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石磺营养价值、活性物质的研究现状及开发前景

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江苏农业科学 2013年第8期41卷 14-17页

作者：孙变娜沈和定吴洪喜刘宸上海海洋大学水产与生命学院上海201306 浙江省海洋水产养殖研究所浙江温州325005

本文分析了石磺科贝类的资源利用状况、营养价值、功效成分以及保健功能,系统地综述了其黏液、肉体及卵群中的生物活性物质研究现状,简述了瘤背石磺产品的开发现状,展望了瘤背石磺这一海洋生物资源诱人的研发前景。通过石磺资源的增殖... 详细信息

本文分析了石磺科贝类的资源利用状况、营养价值、功效成分以及保健功能,系统地综述了其黏液、肉体及卵群中的生物活性物质研究现状,简述了瘤背石磺产品的开发现状,展望了瘤背石磺这一海洋生物资源诱人的研发前景。通过石磺资源的增殖保护、高值化开发,实现石磺资源的可持续利用,将产生良好的社会效益和经济效益。

关键词：石磺营养价值活性物质保健功能研究现状开发前景

石磺科贝类营养价值评价、重金属净化及呼吸机制的初步研究

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石磺科贝类营养价值评价、重金属净化及呼吸机制的初步研究

作者：管菊上海海洋大学

学位级别：硕士

石磺隶属于软体动物门（Mollusca）、腹足纲(Gastropoda)、肺螺亚纲(Pulmonata)，石磺总科（Onchidioidea）、石磺科（Onchidiidae），为裸露无壳、具有肺的贝类，主要栖息于海洋沿岸，是水生和陆生的过渡带物种。石磺具有较高营养价值... 详细信息

石磺隶属于软体动物门（Mollusca）、腹足纲(Gastropoda)、肺螺亚纲(Pulmonata)，石磺总科（Onchidioidea）、石磺科（Onchidiidae），为裸露无壳、具有肺的贝类，主要栖息于海洋沿岸，是水生和陆生的过渡带物种。石磺具有较高营养价值和经济价值，并且其呼吸机制在生物从海洋向陆地进化方面也有着重要的研究价值。为进一步了解石磺科贝类的食品安全以及呼吸机制，本实验就石磺科贝类的营养成分及其价值评价、重金属超标情况及其净化以及耗氧率进行了初步研究。主要研究结果如下：（1）2012年4月至5月，采集里氏拟石磺（Paraoncidium reevesii）、平疣桑椹石磺（Platevindex mortoni）和紫色疣石磺（Peronia verruculata）样品（广东湛江）以及瘤背石磺（Onchidium struma）样品（上海崇明），经活体解剖取四种石磺肌肉组织，对其进行水分、灰分、粗脂肪、粗蛋白、总糖、氨基酸、矿质元素的测定。结果表明：四种石磺均是高蛋白低脂肪、富含水分及矿物质元素的贝类，且瘤背石磺的总糖含量显著高于另外三种石磺。四种石磺肌肉组织蛋白质含量高，蛋白质氨基酸组成全面、呈味氨基酸含量高、必需氨基酸含量符合FAO/WHO理想模式，必需氨基酸组成比例适宜，属于优质蛋白质。四种石磺肌肉组织中矿质元素的含量较丰富，尤其是Ca、Mg含量特别高。说明四种石磺具有较高的营养价值，可作为特色海鲜或高档滋补品。（2）通过底泥添加木鱼石土（富含锌、硒等）、饲料添加蛋白核小球藻粉以及维生素C对瘤背石磺体内Cd和Cu进行生物净化，探究不同实验组对瘤背石磺体内Cd和Cu的净化效果。结果表明，对照组单纯用玉米粉暂养对瘤背石磺重金属的排出有一定的效果，但远远低于试验组在底泥中添加木鱼石土、在饲料中添加蛋白核小球藻粉及维生素C的效果。在瘤背石磺产品生产过程中，通过在底泥中添加木鱼石土、在饲料中添加蛋白核小球藻粉及维生素C能高效的降低其体内重金属镉和铜的含量，达到可食用的目的，保证食品安全。（3）试验在温度22℃，盐度30条件下的密闭容器内进行，溶氧量采用Winkler碘量法测定。分别对不同规格四种石磺：瘤背石磺（Onchidium struma）、平疣桑椹石磺（Platevindex mortoni）、里氏拟石磺（Paraoncidium reevesii）、紫色疣石磺（Peronia verruculata）的水下呼吸耗氧率进行了测定。结果表明：四种石磺单位体重的表皮呼吸耗氧率均随体重的增加而降低;在相同条件下，四种石磺耗氧率的比较发现，紫色疣石磺、瘤背石磺以及平疣桑椹石磺在3h时，耗氧率降到最低，分别为（0.126±0.014）mg/(g·h)、（0.111±0.011）mg/(g·h)、（0.081±0.006）mg/(g·h)，里氏拟石磺在4h时降到最低，为（0.098±0.015）mg/(g·h);紫色疣石磺的耗氧率在各时间段均明显高于其他三种石磺，其次为瘤背石磺、里氏拟石磺、平疣桑椹石磺;石磺在水下时用表皮呼吸，且紫色疣石磺的树枝状鳃也参与了呼吸。

