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IL-24基因对大鼠胶质瘤细胞生长状况的影响

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中华肿瘤杂志 2005年第3期27卷 141-144页

作者：李文玲单保恩闫蕴力郑力芬李巧霞周娜静赵文清河北医科大学基础所细胞生物室石家庄050017 河北医科大学第四医院科研中心河北省人民医院神经外科

目的　探讨IL 2 4基因对C6大鼠胶质瘤细胞生长状况的影响。方法　应用逆转录病毒载体 ,将IL 2 4基因导入C6细胞 ,经G4 18筛选后获得表达IL 2 4分子的阳性细胞克隆C6 /IL 2 4 ;用RT PCR方法检测目的基因表达 ;四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检... 详细信息

目的　探讨IL 2 4基因对C6大鼠胶质瘤细胞生长状况的影响。方法　应用逆转录病毒载体 ,将IL 2 4基因导入C6细胞 ,经G4 18筛选后获得表达IL 2 4分子的阳性细胞克隆C6 /IL 2 4 ;用RT PCR方法检测目的基因表达 ;四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测细胞体外增殖状况 ,流式细胞技术检测细胞的增殖活性 ,并制作荷瘤动物模型 ,观察C6 /IL 2 4和C6细胞的体内致瘤性。结果　RT PCR检测表明 ,外源IL 2 4基因于mRNA水平在C6 /IL 2 4细胞已获得稳定表达。C6 /IL 2 4细胞系的体外增殖性较亲代C6细胞明显下降 ,流式细胞术检测其细胞增殖指数 (PI)为 (2 9.71± 0 .89) %。 9只接种C6 /IL 2 4细胞的实验组大鼠中 ,6只颅内成瘤 ,肿瘤体积为 (14 .0 8± 9.81)mm3 ,明显小于接种C6细胞大鼠的肿瘤体积 (P 基因可部分抑制胶质瘤细胞异常增殖的肿瘤特性。

关键词： IL-24 C6细胞胶质瘤细胞大鼠目的基因肿瘤体积体外增殖 mRNA水平克隆生长状况

重组人巨细胞病毒嵌合肽基因在毕赤酵母中的克隆和表达

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中国生物工程杂志 2005年第3期25卷 29-34页

作者：谢琪璇余巍潘善培肖銮娟彭雅林张春雪暨南大学生殖免疫研究所广州510632

为了在毕赤酵母中表达带有组氨酸纯化标记的重组人巨细胞病毒嵌合肽 (rHCMVp) ,根据其基因序列 ,设计引物从pPIC9K rHCMVp上扩增得到目的基因片段 ,并导入毕赤酵母诱导型表达载体pPICZαA中。通过电击将线性化的重组质粒转化到毕赤酵母... 详细信息

为了在毕赤酵母中表达带有组氨酸纯化标记的重组人巨细胞病毒嵌合肽 (rHCMVp) ,根据其基因序列 ,设计引物从pPIC9K rHCMVp上扩增得到目的基因片段 ,并导入毕赤酵母诱导型表达载体pPICZαA中。通过电击将线性化的重组质粒转化到毕赤酵母X33细胞中 ,筛选获得表达量较高的重组菌株 ,研究了该菌株生长的培养条件 ,包括不同诱导时间、甲醇浓度、pH值对人巨细胞病毒嵌合肽表达的影响。 2L发酵罐进行了高密度发酵 ,经 1 %的甲醇、pH6 0的条件下诱导48h ,最终菌体密度OD60. 0 达到 1 80 ,每升发酵液中含目的蛋白 78. 7mg ,产量比摇瓶提高了 4 8倍。rHCMVp可通过高密度发酵大量获得。

关键词：人巨细胞病毒 HCMV 克隆和表达诱导型目的基因毕赤酵母重组质粒嵌合肽表达载体表达量

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果树转基因研究进展

园艺学报 2001年第S1期28卷 589-596页

作者：林顺权宋刚马英曾黎辉吕柳新华南农业大学园艺学院广州510642 福建农业大学园艺学院福州350002

综述了10多年来国内外果树转基因研究的主要进展。应用于果树的目的基因包括10余种抗病基因以及若干抗虫、抗除草剂、抗逆境和控制生长发育的基因;受体系统包括叶片(含叶盘)、叶柄、茎段、节间、胚轴、子叶、胚、悬浮细胞和原生质体等;... 详细信息

综述了10多年来国内外果树转基因研究的主要进展。应用于果树的目的基因包括10余种抗病基因以及若干抗虫、抗除草剂、抗逆境和控制生长发育的基因;受体系统包括叶片(含叶盘)、叶柄、茎段、节间、胚轴、子叶、胚、悬浮细胞和原生质体等;转化方法以农杆菌介导占主流。已获得近20种常见果树的转基因植株;苹果、番木瓜等的转基因植株已进入大田试验。就目的基因的来源、不同受体系统特点和与转化方法有关的问题等作了讨论。

