检索结果-南通市图书馆

小鼠胎肝红系细胞在分化过程中形态学观察及时序性表达分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国细胞生物学学报 2012年第4期34卷 317-324页

作者：郑雅娟陈涛杨祖立曹玲玲毛群铨薛建有吴业卿张世馥浙江理工大学生命科学学院蛋白质组学与分子酶学实验室杭州310018

小鼠胎肝是小鼠发育早期主要的造血器官，红系细胞在胎肝造血过程中形态特征和组成成分等方面发生了明显变化。根据红系细胞体积的变化，利用Countstar细胞计数仪对小鼠E12．5-E17．5胎肝中直径8-14岬细胞进行数量统计，再结合观测到的... 详细信息

小鼠胎肝是小鼠发育早期主要的造血器官，红系细胞在胎肝造血过程中形态特征和组成成分等方面发生了明显变化。根据红系细胞体积的变化，利用Countstar细胞计数仪对小鼠E12．5-E17．5胎肝中直径8-14岬细胞进行数量统计，再结合观测到的红系细胞的形态特征和血红蛋白表达量的不同，将E9．5．E17．5胎肝中的细胞分为10类。统计结果显示，随着胎肝造血系统的发育，哺乳类红系细胞在终末分化时出现细胞体积减小、细胞核固缩、排核和血红蛋白表达量增加等时序性变化。红系细胞表面特异标志Terll9和CD71在EryD中高表达而在成体骨髓细胞和外周血细胞中表达较低的结果表明胎肝中红系细胞具有较高的分化能力。这些数据为研究红系分化、克隆红系分化相关基因及探讨红白血病发生的机制提供了理论依据。

关键词：胎肝红系细胞时序性分化免疫细胞化学

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

四君子汤对机体红系细胞造血功能的补益作用

中国中西医结合杂志 1999年第S1期19卷 81-82页

作者：高依卿陈玉春王碧英福州市传染病医院福州350025 福建省中医药研究院

红细胞生成素(EPO)能特异性刺激骨髓红系细胞的分化增殖和成熟。血清 EPO 来源于肾脏。脾条件培养液(SCM)中含有刺激红系祖细胞分化增殖的生长因子。本研究观察四君子汤对正常小鼠、正常和血虚大鼠血清 EPO 水平,及其 SCM 中红细胞生成... 详细信息

红细胞生成素(EPO)能特异性刺激骨髓红系细胞的分化增殖和成熟。血清 EPO 来源于肾脏。脾条件培养液(SCM)中含有刺激红系祖细胞分化增殖的生长因子。本研究观察四君子汤对正常小鼠、正常和血虚大鼠血清 EPO 水平,及其 SCM 中红细胞生成素样(EPO 样)生长因子产生的影响,探讨该方剂对红系细胞造血功能的补益作用机理。材料和方法1 动物 IcR 小鼠随机分组,对照组10只,体重(30.56±0.94)g;实验组10只,体重(30.32±0.78)g。Wistar 大鼠随机分组,正常对照组8只,体重(218.00±8.45)g;血虚模型对照组8只,体重(162.50±12.54)g,实验组8只,体重(164.50±22.68)g。

关键词：实验组四君子汤生长因子红细胞生成素红系细胞造血功能正常小鼠补益作用大鼠血清正常对照组

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

纯红系细胞白血病形态学及其意义探讨

中华检验医学杂志 2013年第5期36卷 435-437页

作者：梁华兵卢兴国浙江温岭市第二人民医院检验科 317502 浙江大学医学院附属第二医院检验科

20世纪20～40年代间人们发现了一组骨髓红系细胞高增生和治疗贫血无反应的血液紊乱，有学者将这一异常称为红系骨髓细胞增多症，并观察到进展为急性白血病的病例，鉴于此，提出了Di—Guglielmo综合征的概念。Di—Guglielmo综合征有2个... 详细信息

20世纪20～40年代间人们发现了一组骨髓红系细胞高增生和治疗贫血无反应的血液紊乱，有学者将这一异常称为红系骨髓细胞增多症，并观察到进展为急性白血病的病例，鉴于此，提出了Di—Guglielmo综合征的概念。Di—Guglielmo综合征有2个类型：不转变型（少数），即病情中始终不发生急性白血病转化的急性红血病；转变型（多数），

