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硫酸乙酰肝素与慢性心力衰竭患者心功能及高压氧治疗预后的关系

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中华航海医学与高气压医学杂志 2024年第1期31卷 77-81页

作者：张秀玲常志红郭庆平赵碧瑶长治医学院附属和济医院心血管内科长治046011 长治医学院附属和济医院护理部长治046011

目的探讨血清硫酸乙酰肝素(HS)水平与慢性心力衰竭(CHF)患者心功能及高压氧(HBO)治疗预后的关系。方法选取2020年12月至2021年12月长治医学院附属和济医院心血管内科收治的88例CHF患者作为观察组,入院后均予以常规对症治疗,然后予以HBO... 详细信息

目的探讨血清硫酸乙酰肝素(HS)水平与慢性心力衰竭(CHF)患者心功能及高压氧(HBO)治疗预后的关系。方法选取2020年12月至2021年12月长治医学院附属和济医院心血管内科收治的88例CHF患者作为观察组,入院后均予以常规对症治疗,然后予以HBO辅助治疗。并选取同期80例健康体检者作为对照组。随访半年,根据预后情况将CHF患者分为预后良好组(n=63)和预后不良组(n=25)。采用酶联免疫吸附法检测患者血清HS水平,采用单因素分析不同预后患者的临床资料及血清HS水平,然后应用多因素COX回归分析影响CHF患者HBO治疗预后不良的危险因素,再以预后为自变量,绘制接受者操作特征ROC曲线。结果观察组患者血清HS水平[(85.45±3.67)μg/L]明显高于对照组[(77.63±3.25)μg/L],差异有统计学意义(t=14.561,P1,P<0.05)。结论血清HS水平随着CHF患者心功能分级的增加而逐渐升高,且与HBO治疗预后密切相关。

关键词：硫酸乙酰肝素慢性心力衰竭心功能高压氧治疗预后

葛兰心宁软胶囊对PCI后合并冠状动脉微血管疾病的冠心病患者血浆多配体蛋白聚糖1、多配体蛋白聚糖4和硫酸乙酰肝素的影响

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实用心脑肺血管病杂志 2024年第5期32卷 88-92页

作者：姜瑞嘉程功王依阳蒋红英赵慧梁宸源许百灵方纬陕西省人民医院心血管内科陕西省西安市710068 密苏里大学哥伦比亚分校核科学暨工程研究所美国哥伦比亚65211 中国医学科学院阜外医院核医学科北京市100037

目的分析葛兰心宁软胶囊对PCI后合并冠状动脉微血管疾病(CMVD)的冠心病患者血浆多配体蛋白聚糖(SDC)1、SDC4、硫酸乙酰肝素(HS)的影响。方法选取2021年7月—2022年9月陕西省人民医院心血管内科收治的PCI后合并CMVD的冠心病患者78例为研... 详细信息

目的分析葛兰心宁软胶囊对PCI后合并冠状动脉微血管疾病(CMVD)的冠心病患者血浆多配体蛋白聚糖(SDC)1、SDC4、硫酸乙酰肝素(HS)的影响。方法选取2021年7月—2022年9月陕西省人民医院心血管内科收治的PCI后合并CMVD的冠心病患者78例为研究对象。采用随机数字表法将患者分为葛兰心宁软胶囊组(38例)和对照组(40例)。对照组接受常规治疗,葛兰心宁软胶囊组在常规治疗的基础上加服葛兰心宁软胶囊,两组治疗时间均为2个月。比较两组一般资料、临床疗效,治疗前后血浆SDC1、SDC4、HS及其差值,治疗期间不良反应发生率。结果葛兰心宁软胶囊组临床疗效优于对照组(P0.05)。结论葛兰心宁软胶囊可有效降低PCI后合并CMVD的冠心病患者血浆SDC1、SDC4、HS。