关键词：果树转基因目的基因受体系统介导转化

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转基因小麦目录

麦类作物学报 2005年第4期25卷 116-126页

作者：赵慧张正斌徐萍中国科学院遗传与发育生物学研究所农业资源研究中心

自1992年人类获得第一株转基因小麦以来,转基因小麦研究已获得了许多重大进展。目前国内外已有近200例小麦转基因的报道,其中将抗除草剂基因转入小麦的报道约80例,转抗病虫基因的报道近50例,转改良品质基因约有30例,转抗旱、耐盐基因近2... 详细信息

自1992年人类获得第一株转基因小麦以来,转基因小麦研究已获得了许多重大进展。目前国内外已有近200例小麦转基因的报道,其中将抗除草剂基因转入小麦的报道约80例,转抗病虫基因的报道近50例,转改良品质基因约有30例,转抗旱、耐盐基因近20例,转其他基因的也有不少报道。这些报道中,通过基因枪法转化的近120例、花粉管通道法转化的50例、农杆菌介导法转化的近20例。从转单基因到进行多基因组装,从改良生物胁迫和非生物胁迫的抗逆性,到改良品质、高产等生理和农艺性状,是未来转基因小麦的研究方向。本文比较系统地总结了转基因小麦的研究成果,以期为小麦转基因研究提供大量有价值的参考信息。

关键词：小麦转基因目的基因

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帕金森病基因治疗研究进展

中国神经精神疾病杂志 2015年第11期41卷 701-704,F0003页

作者：蔡琼靳令经同济大学附属同济医院神经内科上海200065

帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一种以脑内多巴胺能神经元进行性丢失和路易小体形成为特征的神经退行性疾病,主要表现为运动迟缓、肌强直、震颤、姿势步态异常等运动障碍,亦常伴有嗅觉减退、睡眠障碍等多种非运动症状。

关键词：帕金森病基因治疗目的基因病毒载体

人胰岛素样生长因子I基因转染骨髓基质细胞的实验研究

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中华外科杂志 2005年第4期43卷 263-267页

作者：张海宁侯筱魁汤亭亭冷萍上海第二医科大学附属第九人民医院骨科 200011 山东大学药学院

目的检测人胰岛样生长因子Ⅰ基因转染骨髓基质细胞的效果及目的基因的表达情况，寻找一种改良组织工程种子细胞的新方法。方法抽取成年雄性山羊髂嵴骨髓，贴壁分离法接种培养骨髓基质细胞，检测细胞生长特性。取第2代细胞，按3：1比例用... 详细信息

目的检测人胰岛样生长因子Ⅰ基因转染骨髓基质细胞的效果及目的基因的表达情况，寻找一种改良组织工程种子细胞的新方法。方法抽取成年雄性山羊髂嵴骨髓，贴壁分离法接种培养骨髓基质细胞，检测细胞生长特性。取第2代细胞，按3：1比例用FuGene6转染试剂介导，将重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-hIGF-Ⅰ(EGFP为增强绿色荧光蛋白，hIGF-Ⅰ为人胰岛素样生长因子Ⅰ)转染骨髓基质细胞，转染后4～72h和传代后分别用倒置荧光显微镜观察标志基因增强绿荧光蛋白的表达情况，计算转染效率。酶联免疫吸附试验检测培养上清液中hIGF-Ⅰ的浓度变化。转染细胞爬片行hIGF—Ⅰ免疫组化染色检测hIGF-Ⅰ的表达。提取转染后48h的细胞总RNA，RT-PCR检测hIGF-Ⅰ和内核糖体进入位点(IRES)的表达。收集转染前及转染后48h的细胞行流式细胞仪检测细胞周期分布及荧光表达情况。结果成年山羊骨髓基质细胞在接种后24h开始贴壁，伸展成长梭形，原代细胞呈集簇状分布。在转染后4h即有细胞表达绿色荧光蛋白，荧光强度和表达细胞总数在48h达高峰，72h时见部分细胞荧光强度下降，传代后仍可观察到EGFP的表达。转染后4～72h转染上清液中分泌hIGF-Ⅰ的浓度呈逐渐上升趋势，在72h最高可达34．75ng／ml。转染后部分细胞形态发生变化。hIGF-Ⅰ免疫组化染色证实在胞浆中有大量棕黄色颗粒。RT-PCR证实有与hIGF-Ⅰ cDNA和IRES大小相符条带出现。流式细胞仪检测表明转染后骨髓基质细胞S期比例增加，荧光检测转染效率约22％。结论使用FuGene 6转染试剂可有效地转染体外培养的成年山羊骨髓基质细胞。在较长时间内有较高浓度的hIGF-Ⅰ蛋白质分泌人培养上清。hIGF-Ⅰ基因转染可促进骨髓基质细胞的增殖、分化。

