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广叶绣球菌多糖磷酸化修饰及体外抗氧化和降糖活性

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食用菌学报 2024年第3期31卷 51-58页

作者：崔芳铭毕书瑜侯江燕曹谨玲程艳芬程菲儿云少君冯翠萍山西农业大学食品科学与工程学院山西晋中030801 黄土高原食用菌山西省重点实验室山西晋中030801

对广叶绣球菌(Sparassis latifolia)多糖(SLPs)进行磷酸化修饰,表征磷酸化SLPs(P-SLPs)结构,分析其体外抗氧化、降糖活性。结果表明:与SLPs比较,P-SLPs的磷酸根质量分数较高,为(8.02±0.48)%;在相同质量浓度时,P-SLPs对DPPH、超氧阴离... 详细信息

对广叶绣球菌(Sparassis latifolia)多糖(SLPs)进行磷酸化修饰,表征磷酸化SLPs(P-SLPs)结构,分析其体外抗氧化、降糖活性。结果表明:与SLPs比较,P-SLPs的磷酸根质量分数较高,为(8.02±0.48)%;在相同质量浓度时,P-SLPs对DPPH、超氧阴离子、羟基自由基和H_(2)O_(2)的清除率均较高,对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制率均较高。研究结果可为广叶绣球菌多糖进一步开发应用提供参考。

关键词：广叶绣球菌多糖磷酸化修饰抗氧化降糖活性

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磷酸化修饰动态调控流感病毒复制

科学通报 2017年第17期62卷 1823-1830页

作者：郑伟楠李晶刘文军中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点研究室北京100101

磷酸化是一种常见的蛋白质翻译后修饰形式,调控蛋白质的活性、稳定性、细胞内定位和蛋白质互作等功能.在真核细胞中,丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸是最常见的磷酸化位点.在流感病毒复制的生命周期中,病毒蛋白可被宿主激酶磷酸化修饰,并调节其... 详细信息

磷酸化是一种常见的蛋白质翻译后修饰形式,调控蛋白质的活性、稳定性、细胞内定位和蛋白质互作等功能.在真核细胞中,丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸是最常见的磷酸化位点.在流感病毒复制的生命周期中,病毒蛋白可被宿主激酶磷酸化修饰,并调节其核质穿梭、信号转导等功能,从而调控病毒的生长、复制和致病力.本文就近年来关于流感病毒内部核蛋白、基质蛋白1、非结构蛋白1的磷酸化修饰位点和其生物学功能进行综述,为深入了解流感病毒复制周期及抗病毒药物研发提供理论基础.

关键词：磷酸化修饰流感病毒核蛋白(NP) 基质蛋白M1 非结构蛋白NS1

磷酸化修饰对山豆根多糖抗Ⅰ型鸭肝炎病毒效果的影响

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南京农业大学学报 2021年第2期44卷 322-330页

作者：何淼张宝康粟灵琳杜红旭明珂白景英刘家国王德云武毅南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095

[目的]山豆根多糖(Bush Sophora Root polysaccharide,BSRPS)具有良好的抗病毒作用,且硫酸化修饰可明显增强其抗病毒作用,但硫酸化修饰污染大,操作危险。本试验拟探究多聚磷酸盐法修饰对BSRPS抗病毒活性的影响。[方法]通过多聚磷酸盐法... 详细信息

[目的]山豆根多糖(Bush Sophora Root polysaccharide,BSRPS)具有良好的抗病毒作用,且硫酸化修饰可明显增强其抗病毒作用,但硫酸化修饰污染大,操作危险。本试验拟探究多聚磷酸盐法修饰对BSRPS抗病毒活性的影响。[方法]通过多聚磷酸盐法对BSRPS进行修饰,观察其理化性质并采用傅里叶红外光谱法分析其结构,通过MTT法和PCR法测定其体外抗Ⅰ型鸭肝炎病毒(duck hepatitis virusⅠ,DHAV-1)感染细胞的活性和对病毒增殖的影响,同时比较修饰前后山豆根多糖对DHAV-1感染雏鸭的保护作用。[结果]修饰后药物的理化性质变化及红外光谱结果表明,BSRPS经磷酸化修饰制备出pBSRPS,BSRPS和pBSRPS为500和15.63μg·mL-1时最大病毒抑制率分别达53.66%和57.87%,且pBSRPS抑制DHAV-1复制的作用也明显强于BSRPS(P磷酸化修饰可以更有效提高其对鸭病毒性肝炎的治疗效果,达到磷酸化修饰的效果。

