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组织因子途径抑制物-2对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长及血管生成的影响

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肿瘤 2013年第2期33卷 157-163页

作者：秦晓林李武县李紫微涂植光张莉唐景云陈敬波徐勇深圳市坪山新区人民医院检验科广东深圳518118 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的:探讨组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)对人肝癌Hep3B细胞株裸鼠皮下移植瘤生长以及肿瘤血管生成的作用。方法:将TFPI-2稳定表达的Hep3B细胞(Hep3B-TFPI-2组)、转染空载体PCDNA3.1的Hep3B细胞(Hep3B-V组)及未进行转染的Hep3B细胞(Hep3B-P组)分别接种于裸鼠皮下,待皮下成瘤后,每隔3d测量1次肿瘤大小,并绘制出肿瘤体内生长曲线。3周后处死裸鼠,测定肿瘤体积,提取组织中总RNA和蛋白,实时荧光定量PCR(real-time uorescence quantitative PCR,RFQ-PCR)检测肿瘤组织中TFPI-2和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的mRNA水平;蛋白质印迹法检测肿瘤组织中TFPI-2和VEGF蛋白表达水平;免疫组织化学法检测肿瘤组织中TFPI-2蛋白表达水平和肿瘤微血管密度(micro vessel density,MVD)。结果:Hep3B-TFPI-2组最终肿瘤体积明显小于Hep3B-V组和Hep3B-P组(P2组肿瘤组织的TFPI-2mRNA表达丰度和蛋白水平明显高于其余2组(P2组VEGFmRNA表达丰度和蛋白水平明显低于其余2组,与2个对照组相比,VEGF蛋白表达抑制率分别为19.8%和23.5%(P2组MVD计数明显低于其余2组(P2能抑制人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长和肿瘤血管生成。

关键词：肝肿瘤实验性丝氨酸蛋白酶抑制剂异种移植模型抗肿瘤试验基因表达新生血管化病理性组织因子途径抑制物-2

组织因子途径抑制物-2和γ-神经突触核蛋白在食管癌中的表达及其与肿瘤细胞浸润、转移和凋亡之间的关系

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肿瘤 2010年第3期30卷 220-225页

作者：孙桢樊青霞师晓天孙明月郑州大学第一附属医院肿瘤科郑州450052 安阳肿瘤医院胸外科安阳455000

目的:探讨组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)和γ-神经突触核蛋白(synuclein gamma,SNCG)在食管癌组织中的表达及其与肿瘤浸润、转移和细胞凋亡之间的关系。方法:应用免疫组织化学法检测82例食管癌组织... 详细信息

目的:探讨组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)和γ-神经突触核蛋白(synuclein gamma,SNCG)在食管癌组织中的表达及其与肿瘤浸润、转移和细胞凋亡之间的关系。方法:应用免疫组织化学法检测82例食管癌组织及20例相应癌旁不典型增生组织和54例相应癌旁正常食管组织中TFPI-2、SNCG和基质金属蛋白酶-9(matrix metallo-proteinase-9,MMP-9)的表达,应用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡并计算细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)。结果:TFPI-2和SNCG在食管癌组织、癌旁不典型增生组织及正常食管组织中的阳性表达率分别为30.4%、60.0%、87.0%和63.4%、30.0%、3.7%,3组间两两比较差异均有统计学意义(P0.05)。食管癌组织中TFPI-2与MMP-9的表达呈负相关(r=-0.636,P=0.000),而SNCG与MMP-9的表达呈正相关(r=0.393,P=0.000)。TFPI-2和SNCG的表达与AI有关(P抑制MMP-9的表达诱导细胞凋亡,抑制食管癌细胞的生长和转移,而SNCG可能在此过程中起着相反的作用,TFPI-2和SNCG有望成为有效的肿瘤标志物和肿瘤基因治疗的新靶点。

关键词：食管肿瘤基因表达肿瘤转移细胞凋亡免疫组织化学组织因子途径抑制物-2 γ-神经突触核蛋白

组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)在动脉粥样硬化斑块稳定性中的作用

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复旦学报（医学版） 2013年第5期40卷 606-609,624页

