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猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗的研究——菌种选择、疫苗制备及安全性试验

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中国兽医科技 2002年第3期32卷 7-9页

作者：逯忠新赵萍邵英德柳纪省鲁炳义邱昌庆李宝玉叶培根陈焕春吴斌中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046 华中农业大学畜牧兽医学院湖北武汉430070

以国内多发的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 (APP) 1、3、7血清型强毒株作为制苗菌株 ,制成油佐剂三价灭活苗。经效力试验 ,对上述 3种血清型强毒攻击的保护率分别为 88.8%、88.8%和 10 0 % ;试验动物安全性检验及田间安全检验 ,除个别猪出... 详细信息

以国内多发的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 (APP) 1、3、7血清型强毒株作为制苗菌株 ,制成油佐剂三价灭活苗。经效力试验 ,对上述 3种血清型强毒攻击的保护率分别为 88.8%、88.8%和 10 0 % ;试验动物安全性检验及田间安全检验 ,除个别猪出现轻微体温反应及暂时减食外 ,无其他异常反应。

关键词：菌种选择疫苗制备安全性试验猪传染性胸膜肺炎放线杆菌三价灭活苗免疫效力

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Ⅲ.疫苗制备及免疫

中国乳品工业 1997年第5期25卷 22-23页

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锦鲤竖鳞病疫苗制备与免疫效果研究

中国水产 2008年第5期 84-86页

作者：梁拥军孙向军史东杰马峻峰孙砚胜北京市水产科学研究所

在日常生产实践中，竖鳞病是危害锦鲤生长发育、造成大量死亡的重要疾病。受感染的锦鲤发病周期短，传播速度快，感染范围广，死亡率高，特别是锦鲤亲鱼死亡率最高可达85％。相关资料显示：导致此病有几种病原体，包括如点状假单胞菌、... 详细信息

在日常生产实践中，竖鳞病是危害锦鲤生长发育、造成大量死亡的重要疾病。受感染的锦鲤发病周期短，传播速度快，感染范围广，死亡率高，特别是锦鲤亲鱼死亡率最高可达85％。相关资料显示：导致此病有几种病原体，包括如点状假单胞菌、产气单胞菌等，均可单一或共同导致锦鲤细胞感染，致使内部器官功能失调。为克服使用中西药对锦鲤体色、体型产生的不良影响，我们通过对患病锦鲤病灶细胞的菌株进行疫苗制备，并对所制备的疫苗进行了免疫效果分析，旨在为防治锦鲤竖鳞病提供一种有效的免疫学方法。

关键词：疫苗制备免疫效果竖鳞病锦鲤产气单胞菌免疫学方法生长发育大量死亡

基于专利引文路径叠加网络的疫苗制备技术演化研究

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基于专利引文路径叠加网络的疫苗制备技术演化研究

作者：陈祥吉林大学

学位级别：硕士

目的:通过文献调研、模型分析等方法,构建一套完整、可行、有效的技术演化分析框架和理论模型,以此指导对技术领域进行技术演化分析,实现宏观技术演化过程展示与微观技术演化规律揭示的兼顾,改进和完善现有技术演化分析方法。当前技术... 详细信息

