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大鼠疑核-迷走神经介导针刺“内关”-“间使”改善心肌缺血机制的研究

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针刺研究 2016年第3期41卷 189-196页

作者：陈伟陈淑萍李成文王俊英端木程琳常小荣刘俊岭湖南中医药大学针灸推拿学院长沙410007 中国中医科学院针灸研究所机能研究室北京100700

目的:观察电针"内关"-"间使"穴对心肌缺血(MI)大鼠疑核胆碱能神经元、心率变异性(HRV)高频成分(HF)等变化的影响,分析电针改善MI的机制。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、内关-间使组、三阴交-地机组,每组12只。结扎冠状动... 详细信息

目的:观察电针"内关"-"间使"穴对心肌缺血(MI)大鼠疑核胆碱能神经元、心率变异性(HRV)高频成分(HF)等变化的影响,分析电针改善MI的机制。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、内关-间使组、三阴交-地机组,每组12只。结扎冠状动脉左前降支复制MI模型。MI后1、2、3d分别给予两电针组动物电针各30min。用生理信号采集系统记录心电图(ECG),并分析心率(HR)、ECG-J点高度和HRV的HF、低频(LF)成分值;用酶联免疫法检测血清磷酸肌酸激酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH 1)、内皮素(ET)的含量,用免疫荧光法检测延髓疑核区乙酰胆碱转移酶(ChAT)、囊泡状乙酰胆碱转运体(VAChT)和c-fos的表达。结果:与正常组比,造模后HR加快(P疑核区的c-fos阳性细胞数明显增多(P0.05)。电针3d后,两电针组ECG-J点高度接近基线水平,与模型组比较差异有统计学意义(P疑核的c-fos阳性细胞数显著增多(P0.05)。内关-间使组疑核c-fos阳性细胞表达数量明显多于三阴交-地机组(P疑核区c-fos神经元有关;但疑核中的胆碱能神经元是否介导电针抗MI的效应,还有待进一步研究。

关键词：心肌缺血电针交感/副交感活动平衡疑核

疑核在中脑导水管周围灰质(PAG)调节细胞免疫机能中的作用

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免疫学杂志 1992年第1期8卷 18-22页

作者：苏正昌张玉生云南农业大学动物生理学教研室解放军兽医大学动物生理教研室长春130062

本研究旨在探讨PAG的细胞免疫调节作用及其调节通路。实验用麻醉家兔,分两组进行。分别将其左侧疑核电解损毁(疑核损毁组)及在其左侧小脑或延脑背侧作电解损伤(对照损毁组)后,电刺激PAG,并分别于刺激前及后不同时间取外周血,测定T细胞... 详细信息

本研究旨在探讨PAG的细胞免疫调节作用及其调节通路。实验用麻醉家兔,分两组进行。分别将其左侧疑核电解损毁(疑核损毁组)及在其左侧小脑或延脑背侧作电解损伤(对照损毁组)后,电刺激PAG,并分别于刺激前及后不同时间取外周血,测定T细胞百分率及对PHA的反应。发现刺激PAG可使对照损毁组外周血中的T细胞百分率及对PHA的反应均比刺激前升高或增强,而疑核损毁组外周血中的T细胞丰分率在刺激PAG前后无显著变化,对PAG的反应在刺激后比刺激前有所增强,但不如对照损毁组强烈。结果提示,PAG可由疑核介导参与调节细胞免疫机能。

关键词：疑核神经免疫调节细胞免疫 PAG

外周有关递质对疑核(AMB)调节细胞免疫机能的影响

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免疫学杂志 1992年第4期8卷 232-235页

作者：柳巨雄张玉生解放军兽医大学生理学教研室长春130062

本实验研究了三种受体拮抗剂对电刺激疑核调节细胞免疫机能的影响,并对疑核调节机体细胞免疫的机制作了探讨。实验用麻醉家兔,分3组进行。分别在静注阿托品、酚妥拉明或心得安后电刺激疑核,并分别于注射前及刺激后不同时间取外周血,测定... 详细信息