关键词：急性白血病红系细胞病形态学细胞增多症急性红血病白血病转化综合征骨髓

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

地塞米松诱导红系细胞凋亡的观察

解剖学报 1996年第4期27卷 404-407,T014页

作者：沈江波张世馥章静波中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所细胞生物室

以ＦＶＡ病毒诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞形成的红系细胞（ｅｒｙｔｈｒｏｉｄｃｅｌ）为研究对象，在红系细胞凋亡抑制剂——红细胞生成素（ＥＰＯ）存在情况下，观察了地塞米松（Ｄｅｘ）对上述细胞凋亡的诱导作用。结果表明，在一定... 详细信息

以ＦＶＡ病毒诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞形成的红系细胞（ｅｒｙｔｈｒｏｉｄｃｅｌ）为研究对象，在红系细胞凋亡抑制剂——红细胞生成素（ＥＰＯ）存在情况下，观察了地塞米松（Ｄｅｘ）对上述细胞凋亡的诱导作用。结果表明，在一定浓度范围内，随着Ｄｅｘ作用时间的延长，细胞逐步凋亡并出现特有的ＤＮＡ梯形（ＤＮＡｌａｄｄｅｒ），而且其ＤＮＡ断裂程度与Ｄｅｘ的作用浓度呈正相关。透射电镜的结果证实，经最适浓度（５×１０－５ｍｏｌ／Ｌ）Ｄｅｘ处理后，红系细胞出现核固缩，染色质凝聚，核周隙扩大，核破裂，胞浆近膜处出现空泡以及细胞破碎等程度不同的细胞凋亡特征。说明Ｄｅｘ可拮抗ＥＰＯ的作用。

关键词：细胞凋亡地塞米松红系细胞红细胞生成素

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

人胚胎干细胞来源红系细胞膜蛋白表达的研究

中国输血杂志 2017年第3期30卷 235-241页

作者：李晴邹庆毛斌黄淑赖默温潘旭孙文翠陈谊金刘嘉馨马峰中国医学科学院北京协和医学院输血研究所四川成都610052 中国医学科学院输血研究所四川新生命干细胞科技股份有限公司联合实验室

目的探讨人胚胎干细胞(h ESCs)来源红系细胞在发育过程中其膜蛋白,包括膜表型分子、膜骨架蛋白和跨膜蛋白的表达情况。方法 h ESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM-S3)基质细胞共培养产生造血干祖细胞(CD34+CD45+)和GPA+细胞,挑取共培养1... 详细信息

目的探讨人胚胎干细胞(h ESCs)来源红系细胞在发育过程中其膜蛋白,包括膜表型分子、膜骨架蛋白和跨膜蛋白的表达情况。方法 h ESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM-S3)基质细胞共培养产生造血干祖细胞(CD34+CD45+)和GPA+细胞,挑取共培养12 d的细胞,同时磁珠分选人脐血中的CD34^+细胞,在多种特定细胞因子SCF、IL-6、IL-3、FLT3-L、TPO、EPO等诱导下,分别进行集落培养12-14 d产生红系爆发式集落形成单位(BFU-E),运用流式细胞术(FACs)、qRT-PCR和免疫荧光染色等方法检测并比较hESCs和人脐血CD34^+细胞2种来源的红系细胞膜蛋白的表达情况,并以后者作为对照组。结果 hESCs来源BFU-E的膜蛋白的表达趋势与对照组相近:其膜骨架蛋白和跨膜蛋白的基因,如SPTA、SPTB、ANK1、EPB41等基因转录水平都在逐渐增强,而一些膜蛋白如黏附分子CD49d、CD29、CD71等的表达逐渐降低,CD47基本不表达;带3蛋白(Band 3)表达量较高且与成体型血红蛋白β-globin的表达呈正相关。结论在hESCs向红系诱导生成过程中,一些膜表型分子表达在逐渐降低,而膜蛋白表达逐渐增强。

关键词：人胚胎干细胞红系细胞膜蛋白表达红系爆发式集落形成单位带3蛋白

PI3K/Akt信号通路调节红系细胞生成的研究进展

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

实用医学杂志 2016年第6期32卷 1019-1021页

作者：赵成玉崔森青海大学附属医院青海大学医学院高原医学研究中心西宁810001

磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）家族是一类特异性催化磷酯酰肌醇脂物质的激酶,具有丝氨酸/苏氨酸激酶的活性,也具有磷脂酞肌醇激酶的活性,广泛存在于细胞中,通过激素受体、跨膜酪氨酸激酶受体和各种细胞因子应答... 详细信息

磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）家族是一类特异性催化磷酯酰肌醇脂物质的激酶,具有丝氨酸/苏氨酸激酶的活性,也具有磷脂酞肌醇激酶的活性,广泛存在于细胞中,通过激素受体、跨膜酪氨酸激酶受体和各种细胞因子应答各种细胞内、外信息,并调控细胞生长、增殖、分化、凋亡等。

关键词：酪氨酸受体激酶红系细胞信号通路二聚体蛋白细胞生长磷脂酰肌醇激素受体细胞因子酪氨酸激酶受体 β-地中海贫血

黄芪多糖和丁酸钠联合用药对人红系细胞增殖和珠蛋白基因表达的作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

黄芪多糖和丁酸钠联合用药对人红系细胞增殖和珠蛋白基因表达的作...

作者：吴倩倩南方医科大学

学位级别：硕士

背景与目的 β-珠蛋白生成障碍性贫血(β-thalassemia,β-地贫)是常见的单基因遗传病,是世界上发病率最高的遗传性疾病之一。它的病理生理基础是β-珠蛋白基因的突变或缺失,造成相对过剩的α-珠蛋白链聚合形成包涵体,使红细胞生成减少... 详细信息

背景与目的 β-珠蛋白生成障碍性贫血(β-thalassemia,β-地贫)是常见的单基因遗传病,是世界上发病率最高的遗传性疾病之一。它的病理生理基础是β-珠蛋白基因的突变或缺失,造成相对过剩的α-珠蛋白链聚合形成包涵体,使红细胞生成减少、破坏过多而造成贫血。人类珠蛋白基因在个体发育的不同时间表现为阶段特异性的表达与关闭,α-珠蛋白基因簇表现为ξ→α基因的转换,而β-珠蛋白基因簇表现为ε→γ和γ→β基因的转换。自上世纪80年代开始的药物基因调控治疗,目前已进入了临床研究阶段,并取得了较好的疗效。γ-珠蛋白基因诱导剂的作用机制,是利用重新激活已近乎关闭的γ-珠蛋白基因表达,以改善α-和非α-珠蛋白链之间的不平衡,合成胎儿血红蛋白(fetal hemoglobin,HbF)以弥补成人血红蛋白(adult hemoglobin,HbA)的不足,最终达到减少溶血、缓解贫血症状的目的。由于此类药物疗效显著,所以在这一研究方向上的探索具有特别重要的意义。目前研究的γ-珠蛋白基因诱导剂主要有:羟基脲(hydroxyurea,HU)、5-氮胞核苷(5-azaeytidine,5-AZAC)、丁酸盐类及其衍生物等。由于这些药物存在骨髓抑制、潜在的致癌性、半衰期较短和价格昂贵等缺点,所以在临床上的应用受到限制。因此,迫切需要发掘一些新的高效、低毒、价廉的γ-珠蛋白基因激活药物以改善治疗现状。与西药研制相比,中药研发周期短,可解决西药化合物人工合成难的问题,且疗效和毒副作用较明确,具有良好的研发前景。国内已有报道如益髓生血颗粒、黄根加味汤等中药方剂可重新激活γ-珠蛋白基因表达。但由于地贫基因表型多样,加上中药方剂成分较多,有效部分难以评估,所以目前许多学者致力于筛选出单味中药及其活性成分,如从一些抗肿瘤中药中筛选出了甲异靛、三尖杉酯碱等成分,旨在评估其治疗效果及作用机制。