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甲基萘醌光敏化单电子氧化多聚鸟苷酸的动态研究

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中国科学（B辑） 2005年第3期35卷 233-236页

作者：马建华林维真杜富强韩镇辉姚思德林念芸集美大学生物工程学院厦门361021 中国科学院上海应用物理研究所上海201800

用248nm激光光解瞬态吸收光谱研究了乙腈-水混合溶液中甲基萘醌(MQ)激发三重态(3MQ*)单电子氧化多聚鸟苷酸(polyG)的原初过程,应用解析瞬态吸收谱方法分别获取了MQ阴离子自由基(MQ??)及polyG阳离子自由基(polyG+?)的瞬态吸收谱,进而分... 详细信息

用248nm激光光解瞬态吸收光谱研究了乙腈-水混合溶液中甲基萘醌(MQ)激发三重态(3MQ*)单电子氧化多聚鸟苷酸(polyG)的原初过程,应用解析瞬态吸收谱方法分别获取了MQ阴离子自由基(MQ??)及polyG阳离子自由基(polyG+?)的瞬态吸收谱,进而分别测定了MQ??及polyG+?的生成速率常数及3MQ*的衰减速率常数.结果表明,3MQ*与polyG的反应速率常数非常接近于3MQ*与dGMP反应的速率常数.

关键词：单电子氧化甲基萘醌动态研究多聚鸟苷酸光敏化阳离子自由基阴离子自由基反应速率常数激发三重态瞬态吸收谱混合溶液光谱研究激光光解谱方法水

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豆豉中产甲基萘醌菌株分离、筛选及其鉴定

食品研究与开发 2018年第17期39卷 139-144页

作者：杜霞陈卫平袁干军邝丙娣江西农业大学食品科学与工程学院江西南昌330045 江西农业大学生物科学与工程学院江西南昌330045

通过平板初筛,从江西产发酵型豆豉中分离得到29株芽孢杆菌。经过高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)初步定性定量检测,得16株产甲基萘醌菌株,其中DC-1为甲基萘醌(menaquinone,MK)产量较高菌株,确定为目标菌... 详细信息

通过平板初筛,从江西产发酵型豆豉中分离得到29株芽孢杆菌。经过高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)初步定性定量检测,得16株产甲基萘醌菌株,其中DC-1为甲基萘醌(menaquinone,MK)产量较高菌株,确定为目标菌株。通过液质连用(liquid chromatograph-mass spectrometer,LC-MS)对DC-1菌株代谢产物分析,确定产物为MK-7。该菌株经形态学,生理生化试验,分子生物学试验和16S rDNA基因序列比对结果分析,鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis DC-1。通过该菌株初步发酵检测结果表明,发酵培时间为4 d时,Bacillus subtilis DC-1代谢物MK-7产量最高,可达到0.416 mg/L,为生物发酵生产MK-7提供了有利的微生物资源。

关键词：豆豉甲基萘醌筛选鉴定枯草芽孢杆菌发酵

具有典型甲基萘醌结构成分微生物参比菌株的筛选

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生物技术 2016年第4期26卷 398-403页

作者：苏姣姣翟磊张露姚粟程池中国食品发酵工业研究院中国工业微生物菌种保藏管理中心北京100015

[目的]筛选得到一套以甲基萘醌MK-6、MK-7、MK-8和MK-9为主要或唯一醌型的参比菌株,用于细菌的常规鉴定及新种分类鉴定。[方法]采用薄层层析(TLC)与高效液相色谱(HPLC)相结合的方法对所挑选的对应醌组分的菌株进行测定、分析,并比较菌... 详细信息

[目的]筛选得到一套以甲基萘醌MK-6、MK-7、MK-8和MK-9为主要或唯一醌型的参比菌株,用于细菌的常规鉴定及新种分类鉴定。[方法]采用薄层层析(TLC)与高效液相色谱(HPLC)相结合的方法对所挑选的对应醌组分的菌株进行测定、分析,并比较菌株的生长性能以及甲基萘醌的类型与含量。[结果]挑选得到对应上述醌型的培养条件简单、培养时间短的特征属菌株,共12株。其中8株菌仅含一种甲基萘醌组分,其余菌株含有多种组分。经相对含量比较,最终确定甲基萘醌成分单一(百分含量>90%)且相对含量高的一套参比菌株。[结论]4株参比菌株,台中金黄杆菌(Chryseobacterium taichungense)CICC 23883、Bacillus oceanisediminis CICC 23881、Deinococcus depolymerans CICC 10360、柠檬色短小杆菌(Curtobacterium citreum)CICC 10675,其主醌型分别为MK-6、MK-7、MK-8和MK-9。

