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类人胶原蛋白表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达

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南京理工大学学报 2008年第2期32卷 252-256页

作者：高力虎杨树林储卫华李新柱钮小松杨艳南京理工大学化工学院江苏南京210094 中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009

基于人胶原蛋白胶原域序列特征,设计合成了一段类人胶原蛋白基因单体gel。采用同向串联方式,构建了含6个单体的类人胶原蛋白表达载体pPIC9KG6,并经DNA测序鉴定。将pPIC9KG6电转化毕赤酵母(Pichia pastoris)经G418筛选得到多拷贝转化子,... 详细信息

基于人胶原蛋白胶原域序列特征,设计合成了一段类人胶原蛋白基因单体gel。采用同向串联方式,构建了含6个单体的类人胶原蛋白表达载体pPIC9KG6,并经DNA测序鉴定。将pPIC9KG6电转化毕赤酵母(Pichia pastoris)经G418筛选得到多拷贝转化子,通过甲醇诱导表达类人胶原蛋白,SDS-PAGE检测表明:初步表达的类人胶原蛋白为胞外产物,其表观分子量为112 ku。

关键词：类人胶原蛋白基因串联毕赤酵母分泌表达

类人胶原蛋白-透明质酸血管支架的性能及生物相容性

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生物工程学报 2009年第4期25卷 591-598页

作者：孙秀娟范代娣朱晨辉马晓轩骆艳娥陈岚郭佳庆西北大学陕西省可降解生物医药材料重点实验室西安710069 西北大学生命科学院西安710069

将类人胶原蛋白与透明质酸按不同比例复合,控制透明质酸的终浓度(W/V)分别为0、0.01%、0.05%、0.1%,用京尼平交联,采用真空冷冻干燥方法构建出血管支架材料。通过扫描电镜、XPS分析、拉力测试、压力爆破实验、细胞毒性实验、血管支架细... 详细信息

将类人胶原蛋白与透明质酸按不同比例复合,控制透明质酸的终浓度(W/V)分别为0、0.01%、0.05%、0.1%,用京尼平交联,采用真空冷冻干燥方法构建出血管支架材料。通过扫描电镜、XPS分析、拉力测试、压力爆破实验、细胞毒性实验、血管支架细胞种植实验及小鼠皮下植入等方法对其表面超微结构、表面元素组成、力学性能、细胞毒性等级、细胞相容性、组织相容性进行了研究。结果表明:当透明质酸的含量为0.05%时,类人胶原蛋白-透明质酸支架的孔径比较均匀,孔隙率达94.38%,应力为(1000.8±7.9)kPa,爆破压力为(1058.6±8.2)kPa,细胞毒性实验合格,同时具有良好的细胞相容性、组织相容性及降解性能。

关键词：类人胶原蛋白透明质酸血管支架生物相容性

类人胶原蛋白-丝素蛋白血管支架的制备及性能表征

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生物工程学报 2009年第8期25卷 1225-1233页

作者：朱晨辉范代娣马晓轩薛文娇惠俊峰陈岚段志广麻璞西北大学陕西省可降解生物医用材料重点实验室西安710069 西北大学陕西省生物材料与发酵工程技术研究中心西安710069 西北大学生命科学学院西安710069 西北大学化工学院西安710069

为了提高血管支架的力学性能,将生物相容性良好的新型生物材料类人胶原蛋白(基因工程技术、高密度发酵生产)与丝素蛋白以质量比9:1、7:3、5:5复合,采用真空冷冻方法制备管状血管支架。研究了不同配比血管支架材料的表面结构、表面元素... 详细信息

为了提高血管支架的力学性能,将生物相容性良好的新型生物材料类人胶原蛋白(基因工程技术、高密度发酵生产)与丝素蛋白以质量比9:1、7:3、5:5复合,采用真空冷冻方法制备管状血管支架。研究了不同配比血管支架材料的表面结构、表面元素组成、力学性能、降解和生物相容性。结果表明:当类人胶原蛋白与丝素蛋白的质量比为7:3混合时,类人胶原蛋白-丝素蛋白管状支架具有均匀的多孔结构,孔径为(60±5)μm,孔隙率达到85%以上;获得了较理想的力学性能:应变为50%±5%,应力为(332±16)kPa;具有相对慢的降解速率;提高了细胞的黏附与增殖,具有良好的生物相容性。

关键词：类人胶原蛋白丝素蛋白血管支架生物相容性

类人胶原蛋白与Ca(Ⅱ)相互作用的荧光光谱研究

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化学工程 2013年第9期41卷 1-4页

作者：俞园园刘学谦西北大学化工学院陕西省可降解生物医用材料重点实验室陕西西安710069 陕西学前师范学院化学与化工系陕西西安710100 复旦大学高分子科学系上海200433