本课题组在前期实验中从益气补血、补肾升髓等中药中筛选出了单味中药黄芪,发现它可有效诱导K562细胞向红系分化,并上调γ-珠蛋白基因表达。因西药类γ-珠蛋白基因诱导剂的不良反应均存在不同程度的剂量依赖性,所以低剂量联合用药是一种值得研究的治疗途径,期望在减少药物剂量的同时,又能利用各药物作用靶点或机制的互补,使γ-珠蛋白基因表达增高。国外一些学者已在动物实验或临床研究中尝试将丁酸盐类与促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)或5-AZAC合用等,旨在探索不同的联合用药方式,发现某些药物联合应用可比单独用药更能显著提高γ-珠蛋白基因表达的水平。但也有观点认为,某些联合用药反而增加细胞毒性,且对HbF合成的调节作用的结论尚不一致,有待进一步研究。西药起效时间快,但作用时间不能持久且不良反应较大;中药起效虽慢,但药效维持时间较长且毒副作用较小。本课题组进一步研究证明:黄芪中起诱导γ-珠蛋白基因表达作用的有效成分主要是黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS),它不仅可诱导K562细胞向红系分化,而且可增加γ-珠蛋白基因表达和HbF合成。与西药丁酸钠(sodium butyrate,NaB)相比,它无明显细胞生长抑制作用,且诱导持续的时间较长。已知APS具有广泛的药理作用,是很有价值的免疫增强剂,对靶器官有明显的保护作用,可减轻放、化疗后的骨髓抑制等不良反应。且其他研究也发现,APS有刺激骨髓造血、增强免疫功能及抗肿瘤的作用,对骨髓细胞有保护作用。能否将中西药联合应用,达到优势互补、减少剂量的效果,值得进一步探讨。近年来国内外应用较广泛的红系细胞体外液体培养法是二步液体培养法,用此方法建立的红系细胞模型比K562细胞更能模拟人体内红细胞的生成过程,体现个体发育中珠蛋白基因表达的转换。本研究旨在探讨APS和NaB单独或联合用药对人红系细胞增殖和珠蛋白基因表达的影响。实验选用脐血来提取体外培养所需的造血干/祖细胞,并建立红系细胞二步液体培养法。以使用该液体方法培养的红系细胞为研究对象,观察正常红系细胞珠蛋白基因的表达规律,再进一步探讨单独或联合用药对珠蛋白基因表达的影响。并采用台盼蓝拒染活细胞计数、形态学观察和逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)等方法对培养的红系细胞进行观察和分析,探讨单独或联合用药对细胞增殖、细胞形态和各珠蛋白基因mRNA的表达等方面的影响,而此研究结果将会为临床联合用药新方案的设计和实施提供理论基础。方法 1脐血来源: 标本来自于广州市南方医科大学南方医院产科健康产妇分娩胎儿脐带,排除传染性疾病、血液疾病、恶性肿痛、各种严重妊娠并发症等病例,用无菌采血袋(PCD-A抗凝)密闭式方法保存。 2实验分组: 实验分为6组,APS+

