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1例粪类圆线虫感染病例报告

中国社区医师 2024年第5期40卷 11-13页

作者：张艳玲胡翠萍李炳光曾广必袁天舒广州市老人院广东广州510550

粪类圆线虫属于条件致病寄生虫,为兼性寄生虫。粪类圆线虫感染临床上较少见,检验医师对粪类圆线虫的成虫、幼虫及虫卵的识别能力普遍偏低,且较依赖仪器设备,而全自动粪便仪对粪类圆线虫的识别能力普遍较差,易造成漏诊和误诊。该文对1例... 详细信息

粪类圆线虫属于条件致病寄生虫,为兼性寄生虫。粪类圆线虫感染临床上较少见,检验医师对粪类圆线虫的成虫、幼虫及虫卵的识别能力普遍偏低,且较依赖仪器设备,而全自动粪便仪对粪类圆线虫的识别能力普遍较差,易造成漏诊和误诊。该文对1例粪类圆线虫感染患者进行检验确诊、病例分析、驱虫治疗及疗效观察,以期加深检验医师和临床医师对粪类圆线虫病的认识,减少误诊、漏诊。

关键词：粪类圆线虫漏诊误诊驱虫治疗

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粪类圆线虫合并其他病原体感染研究进展

中国血吸虫病防治杂志 2023年第2期35卷 206-212页

作者：温晴傅晓茵刘登宇广西医科大学基础医学院广西南宁530021

粪类圆线虫是一种机会性致病寄生虫,在免疫低下人群可引起严重的粪类圆线虫病,甚至导致死亡。既往临床研究报道了粪类圆线虫病患者合并其他寄生虫、病毒、细菌和真菌等病原体感染的病例。本文就粪类圆线虫病合并其他病原体感染进行综述... 详细信息

粪类圆线虫是一种机会性致病寄生虫,在免疫低下人群可引起严重的粪类圆线虫病,甚至导致死亡。既往临床研究报道了粪类圆线虫病患者合并其他寄生虫、病毒、细菌和真菌等病原体感染的病例。本文就粪类圆线虫病合并其他病原体感染进行综述,分析合并感染对粪类圆线虫病的影响,从而为降低与粪类圆线虫感染相关疾病发病率和死亡率提供参考。

关键词：粪类圆线虫合并感染流行病学

粪类圆线虫感染性Ⅲ期幼虫和寄生性雌虫miRNA的鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2023年第4期41卷 412-420页

作者：覃裴溪周彩显鲁志刚张碧瀛周涛勋胡敏华中农业大学动物医学院农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室湖北武汉430070 威康桑格研究所威康基因组校园幸克斯顿剑桥郡CB101SA英国

目的鉴定粪类圆线虫感染性Ⅲ期幼虫(iL3)和寄生性雌虫(pF)的微小RNA(miRNA),分析差异表达miRNA及其靶基因的功能。方法从粪类圆线虫感染犬粪便中收集iL3。取4000~5000条iL3于颈后皮下注射感染健康犬,感染后21 d,从肠道中采集pF。提取iL3... 详细信息