关键词：鸭肝炎病毒山豆根多糖磷酸化修饰抗病毒氧化应激

蛋白质O-GlcNAc糖基化修饰对tau蛋白磷酸化修饰的影响

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生物化学与生物物理进展 2003年第4期30卷 623-628页

作者：钱慰刘飞朱俐龚成新金淑仪南通医学院生物化学教研室南通226001 Department of Neurochemistry NYS Institute for Basic Research in Developmental Disabilities New York 10314USA 南通医学院生物化学教研室南通226001Department of Neurochemistry NYS Institute for Basic Research in Developmental Disabilities New York 10314USA

蛋白质的O位N 乙酰葡萄糖胺 (O GlcNAc)糖基化修饰是一种新近发现的广泛存在于细胞核蛋白与细胞浆蛋白的蛋白质翻译后修饰 .其性质与经典的膜蛋白和分泌蛋白的糖基化修饰不同 ,而与蛋白质磷酸化修饰更相似 .O GlcNAc糖基化和磷酸化均修... 详细信息

蛋白质的O位N 乙酰葡萄糖胺 (O GlcNAc)糖基化修饰是一种新近发现的广泛存在于细胞核蛋白与细胞浆蛋白的蛋白质翻译后修饰 .其性质与经典的膜蛋白和分泌蛋白的糖基化修饰不同 ,而与蛋白质磷酸化修饰更相似 .O GlcNAc糖基化和磷酸化均修饰tau蛋白的丝氨酸和苏氨酸残基 ,通过改变O GlcNAc糖基化供体底物浓度以及其关键酶活性等方法 ,改变分化后成神经细胞样的PC12细胞中的蛋白质O GlcNAc糖基化修饰水平 ,然后用特异性识别不同位点磷酸化的tau蛋白抗体 ,进行蛋白质印迹分析来检测tau蛋白磷酸化水平的变化 .结果发现细胞内蛋白质O GlcNAc糖基化对tau蛋白磷酸化的影响 ,在不同的磷酸化位点其影响不同 .增加蛋白质O GlcNAc糖基化修饰导致tau蛋白大多数磷酸位点的磷酸化水平降低 ,反之亦然 .这些结果说明 ,tau磷酸化在大多数位点受到O GlcNAc糖基化修饰的负性调节 .

关键词：蛋白质糖基化修饰 tau蛋白磷酸化修饰

生物质谱结合IMAC亲和提取和磷酸酶水解分析蛋白质磷酸化修饰

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第5期35卷 459-466页

作者：王京兰张养军蔡耘李蕾刘尚义杨何义钱小红军事医学科学院放射医学研究所北京100850 军事医学科学院放射医学研究所

蛋白质磷酸化是生物体内非常重要的翻译后修饰方式 ,对磷酸化蛋白质的分析及磷酸化位点的确定有助于理解与其相关的生物功能。基质辅助激光解吸 /电离飞行时间质谱和电喷雾四极杆飞行时间质谱这两种生物质谱仪在蛋白质鉴定和翻译后... 详细信息

蛋白质磷酸化是生物体内非常重要的翻译后修饰方式 ,对磷酸化蛋白质的分析及磷酸化位点的确定有助于理解与其相关的生物功能。基质辅助激光解吸 /电离飞行时间质谱和电喷雾四极杆飞行时间质谱这两种生物质谱仪在蛋白质鉴定和翻译后修饰分析中发挥着重要作用。固相金属亲和色谱可选择性亲和提取肽混合物中的磷酸肽 ,结合磷酸酶水解实验和基质辅助激光解吸 /电离飞行时间质谱分析可确定肽混合物中的磷酸肽 ,最后用电喷雾四极杆飞行时间串联质谱分析磷酸肽的序列 ,结合数据库检索确定磷酸化位点。

