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微载体旋转立体培养成人退变髓核细胞及鉴定

中国组织工程研究 2013年第7期17卷 1168-1173页

作者：宁斌丁远景龚维明刘海飞刘勇王德春胡有谷山东大学附属济南市中心医院脊柱外科山东省济南市250013 山东省创伤骨科研究所山东省青岛市266001

背景:旋转生物反应器是目前应用较多的微载体培养系统。目的:应用微载体旋转立体培养方法对成人退变髓核细胞进行扩增及鉴定。方法:对手术切除的髓核组织进行原代培养,传代后进行单层培养和微载体旋转立体培养的对比,并行苏木精-伊红、G... 详细信息

背景:旋转生物反应器是目前应用较多的微载体培养系统。目的:应用微载体旋转立体培养方法对成人退变髓核细胞进行扩增及鉴定。方法:对手术切除的髓核组织进行原代培养,传代后进行单层培养和微载体旋转立体培养的对比,并行苏木精-伊红、Gimsa染色观察细胞形态,利用电镜观察其超微结构,利用MTT比色法检测细胞生长活性。结果与结论:倒置相差显微镜观察培养的细胞符合退变髓核细胞形态,透射电镜下可显示其退变改变。倒置相差显微镜和扫描电镜下观察,可见退变的髓核细胞呈立体状生长,并能够成功甩珠传代。细胞在对数生长期时,微载体培养的细胞的生长活性明显高于单层培养组的细胞。表明微载体旋转立体培养法可以较好的维持细胞表型,对对数生长期髓核细胞的细胞活性具有明显的刺激作用。

关键词：组织构建软骨组织构建髓核细胞退变微载体细胞培养细胞鉴定立体培养单层培养国家自然科学基金组织构建图片文章

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凋亡破骨细胞的拉伸应变(英文)

中国组织工程研究 2013年第7期17卷 1201-1206页

作者：郝庆新李建宇郭勇李瑞欣刘璐万宗明张西正解放军军事医学科学院卫生装备研究所天津市300161 武警医学院天津市300162

背景:力学应变在骨重建中起重要作用。然而,力学应变是否影响破骨细胞的凋亡仍不清楚。目的:观察力学应变对体外培养破骨细胞凋亡的影响。方法:对小鼠单核细胞RAW264.7采用巨噬细胞集落刺激因子和破骨细胞分化因子诱导,抗酒石酸酸性磷... 详细信息

背景:力学应变在骨重建中起重要作用。然而,力学应变是否影响破骨细胞的凋亡仍不清楚。目的:观察力学应变对体外培养破骨细胞凋亡的影响。方法:对小鼠单核细胞RAW264.7采用巨噬细胞集落刺激因子和破骨细胞分化因子诱导,抗酒石酸酸性磷酸酶染色和骨吸收实验确定成功诱导出了破骨细胞。实验共分为3组,对诱导的破骨细胞分别施加0(对照组),2500和5000με的基底拉伸应变3d,1h/次,1次/d。结果与结论:与对照组相比,生理强度载荷2500με阻止了破骨细胞的凋亡和线粒体膜电位的下降。但是,病理强度载荷5000με对破骨细胞的凋亡和线粒体膜电位没有影响。

关键词：组织构建组织构建与生物力学力学应变破骨细胞凋亡线粒体骨重建体外培养生理强度载荷病理强度载荷线粒体膜电位破骨细胞分化因子国家自然科学基金组织构建图片文章

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碘乙酸钠诱导原代大鼠软骨细胞凋亡

中国组织工程研究 2013年第2期17卷 247-253页

作者：姜丽平李龙婕宫德正耿成燕姜丽杰仲来福大连医科大学-中日合作医药科学研究所辽宁省大连市116044 大连医科大学附属第一医院放疗科辽宁省大连市116023 大连大学附属中山医院内科辽宁省大连市116001

背景:近年碘乙酸钠多用于诱导骨关节炎的发生,病理结果观察到软骨区域凋亡的发生,但有关碘乙酸钠诱导软骨细胞凋亡机制的研究较少。目的:探讨不同剂量碘乙酸钠诱导原代大鼠软骨细胞凋亡的发生机制。方法:使用酶消化法建立大鼠关节软骨... 详细信息

背景:近年碘乙酸钠多用于诱导骨关节炎的发生,病理结果观察到软骨区域凋亡的发生,但有关碘乙酸钠诱导软骨细胞凋亡机制的研究较少。目的:探讨不同剂量碘乙酸钠诱导原代大鼠软骨细胞凋亡的发生机制。方法:使用酶消化法建立大鼠关节软骨细胞培养体系;荧光显微镜和流式细胞仪检测软骨细胞凋亡;激光共聚焦显微镜和荧光分光光度计评估线粒体膜电位的改变;荧光分光光度法测定活性氧水平改变;免疫印迹法检测凋亡调控蛋白细胞色素C和caspase-3的表达。结果与结论:碘乙酸钠剂量依赖性地诱导软骨细胞凋亡,使活性氧水平显著升高(P<0.05),线粒体膜电位水平明显降低(P<0.05),凋亡调控蛋白的表达明显增加。提示碘乙酸钠诱导的原代大鼠软骨细胞凋亡主要与活性氧的产生及线粒体介导的caspase-3活化有关。