关键词：冠心病冠状动脉微血管疾病经皮冠状动脉介入治疗葛兰心宁软胶囊多配体蛋白聚糖1 多配体蛋白聚糖4 硫酸乙酰肝素

乙酰肝素酶、硫酸乙酰肝素和多配体蛋白聚糖-1在肺癌患者血清中的表达及诊断价值

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滨州医学院学报 2024年第2期47卷 122-125页

作者：李涛高萌翟乃亮滨州医学院附属医院呼吸与危重症医学科山东滨州256603 烟台山医院呼吸与危重症医学科山东烟台264000

目的探讨多配体蛋白聚糖-1(SDC-1)、硫酸乙酰肝素(HS)以及乙酰肝素酶(HPA)在非小细胞肺癌(NSCLC)及小细胞肺癌(SCLC)患者血清中的水平及其对诊断及预后的预测价值。方法收集10例健康对照组及76例肺癌患者的血清标本,通过ELISA方法检测... 详细信息

目的探讨多配体蛋白聚糖-1(SDC-1)、硫酸乙酰肝素(HS)以及乙酰肝素酶(HPA)在非小细胞肺癌(NSCLC)及小细胞肺癌(SCLC)患者血清中的水平及其对诊断及预后的预测价值。方法收集10例健康对照组及76例肺癌患者的血清标本,通过ELISA方法检测血清中HS、SDC-1、HPA表达水平。采用Mann-Whitney U检验进行组间比较。结果肺癌患者血清HS、SDC-1及HPA含量均高于健康对照组(P<0.05);HS、HPA单因素用于诊断肺癌时的AUC分别为0.819和0.930,HS、SDC-1、HPA三者联合诊断肺癌时AUC为0.974。结论HS、SDC-1、HPA三者联合检测对肺癌的诊断及预后具有较好的预测价值。

关键词：多配体蛋白聚糖-1 硫酸乙酰肝素乙酰肝素酶肺癌

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硫酸乙酰肝素的组成及其对病毒感染的影响

中国兽医科学 2023年第12期53卷 1475-1479页

作者：黄磊袁红宫晓华包慧芳王利豪王涛高洁李平花孙普李冬陈应理刘在新卢曾军白兴文中国农业科学院兰州兽医研究所农业农村部动物病原生物学重点实验室WOAH/国家口蹄疫参考实验室动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 兰州大学动物医学与生物安全学院甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

硫酸乙酰肝素(HS)是一类由多个二糖重复单元组成的线性硫酸化异构多糖,广泛存在于哺乳动物细胞表面和细胞外基质中。HS大分子通过相互作用识别并结合呈正电荷特性的病毒粒子,增强其对宿主细胞的感染能力,因此HS可作为病毒感染靶细胞的... 详细信息

硫酸乙酰肝素(HS)是一类由多个二糖重复单元组成的线性硫酸化异构多糖,广泛存在于哺乳动物细胞表面和细胞外基质中。HS大分子通过相互作用识别并结合呈正电荷特性的病毒粒子,增强其对宿主细胞的感染能力,因此HS可作为病毒感染靶细胞的特异性受体。已有研究证实,HS参与口蹄疫病毒(FMDV)等多种病毒的吸附和入胞过程,在病毒感染中发挥重要作用。本文概述了HS的组成及其对病毒感染的影响,以期为HS的研究提供参考。

关键词：硫酸乙酰肝素受体病毒感染

硫酸乙酰肝素对中性粒细胞杀伤白念珠菌菌丝的影响及机制研究

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硫酸乙酰肝素对中性粒细胞杀伤白念珠菌菌丝的影响及机制研究

作者：何宇飞中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

研究背景及目的:念珠菌是一类常见的条件致病真菌,可以导致皮肤、黏膜、深部器官及血液等多处感染,这些疾病被统称为“念珠菌病”。目前,白念珠菌仍是临床检出率最高的念珠菌病病原体,正持续威胁着人们的健康。白念珠菌通常以酵母态定... 详细信息

