／L）或PBS处理皮肤成纤维细胞，加入AGE—BSA孵育，方法同前，ELISA检测各时间点胞内***平均浓度，计算降解率。慢病毒转染皮肤成纤维细胞，设空白对照组、空载病毒转染组、Catd高表达慢病毒转染组，荧光显微镜观察，RT—PCR、Western印迹法和荧光法检测各组Catd mRNA和蛋白表达及酶活性。分别加入AGE-BSA孵育，处理及检测方法同前，计算降解率。结果1 txmol／LCA074Me组、75 μmol／L pepstatinA组及1 μmol／LMG-132组细胞增殖活性均在90％以上，与对照组（100％）差异无统计学意义（F=1．525，P〉0．05）。去除*** 24 h后，CA074Me＋AGE—BSA组和MG一132＋AGE—BSA组胞内***荧光强度（275．00±10．15、259．00±11．14）均较其相应8 h点荧光强度（295．00±6．56、285．67±8．74）显著下降（配对t值分别为4．778、6．154，均P〈0．05），而pepstatin A＋***组8 h和32 h点细胞内AGE—BSA荧光强度差异无统计学意义（均P〉0．05）。37．5、75和150μmol／LpepstatinA组24 h内对吞入胞内AGE—BSA的降解率分别为9．64％±1．27％、5．62％±0．47％和3．21％±0．73％，各组问差异有统计学意义（F=45．876，P〈0．05），且该降解率随pepstatin A浓度增加而降低（P〈O．05）。荧光显微镜下观察，空白对照组细胞未见荧光，空载病毒转染组和Catd高表达慢病毒转染组细胞荧光阳性率均在80％以上。Card高表达慢病毒转染组Catd mRNA、蛋白表达及活性均较另2组显著上调（均P〈0．05）。Catd高表达慢病毒转染＋***组24 h内***的降解率显著高于AGE—BSA组和空载病毒转染＋AGE—BSA组（均P〈0．05）。结论Catd可促进皮肤成纤维细胞降解吞入胞内的***。

关键词：组织蛋白酶d 成纤维细胞糖基化终产物高级降解