作者：潘俊杰罗心平复旦大学附属华山医院心内科上海200040

组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)是一种含Kunitz型结构域的丝氨酸蛋白酶抑制剂,其生理功能和病理作用尚不清楚。由于TFPI-2在抑制恶性肿瘤侵袭转移中的重要作用及肿瘤侵袭转移与动脉粥样硬化斑块不稳... 详细信息

组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)是一种含Kunitz型结构域的丝氨酸蛋白酶抑制剂,其生理功能和病理作用尚不清楚。由于TFPI-2在抑制恶性肿瘤侵袭转移中的重要作用及肿瘤侵袭转移与动脉粥样硬化斑块不稳定破裂的原因相似,研究者的目光开始转向TFPI-2对斑块稳定性的作用。本文就TFPI-2在动脉粥样硬化斑块稳定性中的作用作一综述。

关键词：组织因子途径抑制物-2 (TFPI-2) 动脉粥样硬化斑块稳定性

组织因子途径抑制物-2基因原核表达及其重组蛋白生物活性研究

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中华检验医学杂志 2005年第11期28卷 1146-1150页

作者：宁勇黄瑞滨宋善俊湖北中医学院医学检验与技术系武汉430064 华中科技大学血液病研究所

目的构建人组织因子途径抑制物2(TFPI2)基因的原核表达载体并在大肠杆菌中有效表达;探索重组TFPI2抑制纤溶酶活性及其对人卵巢癌细胞(A2780)迁徙浸润能力的影响。方法1.以TFPI2cDNA为模板,PCR扩增得到645bpDNA片段,克隆入表达载体pET28a... 详细信息

目的构建人组织因子途径抑制物2(TFPI2)基因的原核表达载体并在大肠杆菌中有效表达;探索重组TFPI2抑制纤溶酶活性及其对人卵巢癌细胞(A2780)迁徙浸润能力的影响。方法1.以TFPI2cDNA为模板,PCR扩增得到645bpDNA片段,克隆入表达载体pET28a,并转化大肠杆菌BL21株表达。2.限制性内切酶和菌落PCR法鉴定TFPI2基因DNA片段,Westernblot法鉴定TFPI2融合蛋白。3.建立TFPI2抑制纤溶酶的动力学方法并测定重组TFPI2对纤溶酶的抑制作用。4.在体外用Boyden小室,以不同浓度TFPI2作用A2780细胞进行迁徙和浸润实验。结果1.成功构建重组TFPI2的原核表达载体pET28a并在BL21株中表达、纯化,获得大量TFPI2蛋白。***证实表达的融合蛋白为TFPI2。3.重组TFPI2对液相和固相中的纤溶酶具有显著抑制作用,且呈剂量效应关系。4.在迁徙实验中,将A2780TFPI2不同浓度组与A2780对照组细胞穿过人工膜的细胞数进行比较,经t检验,无统计学意义(P>0.05);在浸润实验中,将A2780TFPI2不同浓度组与A2780对照组细胞穿过人工膜的细胞数进行比较及TFPI2不同浓度组间的细胞数进行比较,经t检验,具有显著差异(P抑制纤溶酶活性的研究,为探讨TFPI2对人卵巢癌细胞浸润转移能力的影响等提供了实验依据。3.重组TFPI2对人卵巢癌细胞体外自身运动能力无影响,但可显著抑制人卵巢癌细胞的体外浸润能力,为将来卵巢癌用蛋白酶抑制剂治疗提供一可能的靶向依据。

关键词：组织因子途径抑制物-2 卵巢肿瘤基因表达

组织因子途径抑制物-2抑制人前列腺癌细胞的上皮间质转化

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安徽医科大学学报 2015年第12期50卷 1738-1743页

