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Treg细胞延长经不同CD47基因型供者脾细胞预处理小鼠皮肤和心脏移植物存活时间的作用

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中华器官移植杂志 2017年第6期38卷 372-377页

作者：王远涛胡钰高宝山王钢王伟刚傅耀文周洪澜吉林大学第一医院泌尿外二科长春130021 吉林大学中日联谊医院病理科

目的探讨调节性T淋巴细胞（Treg细胞）延长经不同CD47基因型供者脾细胞预处理小鼠皮肤和心脏移植物存活时间的作用.方法以C57BL/6小鼠为受者,MHC-Ι错配的bm1小鼠为供者,建立MHC-Ι错配的小鼠皮肤和心脏联合移植模型.CD47^-/-DST组受... 详细信息

目的探讨调节性T淋巴细胞（Treg细胞）延长经不同CD47基因型供者脾细胞预处理小鼠皮肤和心脏移植物存活时间的作用.方法以C57BL/6小鼠为受者,MHC-Ι错配的bm1小鼠为供者,建立MHC-Ι错配的小鼠皮肤和心脏联合移植模型.CD47^-/-DST组受鼠移植前7 d接受CD47^-/-bm1小鼠的脾细胞输注;CD47^＋/＋DST组受鼠移植前7 d接受CD47^＋/＋bm1小鼠的脾细胞输注;移植对照组受鼠仅行皮肤和心脏联合移植,不做其他预处理.术后通过观察移植皮片及异位心脏移植物的腹部触诊判断移植物存活情况,绘制移植物存活曲线;免疫组化染色检测心脏移植物内Treg细胞浸润情况,流式细胞技术检测脾脏及淋巴结中Treg细胞数量及比例的变化,混合淋巴细胞反应（MLR）检测供者特异性T淋巴细胞增殖及Treg细胞对于供者特异性T淋巴细胞增殖的抑制能力.结果与移植对照组比较,CD47^＋/＋DST组皮肤移植物平均存活时间（MST）为20 d,比移植对照组的17.5 d略延长,差异无统计学意义（P〉0.05）;而CD47^＋/＋DST组皮肤移植物的存活时间显著延长至46.5 d（P〈0.01）.CD47^-/-DST组心脏移植物的MST为17 d,与移植对照组的15.5 d相比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;而CD47^＋/＋DST组心脏移植物的存活时间显著延长至42.5 d（P〈0.01）.移植后18 d,CD47^-/-DST组心脏移植物内可见大量Treg细胞浸润,而同时间点的CD47^＋/＋DST组心脏移植物内未见明显Treg细胞浸润.移植后18 d,与CD47^＋/＋DST组比较,CD47^-/-DST组脾脏中Treg细胞数量显著增加（P〈0.01）,但Treg细胞的比例却明显低于CD47^＋/＋DST组（P〈0.05）;CD47^＋/＋DST组和CD47^-/-DST组淋巴结中Treg细胞数量均有增加,组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）,但CD47^＋/＋DST组淋巴结中Treg细胞的比例明显高于CD47^-/-DST组（P〈0.01）.术后7 d的MLR显示,CD47^＋/＋DST组供者T淋巴细胞增殖明显明显受到抑制,与CD47^-/-DST组和移植对照组比较,差异明显（P〈0.05）;各组Treg细胞对于效应性T淋巴细胞的抑制作用基本一致.结论供者特异性输注中输注细胞表面表达CD47对于延长移植物存活时间至关重要;Treg细胞的比例对于延长移植物存活时间起主要作用,而不是单纯Treg细胞数量增加或单个Treg细胞抑制功能的增强.

关键词： T淋巴细胞,调节皮肤移植心脏移植联合移植小鼠移植物存活

阻断OX40和CD40协同共刺激信号延长小鼠胰岛移植物存活时间

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中华器官移植杂志 2012年第3期33卷 174-177页

作者：陈恕求陈明许斌任全王奕铎王旭辉李宪昌东南大学医学院东南大学附属中大医院泌尿外科南京210009 哈佛大学医学院BID医学中心附属移植研究中心

目的研究阻断OX40／OX40L和CI）40／CD154L协同共刺激通路对小鼠胰岛移植物存活的影响及其机制。方法以DBA／2小鼠为供者，C57BL／6小鼠为受者，制作胰岛移植模型。受鼠分为4组。（1）对照组，注射IgG；（2）抗OX40组，注射抗OX40L单克... 详细信息