关键词：甲基萘醌菌株筛选参比菌株

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饲用维生素K_3中甲基萘醌含量分析研究

中国饲料 2001年第3期1卷 24-25页

作者：刘祥张雄河南省饲料产品质量监督检验站郑州市经五路23号450002

维生素K3是饲料添加剂原料中分析步骤比较繁琐且漂移较严重的产品。由于维生素K3在配合饲料中所占比例较小(一般为每千克几毫克)，但却对动物生长起着非常重要的作用，很小的分析误差就能导致饲料营养成分失调。

关键词：饲用维生素K3 甲基萘醌分析方法

骆驼刺泛菌LysR家族转录因子LrhA对甲基萘醌合成的调控作用及其抗氧化功能研究

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骆驼刺泛菌LysR家族转录因子LrhA对甲基萘醌合成的调控作用及其抗...

作者：李琦琦西北农林科技大学

学位级别：硕士

水资源短缺造成的干旱问题对农作物生产产生巨大影响。因此,提高农作物的抗旱能力成为人们关注的焦点和研究的热点。大量研究显示植物内生菌能够帮助宿主植物抵抗干旱、盐碱等非生物环境胁迫。但目前为止,植物内生菌促作物抗旱抗逆的机... 详细信息

水资源短缺造成的干旱问题对农作物生产产生巨大影响。因此,提高农作物的抗旱能力成为人们关注的焦点和研究的热点。大量研究显示植物内生菌能够帮助宿主植物抵抗干旱、盐碱等非生物环境胁迫。但目前为止,植物内生菌促作物抗旱抗逆的机制并不十分清楚,这阻碍了促植物抗旱内生菌的筛选鉴定和实际应用。本课题组前期从骆驼刺植物组织中分离筛选获得的内生细菌骆驼刺泛菌Pantoea alhagi LTYR-11Z能够定殖于小麦根部,促进小麦生长并增强小麦的抗旱能力。LrhA作为LysR型转录调节因子(LTTR)家族的一员,在菌体生物膜的形成、鞭毛运动、宿主定殖、渗透压响应和趋化性等生命活动中发挥着重要的调控功能。甲基萘醌是一种脂溶性分子,是细菌细胞质膜的成分,衍生自细菌中莽草酸途径的共同分支点中间体—分支酸,它们在电子传递、氧化磷酸化、主动转运和抗氧化过程中起重要作用。本研究以骆驼刺泛菌LTYR-11Z为研究对象,通过分子生物学研究手段结合植物实验研究转录因子LrhA对骆驼刺泛菌甲基萘醌合成的调控作用及其抗氧化功能。主要研究内容如下:1.以全局转录调控因子LrhA为切入点,测定骆驼刺泛菌野生株、ΔlrhA突变株和回补菌株在CHP、HO氧化剂处理下的存活率,发现ΔlrhA突变株与野生株相比存活率显著降低,且在突变株中回补lrhA基因后其抗氧胁迫能力恢复到野生株水平,表明LrhA具有协助骆驼刺泛菌抵御氧化胁迫的重要作用。2.通过ΔlrhA突变株与野生株转录组测序及比较分析,发现在ΔlrhA中,甲基萘醌合成基因men D、men H、men B、men C、men E显著下调(fold change>1.5)(P甲基萘醌的生物合成。通过敲除甲基萘醌合成基因men D、men A,比较骆驼刺泛菌野生株、Δmen A、Δmen D突变株以及Δmen A(men A)和Δmen D(men D)回补菌株在CHP、HO胁迫下的存活率差异,发现突变株的存活率较野生株显著下降,表明骆驼刺泛菌的甲基萘醌生物合成途径参与其抗氧化胁迫功能。随后通过DCFHDA荧光探针测定骆驼刺泛菌野生株、Δmen A、Δmen D突变株以及回补菌株在同等HO和CHP胁迫条件下胞内的活性氧(ROS)水平,发现Δmen A、Δmen D突变株与野生株和回补株相比胞内ROS水平显著上升,表明骆驼刺泛菌的甲基萘醌生物合成途径能显著降低其胞内ROS水平,协助其抵御氧化胁迫。4.通过小麦盆栽实验,发现接种突变株Δmen A、Δmen D的小麦与接种野生株的小麦相比抗干旱能力显著下降,表明骆驼刺泛菌的甲基萘醌生物合成途径具有协助该菌株促小麦抗旱的作用。综上所述,本次研究发现在骆驼刺泛菌*** LTYR-11Z中转录因子LrhA具有抗氧胁迫的生理功能,而LrhA主要是通过正调控甲基萘醌生物合成基因的表达发挥其抗氧胁迫功能。甲基萘醌合成途径在氧胁迫条件下参与清除胞内活性氧自由基,维持胞内氧化还原平衡。此外,甲基萘醌生物合成途径具有增强骆驼刺泛菌促进小麦抗干旱胁迫的能力,这对于研究该菌株促小麦抗旱的内在机制具有重要意义。