作者：刘树瀚宣强谈宜傲吴本鹤孙凌峰乔龙标翟路路孙友文周林玉安徽医科大学附属省立医院泌尿外科合肥230001 安徽医科大学附属省立医院胆胰外科合肥230001

目的探讨组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)对人前列腺癌细胞上皮间质转化的影响。方法将人前列腺癌细胞株PC3M进行培养,并分为3组,分别转染TFPI-2基因真核表达载体、空载体及不转染,细胞划痕实验和细胞侵袭小室实验检测3组细胞的迁移能力... 详细信息

目的探讨组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)对人前列腺癌细胞上皮间质转化的影响。方法将人前列腺癌细胞株PC3M进行培养,并分为3组,分别转染TFPI-2基因真核表达载体、空载体及不转染,细胞划痕实验和细胞侵袭小室实验检测3组细胞的迁移能力和侵袭能力,用转化生长因子-β1(TGF-β1)处理细胞,倒置相差显微镜下观察3组细胞形态,Western blot法和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法分别检测转染组、转染空载体组及未转染组上皮间质转化标志物-E钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和snail在蛋白和mRNA水平上的表达量。结果细胞划痕实验和细胞侵袭小室实验结果显示,转染TFPI-2基因真核表达载体的PC3M细胞迁移率较低(P物较多,vimentin和snail蛋白表达产物较少,差异有统计学意义(P抑制人前列腺癌细胞的上皮间质转化,这是其抑制前列腺癌细胞侵袭与转移的可能机制之一,为基因及生物靶向治疗前列腺癌提供新的思路和方向。

关键词：组织因子途径抑制物-2 前列腺癌上皮间质转化

组织因子途径抑制物-2影响多发性骨髓瘤血管内皮生长因子表达的研究

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广东医学 2010年第5期31卷 546-547页

作者：张蕴芳杜新许云陶小梅李明卓家才广东省深圳市第二人民医院血液科 518035 南方医科大学

目的研究组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)基因对多发性骨髓瘤(MM)细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法通过脂质体转染技术将pcDNA3.0/TFPI-2或pcDNA3.0导入多发性骨髓瘤细胞株,分别设为实验组和对照组,用ELISA法测定实验组和对照... 详细信息

目的研究组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)基因对多发性骨髓瘤(MM)细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法通过脂质体转染技术将pcDNA3.0/TFPI-2或pcDNA3.0导入多发性骨髓瘤细胞株,分别设为实验组和对照组,用ELISA法测定实验组和对照组上清液中VEGF水平以及骨髓基质细胞(BMSCs)与实验组和对照组细胞共同培养分泌的VEGF蛋白的差异,以实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RQ-PCR)法测定实验组和对照组细胞内VEGF mRNA的表达。结果实验组VEGF、细胞内VEGF mRNA的表达未见明显差异,实验组与骨髓基质细胞共同培养的VEGF水平低于对照组。结论TFPI-2基因可能间接抑制BMSCs产生和分泌VEGF。

关键词：多发性骨髓瘤组织因子途径抑制物-2 血管内皮生长因子骨髓基质细胞

组织因子途径抑制物-2在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响

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中国老年学杂志 2015年第1期35卷 52-55页

作者：孟斐沈阳医学院附属中心医院妇产科辽宁沈阳110024

目的观察组织因子途径抑制物(TFPI)-2在正常宫颈、宫颈上皮内肿瘤(CIN)和宫颈鳞癌组织中表达的差异及TFPI-2对体外培养的宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响。方法收集2009~2010年在该院妇产科住院治疗的68例宫颈鳞癌患者,48例CIN患者及12... 详细信息

