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纳豆芽孢杆菌的分离鉴定及纳豆腐乳营养品质探究

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食品安全导刊 2024年第2期 144-148页

作者：袁玉华孙伟广东巨树食品有限公司广东阳江529500 华南理工大学食品科学与工程学院广东广州510640

本研究以纳豆芽孢杆菌的分离纯化实验为基础,探讨筛选高酶活纳豆芽孢杆菌并将其应用于制备纳豆腐乳。通过分离得到的纳豆芽孢杆菌生产新型纳豆腐乳,并比较纳豆腐乳与传统腐乳在纳豆激酶酶活、氨基酸、总酸等营养品质方面的区别。结果表... 详细信息

本研究以纳豆芽孢杆菌的分离纯化实验为基础,探讨筛选高酶活纳豆芽孢杆菌并将其应用于制备纳豆腐乳。通过分离得到的纳豆芽孢杆菌生产新型纳豆腐乳,并比较纳豆腐乳与传统腐乳在纳豆激酶酶活、氨基酸、总酸等营养品质方面的区别。结果表明,从5株纯化菌株中筛选出高酶活的纳豆芽孢杆菌NT4,16S rDNA鉴定结果为Bacillus subtilis subsp. subtilis strain 168,应用该菌株生产的纳豆腐乳纳豆激酶含量为(96.0±4.0)U·g^(-1),盐分含量为9.11%±0.06%,水分含量为74.43%±2.83%,氨基酸态氮含量为(0.60±0.02)g/100 g,总酸含量为(0.46±0.12)g/100 g,感官得分平均值为(8.81±0.95)分。纳豆腐乳有望为腐乳生产的创新发展提供新的方向。

关键词：纳豆芽孢杆菌纳豆腐乳纳豆激酶食品发酵

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纳豆芽孢杆菌对白芨主要营养成分及活性物质的影响

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吉林农业科技学院学报 2024年第1期33卷 1-5页

作者：吕新霞刘冬谭炜安庆职业技术学院农林与服装学院安庆246003 国家农产品标准化检测中心安徽省食品药品检验所合肥230051

以纳豆芽孢杆菌和白芨为试材,采用理化检测和代谢组学技术研究了使用纳豆芽孢杆菌对白芨主要品质和活性代谢物的影响。结果表明:纳豆芽孢杆菌可以促进白芨块茎淀粉、蛋白和多糖的积累,提高白芨4种氨基酸和3种微量元素含量。纳豆芽孢杆... 详细信息

以纳豆芽孢杆菌和白芨为试材,采用理化检测和代谢组学技术研究了使用纳豆芽孢杆菌对白芨主要品质和活性代谢物的影响。结果表明:纳豆芽孢杆菌可以促进白芨块茎淀粉、蛋白和多糖的积累,提高白芨4种氨基酸和3种微量元素含量。纳豆芽孢杆菌能促进6种联苄类化合物、4种二氢菲及菲类化合物和8种黄酮类活性物质积累。纳豆芽孢杆菌可缓解重金属污染,降解农药残留。

关键词：纳豆芽孢杆菌白芨营养成分生物活性物质

纳豆芽孢杆菌men基因过表达菌株的构建及提高溶氧强化MK-7合成

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应用与环境生物学报 2022年第6期28卷 1393-1399页

作者：李楚王晗王丽王鹏郑之明安徽大学物质科学与信息技术研究院合肥230601 中国科学院合肥物质科学研究院合肥230031

近年来,维生素K2更多的生理功能被发现,除了促进凝血之外,还能预防骨质疏松症和心血管疾病,有望治疗肿瘤和帕金森症.纳豆芽孢杆菌是被美国食品药品管理局认证的一种益生菌,可以用来生物制备维生素K2,其主要的产物形式为人体内半衰期较... 详细信息

