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作者：阳春丽大理大学

学位级别：硕士

目的随着有创操作、外科手术的广泛开展以及抗菌药物、免疫抑制剂的大范围使用,免疫低下人群不断增加,导致白色念珠菌血症发病率、病死率逐年升高。而传统的白色念珠菌血症病原学诊断方法耗时较长,较难满足临床及时救治患者的需求,亟需... 详细信息

目的随着有创操作、外科手术的广泛开展以及抗菌药物、免疫抑制剂的大范围使用,免疫低下人群不断增加,导致白色念珠菌血症发病率、病死率逐年升高。而传统的白色念珠菌血症病原学诊断方法耗时较长,较难满足临床及时救治患者的需求,亟需快速方法来鉴定白色念珠菌。本研究采用模拟白色念珠菌血培养阳性样本,以Vitek2 Compact全自动细菌系统鉴定方法为参照,对比分析PNA-FISH技术、MALDI-TOF MS技术鉴定白色念珠菌的符合率、时效性与成本效益,以探讨上述两种快速方法的临床应用可行性。方法1、回顾性分析2017年1月至2021年12月昆明市第一人民医院门诊及住院部各临床科室念珠菌血症的病原菌分离情况,以及临床分布特征,以了解本院念珠菌感染现状。2、复苏白色念珠菌ATCC 14053、热带念珠菌ATCC 750、光滑念珠菌ATCC 15126,克柔念珠菌ATCC 14243、金黄色葡萄球菌ATCC 25923、表皮葡萄球菌ATCC 12228、粪肠球菌ATCC 29212、大肠埃希菌ATCC 25922、肺炎克雷伯菌ATCC 700603、铜绿假单胞菌ATCC 27853等10株标准菌株和临床分离白色念珠菌100株。用复苏菌株,通过BACT/ALENT3D-240全自动血培养系统,将其制备成模拟血培养阳性样本。3、用达安基因公司提供的PNA-FISH探针序列对模拟血培养阳性样本进行PNA-FISH方法直接检测目标念珠菌;同时先将模拟血培养阳性样本转种沙保弱平板培养18-24小时,分离出单个新鲜菌落,采用MALDI-TOF MS进行鉴定;比较PNA-FISH方法和MALDI-TOF MS方法与Vitek 2 Compact全自动细菌系统鉴定白色念珠菌的符合率,分析上述两种快速鉴定方法的的时间效益和鉴定成本。结果1、2017-2021年我院住院及门诊共送检血培养标本38338份,阳性标本2265份,剔除同一患者血培养中分离的重复菌株,检出真菌28株,血培养阳性率为5.91%,真菌分离率为0.07%。其中,2017年真菌分离率最高,占0.11%,2019年真菌分离率最低,占0.03%。2、2017-2021年阳性血培养中分离非重复真菌28株,其中念珠菌属25株(89.29%),新型隐球菌3株(10.71%)。血培养阳性分离念珠菌中,以白色念珠菌为主,检出12株(48%),其次是光滑念珠菌5株(20%)、都柏林念珠菌4株(16%)、近平滑念珠菌2株(8%)、热带念珠菌1株以及未鉴别到种水平的念珠菌属1株,均占4%。3、念珠菌血流感染患者年龄分布,以809岁高龄患者为主,有10例占40%;其次是609岁老年患者5例,占20%;409岁患者9例,占36%;09岁患者1例,占4%。4、念珠菌血症患者科室分布,重症监护室最多,有12例(48%),其次分别来自泌尿外科5例(20%)、老年病科3例(12%)、肾内科2例(8%),其余分布于消化内科、肝胆胰外科、心胸外科,均为1例(4%)。5、采用VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定仪YST卡鉴定念珠菌,25株念珠菌的平均鉴定时间为43.03±21.82小时,12株白色念珠菌的平均鉴定时间为40.98±14.81小时。6、念珠菌血症患者25例,以该病为首要病因的死亡患者12例,致死率达48%;白色念珠菌血流感染患者12例,以该病为首要病因的死亡患者6例,致死率达50%。7、100株白色念珠菌模拟血培养样本,PNA-FISH检测结果与Vitek2 Compact全自动细菌鉴定方法符合率为98%,平均鉴定时间为2.5±0.5小时,每个标本鉴定成本约为60元。8、100株白色念珠菌模拟血培养样本,转种沙保弱平板分离出单个新鲜菌落,采用MALDI-TOF MS鉴定。结果显示,MALDI-TOF MS鉴定100株白色念珠菌最低分值为2.008,平均分值为2.191,均能准确鉴定到白色念珠菌种水平及以上,和Vitek2 Compact全自动细菌鉴定方法的符合率达100%,从血培养报阳开始计算鉴定时间,平均鉴定时间为22±0.6小时,每个标本鉴定成本约为30元。结论1、本院念珠菌血症病原菌分布以白色念珠菌为主,致死率极高。2、PNA-FISH方法鉴定白色念珠菌,设备简单,鉴定结果可靠,相较于传统鉴定方法和MALDI-TOF MS方法,鉴定时间显著缩短,有较好的临床应用前景。