关键词：生物质谱磷酸化修饰固相金属亲和色谱

黑木耳多糖的磷酸化修饰、结构表征及体外降糖活性

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食品科学 2022年第8期43卷 29-35页

作者：陈玥彤张闪闪李文意于文浩赵晓芳刘婷婷吉林农业大学食品科学与工程学院吉林长春130118 吉林省粮食精深加工与高效利用工程研究中心吉林长春130118 吉林省粮食精深加工与副产物高效利用技术创新重点实验室吉林长春130118 农业农村部食用菌加工技术集成科研基地吉林长春130118

利用加压剪切联合萃取技术提取的黑木耳多糖为原料,以三偏磷酸钠为交联剂,不同温度下进行磷酸化修饰,并对其进行结构表征及体外降血糖活性研究。结果表明:磷酸化黑木耳多糖主要由木糖、果糖、甘露糖以及葡萄糖组成的杂多糖,随着温度的... 详细信息

利用加压剪切联合萃取技术提取的黑木耳多糖为原料,以三偏磷酸钠为交联剂,不同温度下进行磷酸化修饰,并对其进行结构表征及体外降血糖活性研究。结果表明:磷酸化黑木耳多糖主要由木糖、果糖、甘露糖以及葡萄糖组成的杂多糖,随着温度的升高磷酸化黑木耳多糖相对分子质量明显下降,并出现三股螺旋结构。红外图谱显示在1205、898 cm^(-1)处出现了P=O及P-O-C的特征吸收峰。核磁共振光谱分析表明磷酸化修饰主要发生在C6位的羟基上,且在δ0~1.5范围内出现了磷酸基团中P的信号峰。扫描电镜结果表明修饰后黑木耳多糖表面形貌变化明显,相比修饰前多糖更加细小、破碎。且对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶具有较强的抑制作用,当PAAP-4质量浓度为5.0 mg/mL时,α-葡萄糖苷酶抑制率为56.89%,体外降血糖活性增强。

关键词：磷酸化修饰黑木耳多糖结构表征体外降血糖活性

14-3-3ε蛋白磷酸化修饰的生物质谱分析

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分析化学 2013年第11期41卷 1653-1658页

作者：李子健何鑫潘晨宇刘宁北京大学第三医院血管医学研究所卫生部心血管分子生物学与调节肽重点实验室分子心血管学教育部重点实验室心血管受体研究北京市重点实验室吉林大学化学学院吉林大学第二医院

本研究在HEK293细胞中过表达带有6个组氨酸标签的14-3-3ε蛋白,经镍离子亲和树脂富集和凝胶电泳等生物化学方法分离并富集目标14-3-3ε蛋白。利用特异性胰蛋白酶对14-3-3ε蛋白进行胶内水解后,采用TiO2亲和层析法,对蛋白水解混合物中的... 详细信息

本研究在HEK293细胞中过表达带有6个组氨酸标签的14-3-3ε蛋白,经镍离子亲和树脂富集和凝胶电泳等生物化学方法分离并富集目标14-3-3ε蛋白。利用特异性胰蛋白酶对14-3-3ε蛋白进行胶内水解后,采用TiO2亲和层析法,对蛋白水解混合物中的磷酸化修饰肽段进行富集,并利用生物质谱技术分析鉴定了14-3-3ε蛋白中的磷酸化修饰位点。结果表明,利用生物质谱技术,结合人工解谱的方法,能够高效、准确地鉴定HEK293细胞中过表达的14-3-3ε蛋白中的磷酸化修饰肽段的结构信息,确定了14-3-3ε蛋白中的12个磷酸化修饰位点,其中多个位点的磷酸化修饰为首次发现。