关键词： IGF-Ⅰ 骨髓基质细胞基因转染表达生长因子 IRES 流式细胞仪检测 EGFP 目的基因人胰岛素

Tet-on基因表达系统转染胚胎干细胞和调控效应检测

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中国科学（C辑） 2005年第3期35卷 192-195页

作者：王彦丛笑倩刘德莉张文杰崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

以荧光素酶基因为目的基因,应用Lipofectamine介导的瞬时转染方法,将pTet-on调控质粒和pTRE2hyg-luciferase表达质粒共转染小鼠胚胎干细胞,滴加系列浓度的DOX后,观察其诱导效应.结果显示,随DOX浓度升高,荧光素酶的活性也逐渐增强;而未... 详细信息

以荧光素酶基因为目的基因,应用Lipofectamine介导的瞬时转染方法,将pTet-on调控质粒和pTRE2hyg-luciferase表达质粒共转染小鼠胚胎干细胞,滴加系列浓度的DOX后,观察其诱导效应.结果显示,随DOX浓度升高,荧光素酶的活性也逐渐增强;而未转染细胞与转染细胞未加诱导剂时,其RLU值均接近空白对照.表明转染Tet-on基因表达系统的胚胎干细胞对DOX诱导有较好的反应性,目的基因的表达与DOX具有严格的剂量依赖关系.

关键词：基因表达系统调控效应小鼠胚胎干细胞检测荧光素酶基因目的基因转染细胞表达质粒诱导效应依赖关系共转染诱导剂反应性 LU值浓度

人KiSS-1基因克隆及其真核表达载体的构建

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中国医科大学学报 2005年第3期34卷 218-219页

作者：王春晖乔宠戴显伟中国医科大学附属第二医院普外科中国医科大学附属第二医院妇产科辽宁沈阳110004

目的:克隆转移抑制基因KiSS1的不含信号肽的表达序列,构建人KiSS1基因的真核表达载体。方法:从人正常胰腺组织中提取总RNA,经RT PCR得到KiSS1基因开放阅读框cDNA序列,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,构建真核表达质粒pcDNA3/KiSS1。... 详细信息

目的:克隆转移抑制基因KiSS1的不含信号肽的表达序列,构建人KiSS1基因的真核表达载体。方法:从人正常胰腺组织中提取总RNA,经RT PCR得到KiSS1基因开放阅读框cDNA序列,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,构建真核表达质粒pcDNA3/KiSS1。结果:经PCR、酶切鉴定和基因序列测定,证实重组入载体pcDNA3的片段为目的基因开放阅读框的核苷酸序列。结论:重组质粒pcDNA3/KiSS1的成功构建,为该基因相应蛋白质的表达和其抗体的制备研究提供基础。

关键词：真核表达载体基因克隆 KiSS-1基因 pcDNA3 开放阅读框转移抑制基因正常胰腺组织 cDNA序列 RT-PCR 真核表达质粒基因序列测定核苷酸序列表达序列总RNA 酶切鉴定目的基因重组质粒信号肽蛋白质栽体

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基因治疗靶向方法的研究进展

中华内科杂志 2006年第5期45卷 432-434页

作者：高艳虹李定国上海交通大学医学院附属新华医院老年科 200092 上海交通大学医学院附属新华医院消化科 200092

靶向基因治疗是指将目的基因通过载体系统导入机体，并特异性地在靶组织细胞中以可调控的方式表达，达到治疗疾病的作用而不影响其他正常细胞、组织或器官的功能。自1990年第1例基因治疗应用以来，基因治疗技术已在遗传、代谢病和肿瘤... 详细信息

靶向基因治疗是指将目的基因通过载体系统导入机体，并特异性地在靶组织细胞中以可调控的方式表达，达到治疗疾病的作用而不影响其他正常细胞、组织或器官的功能。自1990年第1例基因治疗应用以来，基因治疗技术已在遗传、代谢病和肿瘤等领域取得了较快的研究进展。但迄今为止，基因治疗的安全性和有效性仍是有待突破的“瓶颈”。其中，基因治疗的靶向性是安全有效地进行基因治疗的技术关键和研究热点。目前应用于基因治疗的靶向方法主要有：基因的靶向转移、靶向表达、原位修复和RNA干扰技术定点整合等。为此，现就有关问题进行综述。

关键词：靶向基因治疗 RNA干扰技术基因治疗技术组织细胞载体系统目的基因正常细胞治疗应用靶向表达定点整合