关键词：组织构建软骨组织构建软骨细胞碘乙酸钠活性氧线粒体膜电位细胞色素C Caspase-3 凋亡组织构建图片文章

胰蛋白酶与糖皮质激素影响肺成纤维细胞增殖与骨架蛋白的表达

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中国组织工程研究 2013年第11期17卷 2020-2025页

作者：方秋红税朝祥王尧尧王瑞芹王晶马迎民首都医科大学附属北京世纪坛医院呼吸与危重医学科北京市100038 清华大学第一附属医院北京市100016

背景:肺成纤维细胞不但是肺组织的结构支持细胞,还能够通过增殖、收缩、趋化及分泌细胞外基质等多种功能在肺组织的炎症损伤-修复过程中发挥关键作用。目的:观察原代培养的人肺成纤维细胞在胰蛋白酶或糖皮质激素作用下增殖特性与骨架蛋... 详细信息

背景:肺成纤维细胞不但是肺组织的结构支持细胞,还能够通过增殖、收缩、趋化及分泌细胞外基质等多种功能在肺组织的炎症损伤-修复过程中发挥关键作用。目的:观察原代培养的人肺成纤维细胞在胰蛋白酶或糖皮质激素作用下增殖特性与骨架蛋白表达的变化。方法:采用人肺成纤维细胞体外培养,胰酶处理24h,终浓度分别为0,0.5,1.0,5,10mg/L胰酶;地塞米松处理72h,在有血清培养条件下进行,浓度范围10-9-10-6mol/L。MTT法测定成纤维细胞增殖情况;免疫印迹方法测定细胞波形蛋白和肌动蛋白的表达。结果与结论:胰蛋白酶在低浓度(0.1-0.5mg/L)时刺激肺成纤维细胞增殖;而较高浓度(1-10mg/L)明显抑制细胞生长。地塞米松对肺成纤维细胞增殖作用的影响不明显。胰蛋白酶显著上调肺成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白的表达,但对波形蛋白的表达无明显影响;地塞米松(10-9-10-6mol/L)显著抑制波形蛋白的表达。结果表明在慢性阻塞性肺病等支气管肺慢炎症性疾病的发病过程中,胰蛋白酶和糖皮质激素可以通过参与成纤维细胞增殖和骨架蛋白的表达发挥作用。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验胰蛋白酶糖皮质激素肺成纤维细胞波形蛋白肌动蛋白免疫印迹地塞米松骨架蛋白成纤维细胞增殖慢性阻塞性肺病国家自然科学基金组织构建图片文章

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人膝骨性关节炎滑膜中表达的骨桥蛋白

中国组织工程研究 2013年第11期17卷 2013-2019页

作者：肖盛世高曙光徐迈张凯朱鹤远宋扬杨阳雷光华中南大学湘雅医院骨科湖南省长沙市410008 株洲市一医院创伤骨科湖南省株洲市412000 中南大学湘雅医院骨科研究所湖南省长沙市410008

背景:目前研究显示骨桥蛋白与骨性关节炎关节软骨退变密切相关,但骨桥蛋白与骨性关节炎滑膜病变是否相关,仍少见报道。目的:研究骨桥蛋白在原发性骨性关节炎发生与发展过程中的作用。方法:选取膝骨性关节炎患者关节滑膜标本与下肢外伤... 详细信息

背景:目前研究显示骨桥蛋白与骨性关节炎关节软骨退变密切相关,但骨桥蛋白与骨性关节炎滑膜病变是否相关,仍少见报道。目的:研究骨桥蛋白在原发性骨性关节炎发生与发展过程中的作用。方法:选取膝骨性关节炎患者关节滑膜标本与下肢外伤患者作对照,根据综合评分法进行分组,采用免疫组化方法检测关节滑膜中骨桥蛋白水平,比较不同程度骨性关节炎组膝关节滑膜中骨桥蛋白的差异,同时比较标本滑膜衬里层和衬里下层骨桥蛋白的水平。结果与结论:骨性关节炎组织中骨桥蛋白阳性呈黄色、棕黄色、棕褐色表达,病变程度越重,颜色表达越深。骨性关节炎组滑膜中骨桥蛋白明显高于对照组,差异有显著性意义(P0.05)。说明骨桥蛋白可能与骨性关节炎的发病有关。

