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基于CFTR的胞浆内第二信使cAMP检测方法的建立

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中国应用生理学杂志 2022年第1期38卷 79-84页

作者：吴明达刘雪莹冯剑南高雪伟郝峰高俊涛吉林医药学院检验学院吉林132013 延边大学医学院延吉133002 北华大学医学技术学院吉林132013 吉林医药学院基础医学院吉林132013

目的:建立一种基于CFTR可敏感检测胞浆内第二信使cAMP的检测方法。方法:构建CFTR和YFP-H148Q/I152L真核表达载体,应用脂质体转染法构建共表达CFTR和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞,倒置荧光显微镜观察其表达情况,流式细胞仪检测细胞纯度;荧... 详细信息

目的:建立一种基于CFTR可敏感检测胞浆内第二信使cAMP的检测方法。方法:构建CFTR和YFP-H148Q/I152L真核表达载体,应用脂质体转染法构建共表达CFTR和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞,倒置荧光显微镜观察其表达情况,流式细胞仪检测细胞纯度;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型的有效性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型可筛选CFTR调节剂;放射免疫法检测加入CFTR激活剂后细胞内的cAMP浓度。结果:倒置荧光显微镜下观察到CFTR表达在细胞膜上,YFP-H148Q/I152L表达于胞浆中;成功构建共表达CFTR和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型;荧光变化斜率值与CFTR调节剂浓度成剂量依赖关系,该模型可筛选CFTR调节剂;荧光变化斜率值可反映胞浆内cAMP浓度,该模型可敏感检测胞浆内cAMP浓度。结论:此细胞模型可以高效敏感检测胞浆内第二信使cAMP浓度,为cAMP信号相关靶点的研究提供一种简便快捷的方法。

关键词：囊性纤维化跨膜传导调节因子细胞模型第二信使 cAMP浓度

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第二信使cGMP调控植物生长发育研究进展

植物生理学报 2016年第1期52卷 47-54页

作者：南文斌重庆师范大学生命科学学院重庆市植物环境适应分子生物学重点实验室重庆401331

cGMP(cyclic guanosine 3’,5’-monophosphate)是重要的第二信使分子,在细胞内具有广泛的生物学功能。近年来,研究人员对cGMP在植物中的作用进行了大量的研究,发现其在植物生长发育、信号转导和胁迫响应等众多生理过程中是一个重要的... 详细信息

cGMP(cyclic guanosine 3’,5’-monophosphate)是重要的第二信使分子,在细胞内具有广泛的生物学功能。近年来,研究人员对cGMP在植物中的作用进行了大量的研究,发现其在植物生长发育、信号转导和胁迫响应等众多生理过程中是一个重要的信号元件,起着非常关键的调节作用。本文将系统介绍cGMP在植物中的合成代谢、信号转导途径及调控的生理过程,并对相关研究进展进行综述,以期为后续的研究提供参考。

关键词：第二信使 cGMP 信号转导生长发育

肺、脑动脉内皮和平滑肌细胞急性缺氧时某些第二信使的变化

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中国医学科学院学报 1998年第1期20卷 17-22页

作者：胡清华王迪浔同济医科大学

目的研究急性缺氧时细胞内第二信使系统的变化。方法培养猪肺、脑动脉内皮细胞与平滑肌细胞，测定在急性缺氧时胞浆游离钙、磷酸肌醇和环核苷酸的变化。结果肺动脉内皮细胞缺氧时有Ｃａ内流增加、ＩＰ３和ｃＡＭＰ无明显变化，ｃＧＭＰ... 详细信息

目的研究急性缺氧时细胞内第二信使系统的变化。方法培养猪肺、脑动脉内皮细胞与平滑肌细胞，测定在急性缺氧时胞浆游离钙、磷酸肌醇和环核苷酸的变化。结果肺动脉内皮细胞缺氧时有Ｃａ内流增加、ＩＰ３和ｃＡＭＰ无明显变化，ｃＧＭＰ于缺氧４ｍｉｎ升至高峰，随即回降；而脑动脉内皮细胞缺氧时不仅有Ｃａ内流，且有内钙释放、ＩＰ３和ｃＡＭＰ增多，ｃＧＭＰ浓度在缺氧８ｍｉｎ时仍继续上升。肺与脑动脉平滑肌细胞间缺氧时第二信使的变化，仅有ｃＧＭＰ不同。结论内皮细胞的异质性可能与两血管反应性差异有关。

关键词：肺动脉脑动脉血管内皮第二信使脑缺氧

基于细胞内第二信使cAMP的检测评估化合物对多巴胺靶点的活性影响

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临床研究 2023年第6期31卷 4-9页

作者：隋宁张子伟胡丹丹北京爱思益普生物科技股份有限公司细胞部北京100176

目的建立一种基于细胞水平的第二信使cAMP检测方法来评估化合物对多巴胺(DA)受体的活性影响。方法通过构建DA受体真核表达载体,应用Flp-In系统和脂质体转染法构建表达DA受体的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系,反转录PCR(RT-PCR)鉴定DA受体的... 详细信息

