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粘红酵母酪氨酸解氨酶基因的克隆表达与酶学性质

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中国食品学报 2017年第9期17卷 213-219页

作者：梁景龙郭丽琼林俊芳叶志伟华南农业大学食品生物技术研究所食品学院广州510640

为研究粘红酵母酪氨酸解氨酶(Rg TAL)的酶学性质,利用生物信息学分析方法对Rg TAL的氨基酸序列和蛋白结构进行分析;利用大肠杆菌BL21(DE3)和p ET-32a表达系统获得重组Rg TAL;用高效液相色谱(HPLC)检测酶的催化活性。结果:克隆获得完整的... 详细信息

为研究粘红酵母酪氨酸解氨酶(Rg TAL)的酶学性质,利用生物信息学分析方法对Rg TAL的氨基酸序列和蛋白结构进行分析;利用大肠杆菌BL21(DE3)和p ET-32a表达系统获得重组Rg TAL;用高效液相色谱(HPLC)检测酶的催化活性。结果:克隆获得完整的Rg TAL编码基因,氨基酸同源性分析发现,与已有的Rg TAL序列的同源性只有74%,序列具有活性结构区域位点Ala217、Ser218、Gly219和底物特异性决定位点His143。重组的Rg TAL最适反应温度40℃,最适合反应p H值5.0。对Rg TAL的动力学分析表明,催化底物L-酪氨酸的活力不高,有待进一步的研究。本文测定了重组Rg TAL的酶学性质,为今后利用Rg TAL生产香豆酸的和为进一步改造Rg TAL奠定了基础。

关键词：粘红酵母酪氨酸解氨酶对香豆酸

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粘红酵母处理味精废水的研究

北京化工大学学报（自然科学版） 2007年第1期34卷 95-97页

作者：张志红薛飞燕谭天伟北京化工大学生命科学与技术学院

对粘红酵母处理味精废水的条件进行研究。结果表明最佳处理条件为:进水COD浓度为10000 mg/L,pH为6.16,发酵温度为32℃,发酵时间为72 h,接种量为15%。该条件下可使味精废水COD的去除率达80.53%以上,利用发酵后的菌体,可提取单细胞蛋白,... 详细信息

对粘红酵母处理味精废水的条件进行研究。结果表明最佳处理条件为:进水COD浓度为10000 mg/L,pH为6.16,发酵温度为32℃,发酵时间为72 h,接种量为15%。该条件下可使味精废水COD的去除率达80.53%以上,利用发酵后的菌体,可提取单细胞蛋白,提取油脂,具有一定的应用潜力。

关键词：粘红酵母味精废水 COD

粘红酵母产L-苯丙氨酸解氨酶的条件和酶法合成苯丙氨酸的研究

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微生物学报 1994年第2期34卷 137-142页

作者：丁新华岑沛霖吴绵斌浙江大学化工系杭州310027

研究了粘红酵母(Rhodotorula glutinis)中L-苯丙氨酸解氨酶(PAL)(EC4.***.1.5)的产酶条件及用此酶把反式肉桂酸转化成苯丙氨酸的条件.结果表明,在下列培养基(g/L)及培养条件下PAL的活力较高:酵母膏10.0,蛋白胨10.0,NaCl5.0,KH_2PO_4 0.5,... 详细信息

研究了粘红酵母(Rhodotorula glutinis)中L-苯丙氨酸解氨酶(PAL)(EC4.***.1.5)的产酶条件及用此酶把反式肉桂酸转化成苯丙氨酸的条件.结果表明,在下列培养基(g/L)及培养条件下PAL的活力较高:酵母膏10.0,蛋白胨10.0,NaCl5.0,KH_2PO_4 0.5,苯内氨酸0.5,(NH_4)_2SO_41.0,葡萄糖5.0,pH6.0—6.5,培养温度为30℃.转化过程中,[NH_4^+]对初速度的影响符合米氏方程,其K_m和V_(max)分别为16.85mol/L和5.96 g·L^(-1)·h^(-1),最适pH为10.0.底物肉桂酸对反应初速度的影响,在低浓度时有激活作用,在高浓度下则有抑制作用.肉桂酸转化为苯丙氨酸的转化率在60.0%以上.