目的鉴定粪类圆线虫感染性Ⅲ期幼虫(iL3)和寄生性雌虫(pF)的微小RNA(miRNA),分析差异表达miRNA及其靶基因的功能。方法从粪类圆线虫感染犬粪便中收集iL3。取4000~5000条iL3于颈后皮下注射感染健康犬,感染后21 d,从肠道中采集pF。提取iL3和pF的总RNA并测序。测序数据与粪类圆线虫基因组和鼠类圆线虫miRNA比对筛选保守的miRNA,用miRDeep2通过颈环结构分析、成熟序列比对筛选miRNA。分析iL3和pF的miRNA表达谱,筛选差异表达miRNA,预测差异表达miRNA的靶基因,对log2(差异倍数)>1和每百万转录本上的读数(TPM)>1000的未注释miRNA的靶基因功能进行分析。用ClusterProfiler对差异表达miRNA靶基因进行GO富集分析。选取11个未注释或保守的差异表达miRNA进行实时荧光定量PCR(qRT‑PCR)验证,以粪类圆线虫甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶基因(GenBank登录号:BI773092.1)为参照基因,计算差异表达miRNA的相对转录水平。结果共鉴定出265个miRNA,包括130个保守的miRNA和135个未注释的miRNA。其中,134个miRNA在iL3和pF之间差异表达(包含77个保守的miRNA和57个未注释的miRNA),251个为iL3和pF所共有,10个为iL3特有,4个为pF特有。差异表达miRNA靶基因预测结果显示,57个未注释的miRNA中,有12个差异倍数>2且TPM>1000,有248个靶基因与秀丽隐杆线虫同源,其中35.08%(87/248)的靶基因与发育相关,其余与应激、运动和蜕皮等相关。大部分在pF高表达未注释的miRNA靶向SSTP_0000114700。差异表达miRNA靶基因的GO分析结果显示,共5595个靶基因被富集,其中富集靶基因数居前5位的分别为膜组成成分(1821个)、核酸结合(561个)、细胞核(450个)、蛋白质水解作用(365个)和信号传导(284个)。qRT‑PCR验证结果显示,sst‑miR‑86‑5p、sst‑84‑5p、sst‑novel‑104、sst‑miR‑92‑3p、sst‑miR‑34a‑3p、sst‑miR‑81a‑5p、sst‑miR‑1‑3p、sst‑novel‑108、sst‑miR‑124‑5p、sst‑miR‑50‑3p、sst‑novel‑51的log2(差异倍数)分别为-2.13、6.39、4.46、-3.69、-3.69、2.34、-2.48、-2.41、-2.30、2.25、-3.32,转录组分析获得的log2(差异倍数)分别为-3.05、4.98、4.07、-4.9、-3.66、0.98、-3.79、-2.61、-0.99、0.63、-1.55。qRT‑PCR与转录组分析获得的上调、下调趋势结果一致。结论获得粪类圆线虫感染性Ⅲ期幼虫和寄生性雌虫的miRNA表达谱和差异表达miRNA,差异表达miRNA与粪类圆线虫的生长发育和繁殖功能相关。

关键词：粪类圆线虫感染性Ⅲ期幼虫寄生性雌虫 miRNA

粪类圆线虫丝氨酸蛋白酶抑制剂1蛋白生物信息学分析及原核表达

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中国血吸虫病防治杂志 2023年第3期35卷 244-250页

作者：韩雪闭香连赵红英石云良温晴吕佳音孙嘉月傅晓茵刘登宇广西医科大学寄生虫学教研室、广西高校区域性疾病基础研究重点实验室广西南宁530021 广西壮族自治区人民医院检验科广西南宁530021

目的采用生物信息学方法预测粪类圆线虫丝氨酸蛋白酶抑制剂1(Strongyloides stercoralis serine protease in⁃hibitor 1,Ss⁃SRPN⁃1)蛋白结构和抗原表位,构建原核表达载体并进行重组蛋白表达,为阐明Ss⁃SRPN⁃1蛋白功能奠定基础。方法自NCB... 详细信息

目的采用生物信息学方法预测粪类圆线虫丝氨酸蛋白酶抑制剂1(Strongyloides stercoralis serine protease in⁃hibitor 1,Ss⁃SRPN⁃1)蛋白结构和抗原表位,构建原核表达载体并进行重组蛋白表达,为阐明Ss⁃SRPN⁃1蛋白功能奠定基础。方法自NCBI数据库中获取Ss⁃SRPN⁃1氨基酸序列,使用ExPASY、SWISS⁃MODEL和Protean等生物信息学软件对Ss⁃SRPN⁃1蛋白的理化性质、结构和抗原表位等进行预测。根据Ss⁃SRPN⁃1核苷酸序列设计引物,以粪类圆线虫感染性三期幼虫DNA为模板,对Ss⁃SRPN⁃1基因进行扩增、克隆和测序。将重组质粒pET28a(+)/Ss⁃SRPN⁃1转入大肠埃希菌BL21(DE)中诱导重组Ss⁃SRPN⁃1蛋白表达,纯化重组蛋白并进行Western blotting及质谱鉴定。结果生物信息学分析显示,Ss⁃SRPN⁃1蛋白由372个氨基酸组成,分子式为C1948H3046N488O575S16,是一种稳定的亲水性蛋白,预测其亚细胞定位在细胞外;预测该蛋白存在11个优势B细胞抗原表位、20个T细胞表位。成功扩增长度为1119 bp的Ss⁃SRPN⁃1基因,构建了重组质粒pET28a(+)/Ss⁃SRPN⁃1并转化至大肠埃希菌BL21(DE)进行表达,表达的重组Ss⁃SRPN⁃1蛋白分子量约43 kDa,鉴定结果显示该重组蛋白为Ss⁃SRPN⁃1蛋白。结论成功表达了重组Ss⁃SRPN⁃1蛋白,预测该蛋白可作为一种潜在的粪类圆线虫病疫苗候选分子。