关键词：石磺营养价值评价重金属净化铜镉表皮呼吸耗氧率

基于28S rDNA部分序列的石磺科系统发育研究

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生物技术通报 2010年第6期26卷 172-178页

作者：陈诚沈和定吴文健魏峦峦王玲上海海洋大学水产与生命学院上海201306

采用PCR技术对采集自中国大陆沿海5地8个群体石磺的28S rDNA部分序列进行扩增。将测序结果与Gen-Bank中的另外3条石磺科贝类的对应序列一起,以小鼠28S rDNA基因序列进行参照,截取D1、D2、D3区域,拼接后进行比对分析。在获得的689bp的序... 详细信息

采用PCR技术对采集自中国大陆沿海5地8个群体石磺的28S rDNA部分序列进行扩增。将测序结果与Gen-Bank中的另外3条石磺科贝类的对应序列一起,以小鼠28S rDNA基因序列进行参照,截取D1、D2、D3区域,拼接后进行比对分析。在获得的689bp的序列中,有76个变异位点,28个简约信息位点,A+T平均含量为30.9%,C+G平均含量为69.0%。以分类关系较近的菊花螺科(Siphonaria alternate)为外群,用NJ、MP、ML和贝叶斯法构建分子系统树。4种方法得到的进化树拓扑结构很相似,得到的结果也与沈和定提出的中国大陆沿海石磺科贝类可划分为Peronia、Platevindex、Onchidium、Paraoncidium4个属的观点基本一致。同时,28S rDNA部分序列的系统分析还显示,4个属中Peronia属与Paraoncidium属亲缘关系较近,Platevindex属与Onchidium属关系比较近。

关键词： 28S rDNA D区石磺系统发育

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海南岛3种石磺肌肉组织营养成分分析

海洋科学 2017年第12期41卷 104-109页

作者：陈德力郑威冯剑刘洋洋王小兵中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所海南分所海南省南药资源保护与开发重点实验室海南海口570311 海南大学材料与化工学院海南海口570228

参照国家食品营养成分分析相关标准,结合液相色谱仪,元素分析仪,电感耦合等离子光谱仪等测定海南岛采集的瘤背石磺(Onchidium struma),紫色疣石磺(Peronia verruculata),平疣桑葚石磺(Platevindex mortoni)3种石磺肌肉组织中营养成分。... 详细信息

