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痢疾杆菌增进侵袭性染色体调节基因criA的分子克隆及遗传学分析

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中华微生物学和免疫学杂志 1998年第5期18卷 347-352页

作者：齐明山宋诗铎日本国立预防卫生研究所细菌部天津医科大学第二医院感染研究室

目的为证实调控ｉｐａＢＣＤ表达除侵袭质粒上的两个正性调控基因ｖｉｒＦ和ｉｎｖＥ外，染色体上也可能存在与ｉｎｖＥ共同参与促进ｉｐａ基因表达的因子。方法应用低拷贝克隆载体ｐＡ－ＣＹＣ１８４，在大肠杆菌构建福氏志贺氏菌染色... 详细信息

目的为证实调控ｉｐａＢＣＤ表达除侵袭质粒上的两个正性调控基因ｖｉｒＦ和ｉｎｖＥ外，染色体上也可能存在与ｉｎｖＥ共同参与促进ｉｐａ基因表达的因子。方法应用低拷贝克隆载体ｐＡ－ＣＹＣ１８４，在大肠杆菌构建福氏志贺氏菌染色体基因文库。经半乳糖苷酶活性测定、分子杂交等筛选，获得一株能增进上皮细胞侵袭性基因ｉｐａＢ表达的ＤＮＡ分子克隆ｐＱ４４５。结果该片段约为４．３ｋｂ长，ＤＮＡ序列分析表明有两个完整的开放阅读框架（ＯＲＦ），经插入缺失突变发现，其中一个ＯＲＦ的表达产物能增加ｉｐａＢ的活性，为ｉｐａ正性调节因子，定名为ｃｒｉＡ。ｃｒｉＡ基因位于细菌染色体８７．３分处，志贺菌属大多菌群都携带该基因。ｃｒｉＡ约１４３８ｂｐ，编码４７６个氨基酸残基的酸性蛋白，分子量约５２６００。结论ＣｒｉＡ蛋白可能凭借其２６８～２９８位和３２０～３４１位两处的氨基酸残基位点亮氨酸拉链区结构。

关键词：痢疾杆菌基因表达调控分子克隆

痢疾杆菌福氏2a及其环丙沙星耐药株gyrA和parC基因耐药性决定区的序列分析

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中国兽医科技 2003年第4期33卷 20-25页

作者：张继瑜邓旭明阎继业金奇侯云德中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃兰州730050 解放军军需大学动物科技系吉林长春130062 北京病毒基因工程国家重点实验室北京100052

测定了痢疾杆菌福氏 2a 30 1株与喹喏酮类药物耐药性相关的 gyrA基因和 parC基因的序列 ,并对其环丙沙星耐药诱变株的 gyrA和 parC基因喹喏酮类药物耐药性决定区 (QRDR)序列进行了测定分析。结果表明 ,痢疾杆菌福氏 2a 30 1株 gyrA和 p... 详细信息

测定了痢疾杆菌福氏 2a 30 1株与喹喏酮类药物耐药性相关的 gyrA基因和 parC基因的序列 ,并对其环丙沙星耐药诱变株的 gyrA和 parC基因喹喏酮类药物耐药性决定区 (QRDR)序列进行了测定分析。结果表明 ,痢疾杆菌福氏 2a 30 1株 gyrA和 parC基因分别为 2 6 2 5bp和2 2 5 6bp ,环丙沙星诱导的耐药菌 gyrA基因QRDR(2 4 5bp)发生氨基酸残基 6 9 Ala→Val和 87 Tyr→Asp改变 ,parC基因QRDR(2 37b)发生氨基酸残基 79 Ala→Asp、84 Ala→Glu和 85 Pro→Ala改变。

关键词：痢疾杆菌福氏2a301株环丙沙星耐药性 gyrA基因 ParC基因喹诺酮类药物分子机理

肠毒素大肠杆菌定居因子CS6抗原基因在痢疾杆菌中的表达

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生物化学与生物物理进展 2004年第2期31卷 154-158页

作者：罗刚李淑琴王令春赵莹郑继平段海清张兆山吉林大学生命科学学院长春130023 北京生物工程研究所北京100071

通过体外重组的方法 ,将asd基因插入重组表达质粒 ,使抗生素抗性失活 ,并与弗氏志贺氏菌FWL0 1构成宿主载体平衡致死系统 .通过蛋白质印迹结果表明 ,在没有抗生素条件选择的情况下 ,可稳定表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原CS6 .重组菌... 详细信息

通过体外重组的方法 ,将asd基因插入重组表达质粒 ,使抗生素抗性失活 ,并与弗氏志贺氏菌FWL0 1构成宿主载体平衡致死系统 .通过蛋白质印迹结果表明 ,在没有抗生素条件选择的情况下 ,可稳定表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原CS6 .重组菌通过口服和鼻饲免疫小鼠后 ,可以诱生CS6血清IgG抗体 ;同时可以检测到分泌型IgA产生 ,表明重组菌可以诱导相应的黏膜免疫反应 .