本实验研究了三种受体拮抗剂对电刺激疑核调节细胞免疫机能的影响,并对疑核调节机体细胞免疫的机制作了探讨。实验用麻醉家兔,分3组进行。分别在静注阿托品、酚妥拉明或心得安后电刺激疑核,并分别于注射前及刺激后不同时间取外周血,测定T细胞百分率及对PHA的反应。结果:阿托品组上述免疫指标比注射前明显降低;酚妥拉明组上述免疫指标在刺激后60分钟时比注射前有所升高;心得安组上述指标在刺激后120分钟时比注射前明显降低。提示:疑核对细胞免疫机能的调节可能是通过迷走神经末梢释放乙酰胆碱,作用于免疫器官及免疫细胞上的M型胆碱能受体实现的。

关键词：疑核阿托品酚妥拉明细胞免疫

疑核注射L-精氨酸和7-硝基吲哚对大鼠心率变异性的影响

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疑核注射L-精氨酸和7-硝基吲哚对大鼠心率变异性的影响

作者：杜艳霞中国医科大学

学位级别：硕士

前言心率变异性(heart rate variability,HRV)是指逐次窦性心搏间期之间的微小时间差异,HRV的分析方法主要有时域分析法和频域分析法。时域分析法常用的指标有SDNN和rMSSD等。频域分析法的常用指标有高频功率谱(high frequencies,HF),... 详细信息

前言心率变异性(heart rate variability,HRV)是指逐次窦性心搏间期之间的微小时间差异,HRV的分析方法主要有时域分析法和频域分析法。时域分析法常用的指标有SDNN和rMSSD等。频域分析法的常用指标有高频功率谱(high frequencies,HF),低频功率谱(low frequencies,LF),极低频功率谱(very-low frequencies,VLF),低频与高频的比(LF/HF ratio,LF/HF),总功率谱(total power,TP)。研究认为HRV由迷走神经和交感神经共同介导,迷走神经介导HF成分,而LF由迷走和交感神经共同介导,LF/HF反映了交感和迷走神经的平衡状态。HRV反映了自主神经系统(autonomic nervous system,ANS)的紧张性和均衡性,有广泛的临床应用。目前在心肌梗死、糖尿病自主神经病变、高血压等疾病的预后中有很好的应用价值。但自主神经对HRV的影响机制目前还不明确,研究发现一氧化氮(nitric oxide,NO)可调节ANS,进而间接影响HRV。疑核(nucleus ambiguous,NA)是心迷走神经节前神经元胞体所在部位,在调节心迷走神经的活动中起重要作用,但NO在此部位如何影响HR和HRV,目前还尚未见详细报道。本研究以麻醉状态大鼠为实验对象,向NA的心抑制区给予一定剂量的NO前体L-精氨酸(L-argine,L-arg)和不同剂量的特异性神经型一氧化氮合成酶(nitride oxide synthases,nNOS)抑制剂7-硝基吲哚(7-nitroindazole,7-NI),通过HRV分析来探索NA内NO的作用和调节ANS的机制,同时了解在注射两种药物后是否存在偏侧性。材料与方法一、实验动物的处理健康雄性Wistar大鼠100只,体重280g～320g,由中国医科大学动物部提供。大鼠单笼饲养,自由进食、水。在实验前三天将大鼠置于一避音房间,给予12h:12h光照—黑暗周期,保持室温(24±2)℃,湿度(55±5)%。在实验中随机分组。二、动物分组1、空白对照组NA注射蒸馏水0.5μL,30min后注射生理盐水0.5μL(左侧n=10;右侧n=10)。2、对照组NA注射L-arg(5.0 nmol/L,0.5μL),30min后注射生理盐水0.5μL(左侧n=10;右侧n=10)。3、7-NI组NA注射L-arg(5.0nmol/L,0.5μL),30min后再分三组注射低、中、高剂量的7-NI。(1)0.5nmol/L 7-NI(左侧n=10;右侧n=10)。(2)2.0nmol/L 7-NI(左侧n=10;右侧n=10)。(3)5.0nmol/L 7-NI(左侧n=10;右侧n=10)。三、手术和ECG采集20%氨基甲酸乙酯6.5ml/kg腹腔麻醉,将大鼠固定于脑立体定位仪。根据图谱前囟后11.8mm～13.20mm,旁开2.80mm～3.50mm,深9.60mm～9.90mm,将一内有引导针的微量注射管插入左或右侧疑核心抑制区,所有药物30s注完。实验全过程进行标Ⅱ导联ECG采集,数据由Powerlab4/25采集系统记录并保存于计算机。实验在上午8:00～12:00进行。四、HRV分析注射L-arg后和注射7-NI后分别取7.5min～12.5min之间各5min的连续无干扰ECG,用HRV分析软件进行分析,得出HRV的时域和频域指标。五、统计学处理用SPSS11.0软件对实验数据进行统计学处理;数据均以(?)±s表示,左右两侧比较用Chi-squre检验,给药前后比较采用t检验,P＜0.05有统计学意义。实验结果注射等剂量的L-arg和不同浓度的7-NI后,左右两侧各组变化趋势基本一致,约在10min HR降到最低,之后逐渐上升恢复到术后水平;HFn在10min达到最高,25min～30min时基本恢复Fig.5。左侧NA心抑制区微量注射L-arg后与给药前相比,HR降低(P＜0.05),SDNN升高(P＜0.01),rMSSD升高(P＜0.01),LFn和HF升高(P＜0.05),LF/HF降低(P＜0.01)。实验组与对照组相比HR升高(0.5nmol/L 7-NI组:P＜0.01,2.0nmol/L 7-NI组和5.0nmol/L 7-NI组:P＜0.05),SDNN降低(P＜0.05),rMSSD降低(P＜0.01),HFn降低(P＜0.0