参照国家食品营养成分分析相关标准,结合液相色谱仪,元素分析仪,电感耦合等离子光谱仪等测定海南岛采集的瘤背石磺(Onchidium struma),紫色疣石磺(Peronia verruculata),平疣桑葚石磺(Platevindex mortoni)3种石磺肌肉组织中营养成分。结果表明:海南岛3种石磺均属于高蛋白质低脂肪的海产品,蛋白质含量达65.0%以上,其中以平疣桑葚石磺蛋白质含量最高;瘤背石磺肌肉组织多糖含量高达30.96%±1.48%,显著高于其他2种石磺;3种石磺肌肉组织中氨基酸组成全面,且以呈味氨基酸含量最高,均达5.60%以上;3种石磺肌肉组织均含有丰富的矿质元素,其中以钙和镁元素含量最高,含量达20~30 g/kg,同时钠和钾元素含量达3.0~6.5 g/kg。海南岛3种石磺均具有丰富的营养价值,其中以高蛋白高多糖低脂肪的瘤背石磺最具有开发前景。

关键词：石磺肌肉组织营养成分海南岛

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盐度对石磺胚胎发育的影响

上海水产大学学报 2006年第3期15卷 297-302页

作者：沈和定陈汉春陈贤龙冉福施志仪熊柳平王飞上海水产大学生命科学与技术学院上海200090 浙江省慈溪市水产技术推广中心浙江慈溪315300

28℃水温下，实验室内比较观察了盐度为0、3、6、9、15、20、30、40八组水体中石磺（Onchidium sp．）受精卵的胚胎发育状况，并对囊胚期的胚胎进行了低盐度（0、3、6、9）培育试验。结果表明：石磺受精卵在不同盐度水体中的胚胎发育状... 详细信息

28℃水温下，实验室内比较观察了盐度为0、3、6、9、15、20、30、40八组水体中石磺（Onchidium sp．）受精卵的胚胎发育状况，并对囊胚期的胚胎进行了低盐度（0、3、6、9）培育试验。结果表明：石磺受精卵在不同盐度水体中的胚胎发育状况有很大的差异，盐度0组中的胚胎畸形率高达97％±2％，盐度3组中的胚胎畸形率达75％±2％，盐度30组中停止发育的胚胎（即单卵黄球胚胎）比例为60％±4％，盐度40组中停止发育胚胎的比例达98％±2％，盐度6、9、15、20组的胚胎能正常发育，孵化率均在90％以上；石磺卵群孵化的适宜盐度范围为6～20。囊胚期的胚胎适应低盐度的能力稍强，盐度0组中的囊胚期胚胎分裂球解体，不能正常发育；盐度3、6、9组中的囊胚期胚胎能正常发育。盐度为23．4和27．4的自然海水环境中，石磺胚胎也能正常发育和孵化。

关键词：石磺盐度胚胎发育囊胚期畸形率

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石磺进化相关基因的克隆及表达分析

石磺进化相关基因的克隆及表达分析

作者：李杰上海海洋大学

学位级别：硕士

进化论观点认为生命起源于海洋,生物从水栖向陆栖进化,两栖类是进化过程中产生的过渡态物种。石磺科(Onchidiidae)贝类,隶属于软体动物门(Mollusca)、腹足纲(Gastropoda)、肺螺亚纲(Pulmonata)、缩眼目(Systellommatophora),其幼虫生活... 详细信息

