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中华耳科学杂志 2017年第2期15卷 234-238页

作者：杨乐柳柯杨仕明龚平桂刘昀逸张军军汪雪梅彭宏南方医科大学广州510515 广东省第二人民医院耳鼻咽喉头颈外科广州510310 首都医科大学附属友谊医院耳鼻咽喉头颈外科北京100050 中国人民解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科北京100039

目的了解C57小鼠耳蜗毛细胞突触带发育的时间特点。方法全耳蜗基底膜铺片后免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察和记录不同发育阶段C57小鼠听觉突触前膜突触带的数目与分布。运用ABR检测听力发生的时间。结果 C57小鼠出生后0d,在内外毛细胞... 详细信息

目的了解C57小鼠耳蜗毛细胞突触带发育的时间特点。方法全耳蜗基底膜铺片后免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察和记录不同发育阶段C57小鼠听觉突触前膜突触带的数目与分布。运用ABR检测听力发生的时间。结果 C57小鼠出生后0d,在内外毛细胞胞质即可观察到Ctbp2信号;出生后第3天,Ctbp2信号在毛细胞上逐渐增多;出生后第6天,Ctbp2信号在毛细胞的胞质和基底侧膜上的表达达高峰,内毛细胞(35.1±3.4)个/细胞,而外毛细胞上的增加更为显著,达(21.0±3.2)个/细胞;出生后第12、30和60天,Ctbp2信号数目趋于稳定,在内毛细胞16-20个/细胞,外毛细胞1-3个/细胞,信号的分布也逐渐聚集在毛细胞的基底侧膜上。ABR检测提示C57小鼠听觉发生的平均时间为13.2天。结论毛细胞突触带出生时即已存在,出生后逐渐发育和完善。听觉发生与突触带成熟时间上的高度吻合,表明成熟突触带的形成可能是听觉发生的前提条件之一。

关键词：毛细胞突触带发育听觉发生

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耳蜗突触带的发育观察和长期中等强度噪声暴露耳蜗损伤的机制研究

耳蜗突触带的发育观察和长期中等强度噪声暴露耳蜗损伤的机制研究

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作者：杨乐南方医科大学

学位级别：硕士

目的了解耳蜗突触带发育的时间特点和空间分布,明确C57BL/6j小鼠突触带稳定的时间,探讨长期中等强度噪声暴露耳蜗损伤的病理机制。方法(1)全耳蜗基底膜铺片、免疫荧光染色后,通过共聚焦显微镜观察、记录不同发育阶段耳蜗毛细胞突触前膜... 详细信息

目的了解耳蜗突触带发育的时间特点和空间分布,明确C57BL/6j小鼠突触带稳定的时间,探讨长期中等强度噪声暴露耳蜗损伤的病理机制。方法(1)全耳蜗基底膜铺片、免疫荧光染色后,通过共聚焦显微镜观察、记录不同发育阶段耳蜗毛细胞突触前膜上突触带的发育与分布;(2)应用免疫荧光、HE染色、耳蜗电镜扫描评估耳蜗除带状突触之外的结构成分的变化;(3)中等强度白噪声,70dBSPL,8h/天,持续暴露3月,建造模拟环境噪声慢性暴露的动物模型;(4)采用ABR检测评估听觉阈值和诱发电位Ⅰ波幅度;(5)应用小鼠耳蜗音频定位图,建立全耳蜗突触带与听觉频谱之间的对应关系。结果(1)C57小鼠出生后Od,在内外毛细胞的胞质即可观察到CtBP2的信号表达;出生后第6天,CtBP2的信号数目在内外毛细胞的胞质和基底侧膜上的表达均达到高峰,突触带信号的增长在外毛细胞上则表现得尤为明显;出生后第12-60d,内外毛细胞上的CtBP2信号数目急剧减少并逐渐趋于稳定,且在毛细胞上的分布逐渐向基底侧膜聚集。功能学上,ABR可检测听力出现于出生后13.2天;(2)内毛细胞上突触带富集于耳蜗中间区域(距顶转50%-70%),可达18.6个/细胞,明显高于突触带在耳蜗顶转10%-20%(7.4个/细胞)和底转90%-100%(9.6个/细胞)区域的分布。外毛细胞沿耳蜗基底膜螺旋分布未见明显差异,1-3个/细胞;(3)中等强度噪声暴露3个月,在听觉频谱范围内,各频段均有不同程度的听力减退,且以8-16kHz频段阈值及ABRⅠ波幅度下降明显;(4)借助耳蜗音频定位,突触带计数显示,沿耳蜗螺旋突触带数目广泛减少,且在距耳蜗顶转50-70%区域突触带减少明显高于其他区域。(5)与对照组相比,毛细胞计数、静纤毛排列、螺旋神经元计数未见明显差异。结论(1)幼年C57小鼠,毛细胞与蜗神经纤维的突触联系出生前即已存在。出生后12d前,突触带经历数目和空间分布上的剧烈变化,12d后逐渐趋于完善和功能上的成熟;出生13.2d后,小鼠开始出现听力。因此,突触带成熟的时间和小鼠听觉发生时间的吻合,提示功能成熟的突触带是听觉发生的前提之一;(2)60日龄的C57小鼠,突触带沿耳蜗的分布趋于稳定;(3)长期中等强度噪声暴露可致在多个频率上不同程度的听阈提高,且暴露对听觉敏感区(8-16kHz)影响最为显著,其潜在的病理机制可能是原发性的内毛细胞与听觉传入纤维连接的大量减少所致。

关键词：突触带发育中等强度噪声暴露耳蜗损伤机制

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