关键词：心率变异性疑核心率一氧化氮合成酶神经型一氧化氮合成酶

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疑核在大脑皮层参与免疫过程中的作用

兽医大学学报 1989年第3期9卷 220-223页

作者：张玉生王澜兽医大学生理教研室

实验用3～4月龄2.1～2.3kg健康青紫蓝家兔20只。麻醉后,5只刺激左侧大脑皮层,5只刺激右侧大脑皮层,10只损毁疑核后,刺激左侧大脑皮层。刺激前及刺激后不同时间采取血样,检测外周血T细胞百分率和PHA诱导的淋巴细胞转化率。结果:刺激左侧... 详细信息

实验用3～4月龄2.1～2.3kg健康青紫蓝家兔20只。麻醉后,5只刺激左侧大脑皮层,5只刺激右侧大脑皮层,10只损毁疑核后,刺激左侧大脑皮层。刺激前及刺激后不同时间采取血样,检测外周血T细胞百分率和PHA诱导的淋巴细胞转化率。结果:刺激左侧大脑皮层后,所测指标明显上升(P0.05);损毁疑核后,刺激左侧大脑皮层时,所测T细胞百分率和PHA诱导的淋巴细胞转化率均无显著变化(P>0.05)。由此证明,左、右侧大脑皮层对细胞免疫具有分区调整现象,疑核可能是大脑皮层调整细胞免疫的中继站。

关键词：大脑皮层疑核免疫动物试验家兔

疑核咽肌运动神经元中SOM和NOS的共存—PRV、SOM、NOS三标记法研究

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中国组织化学与细胞化学杂志 1997年第4期6卷 2-6页

作者：包新民舒斯云第一军医大学珠江医院神经生物学研究室

用ＰＲＶ、ＳＯＭ及ＮＯＳ三标记方法研究了ＳＯＭ和ＮＯＳ样神经元在疑核咽肌运动神经元中的共存。将ＰＲＶ注射入大鼠咽肌后，先进行ＰＲＶ和ＳＯＭ免疫荧光双标记，再进行ＮＡＤＰＨ反应。结果在疑核半致密部中观察到有少量细胞呈Ｐ... 详细信息

用ＰＲＶ、ＳＯＭ及ＮＯＳ三标记方法研究了ＳＯＭ和ＮＯＳ样神经元在疑核咽肌运动神经元中的共存。将ＰＲＶ注射入大鼠咽肌后，先进行ＰＲＶ和ＳＯＭ免疫荧光双标记，再进行ＮＡＤＰＨ反应。结果在疑核半致密部中观察到有少量细胞呈ＰＲＶ、ＳＯＭ和ＮＯＳ三标记。ＳＯＭ和ＮＯＳ样神经元在疑核咽肌运动神经元中共存的意义还不清楚。