关键词：白色念珠菌鉴定 PNA-FISH技术 MALDI-TOF MS分析

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多吡啶铱配合物在体内外对白色念珠菌的杀灭作用

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西南大学学报（自然科学版） 2022年第12期44卷 70-76页

作者：付琛周伟赵梓圳付爱玲西南大学药学院重庆400715

白色念珠菌(Candida albicans)感染性疾病是一种常见的人畜共患性疾病,研发具有抗白色念珠菌活性的创新药物将有助于大力推动临床治疗的发展.该研究将确定一种带有荧光的多吡啶类配合物可进入白色念珠菌细胞中,在体内外显示出具有较强... 详细信息

白色念珠菌(Candida albicans)感染性疾病是一种常见的人畜共患性疾病,研发具有抗白色念珠菌活性的创新药物将有助于大力推动临床治疗的发展.该研究将确定一种带有荧光的多吡啶类配合物可进入白色念珠菌细胞中,在体内外显示出具有较强的杀灭该真菌的效果,该研究为临床治疗白色念珠菌感染性肾炎提供一个新的方法,通过荧光观测方法,检测白色念珠菌可摄取配合物,然后使用亚甲基蓝染色确定配合物对白色念珠菌的杀灭作用;通过量效关系和时效关系研究进一步验证配合物的抗菌活性,测定出配合物杀灭白色念珠菌的最小抑菌质量浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌质量浓度(minimum fungicidal concentration,MFC);在白色念珠菌感染的肾炎模型中,评价配合物在体内的抑菌效果.结果表明,配合物具有较强的抗菌作用,对白色念珠菌的MIC和MFC分别为1μg/mL和2μg/mL,抗菌活性强于临床药物氟康唑.此外,配合物可降低动物模型肾脏中的白色念珠菌负载量,减轻肾脏炎症损伤,表现出较好的治疗效果.

关键词：白色念珠菌多吡啶铱配合物感染性肾炎抗真菌活性

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新型抗真菌聚硫烷的合成和筛选及对白色念珠菌的抑菌作用

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中国兽医学报 2023年第9期43卷 1888-1897页

作者：姚依然杨普吴浩东甘磊毕师诚曹礼静王庆华西南大学动物医学学院重庆荣昌402460 重庆市荣昌区职业教育中心重庆荣昌402460

在病鸡背腰部无菌采集皮屑,经形态学和分子生物学技术鉴定致病菌为白色念珠菌后,测定促进白色念珠菌性皮肤病愈合的聚硫烷最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),随后体外检测聚硫烷抑制菌落大小、菌丝体增殖、孢子萌发及凋亡与坏死。... 详细信息

