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纤毛蛋白与绵羊白细胞介素2融合基因工程疫苗对实验动物的体液免疫应答

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中国预防兽医学报 2001年第2期23卷 121-124页

作者：王克坚陈立志刘晓颖王克波张洪涛苗立光徐敏中国农业科学院特产研究所左家132109 山东省齐鲁制药厂吉林省特产高等专科学校

将转化节瘤拟杆菌 (D .nodosus)纤毛蛋白 (Pili)和绵羊白细胞介素 2 (oviIL2 )融合基因表达质粒的工程菌BL_2 1,在含梭苄青霉素营养肉汤培养基中表达 ,离心获得菌体沉淀物 ,裂解后配制成Pili_oviIL2融合基因工程疫苗。用加佐剂和不加佐... 详细信息

将转化节瘤拟杆菌 (D .nodosus)纤毛蛋白 (Pili)和绵羊白细胞介素 2 (oviIL2 )融合基因表达质粒的工程菌BL_2 1,在含梭苄青霉素营养肉汤培养基中表达 ,离心获得菌体沉淀物 ,裂解后配制成Pili_oviIL2融合基因工程疫苗。用加佐剂和不加佐剂的Pili_oviIL2融合基因工程疫苗分别接种 2只健康家兔 ,2 1天后接种第 2次 ;定期采血 ,用对流免疫电泳检测试验兔的体液免疫反应。结果发现 ,加佐剂和不加佐剂的Pili_oviIL2融合基因工程疫苗免疫兔 7天即可产生相应抗体 ,抗体在免疫血清中可维持 6个月以上。进一步试验将不加佐剂的Pili_oviIL2融合基因工程疫苗接种 3只健康绵羊 ,同样 2 1天后接种第 2次 ,定期采血 ,用对流免疫电泳检测试验绵羊的体液免疫反应。同时用Pili基因工程疫苗接种 2只绵羊作对照。结果 3只绵羊接种Pili_oviIL2融合基因工程疫苗后 ,分别于 7天和 14天产生相应的抗体 ,而接种Pili基因工程疫苗的绵羊于 2 8天产生相应的抗体 ;被免疫绵羊血清中的抗体可维持 6个月以上。用Pili_oviIL2融合基因工程疫苗接种兔和绵羊的免疫试验表明 ,Pili_oviIL2融合基因工程疫苗具有较好的体液免疫应答反应。

关键词：纤毛蛋白绵羊IL2 基因工程疫苗佐剂体液免疫应答基因融合兔

腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与表达载体的构建

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动物医学进展 2002年第2期23卷 59-62页

作者：苗利光王克坚刘艳环陈立志刘晓颖徐敏张洪涛吉林特产高等专科学校吉林市132109 中国农业科学院特产研究所吉林市132109

用 PCR技术从腐蹄病 C型节瘤拟杆菌克隆出具有免疫保护性抗原 0 .85kb纤毛蛋白基因 ( pili基因 ) ,利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。提取 C型节瘤拟杆菌染色体DNA;用所设计的专一性引物进行 PCR,扩增出 pili基因 ;将 pili基因克... 详细信息

用 PCR技术从腐蹄病 C型节瘤拟杆菌克隆出具有免疫保护性抗原 0 .85kb纤毛蛋白基因 ( pili基因 ) ,利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。提取 C型节瘤拟杆菌染色体DNA;用所设计的专一性引物进行 PCR,扩增出 pili基因 ;将 pili基因克隆于 TE载体 ,TE-pili重组质粒 pili基因序列测定结果正确 ,用 Eco R 酶切 ,低熔点胶回收 pili基因片段 ,经 klenow补平后 ,用 T4DNA连接酶将其与中间载体p PLλ连接 ,将 pili基因克隆于 p PLλ载体 ,经Bam H 、Bam H +Hind 、Dral酶切鉴定 pili基因正向插入 p PLλ载体 ;扩增 p PLλ-pili重组质粒 ,用 Bam H 酶切出 2 .1 kb大小片段 ,回收后 ,与 PME2 90表达质粒连接 ,转化宿主细胞PAK/ 2 pfs中 ,对获得的重组质粒用 Bam H 酶切 ,出现 2 .1 kb大小的带。

关键词：腐蹄病 C型节瘤拟杆菌基因克隆载体纤毛蛋白

腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊IL-2融合基因的分泌型表达

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动物医学进展 2004年第2期25卷 69-70页

作者：刘艳环苗利光王克坚刘波李理中国农业科学院特产研究所吉林132109 厦门大学海洋环境学院福建厦门361005 吉林特产高等专科学校吉林132109

用改进的 Mg Cl2 法制备宿主菌株PAK/ 2 pfs感受态细胞 ;由 JM10 5工程菌中提取纤毛蛋白与绵羊白细胞介素 2 ( Pilin-IL-2 )融合基因表达载体 ,转化宿主细胞 PAK/ 2 pfs,筛选出具有 Pilin-IL-2融合基因表达载体的阳性克隆菌株 ;在营养... 详细信息