研究背景及目的:念珠菌是一类常见的条件致病真菌,可以导致皮肤、黏膜、深部器官及血液等多处感染,这些疾病被统称为“念珠菌病”。目前,白念珠菌仍是临床检出率最高的念珠菌病病原体,正持续威胁着人们的健康。白念珠菌通常以酵母态定植于黏膜和皮肤表面,在一定条件下可以通过由酵母到菌丝的形态转换来提高自身毒力,加强对宿主的侵袭。与此同时,宿主免疫随之启动,用以清除感染。中性粒细胞是机体固有免疫的重要成员之一,能够通过吞噬、脱颗粒、产生活性氧、形成中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)等多种方式实现对白念珠菌的杀伤。然而,既往研究发现了一种奇怪的现象:在阴道白念珠菌感染中,高中性粒细胞水平仅仅对应了更显著的局部炎症,而未能降低真菌负荷。对此,研究人员建立了白念珠菌阴道黏膜感染小鼠模型并进行了一系列实验,最终发现局部环境中一定水平的硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)能够抑制中性粒细胞对菌体的识别及杀伤。截至目前,上述实验结果尚未在人中性粒细胞与白念珠菌的相互作用中得到检验。HS是一种线性多糖,通常以硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparan sulfate proteoglycan,HSPG)的形式广泛分布于细胞表面和细胞外基质(extracellular matrix,ECM),其中也包括了阴道局部环境。鉴于菌丝是白念珠菌致病的关键形态,要想控制感染必先保证对菌丝的有效杀伤,故而我们将关注点放在了白念珠菌菌丝、人中性粒细胞与HS三者之间。近年来多项研究证实,与能够被中性粒细胞吞噬杀灭的酵母不同,菌丝由于体积过大无法被吞噬,NETs介导的胞外杀伤是中性粒细胞将其清除的主要方式。因此,HS对中性粒细胞杀伤白念珠菌菌丝的影响或与NETs有关。为明确人体局部环境中中性粒细胞无法有效控制白念珠菌感染的原因,我们设计体外实验对HS在中性粒细胞杀伤白念珠菌菌丝中的影响及潜在机制进行探究。本课题拟提取健康人外周血中性粒细胞,检验该细胞对白念珠菌菌丝的体外杀伤活性,并评估HS干预对此的影响;同时体外诱导中性粒细胞释放NETs,检测NETs对白念珠菌菌丝的胞外杀伤,分别分析HS干预对NETs形成以及NETs胞外杀伤菌丝的影响,从而形成对其内在机制的初步探索。实验研究主要包括以下两个部分:第一部分硫酸乙酰肝素对中性粒细胞体外杀伤白念珠菌菌丝的影响方法:1.抽取健康人外周血,以密度梯度离心法从中提取中性粒细胞。获得细胞悬液后,行瑞氏-吉姆萨染色以鉴别细胞类型,行台盼蓝染色进行活性分析,行流式细胞术检测进行纯度分析。2.将白念珠菌酵母诱导为菌丝态,以不同的比例关系与中性粒细胞进行共孵育,借助平板菌落计数法评估中性粒细胞对白念珠菌菌丝的杀伤活性,并选取适宜的MOI。3.在适宜MOI条件下的共孵育环境中,施加硫酸乙酰肝素这一干预,检验其对人外周血中性粒细胞体外杀伤白念珠菌菌丝的影响。结果:1.成功提取人外周血中性粒细胞,细胞活性良好,流式检测显示其纯度达99%以上。2.人外周血中性粒细胞在体外具有对白念珠菌菌丝的杀伤活性;当MOI=0.1时,其杀伤作用较为显著,故而该数值可作为适宜MOI在后续实验中选用。3.硫酸乙酰肝素对人外周血中性粒细胞体外杀伤白念珠菌菌丝具有抑制作用。第二部分硫酸乙酰肝素通过抑制NETs形成从而减弱中性粒细胞对白念珠菌菌丝的体外杀伤方法:1.使用SYTOX Green染料对中性粒细胞与白念珠菌菌丝共孵育样本进行荧光染色,在激光共聚焦显微镜下观察其中的NETs结构,并通过扫描电子显微镜技术加以验证,明确以上NETs检测方法的可行性。2.分别以佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)与白念珠菌菌丝为刺激因素诱导中性粒细胞释放NETs,设置不加刺激因素的对照组,同时在各组内设置加HS与不加HS两个亚组,分别进行组内比较和组间比较,分析HS对NETs释放过程产生的影响。3.以PMA为诱导剂刺激中性粒细胞释放NETs,加入适量的白念珠菌菌丝,借助平板菌落计数法比较加HS与不加HS两组间的菌量差异,分析HS对已释放至胞外的NETs发挥菌丝杀伤作用的影响。结果:1.白念珠菌菌丝可在体外诱导人外周血中性粒细胞释放NETs;单一使用SYTOX Green染料进行荧光染色即可实现对NETs结构的定位。2.相同条件下作用3h后,白念珠菌菌丝与PMA的NETs诱导能力基本相当;HS可抑制菌丝诱导下的NETs形成,但对PMA的NETs诱导能力无影响。***对已释放至胞外的NETs发挥菌丝杀伤作用无影响。结论:硫酸乙酰肝素通过抑制白念珠菌菌丝诱导下的NETs形成,从而削弱了人外周血中性粒细胞对菌丝的体外杀伤活性。