目的建立一种基于细胞水平的第二信使cAMP检测方法来评估化合物对多巴胺(DA)受体的活性影响。方法通过构建DA受体真核表达载体,应用Flp-In系统和脂质体转染法构建表达DA受体的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系,反转录PCR(RT-PCR)鉴定DA受体的表达情况;利用TR-FRET cAMP方法检测阳性化合物对DA靶点的激活和抑制作用;毛喉素(Forskolin)是一种有效的腺苷酸环化酶(AC)激活剂,诱导细胞内cAMP的形成。结果经RTPCR鉴定,宿主细胞中无目的表达,而转染后的细胞多巴胺细胞系中有目的基因表达,成功构建表达多巴胺受体的细胞模型;TR-FRET cAMP方法检测结果显示所构建的多巴胺受体细胞模型可以反映化合物的激动和抑制作用。结论所构建的DA受体表达细胞系可以通过TR-FRET cAMP方法检测多巴胺受体被激活后胞内产生的第二信使cAMP的浓度变化,进而反映化合物对DA靶点的活性影响,为DA靶点的化合物筛选提供一种简便快捷的方法。

关键词：多巴胺受体细胞模型第二信使 cAMP浓度化合物筛选

环二腺苷酸(c-di-AMP)--细菌的一种新型第二信使

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微生物学报 2015年第2期55卷 126-133页

作者：杜斌孙建和上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室上海200240

环二腺苷酸(cyclic diadenosine monophosphate,c-di-AMP)是在细菌中新发现的一种第二信使分子,其参与调节多种生理功能,包括细菌的生长、细胞壁的代谢平衡以及细菌的致病力等。c-di-AMP除了在细菌中发挥作用外,它还可作为第二信使分子... 详细信息

环二腺苷酸(cyclic diadenosine monophosphate,c-di-AMP)是在细菌中新发现的一种第二信使分子,其参与调节多种生理功能,包括细菌的生长、细胞壁的代谢平衡以及细菌的致病力等。c-di-AMP除了在细菌中发挥作用外,它还可作为第二信使分子被真核宿主识别,激活先天性免疫应答。细菌细胞内c-di-AMP的代谢受二腺苷酸环化酶(diadenylate cyclase,DAC)和磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)的调控。本文综述了c-di-AMP的代谢途径、调控机制、受体蛋白、生物学功能以及未来的研究方向和应用前景。

关键词：环二腺苷酸第二信使二腺苷酸环化酶磷酸二酯酶细菌信号转导

基于钙激活氯离子通道检测胞质内第二信使Ca^(2+)

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解剖学报 2021年第2期52卷 311-316页

作者：肖云萍解宇浩张嘉琪郭佳琦丁旭郝峰王国庆吉林医药学院检验学院吉林吉林132013 北华大学医学技术学院吉林吉林132013

目的建立一种基于钙激活氯离子通道(CaCC)可敏感检测胞质内第二信使Ca^(2+)的细胞模型。方法构建氯离子通道蛋白1(ANO1)和YFP-H148Q/I152 L真核表达载体,应用脂质体转染法构建共表达ANO1和YFPH148Q/I152 L的FRT细胞,倒置荧光显微镜观察... 详细信息

目的建立一种基于钙激活氯离子通道(CaCC)可敏感检测胞质内第二信使Ca^(2+)的细胞模型。方法构建氯离子通道蛋白1(ANO1)和YFP-H148Q/I152 L真核表达载体,应用脂质体转染法构建共表达ANO1和YFPH148Q/I152 L的FRT细胞,倒置荧光显微镜观察其表达情况,流式细胞仪检测细胞纯度;应用膜片钳技术研究CaCC生理特性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型的有效性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型可筛选CaCC调节剂;荧光探针法检测加入CaCC激活剂后胞质内的Ca^(2+)浓度。结果倒置荧光显微镜下观察到ANO1表达在细胞膜上,YFP-H148Q/I152 L表达于胞质中;该模型具有经典的钙激活氯离子通道的生理特性;成功构建共表达ANO1和YFP-H148Q/I152 L的FRT细胞模型;该模型可筛选CaCC调节剂,荧光变化斜率值与CaCC调节剂浓度成剂量依赖关系;荧光变化斜率值可反映胞质内Ca^(2+)浓度,该模型可敏感检测胞质内Ca^(2+)浓度。结论此细胞模型可以高效敏感检测胞质内第二信使Ca^(2+)浓度,为Ca^(2+)信号相关靶点的研究提供了一种简便快捷的方法。

关键词：钙激活氯离子通道细胞模型第二信使 Ca^(2+)浓度流式细胞术

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第二信使因子对牛卵母细胞体外成熟的影响

中国兽医学报 1996年第1期16卷 80-85页

作者：石德顺卢克焕广西农业大学动物繁殖研究室

本研究旨在确定第二信使因子对牛卵母细胞体外成熟的影响，并探讨通过添加双丁酰ｃＡＭＰ（ｄｂｏＡＭＰ）及其激活剂、延长成熟时间，以提高卵母细胞胞质成熟质量的可行性。成熟液添加０．１ｍｍｏｌ／Ｌ的ｄｂｃＣＭＰ对牛卵母细胞成... 详细信息