目的:通过文献调研、模型分析等方法,构建一套完整、可行、有效的技术演化分析框架和理论模型,以此指导对技术领域进行技术演化分析,实现宏观技术演化过程展示与微观技术演化规律揭示的兼顾,改进和完善现有技术演化分析方法。当前技术演化分析研究缺乏统一的从技术发展规律角度入手的技术演化分析理论框架,构建理论框架和模型可以指导实践研究。通过技术演化分析,旨在明晰当前领域技术发展现状,探究领域的技术发展规律,为企业与国家进行合作发展、科技布局等战略制定等提供参考。材料与方法:在既往研究的基础上,通过总结技术演化相关研究的研究思路,从工作流程视角出发抽象出技术演化分析理论框架。结合文献调研法、模型分析法、比较分析法确定理论框架的各个组成部分。以技术进化理论为基础,从技术知识扩散视角构建核心专利识别模型;从信息利用视角改进专利引文网络;结合SAO文本分析方法与主路径分析方法,对技术演化规律进行探究与呈现。依据构建的理论框架与模型,以疫苗制备领域专利数据为研究对象,经过数据获取、处理、计算、可视化等操作完成领域技术演化历程与知识发展主要脉络的挖掘与展示。结果:通过构建的技术演化分析SCA理论框架与模型,完成了对疫苗制备领域技术发展现状以及技术演化历程的规律探究。当前,疫苗制备领域尚处于技术生命周期的成长期阶段,相关技术成果仍在持续增加。疫苗技术的发展呈现出一定的按疫苗子技术路线进行的规律。减毒活疫苗技术起步最早,远远领先于其他三类技术的发展。在萌芽期的技术主要围绕大肠杆菌以及霍乱弧菌这两种细菌的减毒菌株制备进行。萌芽期时,技术整体呈现较为明显的以探索和解决问题为主的技术发展规律。成长期时,减毒活疫苗相关技术成果明显减少,而灭活疫苗、类毒素疫苗以及亚单位疫苗三种技术获得较大进步。该时期内出现了两次特定病原疫苗相关技术的爆发现象,也是从这个阶段开始,各类型疫苗可通用的疫苗培养前置流程相关技术开始得到重视与发展。从全周期来看减毒灭活疫苗呈现明显的衰退趋势,灭活疫苗和基因重组亚单位疫苗发展趋势较好。结论:在既往研究的基础上,分析技术演化主要任务组成,构建了演化分析SCA理论框架。从技术发展内在规律入手,以技术进化理论为指导,对理论框架中专利筛选部分构建技术知识扩散视角下核心专利识别模型,对框架中网络构建部分提出改进引文路径叠加网络方案,搭建了完整可行的技术演化分析SCA框架模型,完善了技术演化分析理论与方法体系。通过在疫苗制备领域实例应用,验证了核心专利识别模型的可行性与优越性,验证了技术演化SCA分析框架的合理性与有效性。

关键词：技术演化分析专利分析核心专利识别引文路径叠加网络疫苗制备

大鲵虹彩病毒灭活方法比较与疫苗制备技术研究

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大鲵虹彩病毒灭活方法比较与疫苗制备技术研究

作者：孙建滨华中农业大学

学位级别：硕士

大鲵(Chinese giant salamander, Andrias davidianus),俗名“娃娃鱼”,是我国珍贵的保护动物与新兴养殖品种。鉴于大鲵极高的经济价值,近几年在陕西、湖南、浙江、湖北等省大鲵人工繁育和集约化养殖发展十分迅速。但是,随着大鲵养殖范... 详细信息

大鲵(Chinese giant salamander, Andrias davidianus),俗名“娃娃鱼”,是我国珍贵的保护动物与新兴养殖品种。鉴于大鲵极高的经济价值,近几年在陕西、湖南、浙江、湖北等省大鲵人工繁育和集约化养殖发展十分迅速。但是,随着大鲵养殖范围与规模的不断扩大,以及养殖集约化程度的不断提高,养殖大鲵的病害问题日趋严重,严重阻碍了大鲵养殖产业的健康发展。大鲵病毒性出血病是危害养殖大鲵最严重的疾病,其病原为大鲵虹彩病毒(Giant salamander iridovirus, GSIV)。疫苗免疫被认为是预防水生动物疾病最为有效的方法,其中,灭活疫苗的应用最为普遍与安全。本文研究了p-丙内酯(β-propiolactone, BPL)和福尔马林两种灭活剂灭活GSIV的方法,比较了两种灭活剂的灭活条件与效果,确定了GSIV细胞培养灭活疫苗的制备方法,为大鲵虹彩病毒病免疫预防技术研究与应用奠定了重要前期基础。研究内容和结果如下： 1. GSIV BPL灭活方法的研究。选用终浓度分别为0.025%、0.05%、0.1%、0.2%的BPL灭活细胞培养的GSIV,4℃条件下分别灭活处理24h、48h、72h,96h,采用细菌培养、细胞培养、病毒核酸PCR扩增以及鱼体感染试验进行灭活病毒的安全性检验,确定了最适灭活条件。采用病毒结构蛋白SDS-PAGE电泳与Western blotting试验比较研究了最适灭活条件下灭活病毒结构蛋白与抗原性变化情况。试验结果表明,GSIV经终浓度为0.1%的BPL4℃灭活处理72h后可完全灭活病毒,灭活病毒无细菌污染,接种对GSIV敏感的鲤上皮瘤细胞系(EPC)细胞无细胞病变效应(CPE)出现,病毒主要衣壳蛋白(MCP)基因特异性引物PCR反应未扩增出靶基因产物,灭活病毒对健康大鲵的感染试验未出现疾病症状。终浓度为0.1%的BPL于4℃条件灭活GSIV72h,其结构蛋白SDS-PAGE电泳与Western blotting试验结果表明,与未灭活GSIV相比较,灭活GSIV的结构蛋白与抗原性未发生显著变化。 2. GSIV福尔马林灭活方法的研究。选用终浓度分别为0.05%,0.1%,0.2%,0.4%福尔马林灭活细胞培养的GSIV,旋涡混匀后置于37℃培养箱中,分别在灭活24h、48h、72h、96h后采用细菌培养、细胞培养、病毒核酸PCR扩增以及鱼体感染试验进行灭活病毒的安全性检验,确定其最适灭活条件。采用病毒结构蛋白SDS-PAGE电泳与Western blotting试验比较分析了最适灭活条件下灭活病毒结构蛋白与抗原性变化情况。试验结果表明,GSIV经终浓度为0.2%的福尔马林37℃灭活处理72h后可完全灭活病毒,灭活病毒无细菌污染,接种EPC细胞无CPE出现,病毒MCP基因特异性引物PCR反应未扩增出靶基因产物,灭活病毒对健康大鲵的感染试验未出现疾病症状。经最适条件灭活的GSIV,其结构蛋白SDS-PAGE电泳与Western blotting试验结果表明,与未灭活GSIV相比较,灭活GSIV的结构蛋白有较明显破坏,但保持了一定的抗原性。 3.大鲵虹彩病毒灭活疫苗免疫效果初步研究。血清中和抗体效价检测结果显示两种灭活疫苗免疫大鲵后均可得到较高的抗体水平,且在免疫后21d抗体效价最高,但BPL灭活疫苗组抗体水平整体优于福尔马林组。相对免疫保护率结果可看出,注射BPL灭活疫苗的实验组获得了更好的免疫保护效果。两种灭活疫苗的免疫效果研究表明,BPL在疫苗的制备过程对病毒抗原的破坏作用小于福尔马林,从而使疫苗保持了更好的免疫原性。