近年来,维生素K2更多的生理功能被发现,除了促进凝血之外,还能预防骨质疏松症和心血管疾病,有望治疗肿瘤和帕金森症.纳豆芽孢杆菌是被美国食品药品管理局认证的一种益生菌,可以用来生物制备维生素K2,其主要的产物形式为人体内半衰期较长、生物利用度较高的MK-7,在规模化生物制备维生素K2中的应用潜力较大.本研究优化枯草芽孢杆菌的Sipizizen转化法,使其适用于纳豆芽孢杆菌的分子转化;构建甲萘醌合成途径所涉及的全部8个men基因的过表达载体,并考察其转化纳豆芽孢杆菌之后发酵MK-7的性能变化;筛选出对MK-7合成影响较大的3个酶,分别为异戊烯基转移酶(MenA)、1,4-二羟基-2-萘甲酰辅酶A合酶(MenB)和去甲基萘醌甲基转移酶(MenG).通过对menA、menB和menG组合过表达筛选出一株MK-7产率较高的改造菌株(BN-pABG).在5L发酵罐中,通过供氧调控进一步优化其合成MK-7的生理过程,改造菌株的终产量为62.21 mg/L,较出发菌提高了1.26倍.这些结果表明menA、menB和menG组合过表达后对纳豆芽孢杆菌合成MK-7具有较强的促进作用,同时供氧条件的优化也对MK-7的合成有提升效果.(图6表6参21)

关键词：纳豆芽孢杆菌 Sipizizen转化法优化甲萘醌途径过表达载体构建 men基因

纳豆芽孢杆菌对肉仔鸡生长性能、免疫功能及肠道健康的影响

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饲料研究 2023年第10期46卷 34-39页

作者：王丁徐彬席燕燕王改利付趁孙全友李绍钰河南农业大学动物科技学院河南郑州450002 河南省农业科学院畜牧兽医研究所河南郑州450002

试验旨在研究饲喂纳豆芽孢杆菌(Bacillis natto)对肉仔鸡生长性能、免疫功能及肠道菌群的影响。选取180只1日龄科宝肉仔鸡,随机分为2组,每组6个重复,每个重复15只鸡,对照组肉鸡饲喂基础日粮,试验组肉鸡饲喂基础日粮+300 mg/kg纳豆芽孢... 详细信息

试验旨在研究饲喂纳豆芽孢杆菌(Bacillis natto)对肉仔鸡生长性能、免疫功能及肠道菌群的影响。选取180只1日龄科宝肉仔鸡,随机分为2组,每组6个重复,每个重复15只鸡,对照组肉鸡饲喂基础日粮,试验组肉鸡饲喂基础日粮+300 mg/kg纳豆芽孢杆菌。试验期42 d。结果显示,与对照组相比,1~42日龄试验组肉鸡的平均日增重显著提高(P0.05),试验组的Enorma、未分类_f_黄杆菌属(norank_f_Flavobacteriaceae)、Paludicola显著升高(P纳豆芽孢杆菌能够改善肠道菌群结构,提高肠道菌群丰富度和多样性,增强机体免疫功能,进而提高肉仔鸡生长性能。

关键词：纳豆芽孢杆菌肉仔鸡生长性能免疫功能盲肠微生物

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纳豆芽孢杆菌对蛋鸡产蛋性能、孵化性能及血清生化指标的影响

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饲料工业 2022年第11期43卷 25-30页

作者：陈博简晨晨刘振华郭钰君张怀勇黄艳群陈文河南农业大学饲料营养河南省工程实验室河南郑州450002 汝州市动物卫生监督所河南平顶山467500 河南金钱果生物科技股份有限公司河南郑州450000

研究旨在探讨蛋鸡饲粮中添加纳豆芽孢杆菌对蛋鸡产蛋性能、蛋品质以及血清生化指标的影响。选择产蛋均匀的350日龄蛋鸡,对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加100 g/t和200 g/t纳豆芽孢杆菌,每组4个重复,每个重复8 500只;预试... 详细信息