为了制备具有实际应用价值并能应用于人体的类人胶原蛋白-钙螯合物,采用荧光猝灭光谱法和紫外-可见吸收光谱法研究不同温度下类人胶原蛋白(HLC)分子与无机金属Ca(Ⅱ)离子间的相互作用,其中Ca(Ⅱ)离子的浓度为1.0×10-5—1.0×10-4mol/L... 详细信息

为了制备具有实际应用价值并能应用于人体的类人胶原蛋白-钙螯合物,采用荧光猝灭光谱法和紫外-可见吸收光谱法研究不同温度下类人胶原蛋白(HLC)分子与无机金属Ca(Ⅱ)离子间的相互作用,其中Ca(Ⅱ)离子的浓度为1.0×10-5—1.0×10-4mol/L。实验结果表明:无机Ca(Ⅱ)离子能够猝灭类人胶原蛋白分子的内源荧光,并形成HLC-Ca(Ⅱ)复合物;依据Stern-Volmer方程可知在类人胶原蛋白与Ca(Ⅱ)的结合过程中,动态猝灭和静态猝灭这2种猝灭机制同时存在;类人胶原蛋白分子与Ca(Ⅱ)离子以摩尔比1∶1形成蛋白-金属螯合物;根据273 K和298 K时Ca(Ⅱ)与HLC分子之间的结合常数以及相应的热力学参数可确定二者间的结合是自发反应过程,其中疏水作用力占据主导地位。因此,本研究为类人胶原蛋白-Ca(Ⅱ)复合物的大规模制备和进一步应用研究提供了理论依据和实验指导。

关键词：类人胶原蛋白 Ca(Ⅱ) 荧光光谱

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类人胶原蛋白-微孔淀粉的制备及生物学评价

西北大学学报（自然科学版） 2014年第1期44卷 61-65页

作者：蒙俊桦王琪凯范代娣段志广乔存存王溢萍西北大学化工学院陕西西安710069

文中以微孔淀粉为主体,研究一种新型复合止血材料的制备及生物学评价。此复合材料由一定比例的α-淀粉酶与糖化酶复合后处理淀粉以形成微孔结构,然后复合类人胶原蛋白,再以戊二醛为交联剂进行交联;用SD大鼠作肝脏出血模型进行止血效果... 详细信息

文中以微孔淀粉为主体,研究一种新型复合止血材料的制备及生物学评价。此复合材料由一定比例的α-淀粉酶与糖化酶复合后处理淀粉以形成微孔结构,然后复合类人胶原蛋白,再以戊二醛为交联剂进行交联;用SD大鼠作肝脏出血模型进行止血效果对比试验。通过正交试验确定微孔淀粉最优制备工艺条件如下:α-淀粉酶:糖化酶=1∶3,T/℃=50,t/h=20,pH=4.8;用0.2%(V/V)戊二醛乙醇溶液交联的类人胶原蛋白-微孔淀粉止血材料,在相同的止血时间下,该复合材料平均吸水率为3 580%,对照组(分别是微孔淀粉和类人胶原蛋白海绵)的平均吸水率为3 160%和3 280%。而在SD大鼠肝脏实验中,复合材料t/s=94±13,而外购的止血剂t/s=121±15。类人胶原蛋白-微孔淀粉复合材料止血的止血原理从3个方面展开:①微孔淀粉吸收水分并将血液中的有形物质聚集到表面;②加速内源性凝血因子的激活使其形成血栓;③在类人胶原蛋白的牵引下,淀粉颗粒聚成团大幅度增加了比表面积,使止血效果更优秀;对照组止血机理只包含了该复合材料的前两个方面。结果显示,复合材料的止血效果要优于普通微孔淀粉制成的止血剂,证明该复合止血材料具有良好的止血性能。

关键词：微孔淀粉类人胶原蛋白止血材料生物相容性

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类人胶原蛋白基因工程菌高密度发酵过程控制

西北大学学报（自然科学版） 2006年第2期36卷 227-230页

作者：马晓轩范代娣骆艳娥米钰西北大学化工学院陕西西安710069

目的优化基因工程菌Escherichia coli BL 21生产人源型胶原蛋白的高密度发酵工艺。方法建立一套以溶解氧浓度和比生长速率为中心的控制策略,采用溶氧反馈或pH反馈调节补料速度。结果 OD600可达150,胶原蛋白的表达量为9g／L。结论 20％-3... 详细信息