目的观察组织因子途径抑制物(TFPI)-2在正常宫颈、宫颈上皮内肿瘤(CIN)和宫颈鳞癌组织中表达的差异及TFPI-2对体外培养的宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响。方法收集2009~2010年在该院妇产科住院治疗的68例宫颈鳞癌患者,48例CIN患者及12例宫颈正常患者的宫颈组织标本,免疫组化染色检测宫颈组织中TFPI-2的表达。取生长状态良好的宫颈癌Hela细胞,应用基因转染的方法建立TFPI-2高表达细胞系,Real-time PCR和Western印迹方法检测基因转染前后细胞中TFPI-2 mRNA和蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测各组细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 1免疫组化染色显示,正常宫颈组织、CIN和宫颈癌中TFPI-2表达逐渐降低,三者间比较差异有统计学意义(P抑制作用更明显(P抑制宫颈癌Hela细胞增殖,促进其凋亡。提示TFPI-2的表达减少可能是宫颈癌发生发展的机制之一,TFPI-2可能是治疗宫颈癌的新靶点。

关键词：宫颈癌组织因子途径抑制物-2 Hela细胞细胞增殖凋亡

组织因子途径抑制物-2在非小细胞肺癌中的表达及其与细胞凋亡的关系

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实用医学杂志 2010年第11期26卷 1903-1905页

作者：董永强纪涛张晓明朱水波徐家行殷桂林广州军区武汉总医院心胸外科 430070

目的:探讨非小细胞肺癌中组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)的表达及其与细胞凋亡的关系,评价其与肺癌恶性程度的关系。方法:收集非小细胞肺癌石蜡标本、临床资料和临床分期,采用免疫组化法检测TFPI-2蛋白在60例非小细胞肺癌和15例正常肺组... 详细信息

目的:探讨非小细胞肺癌中组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)的表达及其与细胞凋亡的关系,评价其与肺癌恶性程度的关系。方法:收集非小细胞肺癌石蜡标本、临床资料和临床分期,采用免疫组化法检测TFPI-2蛋白在60例非小细胞肺癌和15例正常肺组织中的表达水平,并应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的标记染色法(TUNEL法)检测细胞凋亡,计算凋亡指数(AI)。结果:TFPI-2在非小细胞肺癌中的表达指数为60.0%,低于正常肺组织的89.5%。Ⅰ、Ⅱ期及无转移的非小细胞肺癌组织中TFPI-2表达指数(70.9%)及AI值[(9.58±4.52)%]均高于Ⅲ、Ⅳ期[48.3%、(6.36±1.98)%]及有转移的非小细胞肺癌组织[57.1%、(6.10±2.68)%],差异有统计学意义(P2在正常肺组织中的表达水平明显高于非小细胞肺癌组织,TFPI-2可能在诱导非小细胞凋亡中起到重要作用。

关键词：癌,非小细胞肺组织因子途径抑制物-2 细胞凋亡

组织因子途径抑制物-2影响多发性骨髓瘤血管内皮生长因子表达的研究

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组织因子途径抑制物-2影响多发性骨髓瘤血管内皮生长因子表达的研...

作者：张蕴芳南方医科大学

学位级别：硕士

背景与目的组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)是一种新近发现的具有Kunitz型结构的丝氨酸蛋白酶抑制物,它在人体内主要由构成血管的内皮细胞、平滑肌细胞以及成纤维细胞等合成,并分泌至细胞外基质(extra... 详细信息