关键词：骆驼刺泛菌 LrhA 甲基萘醌氧胁迫抗旱

北极海洋红球菌（Rhodococcus sp.）B7740中甲基萘醌的分离、鉴定及抑制AGEs活性研究

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北极海洋红球菌（Rhodococcus sp.）B7740中甲基萘醌的分离、鉴定...

作者：穆青华中农业大学

学位级别：硕士

研究发现,北极海洋红球菌(Rhodococcus sp.)B7740是一种能够生产类胡萝卜素的极地微生物。在鉴定其产生的类胡萝卜素的同时发现还含有大量的异戊二烯醌类物质,特别是MK-8(H)。目前国内外对红球菌(Rhodococcus sp.)B7740的研究主要集中... 详细信息

研究发现,北极海洋红球菌(Rhodococcus sp.)B7740是一种能够生产类胡萝卜素的极地微生物。在鉴定其产生的类胡萝卜素的同时发现还含有大量的异戊二烯醌类物质,特别是MK-8(H)。目前国内外对红球菌(Rhodococcus sp.)B7740的研究主要集中在培养条件的优化、类萝卜素的产生及其活性方面,对甲基萘醌报道很少。本课题结合微生物产醌类物质的文献报道,先采用酸热破壁和有机溶剂提取相结合的方法提取甲基萘醌;然后通过LC/MS初步鉴定红球菌B7740甲基萘醌的结构,利用高速逆流色谱技术(HSCCC)对其中含量最高的MK-8(H)进行纯化,通过高精度质谱和核磁共振技术对纯化得到的MK-8(H)进行进一步结构鉴定。在此基础上,以MK-4、辅酶Q10作为阳性对照,评价了三者的抗氧化活性和在不同体系中抑制晚期糖基化终末产物(AGEs)的能力及可能的机制。此外,选择果糖-牛血清白蛋白(BSA)体系,深入研究了不同影响因素对AGEs的生成以及三者对体系中AGEs抑制率的影响。主要研究结论如下:(1)红球菌B7740甲基萘醌的提取优化建立了一种利用酸破壁和不同有机溶剂结合的快速、简易、高效提取MK8(H)的方法。在提取中根据提取的醌类物质的保留时间和峰面积,确定甲基萘醌(MK-8(H))的最佳提取溶剂为丙酮。通过酸热破壁实验的单因素实验和正交实验,得到北极海洋红球菌B7740中甲基萘醌(MK-8(H))提取的最佳提取条件:使用2mol/L的盐酸,在水浴温度80℃,水浴时间100min条件下,按照1/60的料液比加入丙酮进行提取,能够快速、高效的提出纯度较高的MK-8(H),纯度达91.77%,得率为0.45%。(2)红球菌B7740中甲基萘醌的分离与鉴定选择石油醚:丙酮(2:1)为提取溶剂,对红球菌B7740中的醌类物质进行提取,结合液相色谱和质谱联用技术(LC-MS)对提取的醌类物质进行结构鉴定,鉴定出其中的7个峰(峰a-g),分别是MK-8(H)、MK-8、MK-8(H)、MK-8(H)、MK-7(H)、MK-8(H)、MK-9(H)。利用高速逆流的谱技术对其峰f(MK-8(H))进行纯化,纯化后的峰初步经液相色谱分析,利用归一化方法计算,纯度达到99.75%。