用改进的 Mg Cl2 法制备宿主菌株PAK/ 2 pfs感受态细胞 ;由 JM10 5工程菌中提取纤毛蛋白与绵羊白细胞介素 2 ( Pilin-IL-2 )融合基因表达载体 ,转化宿主细胞 PAK/ 2 pfs,筛选出具有 Pilin-IL-2融合基因表达载体的阳性克隆菌株 ;在营养肉汤中进行 Pilin-IL-2融合基因的表达。培养 16～ 18h后 ,离心 ,向上清液中加入饱和 ( NH4) 2 SO4提取 Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔 E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的融合蛋白进行对流免疫电泳。

关键词：腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白绵羊融合基因工程疫苗分泌型表达白细胞介素2 免疫佐剂

腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因工程疫苗对家兔的免疫试验

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动物医学进展 2002年第3期23卷 66-67页

作者：苗利光刘艳环陈立志刘晓颖张洪涛王克坚中国农业科学院特产研究所吉林132109 吉林特产专科学校吉林1321009

将转化 C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因表达子粒的工程菌 PAK/ 2 pfs C在含羧苄青霉素营养肉汤培养基中培养 ,用 Mg Cl2 法在培养物上清中提取表达产物 (纤毛蛋白 )。将表达的纤毛蛋白产物用弗氏完全佐剂乳化 ,制成疫苗。用疫苗免疫 3只健... 详细信息

将转化 C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因表达子粒的工程菌 PAK/ 2 pfs C在含羧苄青霉素营养肉汤培养基中培养 ,用 Mg Cl2 法在培养物上清中提取表达产物 (纤毛蛋白 )。将表达的纤毛蛋白产物用弗氏完全佐剂乳化 ,制成疫苗。用疫苗免疫 3只健康家兔 ,2 1 d后再次接种 ;定期采血 ,用对流免疫电泳和 K凝集实验检测试验家兔的体液免疫应答及抗体水平。结果发现 ,免疫 7d即可产生相应抗体 ,2 1 d后抗体效价达到 80 0 0×以上 ,而且高滴度抗体可维持 6个月以上。试验表明 ,腐蹄病

关键词：腐蹄病 C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因工程疫苗家兔免疫试验

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神经纤毛蛋白在血管生成中的作用

中国脑血管病杂志 2008年第12期5卷 570-573页

作者：华烨丁海霞丁新生南京医科大学第一附属医院神经内科南京210029

神经纤毛蛋白(neuropilin,NRP)作为轴突导向分子collapsin/semaphorin的受体,在神经细胞导向、轴突生长方面发挥着调控作用.近年来,关于NRP的研究已从最早的神经轴突导向扩展至血管生成、肿瘤的增殖与转移等多个方面,尤其是其在血管生... 详细信息

神经纤毛蛋白(neuropilin,NRP)作为轴突导向分子collapsin/semaphorin的受体,在神经细胞导向、轴突生长方面发挥着调控作用.近年来,关于NRP的研究已从最早的神经轴突导向扩展至血管生成、肿瘤的增殖与转移等多个方面,尤其是其在血管生成方面的研究逐渐成为热点[1].现就NRP的结构和功能特性及其在血管生成中的作用作一综述.

关键词：纤毛蛋白血管生成 NRP VEGF 大脑中动脉缺血性脑血管病神经

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腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白的基因克隆与表达

中国兽医学报 2000年第4期20卷 362-366页

作者：王克坚 Dhungyel Om 冯书章吴广谋杨海滨 Egerton JR 朱平殷震中国农业科学院特产研究所吉林吉林市132109 澳大利亚悉尼大学解放军军需大学军事兽医研究所吉林长春130062

用 PCR技术从腐蹄病 E型节瘤拟杆菌克隆出具免疫保护性抗原 0 .93 kb纤毛蛋白基因 ( Pili基因 ) ,利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。先将 PCR产物 Pili基因克隆于 TA Cloning System,扩增后 ,用Eco R 酶切 ,低熔点胶回收 ,经 Kle... 详细信息

用 PCR技术从腐蹄病 E型节瘤拟杆菌克隆出具免疫保护性抗原 0 .93 kb纤毛蛋白基因 ( Pili基因 ) ,利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。先将 PCR产物 Pili基因克隆于 TA Cloning System,扩增后 ,用Eco R 酶切 ,低熔点胶回收 ,经 Klenow补平后 ,用 T4DNA连接酶与中间载体 p PLλ连接 ,将 Pili基因克隆于 p PLλ载体 ;经 Bam H 、Bgl 、Pvu 和 Smal +Bgl 酶切鉴定和 p PLλ-Pili重组质粒 Pili基因序列测定正确后 ,扩增 p PLλ-Pili重组质粒 ,用 Bam H 酶切出 2 .1 kb大小的片段 ,回收后 ,与 p ME2 90表达质粒连接 ,转染宿主细胞 PAK/2 pfs,在营养肉汤中进行 Pili基因的表达。培养 1 8～ 2 4 h后 ,离心 ,向上清液中加入 0 .1mol/L Mg Cl2 提取重组纤毛蛋白。用羊抗兔 E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的重组纤毛蛋白进行对流免疫电泳 ,证明重组纤毛蛋白具有特异性 ;染料结合法测定 1 0 0 0 m L上清液中表达纤毛蛋白粗含量约为 1 1 4mg。SDS-PAGE测定重组纤毛蛋白的表达量占总菌量的 1 1 .8%,Western