研究旨在探讨蛋鸡饲粮中添加纳豆芽孢杆菌对蛋鸡产蛋性能、蛋品质以及血清生化指标的影响。选择产蛋均匀的350日龄蛋鸡,对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加100 g/t和200 g/t纳豆芽孢杆菌,每组4个重复,每个重复8 500只;预试期7 d,正式试验期28 d。结果表明:①与对照组相比,各组产蛋性能、孵化性能及蛋品质无显著差异(P>0.05);②200 g/t组血清白蛋白、低密度脂蛋白胆固醇、脂多糖、钙显著降低(P纳豆芽孢杆菌对350日龄蛋鸡产蛋、孵化性能有一定的改善,同时可以显著减轻蛋鸡炎症反应的发生并提高免疫水平。

关键词：纳豆芽孢杆菌孵化性能蛋品质血清指标免疫水平

纳豆芽孢杆菌JLCC513对高脂饮食诱导大鼠肥胖及肠道菌群调控作用研究

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纳豆芽孢杆菌JLCC513对高脂饮食诱导大鼠肥胖及肠道菌群调控作用...

作者：孙瑞悦延边大学

学位级别：硕士

长期高脂饮食致使机体出现能量摄入与消耗失衡以及肠道菌群失调,这将加速肥胖等代谢性疾病的发生。纳豆芽孢杆菌含有多种生物学活性,且能够耐受胃内较强的酸性环境,成功抵达肠道发挥益生作用。本文旨在探讨纳豆芽孢杆菌JLCC513对肥胖大... 详细信息

长期高脂饮食致使机体出现能量摄入与消耗失衡以及肠道菌群失调,这将加速肥胖等代谢性疾病的发生。纳豆芽孢杆菌含有多种生物学活性,且能够耐受胃内较强的酸性环境,成功抵达肠道发挥益生作用。本文旨在探讨纳豆芽孢杆菌JLCC513对肥胖大鼠脂质代谢调节、胰岛素抵抗、胆固醇代谢以及肠道菌群的影响,为防治肥胖等代谢性疾病提供新的策略,同时也为研发纳豆功能性食品奠定理论基础。(1)选用Sprague-Dawley(SD)大鼠,采用高脂饮食(HFD)诱导8周建立肥胖大鼠模型后,口服不同剂量JLCC513菌株干预8周。结果表明,与模型组相比,JLCC513菌株低、中、高剂量干预均可以减轻高脂饮食大鼠体重、脂肪重和肝重,降低大鼠血清中TC、TG、LDL-C、TMAO、TNF-α、IL-1β和IL-6的水平,增加HDL-C和IL-10水平;同时降低了肝脏中ALT、AST和MDA含量,提高SOD和GSH-Px的活性,其高剂量达到极显著水平。(2)采用苏木精伊红(H&E)染色观察大鼠附睾脂肪和肝脏组织病理学变化,并利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)技术对大鼠肝脏组织进行机制研究。结果表明,JLCC513菌株干预能够抑制大鼠附睾脂肪组织细胞的形成,减轻肝脏脂肪变性;同时JLCC513菌株高剂量组能显著上调肝脏中IRS、PI3K和AKT表达水平,恢复胰岛素抵抗稳态;激活AMPK的表达量,抑制SREBP-1、FAS和ACC的表达水平,调节脂质代谢水平;激活LXR的表达,提高CYP7A1的表达,并进一步抑制HMGCR的表达,改善肥胖大鼠胆固醇代谢紊乱。(3)采用16S rRNA高通量测序技术测定大鼠粪便样本中微生物区系的变化。结果表明,与模型组相比,JLCC513菌株高剂量组OUTs的数量增加最为明显,接近正常组;JLCC513菌株不同剂量干预均能有效的提高肠道微生物多样性和丰富度;JLCC513菌株不同剂量干预后大鼠肠道微生物的结构和组成均发生不同变化,与模型组相比,JLCC513菌株低、中、高剂量干预均显著降低了Firmicutes/Bacteroidetes的比值和Blautia的相对丰度,增加了Lactobacillus和Oscillospira的相对丰度,而JLCC513菌株干预后逆转了这一改变。Spearman方法对肠道微生物与肥胖相关指标关联分析显示,Firmicutes/Bacteroidetes和Blautia与肥胖指数、生理生化指标和相关蛋白水平呈负相关,Lactobacillus和Oscillospira与上述指标呈正相关。这些结果表明,JLCC513菌株不同剂量均能改变高脂饮食所导致的肠道微生物区系紊乱,恢复肠道微环境稳态,从而缓解肥胖。综上所述,纳豆芽孢杆菌JLCC513通过重塑大鼠肠道微生物区系结构组成,调节肝脏代谢稳态平衡,包括胰岛素抵抗、脂质代谢和胆固醇代谢,降低血糖、血脂和炎症水平,进而抑制肝脏脂肪组织细胞的增加,减轻肝脏脂肪变性,从而减缓肥胖的发病进程,初步揭示了JLCC513菌株通过基于“肠-肝”轴的多种信号通路靶向发挥抗肥胖效应。