关键词：粪类圆线虫丝氨酸蛋白酶抑制剂1 生物信息学分析重组表达

粪类圆线虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Ss-SRPN-1的生物信息学分析及原核表达

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中国血吸虫病防治杂志 2023年

作者：韩雪闭香连赵红英石云良温晴吕佳音孙嘉月傅晓茵刘登宇广西医科大学寄生虫学教研室广西高校区域性疾病基础研究重点实验室广西壮族自治区人民医院检验科

目的使用生物信息学方法预测分析粪类圆线虫SRPN-1蛋白(Strongyloides stercoralisserineproteaseinhibitor，Ss-SRPN-1)的结构和抗原表位，构建原核表达载体并进行重组蛋白表达，为阐明粪类圆线虫Ss-SRPN-1的功能奠定基础。方法在NCBI... 详细信息

目的使用生物信息学方法预测分析粪类圆线虫SRPN-1蛋白(Strongyloides stercoralisserineproteaseinhibitor，Ss-SRPN-1)的结构和抗原表位，构建原核表达载体并进行重组蛋白表达，为阐明粪类圆线虫Ss-SRPN-1的功能奠定基础。方法在NCBI中获取Ss-SRPN-1的氨基酸序列，使用ExPASY，SWISS-MODE和Protean等生物信息学软件，对Ss-SRPN-1蛋白的理化性质、结构和抗原表位等进行预测。根据Ss-SRPN-1核苷酸序列设计引物，以粪类圆线虫感染性三期幼虫的DNA为模板，对Ss-SRPN-1基因进行扩增、克隆和测序。将重组质粒pET28a(+)/Ss-SRPN-1转入BL21(DE)中诱导重组Ss-SRPN-1蛋白(rSs-SRPN-1)的表达，纯化蛋白并进行Westernblot及质谱鉴定。结果生物信息学分析表明粪类圆线虫Ss-SRPN-1蛋白由372个氨基酸组成，分子式为C1948H3046N488O575S16，是稳定的亲水性蛋白，预测其亚细胞定位在细胞外；预测该蛋白存在11个优势B细胞抗原表位，24个T细胞表位。成功扩增大小为1119bp的Ss-SRPN-1基因，构建了重组质粒pET28a(+)/Ss-SRPN-1并转化至BL21(DE)菌株进行表达，表达的rSs-SRPN-1分子量约43kDa，鉴定结果显示该蛋白为Ss-SRPN-1蛋白。结论成功表达了粪类圆线虫的重组蛋白Ss-SRPN-1，预测该蛋白可作为潜在的疫苗候选分子。

关键词：粪类圆线虫 SRPN-1 生物信息学重组表达

粪类圆线虫虾青素金属蛋白酶基因的克隆、表达及定位分析

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中国兽医学报 2023年第1期43卷 98-105页

作者：张碧瀛单嘉男覃裴溪周涛勋周焕胡敏华中农业大学、动物医学院、农业微生物学国家重点实验室武汉湖北430070

虾青素金属蛋白酶是一种广泛存在于多种动物体内的金属蛋白酶,研究表明该蛋白酶在寄生线虫的入侵和生长发育过程中发挥重要作用。但目前对粪类圆线虫虾青素金属蛋白酶(Ss-AST-1)还所知甚少,研究旨在对该酶编码基因(Ss-ast-1)进行鉴定和... 详细信息

虾青素金属蛋白酶是一种广泛存在于多种动物体内的金属蛋白酶,研究表明该蛋白酶在寄生线虫的入侵和生长发育过程中发挥重要作用。但目前对粪类圆线虫虾青素金属蛋白酶(Ss-AST-1)还所知甚少,研究旨在对该酶编码基因(Ss-ast-1)进行鉴定和表达分析,为进一步研究其功能奠定基础。利用生物信息学方法对Ss-ast-1基因进行序列分析,通过转录组数据分析Ss-ast-1在各个发育阶段的转录水平,转基因技术进行虫体内表达定位分析。通过体外原核表达重组蛋白,Western blot分析其抗原性。采用免疫荧光组织化学方法对Ss-AST-1在粪类圆线虫幼虫体内的定位进行研究。结果显示:Ss-ast-1基因全长1905 bp,编码634个氨基酸;转录组分析该基因在iL3期的表达水平最高。定位分析表明该蛋白在虫卵细胞的细胞核和细胞质均有表达;体外表达重组蛋白的大小约67.5 kDa,Western blot分析表明多克隆抗体可以较好的识别全虫蛋白中的Ss-AST-1。免疫荧光结果显示Ss-AST-1在幼虫体内表达并分布幼虫的头部和体壁。Ss-ast-1属于虾青素金属蛋白酶家族,其可能在寄生虫入侵过程中发挥作用,为进一步探究粪类圆线虫蛋白功能奠定了良好的基础。