关键词：白念珠菌菌丝中性粒细胞中性粒细胞胞外诱捕网硫酸乙酰肝素

硫酸乙酰肝素对NLRP3炎性小体的激活作用及其机制研究

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硫酸乙酰肝素对NLRP3炎性小体的激活作用及其机制研究

作者：赵莉君电子科技大学

学位级别：硕士

目的:明确硫酸乙酰肝素（Heparan Sulfate,HS）对NLRP3炎性小体的激活作用并阐明其确切机制,为HS相关疾病的发生发展机制的阐释提供新的思路,并为其药物治疗提供新的靶点。方法:（1）经PMA诱导的人单核细胞THP-1经HS单独处理或与其它信... 详细信息

目的:明确硫酸乙酰肝素（Heparan Sulfate,HS）对NLRP3炎性小体的激活作用并阐明其确切机制,为HS相关疾病的发生发展机制的阐释提供新的思路,并为其药物治疗提供新的靶点。方法:（1）经PMA诱导的人单核细胞THP-1经HS单独处理或与其它信号二诱导剂共处理后,通过ELISA法检测细胞IL-1β的分泌量来初步明确HS对NLRP3炎性小体的激活作用;（2）以MCC950为对照药,THP-1细胞在经HS和nigericin共刺激后,分别采用ELISA检测细胞IL-1β的分泌、FLICA检测caspase-1的激活、ICC观察NLRP3的寡聚化来进一步明确HS对NLRP3炎性小体的激活作用;（3）在加入NF-κB抑制剂的条件下,通过ELISA检测THP-1细胞经过HS处理后IL-1β的分泌量;采用Real-time PCR检测细胞经HS处理不同时间后NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β的基因表达水平;采用Western Blot检测细胞经HS刺激后胞浆中IκB-α、p-IκB-α和胞核中p65和ac-p65的表达,以此明确HS是否通过NF-κB介导的转录途径诱导NLRP3炎性小体预激活;（4）在加入去泛素化酶抑制剂PR-619的条件下利用ELISA检测THP-1细胞经过HS处理后IL-1β的分泌量;THP-1细胞经HS处理后,分别采用co-IP和ICC检测细胞中NLRP3泛素化水平的变化,以此明确HS是否通过去泛素化的非转录途径诱导NLRP3炎性小体预激活。结果:（1）HS单独刺激或者和ATP、MSU、PA以及LPS等共刺激THP-1细胞并不能使IL-1β的分泌水平显著升高,仅在和nigericin共刺激细胞时能浓度依赖地使IL-1β的分泌水平显著升高,表明HS的作用环节是促进NLRP3的预激活而非组装活化。（2）细胞经HS和nigericin共刺激后IL-1β分泌水平显著上升,NLRP3的寡聚化和caspase-1活性显著增强,上述效应可被NLRP3抑制剂MCC950显著抑制,表明HS和nigericin共刺激可激活NLRP3炎性小体并释放出成熟的IL-1β。（3）HS处理后细胞caspase-1和IL-1β两种基因表达水平显著升高、IκBα磷酸化、p65的乙酰化以及p65进入细胞核的量显著增加,表明HS可通过NF-κB介导的转录途径诱导NLRP3炎性小体预激活;（4）HS和nigericin共处理引起的细胞IL-1β分泌水平升高可被PR-619显著抑制,表明去泛素化调节参与了HS对NLRP3炎性小体的预激活;HS处理THP-1细胞后NLRP3的泛素化修饰水平显著降低,与泛素的细胞内共定位明显减少,表明HS通过去泛素化诱导了NLRP3炎性小体的预激活。结论:HS可启动NLRP3炎性小体的预激活,联合nigericin可激活NLRP3炎性小体;HS一方面通过NF-κB介导的转录途径促进NLRP3炎性小体的预激活,另一方面还可通过诱导NLRP3去泛素化的非转录途径启动NLRP3炎性小体的预激活。