收集纯化后的MK-8(H),经高精度质谱分析,分子离子峰为m/z=741.5588,分离所得MK-8实际值与理论值相对误差为0.13ppm,鉴定分离所得的物质为MK-8(H)纯品。然后利用一维和二维核磁共振技术进一步确证了MK-8(H)的结构。确定两个H原子的加成位置为最后一个异戊二烯单元的双键。(3)红球菌B7740中甲基萘醌(MK-8(H))抗氧化活性及食品体系抑制AGEs能力研究基于市场上尚无MK-8(H)的现状和后续研究的需要,分别利用液相色谱法和紫外光谱法对分离纯化得到的纯度大于99.75%的MK-8(H)纯品绘制标准曲线。利用甲醇:甲基叔丁基醚(1:1)配制成不同浓度的溶液,利用液相法得到标准曲线公式y=7×10x-797935,R=0.9998;根据紫外图谱选择248nm作为测定波长,得到标准曲线公式y=7.72x+0.028,R=0.998。结果表明两种方法均可适用。以MK-4、辅酶Q10作为对照,测定MK-8(H)清除DPPH自由基的能力,其强弱排序为:MK-4>MK-8(H)>辅酶Q10。在清除DPPH自由基实验的基础上,研究了不同浓度的MK-8、MK-4、辅酶Q10在果糖-牛血清白蛋白体系、牛血清白蛋白-丙酮醛体系、精氨酸-丙酮醛体系中对AGEs的抑制作用。结果表明,在果糖-牛血清白蛋白体系中,对AGEs抑制力的强弱按从大到小排序为:MK-8(H)>辅酶Q10>MK-4;在牛血清白蛋白-丙酮醛体系中,对AGEs抑制力的强弱按从大到小排序为:MK-8(H)>MK-4>辅酶Q10;在精氨酸-丙酮醛体系中,对AGEs抑制力的强弱按从大到小排序为:MK-8(H)>MK-4>辅酶Q10。从以上结果可知,MK-8(H)无论在何种体系中对AGEs的抑制能力,与MK-4和辅酶Q10相比,均显示最强的抑制活性。然后通过对MK-8(H)与丙酮醛的反应前后的液相色谱图进行分析,结合LC-MS的结果,初步推断出MK-8(H)与丙酮醛的反应机理是断裂的异戊二烯侧链与丙酮醛发生了加成反应。(4)红球菌B7740中甲基萘醌(MK-8(H))在食品体系抑制AGEs能力影响因素研究根据前一章不同体系的实验结果,选取对AGEs抑制效果较稳定的果糖-牛血清白蛋白体系,深入研究了反应温度、反应时间、pH值、金属离子对体系AGEs的生成量以及MK-8(H)、MK-4、辅酶Q10对其抑制率的影响。结果发现,在不同的反应温度下,随着温度的升高,AGEs的含量也逐渐升高,MK-8(H)、MK

关键词：红球菌B7740 甲基萘醌鉴定纯化晚期糖基化终末产物影响因素

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V_K系列中间体2-甲基萘醌的制备

四川师范大学学报（自然科学版） 2005年第2期28卷 222-224页

作者：黄毅戴汉松王涛四川师范大学化学学院四川成都610066

以2 甲基萘为原料经铬酐氧化制备2 甲基萘醌,通过改变不同的原料比,在没有用复杂试剂的情况下找到了制备2 甲基萘醌的最佳合成条件:其物质量的比n2 甲基萘 n铬酐 n冰醋酸 n水=1 6.4 16.5 35.5,最佳反应时间为70min,收率达到60%左右.

