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人纤维蛋白水凝胶的制备组方对其透明度的影响研究

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中国药学杂志 2023年第16期58卷 1494-1500页

作者：张东袁方贾俊婷章金刚王东根马玉媛军事科学院军事医学研究院卫生勤务与血液研究所国家药品监督管理局血液制品质量控制重点实验室北京100850

目的研究纤维蛋白原、凝血酶及无机盐对纤维蛋白水凝胶透明度的影响规律,获得可制备高透明度纤维蛋白水凝胶的组方条件。方法采用单因素实验设计考察不同成分的浓度变化对水凝胶透明度的影响。目力观察水凝胶外观并测定其在全可见光波段... 详细信息

目的研究纤维蛋白原、凝血酶及无机盐对纤维蛋白水凝胶透明度的影响规律,获得可制备高透明度纤维蛋白水凝胶的组方条件。方法采用单因素实验设计考察不同成分的浓度变化对水凝胶透明度的影响。目力观察水凝胶外观并测定其在全可见光波段(300~800 nm)的吸光度以评价其透明度。利用扫描电子显微镜对水凝胶进行微观结构观察。结果随着纤维蛋白原与氯化钠浓度升高,制得水凝胶的外观变透明、吸光度降低、内部纤维更细、孔径更小。氯化钙浓度升高,水凝胶透明度降低。凝血酶浓度改变对水凝胶透明度无明显影响。结论在高纤维蛋白原浓度(81 mg·mL^(-1))或氯化钠质量浓度≥5 mg·mL^(-1)条件下可制得高透明度人纤维蛋白水凝胶,高透明度人纤维蛋白水凝胶具有较细的纤维与较小的孔径。

关键词：纤维蛋白水凝胶透明度吸光度

基于六邻体蛋白及纤维蛋白序列测定的腺病毒性结膜炎分类分析

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中华实验眼科杂志 2022年第10期40卷 902-907页

作者：王旌朱剑锋陆丽娜上海市眼病防治中心/上海市眼科医院上海市第一人民医院国家眼部疾病临床医学研究中心上海市眼底病重点实验室上海眼视觉与光医学工程技术研究中心上海市眼科疾病精准诊疗工程技术研究中心上海200040

目的基于六邻体蛋白和纤维蛋白的联合基因测序和系统发育分析进行腺病毒性结膜炎中人类腺病毒(HAdV)分型。方法在上海地区收集2015年1月至2017年8月病毒性结膜炎患者下结膜囊结膜拭子样本256份,提取DNA后通过PCR扩增六邻体蛋白及纤维蛋... 详细信息

目的基于六邻体蛋白和纤维蛋白的联合基因测序和系统发育分析进行腺病毒性结膜炎中人类腺病毒(HAdV)分型。方法在上海地区收集2015年1月至2017年8月病毒性结膜炎患者下结膜囊结膜拭子样本256份,提取DNA后通过PCR扩增六邻体蛋白及纤维蛋白全长,完成基因测序及种系发生学分析。结果89例(占34.76%)患者结膜拭子六邻体蛋白基因扩增阳性,包括HAdV-C1、HAdV-C2、HAdV-B3、HAdV-E4、HAdV-D8、HAdV-D19和HAdV-D37各1、7、20、6、23、17和15例,分别占1.12%、7.87%、22.47%、6.74%、25.84%、19.10%和16.85%,其六邻体蛋白种系发生学分析中均与相应参考序列原型聚合。纤维蛋白种系发生学分析中,15例HAdV-D19样本序列和1例HAdV-D37样本序列交叉聚合。结论针对六邻体蛋白和纤维蛋白基因的联合测序可以为HAdV分型和毒力分析提供丰富有效的生物学信息。

关键词：人类腺病毒病毒性结膜炎腺病毒六邻体蛋白纤维蛋白序列分析系统发育

京尼平交联音猬因子复合纤维蛋白支架修复大鼠脊髓损伤

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中国组织工程研究 2022年第21期26卷 3345-3350页

作者：陈平波王晶孙勇徐晓峰陈谦张志坚皖南医学院弋矶山医院骨科安徽省芜湖市241000 镇江市第一人民医院疼痛科江苏省镇江市212001 江苏大学医学院江苏省镇江市212001

背景:组织工程支架移植是修复脊髓损伤最有应用前景的治疗手段之一,通过组织工程支架募集内源性神经干细胞并促进其分化为神经细胞,进而修复脊髓损伤。目的:观察京尼平交联的音猬因子复合纤维蛋白支架移植到大鼠脊髓损伤处的修复作用,... 详细信息