进化论观点认为生命起源于海洋,生物从水栖向陆栖进化,两栖类是进化过程中产生的过渡态物种。石磺科(Onchidiidae)贝类,隶属于软体动物门(Mollusca)、腹足纲(Gastropoda)、肺螺亚纲(Pulmonata)、缩眼目(Systellommatophora),其幼虫生活在水中,变态发育后具有明显的两栖性,被认为是无脊椎动物由浅海向陆地进化的过渡类群,具有重要的学术价值。我国华东地区分布着瘤背石磺(Onchidium struma)、平疣桑椹石磺(Platevindex mortoni)、里氏拟石磺(Paraoncidium reevesii)和紫色疣石磺(Peronia verruculata),生存环境由潮间带向潮上带迁移,产生出具有时空代表性的表型差异。本论文依据石磺转录组数据库,开发出四种石磺间表型进化相关基因,Os-NMHC,Os-RYR,Os-IP3R,Os-MEK,Os-IP3K的cDNA序列,通过RT-PCR技术探究基因的种间差异表达趋势,从基因表达水平探究石磺表型进化差异的同时,也初步地探究了NMHC基因亚型进化节点问题以及相似钙调蛋白RYR和IP3R基因的进化趋势。首次于石磺科贝类中克隆出一条差异表达的Ⅱ型非肌肉型肌球蛋白重链基因(NMHCⅡ)的cDNA全长,将其命名为Os-NMHC基因。其序列全长6057bp,包括5733bp的开放阅读框,236bp的5’端非翻译区,88bp的3’端非翻译区,共编码1910个氨基酸;预测蛋白质等电点为5.26,相对分子质量为220.46KD;通过Phyre2程序和Pymol软件构建蛋白质三级结构图,预测蛋白质二级结构以α螺旋和β折叠为主;通过Clustalx和dnaMAN软件进行氨基酸序列比对,发现其与爪蟾NMHC II A序列一致度为60.37%,与爪蟾NMHC II B序列相似度为61.47%;通过Bayes软件构建系统进化树,发现其与加州海兔亲缘关系最近。通过QRT-PCR技术检测,发现该基因在四种石磺的背部、腹部、腹足部、肺囊、心脏、神经节中均有不同程度的表达。种间表达水平与进化趋势相一致,依次为:瘤背石磺≥平疣桑椹石磺>里氏拟石磺>紫色疣石磺。对于石磺Os-NMHC基因的研究,将有助于NMHC亚型进化节点问题的探究,并为石磺科贝类由浅海向湿地进化的机制研究提供新视角。RYR和IP3R是两种结构相似、功能相近的钙调蛋白,通过RACE技术于瘤背石磺中开发出Os-RYR和Os-IP3R的cDNA3’末端保守区序列。Os-RYR核酸序列1253bp,包括83bp的3’非编码区,翻译氨基酸残基376个,与加州海兔RYR末端保守区序列一致度为94%。Os-IP3R核酸序列4574bp,包括1561bp的3’非编码区,翻译936个氨基酸残基,与加州海兔IP3R末端保守区序列一致度为85%。Clustal omega在线比对,Os-RYR和Os-IP3R钙离子通道在GXRXGGGXGD处的序列高度保守,证明该序列对于形成离子通道具有重要作用。Os-IP3R离子通道保守区与加州海兔IP3R离子通道保守区序列相似度为94%,蛋白质三级结构重合度极高。QRT-PCR分析结果显示,Os-RYR和Os-IP3R在紫色疣石磺中表达水平均最低,Os-RYR在石磺物种间的表达水平不具有梯度趋势,Os-IP3R在瘤背石磺、平疣桑椹石磺、紫色疣石磺中表达量呈梯度下降趋势。Os-IP3R/Os-RYR表达百分比在紫色疣石磺、平疣桑椹石磺、瘤背石磺中呈梯度上升趋势,说明功能相同结构相似的两种钙调蛋白基因Os-IP3R和Os-RYR,在石磺由浅海向湿地进化过程中,对Os-IP3R的钙调功能呈现增加的趋势,其表达具有一定得趋向性。以高等动物VEGF信号通路分子为基础,结合石磺转录组数据库,认为石磺中VEGF信号通路(血管内皮生长因子信号通路)中不存在IP3K/AKT和mTOR通路途径,并筛选出与钙调蛋白Os-IP3R具有互作关系的Os-IP3K通路分子以及表皮生长相关的下游通路分子Os-MEK。克隆瘤背石磺Os-MEK核酸序列全长1201bp,包括40bp 5’的非编码区和83bp的3’非编码区,共编码368个氨基酸残基,与加州海兔MEK基因编码氨基酸序列一致度达到82%。Os-MEK蛋白质三级结构包括α-螺旋、β-折叠、β-转角和少量无规卷曲结构。克隆Os-IP3K核酸序列全长3661bp,不包括3’和5’端非编码区,编码721个氨基酸残基。RT-PCR分析结果显示Os-IP3K在瘤背石磺各组织中的表达趋势与Os-IP3R表达趋势一致。在平疣桑椹石磺神经节中不表达Os-IP3R,但是Os-IP3K的表达水平却是各组织中最高的。提示功能相关的通路分子Os-IP3R和Os-IP3K在石磺科不同