目的研究阻断OX40／OX40L和CI）40／CD154L协同共刺激通路对小鼠胰岛移植物存活的影响及其机制。方法以DBA／2小鼠为供者，C57BL／6小鼠为受者，制作胰岛移植模型。受鼠分为4组。（1）对照组，注射IgG；（2）抗OX40组，注射抗OX40L单克隆抗体；（3）抗CD154组，注射抗CD154单克隆抗体；（4）联合治疗组，注射抗OX40L单克隆抗体和抗CD154单克隆抗体。记录各组胰岛移植物平均存活时间（MST）。将CD154敲除小鼠处死，取其脾脏T淋巴细胞，体外检测活化T淋巴细胞表面OX40的表达；在活化T淋巴细胞中加入不同浓度的抗OX40L单克隆抗体，体外检测T淋巴细胞增殖情况。结果对照组胰岛移植物MST为19d，抗CD154组胰岛移植物MST为48d（P〈0．05）；抗OX40组胰岛移植物MST为22d，与前两组相比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；联合治疗组胰岛移植物MST〉150d，高于另外3组（P〈0．05）。66％的胞表达OX40，较初始T淋巴细胞的表达率高（2％，P〈0．05）；加入抗OX40L单克隆抗体后，T淋巴细胞增殖受抑制且呈剂量依赖性。结论阻断OX40／OX40L和CD4{}／CD154L双通路可诱导小鼠胰岛移植物长期存活，其发挥作用的关键机制是抑制了T淋巴细胞的增殖。

关键词：小鼠胰岛移植抗原 OX40 抗原 CD40 移植物存活

肾移植术后蛋白尿原因分析及其对移植物存活的影响

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中华肾脏病杂志 2011年第9期27卷 698-699页

作者：周晴丁峰顾勇陆福明张明复旦大学附属华山医院肾脏科上海200040

肾移植是解决终末期肾病的有效治疗手段，但是，移植肾长期存活率却有待提高。肾移植患者中出现蛋白尿被认为是预后不良的指标之一。本研究通过收集肾移植患者临床资料回顾性分析肾移植后蛋白尿的原因、危险因素以及移植后蛋白尿对于移... 详细信息

肾移植是解决终末期肾病的有效治疗手段，但是，移植肾长期存活率却有待提高。肾移植患者中出现蛋白尿被认为是预后不良的指标之一。本研究通过收集肾移植患者临床资料回顾性分析肾移植后蛋白尿的原因、危险因素以及移植后蛋白尿对于移植物预后的影响。

关键词：肾移植术后移植物存活蛋白尿原因分肾移植患者预后不良终末期肾病长期存活率

小鼠自体肝脏星状细胞联合同种异体胰岛细胞移植延长移植物存活时间的研究

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中华器官移植杂志 2009年第2期30卷 94-96页

作者：尹震宇王效民蒋国平吕丽娜钱诗光厦门大学附属中山医院肝胆外科 361004

目的研究小鼠自体肝脏星状细胞联合同种异体胰岛细胞移植的新方法对胰岛移植物存活时间的作用。方法选择雄性BALB／c小鼠为胰岛移植模型的供者，雄性C57BL／6糖尿病小鼠为受者。随机将受者分为A、B两组。A组：仅采用供者的胰岛细胞移植... 详细信息

目的研究小鼠自体肝脏星状细胞联合同种异体胰岛细胞移植的新方法对胰岛移植物存活时间的作用。方法选择雄性BALB／c小鼠为胰岛移植模型的供者，雄性C57BL／6糖尿病小鼠为受者。随机将受者分为A、B两组。A组：仅采用供者的胰岛细胞移植；B组：采用受者的肝脏星状细胞（HSCs）与供者胰岛细胞混合后共同移植。术后定期测定受者尾静脉血的血糖含量。结果B组受者胰岛移植物的存活时间明显延长，血糖含量维持正常的中位时间为66d（30～180d），而A组血糖含量维持正常的中位时间为11d（9～15d），两组比较，差异有统计学意义（P〈0．001）。结论受者肝脏星状细胞能延长共同移植的同种异体胰岛移植物存活时间。

关键词：胰岛移植肝细胞移植物存活

CTLA4Ig和西罗莫司短期联合使用延长异种胰岛移植物的存活

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中华器官移植杂志 2008年第5期29卷 268-270页