关键词：粘红酵母苯丙氨酸解氨酶合成

粘红酵母△^(12)-脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达

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应用与环境生物学报 2015年第3期21卷 421-426页

作者：杨晓霞何仕武魏云林林连兵季秀玲张琦昆明理工大学生命科学与技术学院昆明650500

Δ12-脂肪酸脱氢酶一般特异性催化在油酸的Δ12位引入双键转变成亚油酸.为了从粘红酵母YM25079中克隆全长Δ12-脂肪酸脱氢酶基因序列,参考已知的Δ12-脂肪酸脱氢酶基因序列设计基因特异性引物,通过PCR扩增获得到全长为1 353 bp的cDNA序... 详细信息

Δ12-脂肪酸脱氢酶一般特异性催化在油酸的Δ12位引入双键转变成亚油酸.为了从粘红酵母YM25079中克隆全长Δ12-脂肪酸脱氢酶基因序列,参考已知的Δ12-脂肪酸脱氢酶基因序列设计基因特异性引物,通过PCR扩增获得到全长为1 353 bp的cDNA序列,序列分析结果表明该序列具有一个编码450个氨基酸的完整开放阅读框,所编码蛋白质的大小为50.9×103.与报道的Δ12-脂肪酸脱氢酶一样,推测的氨基酸序列具有膜整合脂肪酸脱氢酶特异性的3个组氨酸保守区,表明该序列为一个新的编码Δ12-脂肪酸脱氢酶的基因.为了验证其功能,把开放阅读框序列亚克隆到表达载体pYES3/CT,构建重组表达载体pYRGD12,并转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVScl进行表达.脂肪酸气相色谱(GC)分析表明,该序列所编码的蛋白质具有Δ12-脂肪酸脱氢酶活性,能将油酸转化为亚油酸,亚油酸的含量占酵母总脂肪酸的4.31%.以上结果表明,PCR所获得序列是新的Δ12-脂肪酸脱氢酶基因.

关键词：粘红酵母 Δ12-脂肪酸脱氢酶亚油酸克隆和表达

粘红酵母(Rhodotorula glutinis CIBAS A1401)苯丙氨酸解氨酶cDNA核心序列的克隆与分析

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应用与环境生物学报 2005年第6期11卷 694-698页

作者：缪元颖刘成君杨顺楷杨亚力中国科学院成都生物研究所成都610041 四川大学生命科学学院成都610064

L苯丙氨酸因其在工业、医药上的重要作用而日益受到人们的重视.苯丙氨酸解氨酶(PAL)生物转化肉桂酸生产L苯丙氨酸成了该领域研究与开发的热点.本文利用简并寡核苷酸PCR法结合cDNA末端快速扩增PCR法,从粘红酵母中克隆了苯丙氨酸解氨酶cDN... 详细信息

L苯丙氨酸因其在工业、医药上的重要作用而日益受到人们的重视.苯丙氨酸解氨酶(PAL)生物转化肉桂酸生产L苯丙氨酸成了该领域研究与开发的热点.本文利用简并寡核苷酸PCR法结合cDNA末端快速扩增PCR法,从粘红酵母中克隆了苯丙氨酸解氨酶cDNA核心序列,为克隆其cDNA全长序列及体外表达其活性蛋白奠定了基础.

关键词：粘红酵母苯丙氨酸解氨酶基因克隆 cDNA

粘红酵母酪氨酸解氨酶在大肠杆菌中的异源表达

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食品与生物技术学报 2016年第12期35卷 1241-1246页

作者：刘沛然堵国成周景文陈坚江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122

酪氨酸解氨酶是苯丙氨酸代谢途径的关键酶之一。酪氨酸经其催化生成对香豆酸,可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素类天然产物。作者选取来源于粘红酵母(Rhodotorula glutinis)的酪氨酸解氨酶,对其基因进行大... 详细信息

酪氨酸解氨酶是苯丙氨酸代谢途径的关键酶之一。酪氨酸经其催化生成对香豆酸,可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素类天然产物。作者选取来源于粘红酵母(Rhodotorula glutinis)的酪氨酸解氨酶,对其基因进行大肠杆菌(Escherichia coli)密码子偏好性优化,合成基因后于*** BL21(DE3)中成功表达。经过硫酸铵分级沉淀、QFF阴离子交换层析、分子筛纯化后得到了纯化的酪氨酸解氨酶,比酶活达到1.78 U/mg。在相同的培养条件下,以不同的质粒作为表达载体,获得了不同的对香豆酸产量。其中以酪氨酸为底物发酵24 h,当以p ET-32a(+)作为表达载体时,获得最高的对香豆酸产量196.3 mg/L。经密码子优化后的酪氨酸解氨酶基因可更好地应用于苯丙素类物质的合成途径构建,不同载体的应用也为生物法生产对香豆酸提供了更多的选择依据。