关键词：咽肌疑核生长抑素一氧化氮合酶合酶假狂犬病毒

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疑核在胆碱能抗炎通路中的作用

疑核在胆碱能抗炎通路中的作用

作者：夏甜甜山东师范大学

学位级别：硕士

胆碱能抗炎通路（cholinergic anti-inflammatory pathway，CAP）是指迷走传出神经末梢释放乙酰胆碱（acetylcholine，Ach）与免疫细胞表面的nAchRα7受体特异性结合，通过细胞内信号转导，抑制巨噬细胞的活化，从而抑制促炎因子TNF、... 详细信息

胆碱能抗炎通路（cholinergic anti-inflammatory pathway，CAP）是指迷走传出神经末梢释放乙酰胆碱（acetylcholine，Ach）与免疫细胞表面的nAchRα7受体特异性结合，通过细胞内信号转导，抑制巨噬细胞的活化，从而抑制促炎因子TNF、白介素（IL）产生，能够有效的调节机体的炎症反应，对局部和全身炎症反应具有明显的抑制用。疑核（NA）与迷走复合体（DVC）共同组成了延髓内脏带，与迷走神经背核（DMV）神经细胞的轴突组成了副交感神经节前神经纤维。疑核内含有大量的神经递质，包括乙酰胆碱、生物胺、氨基酸、神经肽等及其受体，在调控呼吸功能、免疫功能、消化功能、心血管活动和内分泌功能中起着重要的作用。我们实验室之前的工作已经证实了内毒素LPS炎症大鼠脑干DVC的c-Fos表达显著增强，迷走传出神经纤维放电频率增加，表明迷走复合体参与了胆碱能抗炎症通路。而迷走传出神经纤维部分纤维起源于疑核，且疑核与迷走复合体存在着结构和功能的联系，因此我们推测疑核参与了胆碱能抗炎症通路。G. E. Hermann等大鼠注射LPS致炎后，右侧NTS、DMV的c-Fos表达要显著高于左侧。Simons CT等的研究发现外周炎症信息主要通过左侧迷走神经传入NTS。这些结果提示对炎症的调节是否存在一侧优势，那么，左右两侧的NA对炎症反应是否存在着差异，相关研究尚未见报道。本实验通过建立LPS炎症大鼠模型，利用电生理技术和免疫组织化学法观察NA内神经元c-Fos以及GFAP的表达，探讨疑核内的神经元和星形胶质细胞是否参与炎症反应。如果NA参与LPS炎症反应，那么它是否与胆碱能抗炎通路具有一定的联系？本研究通过三部分实验来探讨上述问题：第一部分，腹腔注射LPS建立LPS炎症大鼠模型，利用电生理技术、免疫组化和ELISA实验方法，分别记录迷走神经放电、股动脉血压、检测大鼠血清中TNF-α和IL-4水平的变化情况、白细胞数目、观察DVC、NA神经元c-Fos以及星形胶质细胞GFAP的表达，探讨NA在炎症反应中的作用及NA与DMV、NTS和AP在炎症反应中的相关性。结果发现： LPS组与生理盐水对照组相比，迷走神经放电的频率显著增加， TNF-α、IL-4水平均显著升高，NA与DVC的c-Fos和GFAP表达显著增加。结论：LPS引起大鼠炎症反应，NA参与LPS的炎症调节， LPS能激活NA与DVC内星形胶质细胞的活性。第二部分，损毁左侧NA后，注射LPS，记录迷走神经放电、股动脉血压、检测大鼠血清中TNF-α、IL-4变化情况、观察DVC神经元c-Fos以及GFAP的表达，进一步探讨左侧NA在LPS炎症中发挥怎样的作用。结果发现：与假损毁+LPS对照组相比，损毁+LPS组迷走神经放电频率显著降低、TNF-α水平极显著降低，而IL-4水平极显著增高，NTS中的c-Fos表达量极显著增加、DVC中GFAP的表达没有显著性差异。结论：在炎症反应中，左侧NA可能促进促炎症因子的产生，而抑制抗炎因子的生成。第三部分，损毁右侧NA后，采用与第二部分相同的实验方法和检测指标，探讨右侧NA对LPS炎症的调控作用，以及左、右两侧NA在LPS炎症反应中是否具有差异性。结果发现：与假损毁+LPS对照组组相比，损毁+LPS组中的迷走神经放电频率是显著降低的，TNF-α的水平虽有所降低但是差异不显著，而IL-4的水平显著升高，迷走复合体中c-Fos和GFAP虽有增加但是均没有显著性的差异。结论：在炎症反应中，右侧NA可能抑制抗炎因子产生，而对促炎因子无显著的促进作用，左右两侧NA对炎症的调节可能存在一定的差异。