作者：麦刚刘续宝田伯乐胡伟明张肇达四川大学华西医院普外科成都610042

目的观察细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白（CTLA4Ig）与西罗莫司（SRL）联用阻断共刺激通路对异种胰岛移植物存活的影响。方法取C57BL／6小鼠，腹腔注射链佐星，制成糖尿病模型。采用随机单位组设计分组法将糖尿病小鼠分为7组，各... 详细信息

目的观察细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白（CTLA4Ig）与西罗莫司（SRL）联用阻断共刺激通路对异种胰岛移植物存活的影响。方法取C57BL／6小鼠，腹腔注射链佐星，制成糖尿病模型。采用随机单位组设计分组法将糖尿病小鼠分为7组，各组均于小鼠左肾包膜下移植SD大鼠胰岛300胰岛当量。CTLA4Ig组分别于移植当天及移植后第2、4、6天腹腔注射CTLA4Ig0．5mg／d；SRL组分别于移植当天及移植后第1、2天给予SRL灌胃，0．2mg·kg^-1·d^-1，其后隔天用药1次，共用2周；MRl组分别于移植当天及移植后第2、4天腹腔注射仓鼠抗小鼠CDl54单克隆抗体（MRl）0．5mg／d；CTLA4Ig和SRL联用组（SRL联用组）、CTLA4Ig和MRl联用组（MRl联用组）以及CTLA4Ig、MRl和SRL联用组（三药联用组）各药物的剂量与用法同上述各组；对照组仅行胰岛移植，不予以药物。观察至移植后200d，通过监测受者血糖水平来判断排斥反应的发生情况。记录各组移植物的存活（即无排斥反应）时间。发生排斥反应者，或未发生排斥反应、移植物存活时间〉200d者，取移植胰岛，行HE染色及免疫荧光染色，进行组织学观察。结果对照组移植物存活时间中位数为17d，该组最终均发生排斥反应。SRL组、MRl组和CTLA4Ig组移植物存活时间中位数分别为34d、98d和77d，均明显长于对照组（P〈0．05），三组中分别有90％（9／10）、62．5％（5／8）和83．3％（5／6）的小鼠发生排斥反应。SRL联用组移植物存活时间中位数为130d，明显长于上述4组（P〈0.01），有50％（3／6）的小鼠发生排斥反应。MRl联用组以及三药联用组移植物存活时间中位数均〉200d，分别有42．9％（3／7）和25％（2／8）的小鼠发生排斥反应。组织学检查结果显示，对照组发生排斥反应时，其移植胰岛破坏严重，可见大量CD^＋和CD8^＋淋巴细胞及巨噬细胞浸润，并可见IgG、IgM和补体C3沉积。其它组发生排斥反应者的组织学改变与对照组相似。SRL联用组存活200d的小鼠，其移植胰岛组织中未见或仅有少量炎症细胞浸润，胰岛素和胰高血糖素染色阳性，未见IgG、IgM和补体C3沉积。结论短期联合使用CTLA4Ig和SRL能显著延长小鼠体内大鼠来源的胰岛的存活时间。

关键词：移植物存活胰岛移植小鼠动物异种西罗莫司

骨髓输注联合阻断共刺激通路延长大鼠皮肤移植物的存活时间

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中华器官移植杂志 2008年第5期29卷 264-267页

作者：朱振新李元新韩志锋李秋荣张强李幼生黎介寿南京大学临床学院、南京军区南京总医院普外科 210002

目的探讨骨髓输注联合阻断共刺激通路对大鼠移植皮肤存活的影响及可能机制。方法以Lewis大鼠为受者，皮肤移植前经尾静脉输注供者（BN大鼠）骨髓细胞2×10^8个，并于骨髓输注当天、输注后第2、4、6及8天腹腔注射抗CD25单克隆抗体，同时... 详细信息