关键词：肠毒素大肠杆菌痢疾杆菌宿主-载体平衡致死系统活载体疫苗基因表达 CS6抗原基因

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痢疾杆菌及其L型内毒素与细胞凋亡

中国人兽共患病杂志 2002年第5期18卷 69-71,F004页

作者：孙阳李凤云林萍上海市闵行区中心医院细菌室上海201100 蚌埠医学院微生物教研室上海市闵行区中心医院临检室

目的　探讨痢疾杆菌及其L型内毒素与细胞凋亡的关系。方法　将痢疾杆菌诱导为稳定L型 ,分别制备原菌内毒素和L型内毒素 ,用尾静脉注射法感染小鼠 ,观察小鼠的发病情况 ,并对死亡小鼠进行组织学及凋亡细胞检查。本实验共分三组 :A组原菌... 详细信息

目的　探讨痢疾杆菌及其L型内毒素与细胞凋亡的关系。方法　将痢疾杆菌诱导为稳定L型 ,分别制备原菌内毒素和L型内毒素 ,用尾静脉注射法感染小鼠 ,观察小鼠的发病情况 ,并对死亡小鼠进行组织学及凋亡细胞检查。本实验共分三组 :A组原菌内毒素组 ,B组L型内毒素组 ,C组生理盐水组。结果　A组致小鼠细胞凋亡作用最强 ,以肝细胞凋亡最明显 ,A、B两组之间致凋亡的差异有显著性 (P 痢疾杆菌内毒素可致小鼠肝细胞凋亡 ,而其L型 ,由于失去细胞壁 ,内毒素丢失。

关键词：痢疾杆菌痢疾杆菌L型内毒素细胞凋亡

不同波长激光辐照对痢疾杆菌生物学效应的影响

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光子学报 1998年第1期27卷 56-59页

作者：陈荣温彩霞许少峰林丽婷雷焕英福建师范大学激光所福州350007 福建医学院基础部福州350003 福建省人民医院检验科福州350003

分别采用功率密度为1．7W／cm2、照射剂量为2000J／cm2的Ar+激光与LD激光辐照高耐药性的志贺氏福氏痢疾杆菌，波长较短的Ar+激光（488urn）所引起细菌的致死率与药敏实变率明显高于波长较长的LD激光（808um），即波长较短的Ar+激光的辐... 详细信息

分别采用功率密度为1．7W／cm2、照射剂量为2000J／cm2的Ar+激光与LD激光辐照高耐药性的志贺氏福氏痢疾杆菌，波长较短的Ar+激光（488urn）所引起细菌的致死率与药敏实变率明显高于波长较长的LD激光（808um），即波长较短的Ar+激光的辐照导致细菌耐药性显著降低．

关键词：痢疾杆菌氩离子激光激光辐照生物学效应

痢疾杆菌D_(15)及其L型感染与细胞凋亡

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中国人兽共患病杂志 2002年第2期18卷 72-75页

作者：孙阳李凤云王朝夫姚敏上海市闵行区中心医院细菌室上海201100 蚌埠医学院微生物学教研室蚌埠医学院病理学教研室

目的　探讨痢疾杆菌及其L型感染与细胞凋亡的关系。方法　 6～ 8周龄C57BL/ 6J小鼠 ,随机分成 3组。A组 :痢疾杆菌D15感染组 ,每天每只经口灌注 0 5ml菌液 ,连续 12d。B组 :痢疾杆菌D15L型感染组 ,灌注时间及次数均同A组。C组 :生理盐... 详细信息

目的　探讨痢疾杆菌及其L型感染与细胞凋亡的关系。方法　 6～ 8周龄C57BL/ 6J小鼠 ,随机分成 3组。A组 :痢疾杆菌D15感染组 ,每天每只经口灌注 0 5ml菌液 ,连续 12d。B组 :痢疾杆菌D15L型感染组 ,灌注时间及次数均同A组。C组 :生理盐水对照组。于实验第 13d处死动物 ,病变脏器超薄切片 ,用末端转移酶作原位缺口末端标记法检测各组小鼠主要脏器的凋亡细胞。结果　痢疾杆菌及其L型感染均可引起肠及肝细胞的凋亡 ,统计学处理显示 ,细菌型比L型更易引起细胞凋亡。