关键词：酪氨酸解氨酶粘红酵母大肠杆菌异源表达

粘红酵母GLR_(513)生产油脂最佳小型工艺发酵条件的探讨

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食品科学 2003年第1期24卷 48-51页

作者：施安辉周波山东大学生命科学学院微生物学系济南250100 山东农业大学生命科学学院泰安271018

以GRL513粘红酵母(Rhodtoruleglutinis)的突变株为出发菌株进行小试生产,确定其发酵生产油脂的最佳小型工艺条件为:葡萄糖为碳源,(NH4)2SO4为氮源,碳氮比为70∶1,发酵初始pH5.5,发酵过程回调pH值,接种量为20%,温度为30℃,通过后期补加... 详细信息

以GRL513粘红酵母(Rhodtoruleglutinis)的突变株为出发菌株进行小试生产,确定其发酵生产油脂的最佳小型工艺条件为:葡萄糖为碳源,(NH4)2SO4为氮源,碳氮比为70∶1,发酵初始pH5.5,发酵过程回调pH值,接种量为20%,温度为30℃,通过后期补加碳源方式培养72h,最终油脂产量可达菌体干重的67.2%,对该变异菌株产生的油脂进行气相色谱和质谱分析,确定油脂中棕榈油酸含量为33.31%,油酸3.80%,γ-亚油酸0.20%,EPA2.60%,DHA3.60%,总计56.61%。

关键词：粘红酵母发酵条件油脂组成含量微生物生产

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糠醛对粘红酵母生长与油脂积累的影响

生物工程学报 2015年第10期31卷 1484-1491页

作者：雍子涵张栩谭天伟北京化工大学生命科学与技术学院国家能源生物炼制研发中心北京100029

为了探究纤维素水解液中常见的发酵抑制物糠醛对粘红酵母Rhodotorula glutinis生长与油脂积累的影响,对比了不同的糠醛浓度(0.1、0.4、0.6、1.5 g/L)下粘红酵母的生物量和油脂积累情况,并探究了1.0 g/L的糠醛对粘红酵母不同碳源(葡萄糖... 详细信息

为了探究纤维素水解液中常见的发酵抑制物糠醛对粘红酵母Rhodotorula glutinis生长与油脂积累的影响,对比了不同的糠醛浓度(0.1、0.4、0.6、1.5 g/L)下粘红酵母的生物量和油脂积累情况,并探究了1.0 g/L的糠醛对粘红酵母不同碳源(葡萄糖和木糖)利用的影响。研究表明,当糠醛浓度达1.5 g/L时,粘红酵母的延迟期延长至96 h,残糖高达17.7 g/L,生物量最高6.6 g/L,仅为正常积累量的47%,油脂含量也减少了约50%;以木糖为碳源时,糠醛对粘红酵母的抑制程度小于葡萄糖为碳源时的情况;在糠醛存在的逆境中,粘红酵母倾向于生成更多的18碳脂肪酸或18碳不饱和脂肪酸。

关键词：糠醛粘红酵母葡萄糖木糖生物量油脂

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耐乙酸粘红酵母合成油脂

生物工程学报 2016年第3期32卷 339-346页

作者：林樟楠刘宏娟张建安王革华清华大学核能与新能源技术研究院北京100084

乙酸是木质纤维素在水解过程中的主要副产物,高浓度的乙酸严重影响产油微生物的生长和油脂合成。本文研究了粘红酵母对乙酸的耐受性及其利用乙酸合成微生物油脂的能力。结果表明,在初始葡萄糖、木糖浓度分别为6 g/L和44 g/L的混合糖培... 详细信息

乙酸是木质纤维素在水解过程中的主要副产物,高浓度的乙酸严重影响产油微生物的生长和油脂合成。本文研究了粘红酵母对乙酸的耐受性及其利用乙酸合成微生物油脂的能力。结果表明,在初始葡萄糖、木糖浓度分别为6 g/L和44 g/L的混合糖培养基中,乙酸浓度低于10 g/L时,不会对菌体生长产生抑制作用,油脂合成还得到了促进。当乙酸添加量为10 g/L时,生物量、油脂产量、油脂含量较对照组分别提高了21.5%、171.2%和121.6%。进一步研究表明,粘红酵母具备利用乙酸合成油脂的能力,当以乙酸为唯一碳源,浓度为25 g/L时,油脂产量达到3.20 g/L,油脂质量得率为13%。微生物油脂成分分析表明,粘红酵母以乙酸为底物制得的油脂可以作为制备生物柴油的油脂原料,其主要成分为棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸,其中饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸含量分别为40.9%和59.1%。由于粘红酵母具有利用乙酸合成微生物油脂的能力,在以木质纤维素水解液为原料生产微生物油脂的脱毒过程中,一定浓度的乙酸可以不必脱除。

关键词：粘红酵母微生物油脂乙酸玉米芯水解液发酵