目的探讨骨髓输注联合阻断共刺激通路对大鼠移植皮肤存活的影响及可能机制。方法以Lewis大鼠为受者，皮肤移植前经尾静脉输注供者（BN大鼠）骨髓细胞2×10^8个，并于骨髓输注当天、输注后第2、4、6及8天腹腔注射抗CD25单克隆抗体，同时按照分组要求腹腔注射细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白（CTLA4Ig组）、抗CDl54单克隆抗体（抗CDl54单抗组）以及CTLA4Ig和抗CDl54单克隆抗体（联合处理组），于骨髓输注后第8天移植BN大鼠的皮肤。另以仅行皮肤移植者为对照（对照组）。观察各组移植物抗宿主病（GVHD）的发生情况、外周血中供者细胞嵌合率、T淋巴细胞凋亡率及移植皮肤的存活时间。结果各组均未观察到GVHD的发生。骨髓输注后第7天即可在CTLA4Ig组、抗CDl54单抗组及联合处理组观察到嵌合现象，至第21天时，嵌合率仍维持于一定水平，联合处理组明显高于其它三组（P〈0．01）。骨髓输注后第7及21天，CTLA4Ig组、抗CDl54单抗组及联合处理组间两两比较，T淋巴细胞凋亡率的差异无统计学意义，但均显著高于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。CTLA4Ig组、抗CDl54单抗组及联合处理组移植皮肤的存活时间显著长于对照组（P〈0．01），联合处理组移植皮肤存活时间为（16．7±3．1）d，明显长于CTLA4Ig组和抗CDl54单抗组（P〈0．05）。结论骨髓输注联合阻断共刺激通路能够延长移植皮肤存活时间，其机理可能与诱导嵌合和T淋巴细胞凋亡有关。

关键词：移植嵌合体凋亡抗原 CD80 移植物存活皮肤移植

供者骨髓细胞骨髓腔内输注联合低剂量照射延长大鼠复合组织移植物存活时间

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中华器官移植杂志 2005年第7期26卷 396-399页

作者：石作为张信英王鲲鹏张志鹏哈尔滨医科大学附属第一临床医院骨科 150001

目的探讨供者骨髓细胞骨髓腔内输注联合低剂量照射对大鼠复合组织移植物的影响。方法以SD大鼠为供者,Wistar大鼠为受者,实验分4组进行:A组仅进行肢体移植;B组在肢体移植前1d,受者接受亚致死量60Co照射(4.5Gy/次,共2次,间隔4h),同时腹腔... 详细信息

目的探讨供者骨髓细胞骨髓腔内输注联合低剂量照射对大鼠复合组织移植物的影响。方法以SD大鼠为供者,Wistar大鼠为受者,实验分4组进行:A组仅进行肢体移植;B组在肢体移植前1d,受者接受亚致死量60Co照射(4.5Gy/次,共2次,间隔4h),同时腹腔内注射氟达拉滨(50mg/kg);C组于肢体移植当天受者骨髓腔内输注供者骨髓细胞;D组在B组的基础上,受者于肢体移植当天骨髓腔内输注供者的骨髓细胞。所有受者术后均不用免疫抑制剂。术后观察移植物的存活情况及排斥反应征象,对D组存活超过120d的受鼠进行单向混合淋巴细胞反应以及SD大鼠、DA大鼠皮肤移植,同时通过组织学检查,了解受鼠的移植物抗宿主病(GVHD)情况。结果与其它实验组相比,D组移植物的存活时间显著延长(P移植的供者同系大鼠的皮肤得以长期存活,而对第三方DA大鼠的淋巴细胞和皮肤呈现强烈的免疫反应。结论供者骨髓细胞骨髓腔内输注联合低剂量照射和短期氟达拉滨应用,在不用免疫抑制剂的情况下,能显著延长移植复合组织的存活时间。

关键词：组织移植骨髓细胞放射疗法移植物存活

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中华实验外科杂志 2005年第4期22卷 407-409页

作者：汤志刚王春友胡何节安徽省立医院普通外科合肥230001 华中科技大学同济医学院协和医院胰腺外科治疗中心

目的　探讨转染细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(转染CTLA4Ig基因)的同供体大鼠DC细胞对同种大鼠胰岛移植的影响。方法　链尿菌素(STZ) 60mg/kg体重腹腔内注射制作SD大鼠糖尿病模型,胶原酶法分离、Ficoll 40 0密度梯度离心法纯化胰岛,GM CSF... 详细信息