关键词：组织构建组织构建基础实验骨性关节炎骨桥蛋白滑膜病关节软骨发病机制滑膜衬里层衬里下层关节软骨退变免疫组化国家自然科学基金组织构建图片文章

膝关节后交叉韧带断裂对内侧副韧带组织学的影响

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中国组织工程研究 2013年第2期17卷 280-285页

作者：俞芳李康华章灿李宇晟高曙光卢邦宝中南大学湘雅医院骨科研究所中南大学湘雅医院骨科湖南省长沙市410008

背景:通过比较Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原相对数量和Ⅰ/Ⅲ型胶原的比值可以一定程度上判断韧带的组织学性能。目的:观察膝关节后交叉韧带断裂兔保持较低生理负荷和活动度时内侧副韧带组织学的变化。方法:24只成年雄性家兔双侧膝关节配对为自身... 详细信息

背景:通过比较Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原相对数量和Ⅰ/Ⅲ型胶原的比值可以一定程度上判断韧带的组织学性能。目的:观察膝关节后交叉韧带断裂兔保持较低生理负荷和活动度时内侧副韧带组织学的变化。方法:24只成年雄性家兔双侧膝关节配对为自身对照,实验侧行后交叉韧带完全切断,对照侧只暴露后交叉韧带而不切断,造模后第8,16,24,40周随机处死6只实验兔。进行苏木精-伊红染色,天狼猩红染色检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原的相对数量。结果与结论:①苏木精-伊红染色结果:8,16,24周两组内侧副韧带胶原分布、排列无明显差别;40周时实验组胶原纤维较对照组稀疏。②天狼猩红染色结果:8,16,24周实验组内侧副韧带的Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维总和分别较对照组显著增加(P0.05);16,24,40周时实验组比值显著分别小于对照组(P组织学特性无明显影响,随着时间延长,组织学特性显著下降。

关键词：组织构建组织构建与生物力学膝关节后交叉韧带断裂内侧副韧带胶原纤维组织学特征韧带修复组织构建图片文章

酸性成纤维细胞生长因子促进大鼠肠缺血-再灌注损伤的修复

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中国组织工程研究 2013年第11期17卷 1965-1971页

作者：孙虹张明辉翁立新孙同柱内蒙古医学院基础医学院内蒙古自治区呼和浩特市010059 甘肃中医学院甘肃省兰州市730000 内蒙古医学院基础医学院病理教研室内蒙古自治区呼和浩特市010059 解放军总医院创伤修复研究室北京市100853

背景:细胞外调节蛋白激酶和酸性成纤维细胞生长因子受体2在肠缺血-再灌注损伤修复中的作用尚无研究报道。目的:观察大鼠肠缺血-再灌注损伤后外源性酸性成纤维细胞生长因子对细胞外调节蛋白激酶和酸性成纤维细胞生长因子受体2表达的影响... 详细信息

背景:细胞外调节蛋白激酶和酸性成纤维细胞生长因子受体2在肠缺血-再灌注损伤修复中的作用尚无研究报道。目的:观察大鼠肠缺血-再灌注损伤后外源性酸性成纤维细胞生长因子对细胞外调节蛋白激酶和酸性成纤维细胞生长因子受体2表达的影响,探讨细胞外调节蛋白激酶和酸性成纤维细胞生长因子受体2与酸性成纤维细胞生长因子促进创伤修复的关系。方法:以大鼠肠系膜上动脉夹闭45min造成肠缺血-再灌注损伤模型,于再灌注即刻应用酸性成纤维细胞生长因子行干预。分别于再灌注2,6,12,24h取大鼠小肠组织标本,利用免疫组化和RT-PCR检测酸性成纤维细胞生长因子受体的表达及免疫组化检测细胞外调节蛋白激酶表达的规律。结果与结论:在正常大鼠,酸性成纤维细胞生长因子受体2主要分布在小肠绒毛上皮细胞的肠腔侧、侧壁和小肠隐窝朝向隐窝腔的一侧细胞膜上。缺血-再灌注初期,酸性成纤维细胞生长因子受体2及细胞外调节蛋白激酶的表达未发生明显变化,但随着再灌注时间的延长表达水平逐渐提高,并于再灌注后6-12h达高峰。经酸性成纤维细胞生长因子治疗后,大鼠小肠组织小肠黏膜损伤程度减轻,酸性成纤维细胞生长因子受体2及细胞外调节蛋白激酶的表达量高于未治疗大鼠。结果表明缺血-再灌注损伤后,酸性成纤维细胞生长因子干预可上调酸性成纤维细胞生长因子受体2及细胞外调节蛋白激酶的表达,提示外源性酸性成纤维细胞生长因子通过促进内源性酸性成纤维细胞生长因子受体2和细胞外调节蛋白激酶的生成可能是其参与内脏损伤修复的机制之一。