背景与目的组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)是一种新近发现的具有Kunitz型结构的丝氨酸蛋白酶抑制物,它在人体内主要由构成血管的内皮细胞、平滑肌细胞以及成纤维细胞等合成,并分泌至细胞外基质(extracellular matrix,ECM)。TFPI-2在体外可强烈抑制纤溶酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶等多种蛋白水解酶活性,并能抑制由纤溶酶催化的基质金属蛋白酶原proMMP-1和proMMP-3的活化,但以往的研究证实其对基质金属蛋白酶(MatrixMetalloproteinases,MMPs)如MMP-1的活性并无直接抑制作用。研究还发现某些哺乳动物膀胱上皮可分泌TFPI-2,但其意义尚不清楚。业已证实,ECM被降解是肿瘤细胞浸润转移过程中的关键一步,而肿瘤细胞分泌的纤溶酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶等多种丝氨酸蛋白酶则在ECM降解中起重要作用。有研究表明,转TFPI-2基因纤维母细胞瘤细胞在SCID小鼠体内的生长速度明显滞后于未转染的瘤细胞,并且肺内转移率下降。有意义的是,通过实时荧光定量RT-PCR检测发现,转TFPI-2基因肿瘤组织血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA表达水平低于未转染者3-6倍。已知VEGF作为血管新生的正调控因子,特异性作用于血管内皮细胞的有丝分裂,刺激血管内皮细胞增殖和迁移,促进新生血管生长。上述结果说明TFPI-2在体内抑制肿瘤浸润生长和远处转移的作用,可能与其抑制VEGF的表达进而导致肿瘤血管新生减少有关。此后有研究者发现,转染TFPI-2的神经胶质瘤在体内的微血管形成受到抑制,在体外则毛细血管样结构生成减少,进一步提示TFPI-2可能参与肿瘤血管新生的调控。最近,在TFPI-2和VEGF相互关系方面又有新的研究进展,实时定量PCR和蛋白印迹分析显示,VEGF上调血管内皮细胞TFPI-2 mRNA和TFPI-2蛋白的表达,而且该调控作用呈现时间和剂量依赖性。反之,TFPI-2蛋白以剂量依赖方式抑制VEGF刺激内皮细胞增殖的作用以及VEGF诱导的内皮细胞迁移。此结果揭示TFPI-2可能以负反馈机制参与VEGF的调控。综上所述,TFPI-2抑制某些实体肿瘤VEGF的表达以及依赖于VEGF的血管内皮细胞增殖和迁移,具有潜在的抗血管新生作用。多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)作为造血系统常见恶性肿瘤之一,是严重威胁中老年人群健康的恶性疾病。近年来因为其发病率的上升但治疗手段有限而颇受关注。MM的发病机制复杂,其中血管新生是MM发生、发展非常重要的一个方面。血管新生与浆细胞标记指数呈正相关而与骨髓瘤患者的生存期呈负相关。由骨髓瘤细胞产生的促血管新生因子如VEGF和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)等与骨髓基质细胞(bone marrowstromal cells,BMSCs)、内皮细胞一起共同参与了多发性骨髓瘤血管新生。研究表明多发性骨髓瘤患者骨髓及外周血VEGF水平升高,而且血清VEGF与疾病分期和预后相关。因此,下调VEGF的表达水平进而抑制骨髓瘤血管新生,已成为治疗多发性骨髓瘤的有效措施之一。本研究旨在通过基因转染技术将TFPI-2基因导入MM细胞株,比较转染TFPI-2基因的细胞与转空质粒的细胞VEGF和VEGFmRNA的表达以及影响BMSCs分泌VEGF的差异,为MM的治疗提供新思路。研究方法 1.细胞转染取对数生长期U266细胞,接种于用纤连蛋白包被的24孔培养板,每孔5×10个,培养24小时后用无血清RPMI-1640培养基洗涤2次转染前备用。用Lipofectamine 2000脂质体介导的基因转染技术将重组表达载体pcDNA3.0/TFPI-2和单纯表达载体pcDNA3.0转染到U266细胞。将前者设为实验组,后者为对照组。分别用含200 mg/L、400 mg/L、600 mg/L、800mg/L G418的全培养液抗性筛选,浓度为600 mg/LG418的全培养液筛选良好,阳性克隆继续在含400mg/L G418的培养液中传代培养,约经6周后,即可获得稳定筛选,用于下述体外试验。 2.细胞培养 ①实验组和对照组的U266细胞以1×10细胞/ml/孔接种于48孔板中,在1%FBS的RPMI-1640中培养72小时后,收集上清,1500rpm离心5分钟,上清保存于-20℃冰箱,ELISA法检测VEGF浓度,细胞保存于-80℃冰箱中,供RT-PCR实验用。 ②BMSCs消化后,以1×10细胞/ml/孔接种于48孔板,以含10%FBS的DMEM培养液培养24h后弃去

关键词：多发性骨髓瘤组织因子途径抑制物-2 血管内皮生长因子骨髓间质细胞