目的　探讨转染细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(转染CTLA4Ig基因)的同供体大鼠DC细胞对同种大鼠胰岛移植的影响。方法　链尿菌素(STZ) 60mg/kg体重腹腔内注射制作SD大鼠糖尿病模型,胶原酶法分离、Ficoll 40 0密度梯度离心法纯化胰岛,GM CSF +IL 4诱生培育的方法,获得高纯度的DC ,含目的基因CTLA4Ig重组腺病毒AdvCTLA4Ig ,转染同供体DC细胞,与胰岛细胞同时移植于糖尿病受体大鼠肾包膜下,免疫组织化学、Dot ELISA、逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测CTLA4Ig基因在实验组和对照组DC细胞中的表达,并检测受体大鼠的血糖浓度变化,同时观察受体存活情况。结果　实验组DC细胞有CTLA4Ig表达,而对照组DC细胞没有CTLA4Ig表达,实验组正常血糖维持时间(17.3±2 .4)d较对照组(10 .1±1.5 )d、空白对照组(8.3±1.2 )d显著延长,实验组、对照组和空白对照组受体大鼠存活天数分别为(3 4.5±3 .4)d、(14 .7±2 .3 )d和(11.2±1.4)d ,实验组高于对照组(P 移植免疫耐受。

关键词：细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 免疫球蛋白基因同供体移植物存活树突状细胞 CTLA4Ig基因转染逆转录一聚合酶链反应密度梯度离心法 DC细胞免疫组织化学移植免疫耐受对照组糖尿病模型腹腔内注射重组腺病毒 ELISA 实验组胰岛移植物 SD大鼠链尿菌素胶

婴儿先天性角膜混浊行穿透性角膜移植术的临床疗效分析

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中华眼科杂志 2022年第6期58卷 426-432页

作者：苗森蔺琪孙亚杰宋耀文李旭潘志强首都医科大学附属北京安贞医院眼科北京100029 首都医科大学附属北京儿童医院眼科儿科学国家重点实验室北京100045 首都医科大学附属北京同仁医院北京同仁眼科中心北京市眼科研究所北京市眼科学与视觉科学重点实验室北京100730

目的探讨婴儿先天性角膜混浊(CCO)行穿透性角膜移植术(PK)后角膜植片的透明情况及其影响因素。方法回顾性队列研究。纳入2017年1月至2018年1月在首都医科大学附属北京同仁医院和首都医科大学附属北京安贞医院诊断为CCO并行PK的0~1岁患儿... 详细信息

目的探讨婴儿先天性角膜混浊(CCO)行穿透性角膜移植术(PK)后角膜植片的透明情况及其影响因素。方法回顾性队列研究。纳入2017年1月至2018年1月在首都医科大学附属北京同仁医院和首都医科大学附属北京安贞医院诊断为CCO并行PK的0~1岁患儿(42例,51只眼)资料。其中男性23例,女性19例;手术时年龄(5.7±2.2)个月;随访时间为(28.6±2.6)个月。记录患儿的基本信息、相关角膜疾病类型及角膜混浊形态。所有患儿均进行了PK术,术后定期随访角膜植片透明情况及出现的并发症,记录术后角膜植片存活情况。分类诊断、手术年龄以及联合手术等不同影响因素与植片生存之间采用Kaplan-Meier存活曲线及Log-rank检验分析,不同影响因素与透明角膜植片率之间的比较采用χ^(2)检验。结果术后6个月时透明角膜植片率为84.3%(43/51),12个月时下降至78.4%(40/51),至末次随访则进一步下降至60.8%(31/51)。A-R综合征及先天性小眼球术后透明角膜植片率(0)低于Peters异常(62.2%,23/37)和角膜巩膜化(8/11)(P<0.01),联合白内障摘除手术后透明角膜植片率(3/9)也低于单纯行PK者(66.7%,28/42)(P=0.039)。混浊角膜组织中有新生血管者术后透明角膜植片率低(43.5%,10/23),差异有统计学意义(χ^(2)=5.264,P=0.022)。术后常见的并发症为眼压升高(7只眼,13.7%)和持续性角膜上皮缺损(7只眼,13.7%),其次为并发性白内障(4只眼,7.8%)和后发性白内障(2只眼,3.9%)。结论1岁及以下的CCO患儿在行PK治疗后,随随访时间延长透明角膜植片率有下降趋势,但术后2年透明角膜植片率尚好。影响PK术后透明角膜植片率的因素主要包括角膜混浊组织中有新生血管、疾病类型及是否联合白内障摘除手术等。

关键词：角膜混浊角膜移植术,穿透性移植物存活治疗结果婴儿