在病鸡背腰部无菌采集皮屑,经形态学和分子生物学技术鉴定致病菌为白色念珠菌后,测定促进白色念珠菌性皮肤病愈合的聚硫烷最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),随后体外检测聚硫烷抑制菌落大小、菌丝体增殖、孢子萌发及凋亡与坏死。结果显示,形态学和分子生物学方法显示重庆地区某养鸡场流行的致病菌为白色念珠菌,药敏试验发现本课题组合成的聚硫烷表现对重庆地区流行的致病菌具有良好的抑菌活性,其对白色念珠菌的MIC为0.78g/L、MBC为1.56g/L。聚硫烷抑制了白色念珠菌菌丝体的数量、孢子萌发率,其抑菌作用和聚硫烷质量浓度呈负相关。和白色念珠菌感染组的皮肤伤口愈合时间(自愈时间为13d)相比,聚硫烷治疗组的皮肤伤口愈合时间明显缩短(治愈时间为7d)。结果表明,本研究通过在高温反应釜中将有机硫(半胱氨酸、胱氨酸)合成并筛选了最具有抗白色念珠菌作用的棕黄色聚硫烷配方(配方3),平均粒径为162nm。新型聚硫烷抑菌作用为破坏白色念珠菌孢子细胞壁、细胞膜的完整性,诱导了孢子的凋亡和坏死,从而抑制了白色念珠菌孢子萌发率和转化为菌丝体的数量,进而阻断白色念珠菌的增殖和传播。本研究旨在为防控侵袭性真菌特别是白色念珠菌病的流行、开发新兽药提供理论和技术支持。

关键词：聚硫烷白色念珠菌分离鉴定抑菌作用

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白色念珠菌双杂交文库的建立及Crk1相互作用蛋白质的筛选

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第2期33卷 198-204页

作者：倪坚陈曦杨弢陈江野上海200031 中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所!分子生物学国家重点实验室

为研究白色念珠菌形态转变相关蛋白质之间的相互作用 ,利用LexA酵母双杂交系统 ,将白色念珠菌染色体DNA用Sau3AI部分酶解并融合于LexA的激活结构域 (AD) ,构建了AD融合的白色念珠菌基因组表达文库。文库含独立转化子 7.7× 10 4 个 ,包... 详细信息

为研究白色念珠菌形态转变相关蛋白质之间的相互作用 ,利用LexA酵母双杂交系统 ,将白色念珠菌染色体DNA用Sau3AI部分酶解并融合于LexA的激活结构域 (AD) ,构建了AD融合的白色念珠菌基因组表达文库。文库含独立转化子 7.7× 10 4 个 ,包含DNA总长度约为 1.2× 10 5kb ,约覆盖白色念珠菌基因组全长的 10倍 ,是研究白色念珠菌信号转导途径的重要资源。CRK1基因编码一个CDC2相关蛋白质激酶 ,参与调控白色念珠菌菌丝生长。把CRK1与LexA的DNA结合区融合 ,作为诱饵筛选白色念珠菌基因组表达文库 ,在 9× 10 5个转化子中获得 8个Leu、LacZ双阳性克隆 ,经酶切鉴定与序列分析其插入片段有 3种 ,编号为NJ1、NJ2、NJ3。经序列同源性比较 ,这些插入片段分别与啤酒酵母基因STI1、RET2和NFI1具有最高同源性。进一步用Crk1N端的激酶活性区和C端非激酶区与这 3种蛋白质相互作用 ,结果表明 :NJ1与Crk1N端激酶活性区相互作用较弱 ,而NJ2、NJ3与Crk1C端非激酶区有很强的相互作用。最后 ,用免疫共沉淀的方法确证了NJ3与Crk1C端的相互作用。这些蛋白质可能参与Crk1的成熟、转运、定位以及活性调控

关键词：白色念珠菌 CRK1 LexA酵母双杂交系统

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二氢槲皮素联合两性霉素B对白色念珠菌生物被膜的干预作用

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中成药 2022年第12期44卷 4040-4044页

作者：刘冬梅罗劲孔晋亮王可刘丽华广西医科大学第一附属医院呼吸与危重症医学科广西南宁530021

目的通过建立体外白色念珠菌生物被膜模型,研究二氢槲皮素联合两性霉素B对白色念珠菌生物被膜的干预作用及机制。方法采用肉汤稀释法测定二氢槲皮素、两性霉素B对白色念珠菌浮游菌最低抑菌浓度(MIC),结晶紫定量法测定二氢槲皮素联合两... 详细信息