背景:组织工程支架移植是修复脊髓损伤最有应用前景的治疗手段之一,通过组织工程支架募集内源性神经干细胞并促进其分化为神经细胞,进而修复脊髓损伤。目的:观察京尼平交联的音猬因子复合纤维蛋白支架移植到大鼠脊髓损伤处的修复作用,探讨其作用机制。方法:分别制备纤维蛋白胶、音猬因子复合纤维蛋白支架、京尼平交联音猬因子复合纤维蛋白支架,检测京尼平交联音猬因子复合纤维蛋白支架的体外降解率与缓释性能。将120只雌性SD大鼠随机分为4组,每组30只,A组T10-T11脊髓损伤部位不植入任何材料,B组T10-T11脊髓损伤部位植入纤维蛋白胶,C组T10-T11脊髓损伤部位植入音猬因子复合纤维蛋白支架,D组T10-T11脊髓损伤部位植入京尼平交联音猬因子复合纤维蛋白支架,术后每周对大鼠进行运动功能BBB评分,术后12周取脊髓损伤处及周围脊髓组织,进行组织形态与WesternBlot检测。结果与结论:(1)音猬因子复合纤维蛋白支架14 d基本完全降解,京尼平交联的纤维蛋白支架14 d的降解率不超过20%;音猬因子复合纤维蛋白支架7 d基本完全释放了音猬因子;京尼平交联音猬因子复合纤维蛋白支架在1-3 d爆发释放音猬因子,4-14 d内缓慢释放音猬因子,具有良好的缓释性能;(2)随着时间的延长,各组大鼠的运动功能BBB评分升高,B、C组术后12周的BBB评分高于A组(P蛋白、神经生长相关蛋白43、神经丝蛋白200、髓鞘碱性蛋白表达量最低,胶质纤维酸性蛋白表达最高;D组巢蛋白、神经生长相关蛋白43、神经丝蛋白200、髓鞘碱性蛋白表达量最高,胶质纤维酸性蛋白表达最低;(5)结果表明,京尼平交联音猬因子复合纤维蛋白支架具有良好的缓释性能,可促进大鼠损伤脊髓的修复。

关键词：京尼平音猬因子纤维蛋白缓释脊髓损伤交联支架移植修复

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纤维蛋白的两种特殊染色效果比较

中国组织化学与细胞化学杂志 2023年第5期32卷 507-509页

作者：谢文林唐翠兰连家燕中山大学附属第七医院病理诊断中心深圳518107 中山大学附属第一医院病理科广州510080

目的比较分析显示纤维蛋白的两种特殊染色方法,旨在选择一种更适合于显示纤维蛋白的特殊染色方法。方法对富含纤维蛋白的石蜡包埋组织进行改良Masson染色、PTAH染色,光学显微镜下观察染色效果。结果HE染色见纤维蛋白多数呈红染的细丝、... 详细信息

目的比较分析显示纤维蛋白的两种特殊染色方法,旨在选择一种更适合于显示纤维蛋白的特殊染色方法。方法对富含纤维蛋白的石蜡包埋组织进行改良Masson染色、PTAH染色,光学显微镜下观察染色效果。结果HE染色见纤维蛋白多数呈红染的细丝、相互连接成网状,也可相互融合。改良Masson染色显示纤维蛋白呈红色,PTAH染色显示纤维蛋白呈深蓝色。结论改良Masson染色和PTAH染色均可用于显示纤维蛋白,但改良Masson染色时间短,结构清晰、对比明显,是观察纤维蛋白染色效果最佳的染色方法。

关键词：纤维蛋白 Masson染色 PTAH染色

纤维蛋白原、纤维蛋白及其降解产物对共培养血管内皮细胞纤溶活性的影响

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中华心血管病杂志 2008年第1期36卷 62-67页

作者：曹勇军吴延华刘春风苏州大学附属第二医院神经内科 215004

目的研究纤维蛋白原（Fg）、纤维蛋白（Fb）及其降解产物（FDP）对共培养体系中人脐静脉内皮细胞组织型纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂表达的影响。方法应用Transwell膜建立人脐静脉内皮细胞-兔主动脉平滑肌细胞共培养体系，在... 详细信息