关键词：粪类圆线虫虾青素金属蛋白酶原核表达显微注射

粪类圆线虫感染性3期幼虫和寄生性雌虫miRNA的鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2023年

作者：覃裴溪周彩显鲁志刚张碧瀛周涛勋胡敏威康桑格研究所威康基因组校园幸克斯顿剑桥郡CB101SA 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

目的鉴定粪类圆线虫感染性3期幼虫（iL3）和寄生性雌虫（pF）的微小RNA (miRNA)，分析差异表达miRNA及其靶基因的功能。方法从粪类圆线虫感染犬粪便中收集iL3。取4 000～5 000条iL3于颈后皮下注射感染健康犬，感染后21 d，从肠道中采... 详细信息

目的鉴定粪类圆线虫感染性3期幼虫（iL3）和寄生性雌虫（pF）的微小RNA (miRNA)，分析差异表达miRNA及其靶基因的功能。方法从粪类圆线虫感染犬粪便中收集iL3。取4 000～5 000条iL3于颈后皮下注射感染健康犬，感染后21 d，从肠道中采集pF。提取iL3和pF的总RNA并测序。测序数据与粪类圆线虫基因组和鼠类圆线虫miRNA比对筛选保守的miRNA，用miRDeep2通过颈环结构分析、成熟序列比对筛选miRNA。分析iL3和pF的miRNA表达谱，筛选差异表达miRNA，预测差异表达miRNA的靶基因，对log2（差异倍数）> 1和每百万转录本上的读数（TPM）> 1 000的未注释miRNA的靶基因功能进行分析。用ClusterProfiler对差异表达miRNA靶基因进行GO富集分析。选取11个未注释或保守的差异表达miRNA进行实时荧光定量PCR (qRT-PCR)验证，以粪类圆线虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因（GenBank登录号：BI773092.1）为参照基因，计算差异表达miRNA的相对转录水平。结果共鉴定出265个miRNA，包括130个保守的miRNA和135个未注释的miRNA。其中，134个miRNA在iL3和pF之间差异表达（包含77个保守的miRNA和57个未注释的miRNA）,251个为iL3和pF所共有，10个为iL3特有，4个为pF特有。差异表达miRNA靶基因预测结果显示，57个未注释的miRNA中，有12个差异倍数> 2且TPM> 1 000，有248个靶基因与秀丽隐杆线虫同源，其中35.08%(87/248)的靶基因与发育相关，其余与应激、运动和蜕皮等相关。大部分在pF高表达未注释的miRNA靶向SSTP＿0000114700。差异表达miRNA靶基因的GO分析结果显示，共5 595个靶基因被富集，其中富集靶基因数居前5位的分别为膜组成成分（1 821个）、核酸结合（561个）、细胞核（450个）、蛋白质水解作用（365个）和信号传导（284个）。qRT-PCR验证结果显示，sst-miR-86-5p、sst-84-5p、sst-novel-104、sst-miR-92-3p、sst-miR-34a-3p、sst-miR-81a-5p、sst-miR-1-3p、sst-novel-108、sst-miR-124-5p、 sst-miR-50-3p、 sst-novel-51的log2（差异倍数）分别为-2.13、 6.39、 4.46、-3.69、-3.69、2.34、-2.48、-2.41、-2.30、2.25、-3.32，转录组分析获得的log2（差异倍数）分别为-3.05、4.98、4.07、-4.9、-3.66、0.98、-3.79、-2.61、-0.99、0.63、-1.55。qRT-PCR与转录组分析获得的上调、下调趋势结果一致。结论获得粪类圆线虫iL3和pF的miRNA表达谱和差异表达miRNA，差异表达miRNA与粪类圆线虫的生长发育和繁殖功能相关。

关键词：粪类圆线虫感染性3期幼虫寄生性雌虫 miRNA