目的优化基因工程菌Escherichia coli BL 21生产人源型胶原蛋白的高密度发酵工艺。方法建立一套以溶解氧浓度和比生长速率为中心的控制策略,采用溶氧反馈或pH反馈调节补料速度。结果 OD600可达150,胶原蛋白的表达量为9g／L。结论 20％-30％饱和度的溶解氧和0．1- 0．2 h-1的比生长速率有利于细胞生长和产物表达,其与降低乙酸等有害代谢副产物的积累密切相关。

关键词：重组大肠杆菌高密度发酵乙酸类人胶原蛋白

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类人胶原蛋白生物相容性实验研究

西北大学学报（自然科学版） 2004年第1期34卷 66-68,72页

作者：米钰惠俊峰范代娣刘欢乐西北大学化工学院陕西西安710069 西安油脂化工总厂陕西西安710069

目的　为扩大类人胶原蛋白的应用,评定和比较猪胶原蛋白、类人胶原蛋白和明胶在动物体内的生物相容性。方法　分别用胶原材料和明胶进行以下生物学测试:急性毒性试验、溶血试验、热原试验、皮肤刺激试验。根据标准对试验数据进行分析和... 详细信息

目的　为扩大类人胶原蛋白的应用,评定和比较猪胶原蛋白、类人胶原蛋白和明胶在动物体内的生物相容性。方法　分别用胶原材料和明胶进行以下生物学测试:急性毒性试验、溶血试验、热原试验、皮肤刺激试验。根据标准对试验数据进行分析和评估。结果　类人胶原蛋白的急性毒性试验、溶血试验、热原试验、皮肤刺激试验均为阴性。结论　材料生物学测试结果显示类人胶原蛋白较其他两种材料的生物相容性更高,是理想的医用生物材料。

关键词：胶原蛋白类人胶原蛋白明胶生物相容性

类人胶原蛋白基因工程菌诱导后比生长速率优化

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西北大学学报（自然科学版） 2008年第6期38卷 943-946页

作者：骆艳娥范代娣米钰马晓轩迟雷王小刚西北大学陕西省可降解生物医用材料重点实验室陕西省生物材料与发酵工程技术研究中心陕西西安710069

目的优化类人胶原蛋白基因工程菌高温诱导后的比生长速率。方法通过分析不同比生长速率下发酵液中菌体浓度、类人胶原蛋白浓度、细胞得率系数(YX/S)、产物得率系数(YP/S)的变化,确定诱导后的最佳比生长速率。结果当比生长速率为0.04～0.... 详细信息

目的优化类人胶原蛋白基因工程菌高温诱导后的比生长速率。方法通过分析不同比生长速率下发酵液中菌体浓度、类人胶原蛋白浓度、细胞得率系数(YX/S)、产物得率系数(YP/S)的变化,确定诱导后的最佳比生长速率。结果当比生长速率为0.04～0.05h-1,细胞浓度和类人胶原蛋白的浓度分别可达69.5g/L(DCW)和13.8g/L。结论诱导后的比生长速率对细胞生长、类人胶原蛋白的合成均产生显著性影响。

关键词：类人胶原蛋白重组大肠杆菌温度诱导比生长速率

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类人胶原蛋白对BHK-21细胞生长的影响

西北大学学报（自然科学版） 2005年第5期35卷 581-584页

作者：程宁范代娣西北大学化工学院陕西西安710069

目的研究类人胶原蛋白HLC(Human-like Collagen)对于细胞生长、细胞凋亡、细胞生长周期及细胞形态的影响。方法用体外细胞培养法,选用BHK-21细胞系为实验对象,进行MTT检测、LDH测定、流式细胞分析、形态学观察及统计学分析。结果MTT检... 详细信息

目的研究类人胶原蛋白HLC(Human-like Collagen)对于细胞生长、细胞凋亡、细胞生长周期及细胞形态的影响。方法用体外细胞培养法,选用BHK-21细胞系为实验对象,进行MTT检测、LDH测定、流式细胞分析、形态学观察及统计学分析。结果MTT检测表明0.2,0.3 g/LHLC对于细胞生长有显著的促进作用;HLC对于细胞培养液中LDH浓度无显著性影响;经0.1,0.2,0.3 g/LHLC作用后的细胞凋亡百分数变化不大,进一步作周期分析,也无显著影响;形态学观察表明0.3 g/LHLC对于细胞形态有加长作用。结论HLC可能通过影响细胞膜、增强细胞贴壁生长而促进细胞生长。

关键词：类人胶原蛋白体外细胞培养 MTT检测流式细胞检测细胞形态