目的研究纤维蛋白原（Fg）、纤维蛋白（Fb）及其降解产物（FDP）对共培养体系中人脐静脉内皮细胞组织型纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂表达的影响。方法应用Transwell膜建立人脐静脉内皮细胞-兔主动脉平滑肌细胞共培养体系，在不同浓度（0、0．5、1．5、3．0、4．5和6．0g／L）Fg、Fb和FDP干预24h后，分别检测该共培养体系中人脐静脉内皮细胞组织型纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂mRNA水平（RT-PCR法）以及培养上清中组织型纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂抗原含量（ELISA法）与活性（发色底物法）的变化情况。结果Fg对组织型纤溶酶原激活物的表达没有显著影响，较高浓度的Fg（3．0～4．5g／L）可明显促进纤溶酶原激活物抑制剂mRNA表达、抗原含量及活性升高，但过高浓度的Fg（6．0g／L）却抑制纤溶酶原激活物抑制剂的表达。3．0-4．5g／L的Fb对组织型纤溶酶原激活物mRNA和抗原含量都起上调作用，同时显著下调组织型纤溶酶原激活物活性。较高浓度的Fb（1．5-4．5g／L）则可明显上调纤溶酶原激活物抑制剂的表达，且在mRNA、蛋白和活性水平趋势基本一致。3．0-6．0g／L的FDP均可明显下调组织型纤溶酶原激活物mRNA、蛋白和活性水平，1．5-6．0mg／ml的FDP均可促进纤溶酶原激活物抑制剂的高表达。结论Fg、Fb和FDP可以通过影响组织型纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂的表达，引起纤溶活性降低，参与动脉粥样硬化的发展进程。

关键词：动脉硬化纤维蛋白纤维蛋白原纤维蛋白纤维蛋白原降解物

魔芋多糖-纤维蛋白复合凝胶特性研究及其在细胞支架中的应用

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魔芋多糖-纤维蛋白复合凝胶特性研究及其在细胞支架中的应用

作者：王心荷江南大学

学位级别：硕士

随着细胞生物学和组织工程的发展,细胞培养肉技术已成为新兴的肉类生产技术,其研究重点之一是细胞支架材料的构建。理想的细胞支架材料应具有良好的生物相容性和降解特性,支架材料的力学性能还会影响细胞分化方向。多糖、蛋白质是食品... 详细信息

随着细胞生物学和组织工程的发展,细胞培养肉技术已成为新兴的肉类生产技术,其研究重点之一是细胞支架材料的构建。理想的细胞支架材料应具有良好的生物相容性和降解特性,支架材料的力学性能还会影响细胞分化方向。多糖、蛋白质是食品体系中最重要的两种大分子聚合物,与细胞外基质成分相似,非常适合用于细胞支架的制备。魔芋多糖(konjac glucomannan,KGM)是提取自魔芋的天然水溶性植物多糖,在热碱处理下能够脱去乙酰基形成热不可逆凝胶,但KGM凝胶存在持水性和生物相容性较差等问题,限制了KGM在细胞支架中的应用。本研究制备了KGM-纤维蛋白(fibrin,FN)复合凝胶,依据力学性能的不同分别用于支撑外胚层间充质干细胞(ectodermal mesenchymal stem cells,EMSCs)成肌肉和成骨分化。本研究的主要结果如下:(1)将KGM与FN复配,制得不同浓度比例的多糖-蛋白复合凝胶并比较其力学性能、流变性质、持水力、降解速率、微观结构和生物相容性的差异。结果表明,复合凝胶的凝胶强度、降解速率、持水力等特性均优于单一凝胶;其中,KGM浓度为0.8%、FN浓度为1.2%的复合凝胶的杨氏模量为24.94 k Pa±0.08 k Pa,适于干细胞向肌肉方向分化;KGM浓度为1.6%、FN浓度为0.4%时复合凝胶杨氏模量较高(48.67 k Pa±2.78k Pa),适于干细胞成骨分化。KGM-FN复合凝胶为剪切变稀的假塑性流体,KGM、FN之间主要通过氢键相互作用交联,形成了更加稳定的凝胶结构。KGM-FN复合凝胶具有均匀的孔隙和优异的生物相容性,能够促进EMSCs的增殖且不影响细胞形态。(2)探究低杨氏模量的KGM-FN复合凝胶对EMSCs成肌分化的影响并将其用于细胞培养肉的制备。结果发现,与高杨氏模量的复合凝胶相比,KGM浓度为0.8%、FN浓度为1.2%的低杨氏模量的复合凝胶能够上调EMSCs成肌相关基因的表达,促进成肌分化,该促进作用与该复合凝胶对Rho/Rock途径的抑制有关。将KGM-FN复合凝胶用于细胞培养肉的制备,能够制得质构特性和主要营养成分与动物肉相近的细胞培养肉,且具有较高的干基蛋白含量和干基碳水化合物含量。(3)探究高杨氏模量的KGM-FN复合凝胶对EMSCs体外、体内成骨分化的影响。结果表明,KGM浓度为1.6%、FN浓度为0.4%的复合凝胶能够提高碱性磷酸酶活性,促进钙结节的形成,上调成骨相关基因的表达,有利于EMSCs的成骨分化。该复合凝胶表面的EMSCs通过细胞膜整合素β1感受细胞外基质的力学刺激,激活FAK/ERK信号通路,从而上调成骨相关基因的表达。建立大鼠牙槽骨缺损模型以验证复合凝胶在体内促进EMSCs成骨分化的作用,发现与不加处理的模型组相比,负载EMSCs的复合凝胶能够上调成骨相关基因的表达,促进骨基质的形成和矿化,在体内促进干细胞成骨分化,在相关领域具有广阔的应用前景。