关键词：组织构建组织构建与生物活性因子酸性成纤维细胞生长因子受体细胞外调节蛋白激酶缺血-再灌注损伤小肠小肠绒毛上皮细胞其他基金组织构建图片文章

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雷洛昔芬促进兔下颌骨骨折的愈合

中国组织工程研究 2013年第2期17卷 217-222页

作者：刘凯石崇刘树发张洪凯佳木斯大学附属第二医院黑龙江省佳木斯市154007

背景:雷洛昔芬虽在临床中广泛应用于治疗骨质疏松,但对骨折愈合的影响尚未见报道。目的:观察雷洛昔芬对兔下颌骨骨折愈合的影响。方法:取新西兰大耳白兔24只,制备双侧下颌角1.5mm×10.0mm骨缺损模型,随机抽签法分为2组,实验组于造模后第... 详细信息

背景:雷洛昔芬虽在临床中广泛应用于治疗骨质疏松,但对骨折愈合的影响尚未见报道。目的:观察雷洛昔芬对兔下颌骨骨折愈合的影响。方法:取新西兰大耳白兔24只,制备双侧下颌角1.5mm×10.0mm骨缺损模型,随机抽签法分为2组,实验组于造模后第2天开始给予7.5mg/(kgd)雷洛昔芬至30d,对照组不作处理。结果与结论:X射线观察造模后1周两组骨缺损区骨痂形成不明显。3周实验组缺损区模糊,对照组缺损区仍可见;4周实验组骨痂多,髓腔再通;对照组骨痂较多,髓腔未通。造模后1,3,4周实验组骨密度和血清骨源性碱性磷酸酶较对照组明显升高(P<0.05),均于第4周时达到高峰;造模后3,4周实验组骨痂中骨形态发生蛋白2的表达强度高于对照组(P<0.01)。提示雷洛昔芬能够促进成骨细胞分化,加速骨矿物沉积,同时诱导骨形态发生蛋白2表达从而加速骨折的愈合。

关键词：组织构建骨组织构建雷洛昔芬下颌骨骨折愈合兔骨形态发生蛋白组织构建图片文章

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耻骨联合可作为组织工程种子细胞的供区?

中国组织工程研究 2013年第11期17卷 1972-1980页

作者：葛成臧晓霞邹敬才于开涛孙海燕张志光解放军307医院口腔科北京市100071 解放军空军总医院口腔科北京市100142 中山大学附属口腔医院颌面外科广东省广州市510055

背景:耻骨联合是与关节盘、半月板或椎间盘具有相同性质的组织,但是将其作为组织工程种子细胞供区的研究,至今鲜有报道。目的:观察耻骨联合作为组织工程种子细胞供区的可行性。方法:取大鼠的耻骨联合组织进行苏木精-伊红、阿尔新蓝及Ⅱ... 详细信息

背景:耻骨联合是与关节盘、半月板或椎间盘具有相同性质的组织,但是将其作为组织工程种子细胞供区的研究,至今鲜有报道。目的:观察耻骨联合作为组织工程种子细胞供区的可行性。方法:取大鼠的耻骨联合组织进行苏木精-伊红、阿尔新蓝及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,观察细胞外基质的组织学特征。再将分离自大鼠耻骨联合组织的细胞,在体外培养扩增后,与藻酸盐凝胶支架复合立体培养,通过活细胞荧光标记方法,观察细胞存活率,通过21d长期培养观察细胞增殖情况。测量8具成年男性骨盆标本的耻骨联合软骨区的体积,判断其是否有利于分离足够数量的种子细胞。结果与结论:苏木精-伊红染色显示,大鼠耻骨联合组织有大量平行或交叉排列的纤维束,细胞单独散在、成对或成行排列分布于纤维束之间的陷窝内。阿尔新蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色发现,大鼠耻骨联合组织广泛着色,细胞及陷窝附近着色较深。藻酸盐凝胶支架为多孔结构,孔隙间交互通连,孔隙直径为(27.0±16.7)μm,孔隙壁较光滑。在支架上细胞存活率为(72.4±4.5)%。在体外长期培养过程中,支架上的细胞呈圆球形,逐渐形成"同源细胞群",培养13d时观察到的细胞团,在第21天时明显增大,所含细胞数明显增多。成年男性耻骨联合组织的体积为(1.13±0.21)cm3。结果证实,大鼠耻骨联合组织细胞具有软骨细胞的排列特征,细胞外间质有软骨组织特异性基质成分。取自大鼠耻骨联合的细胞,在体外立体培养具有持续的增殖能力,耻骨联合组织可作为软骨组织工程种子细胞供区。成年男性耻骨联合组织量较大,有利于分离获取较多的原代细胞。

关键词：组织构建骨组织构建耻骨联合形态学软骨细胞外基质增殖立体培养种子细胞供区组织工程省级基金组织构建图片文章