本研究旨在确定第二信使因子对牛卵母细胞体外成熟的影响，并探讨通过添加双丁酰ｃＡＭＰ（ｄｂｏＡＭＰ）及其激活剂、延长成熟时间，以提高卵母细胞胞质成熟质量的可行性。成熟液添加０．１ｍｍｏｌ／Ｌ的ｄｂｃＣＭＰ对牛卵母细胞成熟后的囊胚发育率有促进作用（４６．５％比３８．５％，Ｐ＜０．０８）。当成熟培养时间为２２ｈ时，０．１ｍｍｏｌ／Ｌ的ｄｂｃＡＭＰ或ｄｂｃＧＭＰ对卵母细胞的分裂率、囊胚发育率及其囊胚的孵化率均无明显影响（Ｐ＞０．０５）。ｄｂｃＡＭＰ或ｄｂｃＧＭＰ对卵母细胞的成熟具延迟作用，但这种延迟作用因彼此混合而消失。随着成熟培养时间的延长，不管卵母细胞在抑制液（含有１ｍｍｏｌ／ＬｄｂｃＡＭＰ，０．２ｍｍｏｌ／Ｌ异溴甲基黄嘌呤，２．０ｍｍｏｌ／Ｌ次黄嘌呤．０．１ｍｍｏｌ／Ｌ腺苷的成熟液）中的培养时间长短，其分裂率和囊胚发育率均随之下降。成熟液添加蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的激活剂（５０μｍｏｌ／ＬＯＡＧ和５μｍｏｌ／ＬＡ２３１８７），可明显降低卵母细胞的囊胚发育率（２１．５％比３３．３％，Ｐ＜０．０５）。结果表明，ｃＣＭＰ对牛卵母细胞质的成熟具促进作用，而ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ对此过程无作用，且还对胞核的成熟略具延迟作用。?

关键词：第二信使体外成熟牛卵母细胞环一磷酸核苷

第二信使在调控活化旋毛虫感染性幼虫表面修饰中作用的研究

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国际医学寄生虫病杂志 1996年第3期23卷 128-129页

作者：陈晓蓓

本文报道了第二信使在活化旋毛虫感染性幼虫表面修饰中的调控作用。作者从BALB/c小鼠肌肉中分离旋毛虫感染性幼虫,置含胰酶和胆汁的RPMI1640中孵育或与IP;、NITR-5及cAMP包被物（经紫外光照射后可透过幼虫表膜）共同孵育,再用脂质荧光探... 详细信息

本文报道了第二信使在活化旋毛虫感染性幼虫表面修饰中的调控作用。作者从BALB/c小鼠肌肉中分离旋毛虫感染性幼虫,置含胰酶和胆汁的RPMI1640中孵育或与IP;、NITR-5及cAMP包被物（经紫外光照射后可透过幼虫表膜）共同孵育,再用脂质荧光探针PKH26和AF18进行标记,观察幼

关键词：旋毛虫感染胰酶胆汁包被 cAMP 第二信使表膜表面修饰幼虫

牛磺酸对运动大鼠甲状腺激素及心肌第二信使的影响

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中国应用生理学杂志 2002年第2期18卷 159-161页

作者：张钧黄叔怀陈炳猛扬州大学体育学院江苏扬州225002

目的 :探讨牛磺酸对力竭运动后大鼠心肌损伤的保护作用。方法 :以大鼠力竭运动为模型 ,研究牛磺酸对血清和心肌中四碘甲腺原氨酸 (T4)和三碘甲腺原氨酸 (T3 ) ,心肌T45′ 脱单碘酶 (T45′ DI)活性、环磷酸腺苷 (cAMP)水平的影响。结果 ... 详细信息

目的 :探讨牛磺酸对力竭运动后大鼠心肌损伤的保护作用。方法 :以大鼠力竭运动为模型 ,研究牛磺酸对血清和心肌中四碘甲腺原氨酸 (T4)和三碘甲腺原氨酸 (T3 ) ,心肌T45′ 脱单碘酶 (T45′ DI)活性、环磷酸腺苷 (cAMP)水平的影响。结果 :力竭运动可造成血清和心肌中T3 水平、心肌中T45′ DI活力和cAMP含量显著升高 (P <0 .0 1) ,T4水平无显著性改变 ;而补充牛磺酸可显著抑制力竭运动后大鼠血清和心肌中T3 水平的升高 ,抑制心肌中T45′ DI活力和cAMP含量的显著增加。结论 :牛磺酸对大鼠力竭运动后心肌损伤具有一定的保护作用。

关键词：牛磺酸运动大鼠甲状腺激素心肌第二信使力竭运动