关键词：硫酸乙酰肝素 NLRP3炎性小体预激活核因子-κB 去泛素化

理性设计提高硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶催化活性的研究

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理性设计提高硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶催化活性的研究

作者：王萱北京化工大学

学位级别：硕士

肝素类药物目前是临床常用的抗凝血药品,如何通过生物合成法高效的合成肝素类抗凝血药一直是人们所关注的问题。3-氧-磺基转移酶I(3-OST-1)是合成具有抗凝活性的硫酸乙酰肝素的必要工具酶,因而增加3-OST-1的酶表达量、提高3-OST-1的酶... 详细信息

肝素类药物目前是临床常用的抗凝血药品,如何通过生物合成法高效的合成肝素类抗凝血药一直是人们所关注的问题。3-氧-磺基转移酶I(3-OST-1)是合成具有抗凝活性的硫酸乙酰肝素的必要工具酶,因而增加3-OST-1的酶表达量、提高3-OST-1的酶活性且拓展其底物广谱性对于肝素类药物的生产与相关药物的研发具有深远意义。本课题采用理性设计策略,通过分子对接和突变能模拟计算的方法解析3-OST-1与底物之间的结合模式,设计出11种突变策略,通过大肠杆菌表达体系将3-OST-1重组蛋白野生型和突变株表达,成功表达出了可溶的有活性的3-OST-1重组蛋白野生型和突变株,并对表达产物进行了纯化及酶学活性的初步研究。经探究,3-OST-1重组蛋白的野生型和突变株在终浓度0.5 mM IPTG、16℃诱导20 h条件下适宜表达,之后进行纯化后的重组蛋白定量和酶活测定,发现3-OST-1重组蛋白突变株的酶量相比野生型提高2-4倍,酶的活性也提高了数十倍。综上,本研究成功构建出适宜3-OST-1的原核表达体系,并通过理性设计提高了3-OST-1的酶催化活性,对于提高肝素类药物生产效率及探究肝素生物合成方式具有重要意义。

关键词：硫酸乙酰肝素磺基转移酶 3-OST-1 表达理性设计

硫酸乙酰肝素聚合物胶束的制备及其性能的研究

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中国药学杂志 2016年第15期51卷 1302-1307页