关键词： β-珠蛋白生成障碍性贫血红系细胞 γ-珠蛋白基因黄芪多糖丁酸钠

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

人类多能干细胞来源红系细胞的膜蛋白的研究

人类多能干细胞来源红系细胞的膜蛋白的研究

作者：李晴北京协和医学院

学位级别：硕士

背景:人类胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)和人类诱导性多潜能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPSCs),统称为人类多能干细胞(human pluripotent stem cells,hPSCs),具有自我更新、无限增殖的能力,可分化成人体所有类型的细胞。输血治疗是当今临床重要的治疗手段,而血源紧张、输血传染病等问题给临床应用的安全性和广泛性带来了巨大的挑战。因此,能否在体外将hPSCs成功诱导分化并大量扩增造血干细胞和功能成熟血细胞,是现今hPSCs研究的一个重要方向。hPSCs不仅为再生医学的研究提供了较好的细胞来源,并且为建立特异疾病模型,最终实现精准医疗和个体化治疗提供了可能。最近几年,各实验室关于hPSCs体外向红系细胞的诱导的研究逐步成熟,而膜蛋白作为其重要的功能蛋白,在维持红细胞的形态及功能特性方面都有重要的作用。因此,对于hPSCs来源各发育阶段的红系细胞的膜蛋白的研究必不可少。本实验室此前已有关于hESCs向红系细胞的诱导生成及功能的重要报导,但尚未对hESCs来源红系细胞的膜蛋白的表达情况及发育模式做深入研究。目的:本实验拟在体外半固体培养条件下分别诱导hPSCs和人脐带血(human cord blood,hCB)来源单个核细胞中的CD34阳性细胞(hCB-MNCs-CD34+细胞)分化为红系细胞。本研究以hCB-MNCs-CD34+细胞来源红系细胞的膜蛋白表达情况为参考,通过将两者细胞的形态和膜蛋白的表达情况进行比较,比较两种来源红系细胞膜蛋白的早期发育以及后期成熟过程的异同,期望为建立红系细胞膜相关疾病模型及药物筛选提供一定的依据。方法:将hPSCs与经13.3GrayX射线照射的小鼠AGM-S3基质细胞(mAGM-S3)共培养,在第12天“收割”大量“鹅卵石”样(cobble stone-like cells,CS)的造血干/祖细胞,同时,采用磁珠分选技术分选出人脐带血单个核细胞中的CD34+细胞,分别将以上两种细胞在半固体条件下向红系诱导培养。本课题以glycophorinA阳性细胞(GPA+细胞)为主要研究对象,将hCB-MNCs-CD34+细胞诱导而来的红系细胞的膜蛋白的研究结果作为参照。实验采用瑞姬氏(May-Grunwald-Giemsa,MGG)染色观察两种干细胞来源红系细胞的形态,运用流式细胞术和实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)从整体上分析不同来源红系细胞膜蛋白的表达模式的异同,通过免疫荧光染色对两种来源红系细胞的胞内蛋白和跨膜蛋白即带3蛋白(Band3)进行检测,辅助判断红系细胞的成熟度。结果:1、hESCs/mAGM-S3共培养阶段可产生大量“鹅卵石”样的造血干/祖细胞,以及较高比例的GPA阳性的细胞。将上述细胞和hCB-MNCs-CD34+细胞分别进行半固体培养,均可产生BFU-E,Mix及其他髓系集落。2、hESCs/mAGM-S3共培养第12天的GPA+细胞还处于原始红细胞阶段;而通过后期的集落培养产生的BFU-E是一个以中、晚幼红细胞为主的异质性细胞群,这与hCB-MNCs-CD34+细胞诱导产生的BFU-E相似。3、相较于对照组(hCB-MNCs-CD34+细胞来源),hESCs/mAGM-S3共培养阶段的红系细胞还很幼稚,表型分子的表达还处于幼稚阶段,也几乎不表达相关基因,但通过后期集落培养,膜蛋白基因的表达在不断增强。需注意的是,CD49d和CD29表达情况的降低趋势并不如对照组明显。4、hESCs来源的Mix集落红系细胞膜蛋白基因表达整体低于相同细胞来源BFU-E集落。5、hESCs诱导而来的BFU-E细胞无论是基因水平还是蛋白水平都表达较高比例的Band3。结论:1、hESCs与mAGM-S3基质细胞共培养可产生大量造血干/祖细胞,具有成体造血的特性。2、hESCs/mAGM-S3共培养阶段红系细胞的表型分子发育处于幼稚阶段,也几乎不表达膜蛋白相关基因,但通过后期集落培养,其膜蛋白发育不断成熟,表明随着红系细胞发育成熟,膜蛋白的表达也随之变化,并且接近成体来源模式。3、hESCs诱导而来的红系细胞的膜蛋白具有成体来源特性,表达较高比例的β-globin和Band3,将两者结合一起可评价hESCs来源红系细胞的成熟度。4、hPSCs来源红系细胞的膜蛋白的表达模式总体而言接近成体来源,但也具有一定的差异,可辅助监测本实验体系红系的发育进程。

关键词：人类多能干细胞人类胚胎干细胞人类脐带血基质细胞红系细胞红系细胞爆发式集落形成单位(Burst-Forming Unit-Erythroid,BFU-E) 膜蛋白

SHMT2在人胚胎干细胞向红系细胞诱导分化及红系细胞增殖过程中的作用研究

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

SHMT2在人胚胎干细胞向红系细胞诱导分化及红系细胞增殖过程中的...

作者：李基晟天津医科大学

学位级别：硕士

研究目的多能干细胞是体外诱导获取大量红系细胞的理想种子细胞来源,对于解决临床上红细胞成分输注供需矛盾的问题具有重要价值。但体外诱导人多能干细胞向红系细胞分化面临着诱导效率低下、体外诱导获得的造血干/祖细胞及成熟血细胞存... 详细信息

