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结直肠癌长链非编码RNA CASC11和原癌基因c-myc的表达及其与复发转移的关系

肿瘤研究与临床 2021年第6期33卷 445-451页

作者：范士民何桦赵凯河北省唐山市协和医院消化内科 063000 河北省唐山市人民医院放化疗科 063000

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)CASC11和原癌基因c-myc在结直肠癌中的表达及其与复发转移的相关性。方法:收集2016年2月至2018年7月河北省唐山市协和医院收治的90例结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织标本,体外培养正常结肠上皮细胞株CCD... 详细信息

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)CASC11和原癌基因c-myc在结直肠癌中的表达及其与复发转移的相关性。方法:收集2016年2月至2018年7月河北省唐山市协和医院收治的90例结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织标本,体外培养正常结肠上皮细胞株CCD841及结直肠癌细胞株SW480、SW620、HCT116、HT29、DLD-1。以癌组织中CASC11或c-myc mRNA相对表达量的均值为界,将患者分为CASC11或c-myc高表达者和低表达者。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及蛋白质印迹法分别检测CASC11、c-myc mRNA及c-myc蛋白表达水平。以CASC11、c-myc mRNA及c-myc蛋白表达水平最高的细胞株进行后续细胞实验。分析CASC11、c-myc mRNA表达水平与患者临床病理特征的关系;采用Pearson相关检验分析患者癌组织中CASC11和c-myc mRNA水平的关系。采用JASPAR软件分析CASC11与c-myc基因是否有结合位点;构建野生型、突变型CASC11重组质粒,采用双荧光素酶报告基因实验验证c-myc与CASC11间的关系。向CASC11、c-myc表达水平最高的细胞株转染载有c-myc干扰序列质粒(Sh-c-myc组)或载有其阴性对照序列质粒(Sh-NC组),另设常规培养的空白对照组(NC组);采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖情况,采用Tanswell实验检测各细胞侵袭、迁移能力,采用qRT-PCR及蛋白质印迹法分别检测各组细胞中CASC11、c-myc mRNA及c-myc蛋白表达水平。结果:与癌旁组织比较,癌组织中CASC11、c-myc mRNA及c-myc蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义(均P11、c-myc mRNA及c-myc蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义(均P11、c-myc mRNA及c-myc蛋白表达水平最高,选取其进行后续细胞实验。Pearson相关性分析结果显示,癌组织中CASC11 mRNA和c-myc mRNA表达水平呈正相关(r=0.494,P11、c-myc mRNA高表达率高于无淋巴结转移者[73.7%(28/38)比26.9%(14/52)、84.2%(32/38)比23.1%(12/52)],TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者癌组织CASC11、c-myc mRNA高表达率高于Ⅰ~Ⅱ期者[76.0%(38/50)比10.0%(4/40)、72.0%(36/50)比20.0%(8/40)],差异均有统计学意义(均P11启动子区与c-myc基因存在结合位点;双荧光素酶报告基因实验结果显示,与共转染Sh-NC和载有野生型CASC11质粒的SW480细胞比较,共转染Sh-c-myc和载有野生型CASC11质粒的SW480细胞启动子相对活性低(P11 mRNA表达水平及侵袭、迁移细胞数低,细胞增殖抑制率高,差异均有统计学意义(均P11、c-myc mRNA在结直肠癌组织及细胞株中均高表达,CASC11启动子区存在与c-myc基因结合位点。二者表达具有相关性,下调c-myc可能通过抑制CASC11表达而抑制结直肠癌细胞侵袭和迁移。

关键词：结直肠癌长链非编码RNA 复发转移癌症易感候选基因11 原癌基因c-myc

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