作者：王骞邱立朋黄燕赵丽朱梦琴陈敬华江南大学药学院江苏无锡214122

目的合成硫酸乙酰肝素-维生素E琥珀酸酯(heparan sulfate-vitamin E succinate,HDV)两亲性材料,包载多柔比星形成聚合物胶束,并对其制剂学性质进行考察。方法通过酰胺反应,合成HDV载体,利用核磁对其结构进行确证。选择超声法制备载多柔... 详细信息

目的合成硫酸乙酰肝素-维生素E琥珀酸酯(heparan sulfate-vitamin E succinate,HDV)两亲性材料,包载多柔比星形成聚合物胶束,并对其制剂学性质进行考察。方法通过酰胺反应,合成HDV载体,利用核磁对其结构进行确证。选择超声法制备载多柔比星的聚合物胶束,考察胶束的粒径、形貌、电位、载药量、包封率以及体外释放行为,并对其体外细胞毒性进行了评价。结果成功地合成了HDV两亲性聚合物材料,制备的载药胶束平均粒径为(105.0±7.3)nm,PDI值为(0.239±0.484),电位值为(-21.4±2.6)m V,包封率为(76.22±0.76)%,载药量为(9.53±0.58)%;体外药物释放实验结果表明,载药胶束具有良好的缓释作用。细胞毒性实验显示,空白胶束对正常细胞和肿瘤细胞都几乎没有毒性,而载药胶束具有较好的抗肿瘤活性。结论 HDV聚合胶束可以有效地包载抗肿瘤药物多柔比星,具有良好的缓释特性和抗肿瘤活性,可作为一种潜在应用价值的抗肿瘤药物载体。

关键词：硫酸乙酰肝素维生素E琥珀酸酯聚合物胶柬多柔比星

硫酸乙酰肝素协同细胞因子对脐血造血细胞体外生长的作用

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中华血液学杂志 2002年第10期23卷 531-533页

作者：文珠戴育成李洁唐燕华江西省医学科学研究所血液研究室南昌330006 江西医学院第二附属医院

目的　探讨硫酸乙酰肝素 (HS)协同细胞因子对脐血造血细胞体外生长的影响。方法　细胞因子 (rhIL 3,rhIL 1β ,rhIL 6和SCF)、骨髓基质细胞培养上清 (SN) +细胞因子、SN、HS +细胞因子 4组分别与脐血造血细胞培养 ,检测细胞增殖、细胞... 详细信息

目的　探讨硫酸乙酰肝素 (HS)协同细胞因子对脐血造血细胞体外生长的影响。方法　细胞因子 (rhIL 3,rhIL 1β ,rhIL 6和SCF)、骨髓基质细胞培养上清 (SN) +细胞因子、SN、HS +细胞因子 4组分别与脐血造血细胞培养 ,检测细胞增殖、细胞表面标志和造血祖细胞集落生长。结果　培养至第14天细胞增殖达高峰 ,4个组细胞总数依次增加了 134 .5 ,171.3,81.5和 16 7.2倍。第 2 1天细胞数量SN组明显下降。CD3 4+细胞数第 7天已升高 ,第 14天达高峰 ,依次增加了 6 8.4% ,82 .5 % ,6 9.8%和79 3% ,第 2 1天仍为 5 6 .2 % ,71.7% ,12 .3%和 73.7%。CD3 3+细胞数第 14天达高峰 ,依次增加了80 2 % ,6 8.6 % ,81.6 %和 70 .3% ,第 2 1天时仍维持在第 14天水平。CD3 8+细胞数第 7天时比培养前增加了 6 6 .6 % ,73.8% ,70 .4%和 71.9% ,第 14至第 2 1天均维持该水平。扩增 1周各组CFU GM产率均有提高 ,2周达最高 ,依次增加了 2 5 0 % ,2 79% ,2 17%和 2 73%。第 3周仍有 15 1% ,2 40 % ,145 %和2 31%。结论　SN与细胞因子联用对脐血造血细胞增殖的促进作用明显强于两者单用。

关键词：硫酸乙酰肝素胎血造血细胞体外生长