目的通过建立体外白色念珠菌生物被膜模型,研究二氢槲皮素联合两性霉素B对白色念珠菌生物被膜的干预作用及机制。方法采用肉汤稀释法测定二氢槲皮素、两性霉素B对白色念珠菌浮游菌最低抑菌浓度(MIC),结晶紫定量法测定二氢槲皮素联合两性霉素B对白色念珠菌生物被膜的清除作用,荧光显微镜下观察二氢槲皮素、两性霉素B及两药联合对白色念珠菌生物被膜结构的影响,通过测定生物被膜细胞表面疏水性探讨药物作用机制。结果二氢槲皮素、两性霉素B对白色念珠菌浮游菌的MIC分别为>1024、16μg/mL,两药联合对白色念珠菌浮游菌的MIC为512、8μg/mL,分级抑菌浓度指数(FICI)值为1。两药联用组与阳性对照组比较,生物被膜胞外基质明显减少,活菌比例下降,细胞表面疏水性降低,菌丝粘附于载体数减少。结论二氢槲皮素联合两性霉素B可以促进白色念珠菌生物被膜的清除,二氢槲皮素通过减少白色念珠菌生物被膜粘附及其胞外基质甘露糖以增强两性霉素B的杀菌作用。

关键词：二氢槲皮素两性霉素B 白色念珠菌生物被膜疏水性

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鸽源白色念珠菌的分离鉴定及药物敏感性分析

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畜牧兽医学报 2023年第7期54卷 3002-3011页

作者：程相宁张韵何佳蔚陈政锟金美兰丁红雷王庆华西南大学动物医学院动物支原体学实验室重庆400715 西南大学实验动物中心重庆400715

重庆某鸽场1~3周龄幼鸽喉头出现大块干酪样物,堵塞喉头,导致无法进食并陆续死亡。本研究旨在鉴定导致该鸽场大批幼鸽发病的病原。在病鸽喉头、嗉囊、腺胃、肠道等部位采集病料,接种含1%庆大霉素PDA平板分离病原,采用革兰染色、棉蓝染色... 详细信息

重庆某鸽场1~3周龄幼鸽喉头出现大块干酪样物,堵塞喉头,导致无法进食并陆续死亡。本研究旨在鉴定导致该鸽场大批幼鸽发病的病原。在病鸽喉头、嗉囊、腺胃、肠道等部位采集病料,接种含1%庆大霉素PDA平板分离病原,采用革兰染色、棉蓝染色、芽管生成试验和PCR扩增鉴定病原。分离的病原菌进行动物回归试验和药物敏感性试验。最终在5只病鸽分离到8株革兰染色呈卵圆形、黑色或粉紫色的革兰阳性酵母样菌体,棉蓝染色结果显示菌体长出菌丝和孢子。这些真菌在含1%庆大霉素PDA平板上生长为乳白色、边缘整齐的光滑菌落,在胎牛血清中孵育能生成芽管,能扩增出白色念珠菌特异rDNA基因间转录间隔区序列。动物回归试验结果显示分离菌株能导致雏鸡嗉囊肿胀,嗉囊鳞状上皮细胞变性、坏死、脱落。药物敏感性试验显示分离菌对两性霉素B、制霉菌素和克霉唑敏感。本研究确定了导致鸽场发病的病原为白色念珠菌,且分离菌在体外对部分抗真菌药物敏感。

关键词：白色念珠菌形态学鉴定抗真菌药物敏感性最小抑菌浓度

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白色念珠菌胞外磷脂酶B在兔角膜真菌感染中毒力作用的研究

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中华眼科杂志 2008年第3期44卷 237-243页

作者：马林谢立信董晓光史伟云山东省眼科研究所山东省眼科学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地青岛266071