关键词：魔芋多糖纤维蛋白复合凝胶细胞支架细胞培养肉

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纤维蛋白酶谱检测蚯蚓纤溶酶组分

中国药学杂志 2005年第21期40卷 1656-1659页

作者：武金霞赵晓瑜河北大学生命科学学院河北保定071002

目的建立鉴定蚯蚓纤溶酶粗酶液中活性组分的方法。方法根据蚯蚓纤溶酶能水解纤维蛋白的性质,建立了纤维蛋白-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Fibrin-SDS-PAGE),优化了电泳条件,电泳后酶所在部位为透明区带。结果分离胶中纤维蛋白终... 详细信息

目的建立鉴定蚯蚓纤溶酶粗酶液中活性组分的方法。方法根据蚯蚓纤溶酶能水解纤维蛋白的性质,建立了纤维蛋白-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Fibrin-SDS-PAGE),优化了电泳条件,电泳后酶所在部位为透明区带。结果分离胶中纤维蛋白终质量浓度为0.4×10^(-3)mg·L^(-1),电泳后胶板用2.5%TritonX-100复性30min,PBS缓冲液(pH7.2)保温30min,考马斯亮蓝R-250染色,7%醋酸脱色,可以得到清晰的酶谱。结论该方法灵敏度高,用2μg样品,就能准确检测出粗酶液中所有纤溶酶组分。

关键词：酶谱蚯蚓纤溶酶纤维蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳

昆明市一起聚集性发热疫情中腺病毒3型Penton base、Hexon和Fiber基因遗传进化分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第3期44卷 241-248页

作者：刘艳艳古文鹏段忠文王钰龚娇茶琦雁吴林蔚侯敏昆明市疾病预防控制中心微生物检验科昆明650228 云南省疾病预防控制中心急性传染病防制所昆明650022 昆明市呈贡区疾病预防控制中心检验科昆明650500 玉溪市疾病预防控制中心卫生监测检验科玉溪678400

目的对昆明市一起聚集性发热疫情样本进行腺病毒检测和遗传进化分析。方法采集典型发热患者咽拭子标本,使用微流体芯片技术进行30种常见呼吸道传染病病原体核酸检测。对腺病毒核酸阳性标本使用Nanopore三代高通量测序技术进行Penton bas... 详细信息

目的对昆明市一起聚集性发热疫情样本进行腺病毒检测和遗传进化分析。方法采集典型发热患者咽拭子标本,使用微流体芯片技术进行30种常见呼吸道传染病病原体核酸检测。对腺病毒核酸阳性标本使用Nanopore三代高通量测序技术进行Penton base、Hexon和Fiber三个重要基因全长序列扩增、测定和分型鉴定,构建系统进化树,开展分子变异、遗传进化等分析。结果共采集5份标本,均检出呼吸道腺病毒及流感嗜血杆菌。对腺病毒进行Nanopore三代基因测序最终均获得Penton base、Hexon和Fiber基因全长编码区核苷酸序列,5份标本之间3个基因核苷酸相似性依次为100.0%、99.9%~100.0%和100.0%,氨基酸同源性均为100.0%;与HAdV3原型株(AY599834)核苷酸相似性最高,分别为98.6%、98.7%和98.9%。系统发育分析表明,3个基因系统进化树分析结果基本一致,人腺病毒3型(HAdV3)原型株单独一支,本研究中HAdV3序列均划分在同一进化分支上,与较早年份国外及中国台湾毒株亲缘关系较远,与近年国内外毒株亲缘关系较近,与2019年日本株(LC703523)和中国广州株(MZ540961)高度同源。与原型株比较分析昆明HAdV3氨基酸突变位点,Penton base有5处变异;Hexon有10处变异;Fiber有11处变异。结论本起疫情中的腺病毒在Penton base、Hexon和Fiber基因全长序列中型别分型结果一致,为P3H3F3型,与包括原型株在内的国内外HAdV3毒株显示出非常小的遗传变异。与原型株相比发生了多处氨基酸位点突变,并且多数氨基酸位点变异发生在蛋白质的高变区或功能区,其中Hexon蛋白中M7L为昆明序列独有氨基酸突变位点。