关键词：石磺表达分析进化相关分子基因进化

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4种石磺水中呼吸耗氧初步研究

海洋渔业 2014年第6期36卷 511-515页

作者：管菊沈和定王冬凤刘宸李多上海海洋大学省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室上海201306

在温度22℃、盐度30的密闭容器内,采用WINLKER氏碘量法测定溶氧量,分别对不同规格的4种石磺[瘤背石磺(Onchidium struma)、平疣桑椹石磺(Platevindex mortoni)、里氏拟石磺(Paraoncidium reevesii)、紫色疣石磺(Peronia verruculata)]的水下呼吸耗氧率进行了测定。结果表明:4种石磺的表皮呼吸耗氧率均随体质量的增加而降低;在相同条件下,比较4种石磺的耗氧率发现,紫色疣石磺、瘤背石磺和平疣桑椹石磺在3 h时耗氧率降到最低,分别为(0.126±0.014)mg·(g·h)-1、(0.111±0.011)mg·(g·h)-1、(0.081±0.006)mg·(g·h)-1,里氏拟石磺在4 h时降到最低,为(0.098±0.015)mg·(g·h)-1;紫色疣石磺的耗氧率在各时间段均明显高于其它3种石磺,以下依次为瘤背石磺、里氏拟石磺、平疣桑椹石磺。

关键词：石磺表皮呼吸耗氧率呼吸机制

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4种石磺科贝类的胆甾醇含量测定

海洋科学 2015年第1期39卷 24-28页

作者：孙变娜沈和定吴洪喜姚理想上海海洋大学省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室上海201306 浙江省海洋水产养殖研究所浙江温州325005 浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点试验室浙江温州325005

将瘤背石磺(Onchidium struma)、里氏拟石磺(Paraoncidium reevesii)、平疣桑椹石磺(Platevindex mortoni)和紫色疣石磺(Peronia verruculata)样品,经活体解剖取四种石磺肌肉组织,运用高效液相色谱法对其可食部分进行了胆甾醇含量测定... 详细信息

将瘤背石磺(Onchidium struma)、里氏拟石磺(Paraoncidium reevesii)、平疣桑椹石磺(Platevindex mortoni)和紫色疣石磺(Peronia verruculata)样品,经活体解剖取四种石磺肌肉组织,运用高效液相色谱法对其可食部分进行了胆甾醇含量测定。结果表明:瘤背石磺胆甾醇平均浓度最高,达5 870.00 mg/kg;平疣桑椹石磺、紫色疣石磺、里氏拟石磺的胆甾醇平均质量分别为3 480.00、388.00、316.00 mg/kg,统计分析显示四种石磺可食部分的胆甾醇含量差异显著。