目的探讨白色念珠菌胞外磷脂酶B（PLB）在兔真菌性角膜炎中的毒力作用。方法为实验研究。选用白色念珠菌PLB基因缺失株及其相应母体株，角膜接触镜法建立两种菌株兔角膜感染动物模型，通过对动物模型在2、3、5及8d不同时间点的临床观察... 详细信息

目的探讨白色念珠菌胞外磷脂酶B（PLB）在兔真菌性角膜炎中的毒力作用。方法为实验研究。选用白色念珠菌PLB基因缺失株及其相应母体株，角膜接触镜法建立两种菌株兔角膜感染动物模型，通过对动物模型在2、3、5及8d不同时间点的临床观察和病变角膜的组织病理学检查，比较两种菌株的毒力；并建立两种菌株孢子与体外培养的兔角膜基质细胞共同孵育体系，通过扫描电镜、酶联免疫吸附实验及流式细胞仪检测，观察两种菌株对细胞的影响，确定PLB的毒力作用机制。结果两种菌株菌丝在角膜中均呈垂直方式生长；动物模型接种后2d，两种菌株菌丝在角膜中的浸润深度比较差异有统计学意义（P=0．002）；而在3、5及8d时问点的两种菌株菌丝浸润深度及所有时问点的兔角膜真菌感染的临床表现、角膜炎性反应程度比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。与单层细胞共同孵育后，两种菌株孢子、菌丝的黏附率、菌丝生成率比较差异无统计学意义（P〉0．05），而破坏穿透细胞膜的菌丝数量比较差异有统计学意义（P=0．009）；角膜基质细胞加母体株孢子悬液组培养上清中前列腺素E2（PGE2）的含量为（65466±5773）pg／ml，较角膜基质细胞加缺失株孢子悬液组培养上清的PGE2含量（18025±5232）pg／ml明显升高；母体株组、缺失株组及正常对照组细胞膜被破坏细胞的百分比分别为3．02％、2．04％及0．12％；凋亡细胞百分比分别为33．17％、27．56％及1．46％；正常活细胞百分比分别为63．81％、70．40％及98．41％。结论白色念珠菌胞外PLB在兔角膜感染的整个病理损害中，仅在真菌黏附于角膜刚开始侵袭角膜细胞时有促进菌丝侵入细胞的作用，而在其后角膜炎性反应的病理损害中，并无明显的毒力作用。

关键词：眼感染真菌性角膜炎白色念珠菌溶血磷脂酶基因缺失

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光活化消毒技术清除小鼠舌部白色念珠菌的实验研究

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口腔疾病防治 2022年第6期30卷 406-411页

作者：谷悦刘娜王佳宁张立芳刘庆河北医科大学口腔医学院·口腔医院儿童口腔科河北省口腔医学重点实验室河北省口腔疾病临床医学研究中心河北石家庄050017 河北医科大学口腔医学院·口腔医院口腔预防科河北省口腔医学重点实验室河北省口腔疾病临床医学研究中心河北石家庄050017 河北医科大学口腔医学院·口腔医院实验中心河北省口腔医学重点实验室河北省口腔疾病临床医学研究中心河北石家庄050017

目的建立小鼠急性假膜型念珠菌性口炎模型,观察光活化消毒技术(photoactivated disinfection,PAD)在体内清除白色念珠菌的效果,初步探索该技术应用于急性假膜型念珠菌性口炎的可行性。方法选取6周龄雄性ICR小鼠,向已产生免疫抑制的小... 详细信息