研究目的多能干细胞是体外诱导获取大量红系细胞的理想种子细胞来源,对于解决临床上红细胞成分输注供需矛盾的问题具有重要价值。但体外诱导人多能干细胞向红系细胞分化面临着诱导效率低下、体外诱导获得的造血干/祖细胞及成熟血细胞存在功能性缺陷的问题。因此,探索关键分子及信号通路在人多能干细胞向造血谱系分化中的作用及分子调控机制,对于优化多能干细胞向红系细胞分化体系具有重要价值。丝氨酸羟甲基转移酶2（Serine hydroxymethyl transferase 2,SHMT2）是在细胞有氧呼吸和线粒体代谢中发挥重要作用的一种催化酶。大量文献研究表明SHMT2蛋白调控多种肿瘤的发生、肿瘤细胞的存活及增殖。近年来的研究表明Shmt2基因敲除会导致小鼠胚胎发育至13.5天死亡,小鼠胎肝发育缺陷,存在胚胎贫血,提示Shmt2基因在小鼠胚胎期红细胞的发育分化成熟或增殖过程中可能发挥了重要的调控作用。该基因是否参与调控人胚胎期造血发育及红系细胞的定向分化与增殖呢?为研究这一问题,本研究选择人胚胎干细胞（Human embryonic stem cells,hESC）作为研究的起始细胞。hESC具有近乎无限的自我更新能力,并具有向三个胚层组织细胞分化的能力,其向造血细胞分化的模型是研究人类胚胎血谱系细胞发育调控的理想模型。因此,本研究拟基于hESC向造血细胞及红系细胞分化的模型揭示SHMT2基因在人类红细胞发育分化过程中的作用。文献研究表明干细胞分化产生的早期红系细胞具有极强的扩增能力,从而生成足够数量的红细胞以满足机体的需要。为进一步考察SHMT2蛋白对红系细胞扩增的影响,本课题选择人脐带血来源的红系祖细胞系（human umbilical cord blood-derived erythroid progenitor-2,HUDEP-2）作为研究对象来考察SHMT2对红系祖细胞增殖的影响,并对其发挥作用的分子机制进行初步研究。拟通过本课题研究,阐明SHMT2蛋白在人胚胎干细胞向红系细胞分化及扩增过程中的作用,为体外优化以人类干细胞为种子细胞高效制备红系细胞的体系提供理论及实验依据。研究方法本研究使用电转染的方法,将已构建的SHMT2基因敲除质粒导入hESC（H9细胞系）,通过嘌呤霉素加压筛选的方法获得SHMT2敲除表达的hESC细胞株,即SHMT2-KO-H9;使用q PCR、Western blot与免疫荧光染色等方法评价SHMT2-KO-H9细胞内SHMT2、多能性相关基因及蛋白的表达情况。进一步将SHMT2-KO-H9细胞植入NOD-SCID小鼠体内进行畸胎瘤形成实验,评价SHMT2-KO-H9细胞是否具有与野生型H9（Wild type H9,WT-H9）相似的多能性。采用基于拟胚体形成的诱导方法建立WT-H9与SHMT2-KO-H9向生血内皮细胞、造血干/祖细胞及红系细胞分化的体系,使用多色流式细胞术、细胞计数等方法检测SHMT2敲除是否影响hESC向造血干/祖细胞及红系细胞的分化;使用q PCR方法检测SHMT2敲除是否影响造血相关及红系特征性的转录因子基因的表达。进一步选择人脐带血来源的红系祖细胞系HUDEP-2作为研究对象。由于丝氨酸是SHMT2作用的底物,选择对其培养基中SHMT2代谢需要的丝氨酸进行干预及添加阻断SHMT2作用的抑制剂SHIN1,使用流式细胞术与细胞计数来考察SHMT2对红系细胞增殖的影响。研究结果本研究运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,使H9 hESC的SHMT2基因碱基序列出现缺失突变,成功构建了SHMT2敲除的H9 hESC细胞株。对WT-H9与SHMT2-KO-H9细胞的表型进行对比分析,结果表明SHMT2敲除的H9细胞具有与野生型H9相似的细胞克隆形态,其染色体核型维持正常。SHMT2-KO-H9细胞的多能性相关基因和多能性表面标志的表达水平与WT-H9无显著差异,两种细胞均能够在NOD-SCID小鼠体内形成含有三胚层组织结构的畸胎瘤,表明SHMT2敲除不影响hESC的多能性。在此基础上,本研究基于拟胚体分化策略建立了分阶段诱导WT-H9与SHMT2-KO-H9向中胚层祖细胞、生血内皮细胞、造血干/祖细胞及红系细胞定向分化的体系。流式细胞术结合总细胞计数的检测结果表明SHMT2-KO-H9细胞经该体系诱导分化14天,产生的CD34CD45、CD34CD43细胞的比例与细胞数显著高于WT-H9。q PCR的检测结果表明,在诱导分化至10天及14天时,SHMT2-KO-H9衍生的细胞内RUNX1和SCL转录因子的表达显著高于WT-H9。流式细胞术分析红系细胞表面标志物表达的结果表明,经该体系诱导分化14天后,SHMT2-KO-H9分化的CD71CD235a红系细胞的比例及数量明显高于对照组。q PC

关键词： SHMT2 hESC 红系细胞分化扩增 HUDEP-2 丝氨酸代谢