关键词：人腺病毒3型五邻体基座蛋白六邻体蛋白纤维蛋白遗传进化

纤溶酶在清理急性化脓性腹膜炎纤维蛋白作用的研究

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纤溶酶在清理急性化脓性腹膜炎纤维蛋白作用的研究

作者：颜飞宇遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:探究外源性纤溶酶对化脓性腹膜炎腹腔内纤维蛋白的溶解作用,以及是否影响体内的炎症因子(TNF-α、IL-1、IL-6)水平和凝血功能(PT、TT),初步评估其安全性,为临床更好清理腹膜炎纤维蛋白的手术效果打下基础。方法:实验分两部分进行,... 详细信息

目的:探究外源性纤溶酶对化脓性腹膜炎腹腔内纤维蛋白的溶解作用,以及是否影响体内的炎症因子(TNF-α、IL-1、IL-6)水平和凝血功能(PT、TT),初步评估其安全性,为临床更好清理腹膜炎纤维蛋白的手术效果打下基础。方法:实验分两部分进行,第一部分:体外实验,研究外源性纤溶酶在腹腔外是否对急性化脓性腹膜炎形成的纤维蛋白有溶解作用。将30只新西兰兔随机分成实验组(A组),对照组(B组);在胃穿孔模型48h后收集穿孔周围约(1.0×1.0)cm胃壁全层及表面脓苔组织,在体外向A组分别加入15U(配制成3ml)纤溶酶,B组加入等体积生理盐水,ELISA测量标本内Fb,以及溶解液内FDP含量。第二部分:体内实验,研究外源性纤溶酶在腹腔内是否对急性化脓性腹膜炎的纤维蛋白的解作用,腹腔液中炎症因子TNF-α、IL-1、IL-6水平以及凝血功能PT、TT的影响。将30只新西兰兔随机分成实验组(C组),对照组(D组);按照体外建模方法建立胃穿孔模型,分别在实验前(T0)、建模48h后(T1)、实验后(T2)时间点沿耳缘静脉抽血,于全自动分析仪测量凝血功能PT、TT。在建模48h后开腹向C、D两组胃穿孔处脓苔中分别加入(配制成3ml)纤溶酶、等体积生理盐水;反复、缓慢冲洗30min后收集各组新西兰兔胃壁、肠壁表面脓苔组织,一部分于HE染色后光镜下观察纤维蛋白的性状;一部分于扫描电镜下观察纤维蛋白的性状;收集穿孔周围约(1.0×1.0)cm全层胃壁及表面脓苔组织和腹腔液,于ELISA测量胃表面脓苔组织内Fb、腹腔液内FDP的含量以及TNF-α、IL-1、IL-6水平。对体外、体内所有数据采用SPSS18.0统计学软件进行分析,对比体外、体内两组间结果差异是否具有统计学意义。结果:(1)在体外实验部分A组较B组胃表面脓苔组织的Fb含量少,溶解液中的FDP含量多,差异具有统计学意义(P0.05)。光镜下两组均可见胃、肠壁组织附着脓苔表面有类似包膜物覆盖,且包膜样结构较为完整、光滑,包膜下大量中性粒细胞浸润、未消化完饲料、异物以及大量炎性渗出等,C组包膜下渗出样物质较D组疏松,且炎细胞较少。扫描电镜下显示C组胃、肠壁表面纤维蛋白层结构错杂,部分部位的纤维蛋白稍有疏松、变薄,纤维孔径较大,可见少量红细胞、中性粒细胞嵌入;D组胃、肠壁表面纤维蛋白层较为平整,纤维蛋白紧密,交织成网,可见红细胞陷入,部分已变性。结论:(1)体外纤溶酶可以溶解化脓性腹膜炎中的纤维蛋白。(2)外源性纤溶酶在体内一定程度上可以清除急性化脓性腹膜炎腹腔内产生的纤维蛋白,且未改变腹腔液内炎症因子水平以及未增加体内纤溶亢进的风险。

关键词：纤溶酶急性化脓性腹膜炎纤维蛋白炎症因子凝血功能