关键词：内毒素胆碱能抗炎通路疑核迷走复合体细胞因子星形胶质细胞

曲马多中毒死亡后GABA_A受体α1和GABA_B受体1亚型在延髓孤束核和疑核中的表达

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法医学杂志 2011年第6期27卷 401-404页

作者：张舒官大威王玲王华新张国华赵锐范琰琰中国医科大学法医学院法医病理学教研室辽宁沈阳110001 沈阳军区总医院急诊科辽宁沈阳110015 大连医科大学基础医学院病理学与法医学教研室辽宁大连116044

目的观察曲马多中毒死亡后人脑延髓孤束核和疑核中γ-氨基丁酸(gamma-amino butyric acid,GABA)A受体α1亚型(GABAAα1)和B受体1亚型(GABAB1)的表达变化,探讨曲马多中毒死亡的机制。方法应用免疫组织化学方法,观察比较曲马多中毒死亡人... 详细信息

目的观察曲马多中毒死亡后人脑延髓孤束核和疑核中γ-氨基丁酸(gamma-amino butyric acid,GABA)A受体α1亚型(GABAAα1)和B受体1亚型(GABAB1)的表达变化,探讨曲马多中毒死亡的机制。方法应用免疫组织化学方法,观察比较曲马多中毒死亡人脑与非中毒原因死亡人脑延髓孤束核和疑核的GABAAα1和GABAB1的变化,并用图像分析系统进行分析。结果非中毒原因死亡人脑延髓孤束核和疑核有低水平的GABAAα1和GABAB1表达,曲马多中毒死亡人脑延髓孤束核和疑核的GABAAα1和GABAB1表达明显增加。结论曲马多中毒死亡的机制可能是由于人脑延髓孤束核和疑核GABAAα1和GABAB1表达增加所致的呼吸抑制。

关键词：法医病理学中毒曲马多孤束核疑核受体,GABA

疑核在针刺“足三里”调节机体细胞免疫中的作用

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兽医大学学报 1990年第2期10卷 146-148页

作者：王澜张玉生兽医大学生理教研室

实验用3～4月龄健康家兔(体重2.0～2.5kg)15只。实验组兔经麻醉后固定于大脑立体定位仪上,于A P20-21、L1-1.5处埋置套管(H20-21),以微量注射器注入2%盐酸利多卡因0.5μL 阻断单侧疑核;对照组兔疑核未被阻断,其他处置同实验组。所有动... 详细信息

实验用3～4月龄健康家兔(体重2.0～2.5kg)15只。实验组兔经麻醉后固定于大脑立体定位仪上,于A P20-21、L1-1.5处埋置套管(H20-21),以微量注射器注入2%盐酸利多卡因0.5μL 阻断单侧疑核;对照组兔疑核未被阻断,其他处置同实验组。所有动物均电针“足三里”穴0.5 h,并于电针前和电针后即刻及0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 h采血测定PHA诱导的淋巴细胞转化率、T细胞百分率及E-玫瑰花环形成率。结果,实验组兔的上述免疫指标在电针前,后无明显差异,而对照兔电针后的免疫指标显著高于电针前。由此认为,电针“足三里”穴可能通过神经-内分泌-免疫网络调节细胞免疫,而疑核是该调节环路中的一个重要的中继核团。

关键词：疑核足三里穴细胞免疫免疫调节