关键词：大鲵虹彩病毒 β-丙内酯福尔马林灭活疫苗制备

重组胰酶在MDCK细胞培养的流感疫苗制备中的应用

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微生物学免疫学进展 2023年

作者：杨卓圆李贝贝周琳婷王石磊蒋思静罗剑上海生物制品研究所有限责任公司第四研究室

目的探究使用重组胰酶(recombinant trypsin， RT)替代N-(对甲苯磺酰基)-L-苯基乙基氯甲基酮(N-p-Tosyl-L-phenylalanine chloromethyl ketone， TPCK)处理的牛源胰蛋白酶(TPCK-trypsin， TT)，在基于无血清悬浮细胞培养的流感病毒疫苗制备中的可行性。方法用不同浓度的RT处理无血清悬浮培养的犬肾细胞(madin-darby canine kidney cell，简称MDCK细胞)，检测其对细胞密度和细胞活力的影响。在流感病毒感染环节添加不同浓度的RT，在不同时间细胞收获病毒液，检测病毒滴度，确定适合的RT浓度。再以2 μg/mL RT的条件下，接种不同(亚)型流感病毒毒株，以检测不同时间病毒滴度及细胞密度，并在3 L生物反应器中验证RT对流感病毒扩增的影响。结果当RT浓度＜5 μg/mL时，对无血清悬浮培养的MDCK细胞生长密度和细胞活力均无显著影响；在病毒感染与扩增过程中，添加终浓度为2 μg/mL RT可保证不同(亚)型流感病毒疫苗株的有效扩增。其中，H1N1、H3N2、B/Vic、B/Yam的血凝效价分别可达8.0、8.0、10.0、10.0 log2HAU/50 μL；病毒感染性滴度分别可达到7.25、7.00、6.75、6.75 lgTCID50/mL。病毒扩增效率RT与使用TT相比，H1N1和H3N2基本保持一致，B/Vic略高，B/Yam略低。同时，RT可在3 L生物反应器中促进流感病毒的扩增。结论 RT可替代TPCK处理的动物源胰蛋白酶应用于基于细胞培养的流感病毒扩增体系，支持流感病毒的高滴度扩增。将该RT应用于基于无血清、无动物源性物质的流感病毒扩增体系，可实现流感疫苗生产过程中的无动物源成分添加。

关键词：无血清无动物源成分重组胰酶牛源胰酶流感疫苗疫苗制备

重组胰酶在口服轮状病毒活疫苗制备中的初步应用

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微生物学免疫学进展 2017年第1期45卷 36-41页