关键词：质谱 14-3-3ε蛋白磷酸化修饰

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质谱法分析大肠癌组织中踝蛋白的磷酸化修饰

分析化学 2012年第10期40卷 1500-1506页

作者：孙莉赵海丰郭宏华扬光远何成彦师庆红文雪王小婷赵丽纯吉林大学中日联谊医院佳木斯大学附属第一医院吉林大学药学院

踝蛋白的磷酸化修饰,特别是肿瘤等病理条件下的踝蛋白磷酸化状态,与肿瘤的发病、转移机理密切相关。本研究采用盐析、离子交换层析和电泳分离并纯化了人大肠癌组织中的踝蛋白(Talin),经胰酶水解获得其肽段混合物,进一步分别利用固定化F... 详细信息

踝蛋白的磷酸化修饰,特别是肿瘤等病理条件下的踝蛋白磷酸化状态,与肿瘤的发病、转移机理密切相关。本研究采用盐析、离子交换层析和电泳分离并纯化了人大肠癌组织中的踝蛋白(Talin),经胰酶水解获得其肽段混合物,进一步分别利用固定化Fe3+亲和层析和TiO2亲和层析在酸性条件下对其中磷酸化修饰肽段进行吸附,并以1%氨水进行洗脱。在Michrom Magic C18色谱柱上,以A:99%水+1%乙腈+0.1%甲酸和B:99%乙腈+1%水+0.1%甲酸两种流动相进行梯度洗脱分离,采用ESI质谱进行依赖数据的二级子离子扫描。结果显示,固定化Fe3+富集到8个磷酸化肽段而TiO2富集到9个磷酸化肽段。本研究提供了一种快速、准确地鉴定从人大肠癌组织中分离表征踝蛋白的方法。

关键词：质谱踝蛋白大肠癌磷酸化修饰

来源：博看期刊

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神经元蛋白质磷酸化修饰分析方法的初步研究

四川大学学报（医学版） 2004年第5期35卷 715-718页

作者：何涛李洪李蓉晖段承刚甘淋李娟宋杰泸州医学院基础医学院分子生物学实验室泸州646000 泸州医学院基础医学院生物化学教研室四川大学基础医学与法医学院生物化学教研室

目的　建立一种对神经细胞中的磷酸化蛋白质进行分离分析的方法。方法　培养新生乳小鼠神经细胞 ,加入 32 P- Na H2 PO4 2 .78× 10 6 Bq/ ml,37℃孵育 1.5 h。刺激组分别加入表皮生长因子 (EGF) 2 0 ng/ m l或胰岛素10 0 nm ol/ L,对... 详细信息

目的　建立一种对神经细胞中的磷酸化蛋白质进行分离分析的方法。方法　培养新生乳小鼠神经细胞 ,加入 32 P- Na H2 PO4 2 .78× 10 6 Bq/ ml,37℃孵育 1.5 h。刺激组分别加入表皮生长因子 (EGF) 2 0 ng/ m l或胰岛素10 0 nm ol/ L,对照组加入等量的培养基 ,作用不同时间后液氮终止反应。裂解细胞 ,用 Bio- Rad DC Protein Assaykit测定细胞蛋白质含量 ,双向电泳分离细胞蛋白。放射自显影。结果　 1双向电泳自显影图谱显示近数十个蛋白质斑点 ,绝大部分集中于 p H偏酸性和中性区域 ,p H4 .6～ 6 .5 ,其相对分子质量主要介于 2 0× 10 3～ 130× 10 3之间。2 EGF、胰岛素刺激不同时间后虽出现有磷酸化蛋白质斑点的增加或消失 ,但更多表现为某些磷酸化蛋白质斑点灰度的增强或减弱。 3对比分析发现 ,放射自显影图谱中只有少数斑点出现在双向电泳 Coom assie Brilliant BlueR- 2 5 0染色图谱中 ,提示神经细胞中的大多数磷酸化蛋白质为低丰度蛋白。结论　采用本研究建立的双向电泳和放射自显影技术可对神经细胞中的蛋白质可逆磷酸化修饰状态进行较为全面、动态的分析 ,方法灵敏、特异性强。

关键词：磷酸化修饰双向电泳放射自显影蛋白质组