关键词：痢疾杆菌细胞凋亡 L型感染细胞凋亡机制

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痢疾杆菌毒力相关抗原分析

军事医学 1989年第1期34卷 30-34页

作者：初连瑞陈志华徐晓平夏光明闻悦苏新军事医学科学院微生物流行病研究所解放军302医院

采用BA-immunoblot法,以肠道感染痢疾菌后的猴恢复期血清为抗体,对痢疾杆菌和侵袭性大肠杆菌共20株进行了抗原分析.发现有毒痢疾菌和侵袭性大肠菌均表达4种主要毒力相关抗原,其分子量分别为:78K,66K,44K和39K.而这4种抗原在无毒株是不... 详细信息

采用BA-immunoblot法,以肠道感染痢疾菌后的猴恢复期血清为抗体,对痢疾杆菌和侵袭性大肠杆菌共20株进行了抗原分析.发现有毒痢疾菌和侵袭性大肠菌均表达4种主要毒力相关抗原,其分子量分别为:78K,66K,44K和39K.而这4种抗原在无毒株是不存在的.采用痢疾病人恢复期血清分析也获得类似结果.还发现,豚鼠眼感染痢疾菌后,其恢复期血清与人及猴肠道感染痢疾菌后恢复期血清中主要抗体组分相似,而很少有与无毒株交叉的抗体.所分析的菌株均含120或140Mdal大质粒.文中对痢疾菌群、型间的交叉保护作用与4种共同抗原的关系进行了讨论.

关键词：痢疾杆菌毒力相关抗原 BA-immunoblot法

用酵母双杂交系统筛选与痢疾杆菌侵袭素IpaC相互作用的蛋白

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Acta Genetica Sinica 2004年第4期31卷 369-374页

作者：阎晓宇姚潇王恒樑冯尔玲史兆兴苏国富游松黄留玉沈阳药科大学制药工程学院沈阳110016 北京生物工程研究所北京100071

利用酵母双杂交技术筛选与IpaC相互作用的真核细胞蛋白。首先将IpaC全长基因克隆到诱饵蛋白载体pGBKT7中 ,以构建的pGBKT IpaC为靶蛋白质粒 ,筛选人HeLa细胞cDNA文库。在 2× 10 6个克隆中得到 2 2个阳性克隆。其中 2个阳性克隆编码人... 详细信息

利用酵母双杂交技术筛选与IpaC相互作用的真核细胞蛋白。首先将IpaC全长基因克隆到诱饵蛋白载体pGBKT7中 ,以构建的pGBKT IpaC为靶蛋白质粒 ,筛选人HeLa细胞cDNA文库。在 2× 10 6个克隆中得到 2 2个阳性克隆。其中 2个阳性克隆编码人胶原酶蛋白片段。并且进一步证明与胶原酶片段相互作用的IpaC结构域在 6 2aa～ 170aa之间。提示IpaC可能在胶原酶参与的生物学过程中发挥作用。

关键词：痢疾杆菌酵母双杂交系统 IpaC 胶原酶

嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌协同抑制痢疾杆菌的活性研究

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中国药科大学学报 2015年第1期46卷 117-122页

作者：王艺宙方凯王慧窦洁周长林中国药科大学生命科学与技术学院南京210009

以嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌为研究对象,用琼脂扩散法检测其纯培养和共培养后的发酵液对福氏痢疾杆菌的体外抑菌活性。结果表明,嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌共培养液对福氏痢疾杆菌具有良好的协同抑制作用,其共培养液抑菌作用较嗜酸乳杆菌和酪酸... 详细信息

以嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌为研究对象,用琼脂扩散法检测其纯培养和共培养后的发酵液对福氏痢疾杆菌的体外抑菌活性。结果表明,嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌共培养液对福氏痢疾杆菌具有良好的协同抑制作用,其共培养液抑菌作用较嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌纯培养,其抑菌作用分别增强了17.2%和22.4%。同时,嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌存在共生关系,共培养后生物量可达4.27 g/L(干重),较嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌纯培养生物量分别提高6.0%和30.6%,且共生可使产酸增多,从而达到协同抑菌效果。对福氏痢疾杆菌黏附人结肠腺癌Caco-2细胞的研究表明,嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌能协同抑制福氏痢疾杆菌对Caco-2细胞的黏附,Caco-2与混合益生菌、嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌共孵育的组别,其福氏痢疾杆菌的相对黏附率分别降低了84.2%,81.2%和75.8%,相对应的Caco-2细胞的活力分别提高了22.9%,12.5%和11.5%。本研究首次发现两种益生菌嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌具有共生关系,并且在体外能够协同抑制肠道致病菌福氏痢疾杆菌的生长和黏附,对于由福氏痢疾杆菌引起的细菌性痢疾治疗具有临床应用前景。

关键词：嗜酸乳杆菌酪酸梭菌协同抗菌活性痢疾杆菌复合益生菌黏附抑制