关键词：纳豆芽孢杆菌高脂饮食肥胖肠道菌群

纳豆芽孢杆菌JNFE 0127发酵豆乳的研制及其预防小鼠血栓的作用研究

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纳豆芽孢杆菌JNFE 0127发酵豆乳的研制及其预防小鼠血栓的作用研究

作者：王淼霜江南大学

学位级别：硕士

纳豆激酶在体内作用迅速且持续时间长,是天然活性物质中理想治疗和预防血栓的物质。目前市场上纳豆激酶产品有保健品和普通食品。保健品有纳豆激酶胶囊、纳豆激酶片剂等,形式类似药物,易造成服用者吞咽和心理负担。普通食品有纳豆、纳... 详细信息

纳豆激酶在体内作用迅速且持续时间长,是天然活性物质中理想治疗和预防血栓的物质。目前市场上纳豆激酶产品有保健品和普通食品。保健品有纳豆激酶胶囊、纳豆激酶片剂等,形式类似药物,易造成服用者吞咽和心理负担。普通食品有纳豆、纳豆粉等,常存在酶活力不明且气味难闻的问题。本文从实验室选出一株高产纳豆激酶的纳豆芽孢杆菌,并以大豆为原料,开发一款具有冷藏货架期的风味口感良好、酶活可控、方便食用的发酵豆乳,同时采用动物实验验证发酵豆乳的急性毒性和溶栓效果,以期为富含纳豆激酶、食用方便的纳豆食品开发提供借鉴。具体研究内容及结果如下:首先,筛选高产纳豆激酶的纳豆芽孢杆菌并从基因角度分析。以纳豆芽孢杆菌JNFE 0127和纳豆芽孢杆菌JNFE 0126为筛选对象,探究其产酶能力。结果发现JNFE0127产纳豆激酶能力更强,可达到23361.18 IU/m L。基因分析结果显示,JNFE 0127比JNFE 0126基因组长度多26569个碱基对和24个蛋白编码序列;两株菌在跨膜转运、氨基酸运输和代谢以及碳水化合物活性酶等方面存在功能基因差异。这些功能基因的差异可能会造成JNFE 0127和JNFE 0126的生理功能差异。其次,以大豆为原料,利用JNFE 0127菌株制备发酵豆乳并探究贮藏期间品质变化。通过单因素实验得到最佳工艺参数为:采用静置发酵方式,发酵时间6 h,均质压力20 MPa,甜味剂木糖醇和赤藓糖醇添加量分别为1.5%和3.5%,稳定剂添加0.20g/100 m L结冷胶,乳化剂单甘酯与蔗糖酯配比为8:2,体系p H 6.8。复配后获得的发酵豆乳纳豆激酶活力和挥发性盐基氮含量分别为45.59 FU/m L和0.21 mg/100 m L,微生物指标符合GB 29921规定,产品无异味、体系均一、口感良好。将发酵豆乳进行贮藏稳定性研究,在4℃贮藏21天,纳豆激酶活力为28.04 FU/m L,可达到摄入要求。最后,利用动物实验验证发酵豆乳安全性、溶栓效果及其对血栓小鼠肠道的影响。急性毒性实验显示:发酵豆乳的半数致死量大于20 m L/kg。