目的建立小鼠急性假膜型念珠菌性口炎模型,观察光活化消毒技术(photoactivated disinfection,PAD)在体内清除白色念珠菌的效果,初步探索该技术应用于急性假膜型念珠菌性口炎的可行性。方法选取6周龄雄性ICR小鼠,向已产生免疫抑制的小鼠舌背接种浓度为1×10^(7)CFU/mL的白色念珠菌菌液,成功建立急性假膜型念珠菌性口炎模型30只,随机分为对照组、光活化组,每组15只。光活化组小鼠舌背部涂抹1 mg/mL甲苯胺蓝溶液,孵育1 min,750 mW LED红光照射1 min后即刻与对照组小鼠行舌背真菌载量测定,48 h后再次对两组小鼠行舌背真菌载量测定,并行舌部组织病理学检查。结果 PAD处理后48 h,光活化组舌背白色假膜明显少于对照组。PAD处理后即刻和48 h,光活化组舌背真菌载量均明显低于对照组,差异具有统计学意义(P 菌丝数量明显少于对照组,偶见菌丝侵入角化层,但未深入上皮层。结论 PAD能显著清除急性假膜型念珠菌性口炎小鼠舌部的白色念珠菌。

关键词：光活化消毒技术白色念珠菌急性假膜型念珠菌性口炎真菌载量甲苯胺蓝溶液小鼠模型实验研究

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白色念珠菌与口腔常见致病菌交互作用的研究进展

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华西口腔医学杂志 2019年第6期37卷 671-676页

作者：邓凌薛晶蒋丽邹玲李伟口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心四川大学华西口腔医院口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心四川大学华西口腔医院牙体牙髓病科口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心四川大学华西口腔医院全科门诊成都610041

越来越多的微生物组研究使人们能够更好地理解拮抗和协同的微生物相互作用是如何影响疾病结果的。白色念珠菌是人类口腔微生态系常见的机会性病原体。在健康口腔环境中白色念珠菌具有明显影响口腔细菌生态系与宿主之间平衡的潜力,从而... 详细信息

越来越多的微生物组研究使人们能够更好地理解拮抗和协同的微生物相互作用是如何影响疾病结果的。白色念珠菌是人类口腔微生态系常见的机会性病原体。在健康口腔环境中白色念珠菌具有明显影响口腔细菌生态系与宿主之间平衡的潜力,从而导致口腔疾病的发生、发展。本文对白色念珠菌与口腔主要常见致病菌交互作用的研究进行综述,以期更好地理解口腔感染性疾病的本质。

关键词：白色念珠菌细菌交互作用

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卵黄抗体对鸽毛滴虫与白色念珠菌感染的治疗效果

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畜牧兽医学报 2022年第2期53卷 658-662页

作者：王飞张禾蔡淯涵黄中佐严沛洁王李格孙鸿李复煌何诚中国农业大学动物医学院北京100193 北京市畜牧总站北京100107 北京优帝鸽业有限公司北京100188

旨在研究鸽毛滴虫与白色念珠菌二联卵黄抗体制备方法和评价其临床效果。利用临床分离的白色念珠菌与毛滴虫制备二联灭活疫苗,免疫产蛋母鸡获得高水平抗体,采取低温冻干技术制备成卵黄抗体粉。建立ELISA抗体检测法测定卵黄抗体水平,确保... 详细信息

旨在研究鸽毛滴虫与白色念珠菌二联卵黄抗体制备方法和评价其临床效果。利用临床分离的白色念珠菌与毛滴虫制备二联灭活疫苗,免疫产蛋母鸡获得高水平抗体,采取低温冻干技术制备成卵黄抗体粉。建立ELISA抗体检测法测定卵黄抗体水平,确保质量可控;以分离的肉鸽毛滴虫、白色念珠菌制备发病模型,评价卵黄抗体的保护效果。结果表明:二次免疫后,卵黄中毛滴虫抗体和白色念珠菌抗体OD值达到高峰,分别为0.90和0.66,抗体维持时间达到2个月。卵黄抗体按1 g·只^(-1)口服饲喂5 d后,肉鸽口腔和嗉囊病变评分与感染对照组相比显著降低(P菌素无差异;此外,毛滴虫、白色念珠菌病原载量极显著降低(P白色念珠菌二联卵黄抗体可以替代甲硝唑和制霉菌素,为肉鸽的健康养殖提供一种新的抗菌素替代产品。

关键词：肉鸽毛滴虫白色念珠菌卵黄抗体粉甲硝唑制霉菌素

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