作者：姜英陈汉泉包红马超周旭兰州生物制品研究所有限责任公司第二研究室甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046 上海生物制品研究所有限责任公司总经理办公室上海200052

目的探究重组胰酶替代猪源胰酶在轮状病毒疫苗制备中的可行性。方法确立3种重组胰酶的最佳工作浓度;观察3种重组胰酶和猪源胰酶消化MA104细胞并连续传10代(P1~P10),根据消化时间、消化后细胞总数、细胞活率、细胞生长状况、细胞形态变... 详细信息

目的探究重组胰酶替代猪源胰酶在轮状病毒疫苗制备中的可行性。方法确立3种重组胰酶的最佳工作浓度;观察3种重组胰酶和猪源胰酶消化MA104细胞并连续传10代(P1~P10),根据消化时间、消化后细胞总数、细胞活率、细胞生长状况、细胞形态变化等方面进行考量比较;观察轮状病毒LH9株经4种胰酶活化,分别接种对应胰酶传代的MA104细胞上培养,通过病毒滴度(lg CCID_(50)/mL)及RNA-PAGE检测,分析重组胰酶替代猪源胰酶在轮状病毒疫苗制备中的应用。结果连续P1~P10代后3种重组胰酶和猪源胰酶在细胞总数、细胞活率及细胞生长状况,差异均无统计学意义(P>0.05),显微镜观察细胞形态无明显改变。轮状病毒LH9株经不同胰酶活化,接种MA104细胞P1~P10代培养后,病毒滴度差异均无统计学意义(P>0.05),且RNA-PAGE电泳图谱未见差异。结论初步应用试验表明3种重组胰酶均可替代猪源胰酶用于轮状病毒疫苗的制备。

关键词：轮状病毒重组胰酶猪源胰酶疫苗制备

单层细胞培养制备的流行性乙型脑炎疫苗——I.病毒培养及疫苗制备

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微生物学报 1964年第1期 31-38页

作者：王用楫顾佩韦孙勉马文信周宁珍孙盛豪李美容卫生部生物制品研究所成都生物制品研究所

自从单层组织培养技术应用到病毒培养以来,许多学者先后证明流行性乙型脑炎病毒在单层的鸡胚细胞上、HeLa细胞上、猴肾细胞上、仓鼠肾细胞上、猪肾细胞上、Detroit-6细胞上能够繁殖。这就为采用单层细胞以制备乙型脑炎疫苗提供了可能性... 详细信息

自从单层组织培养技术应用到病毒培养以来,许多学者先后证明流行性乙型脑炎病毒在单层的鸡胚细胞上、HeLa细胞上、猴肾细胞上、仓鼠肾细胞上、猪肾细胞上、Detroit-6细胞上能够繁殖。这就为采用单层细胞以制备乙型脑炎疫苗提供了可能性。从制备疫苗的目的出发,1958年我们开始选用鸡胚细胞系统培养病毒,制备疫苗,并进行动物实验。1960年已制成相当数量的疫苗,开始在人体中使用。本文中报导病毒培养及疫苗制备的研究结果;有关抗原性的动物试验及人体使用的预防效果在另文中介绍。

关键词：病毒培养流行性乙型脑炎疫苗鸡胚鼠脑流行性乙型脑炎病毒单层病毒滴度疫苗制备

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沙眼衣原体的免疫清除机制及其疫苗制备

国外医学（计划生育分册） 2002年第1期21卷 47-50页

作者：徐万祥上海市计划生育科学研究所 200032

沙眼衣原体(Ct)感染是当今世界上最常见的性传播疾病,而疫苗在预防和控制Ct感染方面将是有效措施之一。大量研究表明细胞介导免疫是体内清除Ct的主要应答机制,动物实验也支持体液免疫抗Ct感染的可行性。本文从Ct的免疫清除机制和可能的... 详细信息

沙眼衣原体(Ct)感染是当今世界上最常见的性传播疾病,而疫苗在预防和控制Ct感染方面将是有效措施之一。大量研究表明细胞介导免疫是体内清除Ct的主要应答机制,动物实验也支持体液免疫抗Ct感染的可行性。本文从Ct的免疫清除机制和可能的靶抗原分析等角度,综述了目前抗Ct疫苗研制中存在的主要障碍,以及探讨实施最佳免疫路径和发展新型Ct疫苗的可能性等最新进展。

关键词：沙眼衣原体免疫应答疫苗制备 Ct感染