黑尾实验结果显示:建立血栓模型24 h后,灌胃2000 FU或5000 FU纳豆激酶发酵豆乳组相比模型组小鼠黑尾相对长度均显著减小;96 h后2000 FU或5000 FU纳豆激酶发酵豆乳组小鼠黑尾相对长度小于48 h;灌胃5000 FU纳豆激酶发酵豆乳组效果优于同等酶含量组和2000 FU纳豆激酶发酵豆乳组。小鼠黑尾及结肠切片结果显示:含纳豆激酶的发酵豆乳对小鼠尾部血栓有抑制作用且对结肠组织有修复效果。炎症因子和氧化应激指标显示:与模型组相比,灌胃2000 FU或5000 FU纳豆激酶发酵豆乳后肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β水平显著降低,白细胞介素-10水平显著升高;超氧化物歧化酶水平显著升高,丙二醛水平显著降低,谷胱甘肽过氧化物酶水平上升。综上,发酵豆乳对溶解血栓有效果且有剂量依赖性。在纳豆激酶含量相同条件下,豆乳体系溶栓效果优于纯纳豆激酶体系。16S r RNA基因测序结果显示,发酵豆乳可使小鼠肠道厚壁菌门与拟杆菌门比例下降,乳酸菌数量提升,梭状芽孢杆菌数量降低,对小鼠肠道菌群有积极调节作用。

关键词：纳豆芽孢杆菌纳豆激酶发酵豆乳血栓黑尾模型

纳豆芽孢杆菌对蛋鸡生产性能、蛋品质、肠道微生物及血清生化指标的影响

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饲料研究 2022年第16期45卷 44-47页

作者：孙新堂钱淼孙茜王强杨瑞峰杨文文张娜李安东山东畜牧兽医职业学院山东省畜禽抗菌药物使用减量化工程技术研究中心潍坊市兽用生物发酵技术重点实验室山东潍坊261061

试验旨在研究纳豆芽孢杆菌对蛋鸡的生产性能、蛋品质、肠道微生物及血清生化指标的影响。选取300只34周龄海兰褐蛋鸡随机分为5组,每组3重复,每个重复20只鸡。试验1组(对照组)蛋鸡饲喂基础日粮,试验2组、试验3组、试验4组、试验5组分别... 详细信息

试验旨在研究纳豆芽孢杆菌对蛋鸡的生产性能、蛋品质、肠道微生物及血清生化指标的影响。选取300只34周龄海兰褐蛋鸡随机分为5组,每组3重复,每个重复20只鸡。试验1组(对照组)蛋鸡饲喂基础日粮,试验2组、试验3组、试验4组、试验5组分别在基础日粮中添加0.01%、0.05%、0.10%、0.20%的纳豆芽孢杆菌菌粉。试验期42 d。结果显示:20 h后纳豆芽孢杆菌浓度达到2.31×10^(10)CFU/mL,芽孢最大值达96%;采用糊精作为纳豆芽孢杆菌干燥的保护剂,干燥后菌粉活菌数达1.76×10^(11)CFU/g。与对照组相比,各试验组蛋鸡产蛋率均显著升高(P杆菌、沙门氏菌数量显著降低(P纳豆芽孢杆菌菌粉可提高蛋鸡的生产性能,维持肠道健康,改善血清生化指标。