关键词：甲基萘醌制备中间体 K系列 2-甲基萘最佳合成条件最佳反应时间原料比冰醋酸物质量铬酐试剂收率

化学导向法筛选高产甲基萘醌菌株及其生产性能的研究

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化学导向法筛选高产甲基萘醌菌株及其生产性能的研究

作者：杜霞江西农业大学

学位级别：硕士

甲基萘醌（Menaquinone,MK）为一类脂溶性K族维生素,具有促进血液凝固、预防骨质疏松、治疗精神性疾病等重要生理活性,为人体所需的重要微量营养成分。传统合成方法为化学合成,面临产量低,副产物多,反应要求高等缺点,而利用生物发酵方... 详细信息

甲基萘醌（Menaquinone,MK）为一类脂溶性K族维生素,具有促进血液凝固、预防骨质疏松、治疗精神性疾病等重要生理活性,为人体所需的重要微量营养成分。传统合成方法为化学合成,面临产量低,副产物多,反应要求高等缺点,而利用生物发酵方法生产甲基萘醌,具有产量高及耗能低等优点,本文利用枯草芽孢杆菌为菌株生产甲基萘醌,建立了一种化学导向筛选甲基萘醌菌株的方法。从以下几方面开展了工作:1、对甲基萘醌标准品MK-0,MK-1,MK-4高效液相色谱检测,得到甲基萘醌系列物在245 nm,265 nm,325 nm波长下产生样品吸收带,且最大吸收波长λmax为245 nm。以豆豉为筛选原材料,高温水浴初筛得29株芽孢杆菌。对菌株产物HPLC分析得16株产甲基萘醌菌株。经高效液相质谱联用（LC-MS）检测,确定产物为MK-7,验证了化学导向筛选产甲基萘醌菌株方法的可靠性。2、以MK-7产量最高的菌株DC-1为目标菌株,综合各项生物学试验结果,鉴定DC-1菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。3、探讨了培养基组分对菌株甲基萘醌生产性能的影响,结果表明碳源和氮源的种类及添加量对发酵产物中甲基萘醌产量和多样性均有较大影响。当碳源为甘油,添加量为0.5 g/100 m L时,菌株MK-7产量为26.830mg/L。当氮源为蛋白胨、玉米浆、牛肉膏、复合氮源（豆粉:蛋白胨1:1）时,菌株甲基萘醌产物多样性变强。除MK-7外还会产生一种不同结构甲基萘醌产物:MK-2,且当氮源为玉米浆,添加量为4 g/100m L时,MK-7和MK-2产量均为最高,分别为32.280mg/L和1.292mg/L。4、优化DC-1菌株MK-7生产性能最佳培养条件。单因素试验表明转速、培养温度和培养时间对菌株MK-7生产性能影响较大。当转速为0 r/min时,MK-7产量最高为34.296mg/L;当温度为42 ℃时,MK-7产量最高为50.283mg/L;当发酵时间为4 d时,MK-7产量最高为54.383mg/L。进一步正交试验表明最佳培养条件为转速30r/min,培养温度39 ℃,培养时间3.5 d,MK-7产量高达63.942mg/L,与优化前相比提高了98.09%。

关键词：甲基萘醌枯草芽孢杆菌化学导向液态发酵正交试验

诺卡氏菌型放线菌中甲基萘醌的高效液相色谱研究

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现代仪器 2004年第2期10卷 21-24页

作者：张建丽刘志恒北京理工大学生命科学与技术学院北京100081 中国科学院微生物研究所微生物资源国家重点实验室北京100080

本文以已知的星状诺卡氏菌(Nocardia asteroides)、紫红红球菌(Rhodococcusrhodochrous)和灰色链霉菌(Streptomyces griseus)标准菌株中提取的醌作为对照样品,用高效液相色谱法,分析测定9株诺卡氏菌型放线菌的甲基萘醌。结果表明,该法... 详细信息

本文以已知的星状诺卡氏菌(Nocardia asteroides)、紫红红球菌(Rhodococcusrhodochrous)和灰色链霉菌(Streptomyces griseus)标准菌株中提取的醌作为对照样品,用高效液相色谱法,分析测定9株诺卡氏菌型放线菌的甲基萘醌。结果表明,该法是一种较理想的甲基蔡醌测定方法,可应用于诺卡氏菌型放线菌的分类和鉴定。

关键词：诺卡氏菌型放线菌甲基萘醌高效液相色谱测定分类鉴定