关键词：腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因克隆

连接抗神经纤毛蛋白1抗体Fab′片段的多西他赛脂质体的主动肿瘤靶向作用

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中国医药工业杂志 2014年第5期45卷 459-459页

作者： Manjappa AS 王盈

采用薄膜水化法制备PEG化的多西他赛脂质体，然后用后插法制得功能化PEG化脂质体，最后通过硫醚键与抗神经纤毛蛋白1抗体的Fab’片段共价结合，得到抗神经纤毛蛋白1免疫脂质体。该制品可主动靶向于神经纤毛蛋白1受体过表达肿瘤细胞。

关键词：免疫脂质体纤毛蛋白多西他赛肿瘤细胞神经连接 PEG 水化法

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上海四膜虫细胞膜和纤毛的蛋白质研究

上海师范大学学报（自然科学版） 1996年第2期25卷 55-60页

作者：沈锡祺唐思贤王康乐吴巍黄剑清华东师范大学生物系

以丰富有机培养基恒温无菌培养的上海四膜虫（ＴｅｔｒａｈｙｍｅｎａｓｈａｎｇｈａｉｅｎｓｉｓＳｌ）为实验材料，分别收集对数生长期和衰老期的四膜虫，用Ｎｏｚａｗａ等人［１］法制备细胞膜和纤毛样品，并按Ｌａｅｍｍｌｉ［２］... 详细信息

以丰富有机培养基恒温无菌培养的上海四膜虫（ＴｅｔｒａｈｙｍｅｎａｓｈａｎｇｈａｉｅｎｓｉｓＳｌ）为实验材料，分别收集对数生长期和衰老期的四膜虫，用Ｎｏｚａｗａ等人［１］法制备细胞膜和纤毛样品，并按Ｌａｅｍｍｌｉ［２］法进行凝胶电泳，并扫描分析，还采用４％～２５％梯度凝胶电泳．结果为：（１）对数期的膜和纤毛样品的蛋白带，在相同的峰面积０．２ｍｍ２以上计算分别为３７和４０条，相应地比衰老期的膜和纤毛样品的蛋白带４７和４５条要少；（２）两种生理状态的纤毛样品在高分子区域蛋白带比膜样品多，并具有膜样品没有的３６０×１０３，３５５×１０３，３４５×１０３，３４０×１０３和３３０×１０３的蛋白带，而缺少膜含有的２５０×１０３，２００×１０３和１８０×１０３等蛋白带；（３）两种生理状态的纤毛和膜样品内部有明显的差别，即使具有相同的蛋白带，其含量也有显著不同．这些差别对于研究细胞衰老的分子机理有重要意义．

关键词：原生动物上海四膜虫 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳膜蛋白纤毛蛋白

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IFT80调控骨生长发育的分子机制

中华外科杂志 2020年第1期58卷 75-77页

作者：魏桂清薄占东广西医科大学第一附属医院骨关节科南宁530021

初级纤毛和纤毛蛋白普遍存在于脊椎动物的细胞表面,以微管为基础,协助细胞表面与周围环境间的信号转导[1,2],进而影响细胞的增殖、分化和基因表达[3]。由于纤毛内部无法合成蛋白,其结构、功能的完整性离不开纤毛内转运系统,该系统由纤... 详细信息

初级纤毛和纤毛蛋白普遍存在于脊椎动物的细胞表面,以微管为基础,协助细胞表面与周围环境间的信号转导[1,2],进而影响细胞的增殖、分化和基因表达[3]。由于纤毛内部无法合成蛋白,其结构、功能的完整性离不开纤毛内转运系统,该系统由纤毛内转运蛋白(intraflagellar transport,IFT)复合物A、B构成,可沿纤毛轴做双向运动。目前已知22种IFT蛋白参与IFT复合物A、B的形成[4,5],其中14种蛋白参与IFT-B复合物形成,包括IFT22、IFT25、IFT27、IFT46、IFT52、IFT56、IFT70、IFT74、IFT81、IFT88、IFT20、IFT38、IFT54、IFT57、IFT80和IFT172[6]。这些蛋白的突变通常会导致纤毛结构与功能缺陷,诱发一系列纤毛病,这类疾病可涉及多种组织器官,其中较为明显的表现是骨骼发育异常[7]。

关键词： IFT 转运系统周围环境细胞表面纤毛蛋白合成蛋白信号转导基因表达