关键词：石磺高效液相色谱法胆甾醇含量测定

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我国石磺科形态结构再描述及同工酶分析

我国石磺科形态结构再描述及同工酶分析

作者：张坤霞上海海洋大学

学位级别：硕士

石磺（Onchidiid）隶属于软体动物门（Mollusca）、腹足纲(Gastropoda)、肺螺亚纲(Pulmonata)，石磺总科（Onchidioidea）、石磺科（Onchidiidae），经过多年演替，石磺科6属（Onchidina, Onchidella, Peronia, Platevindex, Paraoncidium,Onchidium）的分类系统已被广泛采纳。石磺科分类研究的资料不全，模式种描述过于简单。石磺科贝类的分类、命名较为混乱。本文从形态结构解剖，齿舌形态扫描电镜观察及同工酶分析等角度对中国4种石磺进行了系统的形态研究，总结得出石磺科模式种描述或者再描述时所需关注的形态特征;并系统比较了各属种之间形态结构的异同，为及时完成我国石磺科模式种修订工作奠定良好基础，也为石磺科种质资源的保护和物种多样性研究提供了科学依据。中国4种石磺外部形态（颜色、外观、背部形状、鳃、背眼、生殖沟、肛门、呼吸孔、雌孔位置）和内部结构（消化系统、中枢神经系统、外套膜复合体、生殖系统和雄性附属结构）均在绘图解剖镜下观察，并用绘图笔绘制。阴茎及齿舌置于扫描电子显微镜下观察并拍照。不同种石磺形态各不相同，树枝状鳃是紫色疣石磺区别于其他种的明显特征。不同种石磺的体色，背眼数目，呼吸孔及雌性生殖孔位置均存在差异。研究我国4种石磺的消化系统表明，胃的构成，肠式、直肠腺有无及形态均可作为不同种石磺的分类依据。石磺的胃整体呈U型，分为三个部分。紫色疣石磺肠式为Ⅰ型，瘤背石磺为Ⅲ型，里氏拟石磺和平疣桑椹石磺为Ⅱ型。瘤背石磺直肠腺发达，高度无规则盘绕;平疣桑椹石磺直肠腺发达，呈蛇形规则结构;紫色疣石磺和里氏拟石磺无直肠腺。石磺为雌雄同体，生殖系统分为雌雄同体生殖系统和雄性生殖系统。可作为石磺种间分类依据的有：雌雄同体生殖系统的构成及输精管形态;雄性生殖系统的构成，阴茎形态，阴茎附属腺存在与否及组成阴茎附属腺的附属腺鞭状体的长度和排列规律。平疣桑椹石磺无雄性附属腺，是区别其他3种石磺的典型特征。瘤背石磺阴茎为螺旋状，而其他3种均直线型。紫色疣石磺、里氏拟石磺附属鞭状体的开端为一膨大结构，形似弦月，壁很厚，瘤背石磺无膨大结构。紫色疣石磺和瘤背石磺的雄性附属鞭高度盘绕，无规则排列;里氏拟石磺雄性附属鞭呈蛇形阵排列。对阴茎进行深入解剖，利用扫描电子显微镜拍摄了4种石磺的阴茎钩的形态。不同种石磺阴茎钩形状，基部直径，长度及分布密集程度均存在差异。运用扫描电子显微镜对我国4种石磺10个群体样本的齿舌进行观察，并在光学显微镜下对其形态学数据进行测量比较。结果表明，石磺科齿舌很发达，呈片状，齿舌的每一横排中部都有中央齿1枚，侧齿数枚且左右对称分布于中央齿的两侧，无缘齿;不同群体侧齿数目不同。瘤背石磺Onchidium struma齿式(75-107):1:(75-107),紫色疣石磺Peronia verruculate齿式(52-79):1:(58-79),平疣桑椹石磺Platevindex mortoni齿式(89-105):1:(89-105),里氏拟石磺Paraoncidiumreevesii齿式(66-94):1:(66-94)。不同属种的齿舌形态有区别，主要体现在中央齿基板的形状以及中央齿第一突起的长度上。齿舌形态差别可以体现在种间，也可以体现在种内。采用聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳分离技术对我国5种石磺的腹足、肝胰脏2种组织的超氧化物歧化酶和酯酶同工酶进行分析。种间的个体酶谱表型有差异，同属的种间差异小于不同属的种间差异。酶谱的差异程度与形态分类学中的亲缘关系相近。利用超氧化物歧化酶同工酶和酯酶同工酶酶谱表型也可以作为一种蛋白分子标记应用于石磺科属种的分类鉴定。本次采集样本中发现一种与所记载四属石磺不同的新属种—白底石磺，暂定为Onchidella sp.

关键词：石磺生殖系统齿舌形态学同工酶