关键词：海兰褐蛋鸡纳豆芽孢杆菌生产性能蛋品质喷雾干燥菌粉

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纳豆芽孢杆菌鉴定及纳豆细菌多样性

纳豆芽孢杆菌鉴定及纳豆细菌多样性

作者：杨艳莉长江大学

学位级别：硕士

纳豆是由大豆经纳豆芽孢杆菌发酵而成的一种传统发酵豆制品,富含蛋白质、维生素、异黄酮等营养成分,具溶解血栓、预防骨质疏松、减肥抗癌等生理功能。纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis ***)是一种常见益生菌,在发酵过程中可产生纳豆激酶... 详细信息

纳豆是由大豆经纳豆芽孢杆菌发酵而成的一种传统发酵豆制品,富含蛋白质、维生素、异黄酮等营养成分,具溶解血栓、预防骨质疏松、减肥抗癌等生理功能。纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis ***)是一种常见益生菌,在发酵过程中可产生纳豆激酶和γ-聚谷氨酸等多种活性物质,常作为微生态制剂、防腐剂、饲料添加剂、免疫活性增强剂等应用于食品、医药、农业等领域。本研究以贵州传统方法制作的纳豆为研究对象,采集了铜仁市思南县不同晾晒状态下的纳豆样品S1(晾晒4 d至全干)、S2(晾晒2 d至半干)和S3(未晾晒)。通过可培养方法分离纳豆芽孢杆菌,并进行生理生化特性和分子标记鉴定,筛选获得多株高纳豆激酶活性菌株。同时,利用高通量测序技术,对不同纳豆样品进行细菌多样性分析,探究其群落组成及多样性变化。取得的主要研究结果如下:(1)纳豆芽孢杆菌分离与鉴定。利用纳豆芽孢杆菌耐热及产蛋白酶的特性,通过可培养方法对纳豆悬浮液进行脱脂牛奶平板稀释涂布分离,经形态学观察、生理生化测定和分子标记鉴定,共分离纳豆芽孢杆菌45株。通过纤维蛋白平板测定分离菌株产纳豆激酶活性,挑选出活性较高的前10个菌株分别命名为BN-1～BN-10,最高纳豆激酶活性单位为3657.56 IU/m L。(2)纳豆细菌多样性分析。以不同晾晒状态下纳豆样品为研究对象,每组3个重复,采用细菌通用引物338F和806R对样品中细菌16S r RNA的可变区域V3-V4区进行PCR扩增,并利用Mi Seq测序技术进行高通量测序。根据97%相似性对得到的序列进行OTU聚类,9个样品共鉴定出5个门,8个纲,28个目,46个科,87个属,123个种,135个OTU。Alpha多样性分析结果显示,群落丰富度最高和最低的分别为S1和S2。由物种组成分析可得,S2和S3具有相似的群落组成。三组样品共有OTU主要为热噬淀粉芽孢杆菌(Bacillus thermoamylovorans)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和马葡萄球菌(Staphylococcus equi)。通过物种注释,3组样品中的优势菌门为厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteriota)、变形菌门(Proteobacteria),S1和S2中的优势菌属为芽孢杆菌属(Bacillus),S3中的优势菌属为葡萄球菌属(Staphylococcus)。Beta多样性分析说明S1的组内相似性最大,S2的组内相似性较低,S3和其他两组样品间具有显著性差异。平均相对丰度排名前五的为芽孢杆菌属、葡萄球菌属、漫游球菌属(Vagococcus)、变形杆菌属(Proteus)和棒状杆菌属(Corynebacterium)。本研究筛选的45株纳豆芽孢杆菌可为选育高产纳豆激酶活性菌株提供种质资源,并为推动纳豆产业发展和扩大芽孢杆菌资源利用提供基础。

关键词：纳豆纳豆芽孢杆菌细菌多样性高通量测序