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细粒棘球蚴生发层细胞的体外培养

中国兽医学报 1997年第1期17卷 36-38页

作者：刘金明王爱华顾惠明陈燕军中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所

将分散的绵羊源细粒棘球蚴生发层细胞在５％ＣＯ２、３７℃恒温箱中进行连续传代培养，细胞培养液为ＲＰＭＩ１６４０完全培养基，细胞支持物在１～１４代时交替为２４孔细胞培养板和用胶原蛋白包被的２４孔细胞培养板，１４代后仅为２... 详细信息

将分散的绵羊源细粒棘球蚴生发层细胞在５％ＣＯ２、３７℃恒温箱中进行连续传代培养，细胞培养液为ＲＰＭＩ１６４０完全培养基，细胞支持物在１～１４代时交替为２４孔细胞培养板和用胶原蛋白包被的２４孔细胞培养板，１４代后仅为２４孔细胞培养板。细胞经４０～４５ｄ传代培养（８代）后增殖缓慢。１２代开始至２５代止，各孔细胞又逐步转变成快速增殖细胞，第２６代细胞在对数增长期内的倍增时间约为２４ｈ。这一细胞增殖速率持续至３４代后约有减缓。传代增殖细胞呈小点形、圆形和椭圆形，大部分行悬浮生长。行贴壁生长的细胞经长期培养后融合成合胞体。

关键词：细粒棘球蚴生发层细胞体外培养

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土荆皮乙酸的抗多房棘球蚴作用及其机制研究

中国普外基础与临床杂志 2024年第6期31卷 695-705页

作者：陈青达哇卓玛刘川川樊海宁青海大学临床医学院西宁810001 青海大学附属医院肝胆胰外科西宁810001 青海省包虫病研究重点实验室西宁810001

目的探讨土荆皮乙酸(pseudolaric acid B,PAB)体外对原头节细胞凋亡的影响,以及体内对病灶-宿主微环境组织中血管生成和细胞凋亡的调节作用及其可能机制,为临床开发多房棘球蚴病新型替代药物提供依据。方法体外实验:原头节、囊泡、生发... 详细信息

目的探讨土荆皮乙酸(pseudolaric acid B,PAB)体外对原头节细胞凋亡的影响,以及体内对病灶-宿主微环境组织中血管生成和细胞凋亡的调节作用及其可能机制,为临床开发多房棘球蚴病新型替代药物提供依据。方法体外实验:原头节、囊泡、生发层细胞、人包皮成纤维细胞(human foreskin fibroblasts,HFFs)和正常人肝细胞经不同浓度(0、2.5、5、10、20、40、80、160和320μmol/L)的PAB分别处理7、5、5、5、5 d后,评价原头节存活率、囊泡磷酸葡萄糖异构酶(phosphoglucose isomerase,PGI)释放水平、生发层细胞活力及HFFs和正常人肝细胞活力;原头节和囊泡经2.5%戊二醛固定后用于扫描电镜和透射电镜观察。动物实验:从保种沙鼠腹腔病灶中分离原头节,然后腹腔注射感染18只C57BL/6J小鼠建立模型,随机分为3组,每组6只:模型组(Model组)每日给予0.3 mL PBS缓冲液灌胃;阿苯达唑(albendazole,ABZ)组每日给予0.3 mL ABZ(100 mg/kg)灌胃;PAB组每日予以0.3 mL PAB(40 mg/kg)灌胃。连续灌胃6周后,取病灶-宿主微环境组织,采用ELISA法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)和半胱氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase3,caspase3)的表达水平,采用生化检测试剂盒检测一氧化氮(nitric oxide,NO)的表达水平,采用Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(BCL2-associated X protein、Bax)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl2)、caspase3、活化caspase3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase3,cleaved-caspase3)、VEGF、血管内皮细胞生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)、磷脂肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、磷酸化PI3K(phosphorylated phosphatidylinositol 3 kinase,p-PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)及磷酸化AKT(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)蛋白的表达水平。结果体外实验:体外不同浓度PAB与多房棘球绦虫原头节共培养7 d后,40、80、160和320μmol/L组原头节分别在6、4、2和1 d后全部死亡;PAB对多房棘球绦虫原头节表现出一定的时间和浓度依赖性。多房棘球绦虫囊泡及生发层细胞经PAB处理后,随着PAB浓度增大,培养上清液中PGI释放量逐渐增加[半数最大效应浓度值为(24.40±1.42)μmol/L],生发层细胞活力明显被抑制[半数抑制浓度值为(15.94±2.55)μmol/L]。PAB对哺乳动物细胞无明显毒性。20μmol/L PAB干预原头节3 d后Bax和caspase3蛋白的表达水平上调,Bcl2蛋白表达水平下调。动物实验:与Model组相比,PAB组和ABZ组小鼠的病灶湿重均降低(P细胞凋亡增加和血管生成减少有关。

关键词：多房棘球绦虫土荆皮乙酸原头节囊泡生发层细胞细胞凋亡血管生成磷脂肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路

棘球蚴细胞系(株)的培育及其在免疫预防中的应用研究　Ⅰ.人源细粒棘球蚴细胞的培养

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中国兽医学报 1997年第5期17卷 473-474页

作者：陆家海郭中敏李德昌郭固张守竹冯德元程维新陈启军兰州军区乌鲁木齐总区院

用外科方法从临床确诊的细粒棘球蚴病人肝脏取出包囊，以生发层为培养材料，采用ＲＰＭＩ１６４０、１９９、改良伊格水解乳蛋白培养基，用胶原蛋白包被和不包被两种培养瓶，对细粒棘球蚴生发层细胞进行初培养，并进行了对比观察。结果... 详细信息

用外科方法从临床确诊的细粒棘球蚴病人肝脏取出包囊，以生发层为培养材料，采用ＲＰＭＩ１６４０、１９９、改良伊格水解乳蛋白培养基，用胶原蛋白包被和不包被两种培养瓶，对细粒棘球蚴生发层细胞进行初培养，并进行了对比观察。结果显示，以胶原蛋白作为支撑条件，应用改良伊格水解乳蛋白培养基培养生发层细胞的效果优于其他，并已传７代，原代培养时间需要２８～４５ｄ才能传代，３代以内细胞为多形态性。

关键词：棘球蚴人源细粒棘球蚴生发层细胞细胞培养

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泡球蚴持续感染对小鼠肝脏纤维化的影响

中国血吸虫病防治杂志 2021年第1期33卷 54-61页

作者：高海军庞华胜孙旭冬张颋景涛王晓玲莫筱瑾胡薇国家卫生健康委员会包虫病防治研究重点实验室、西藏自治区疾病预防控制中心拉萨850000 兰州大学基础医学院中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、国家热带病研究中心、WHO热带病合作中心、科技部国家级热带病国际联合研究中心、国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室四川省甘孜藏族自治州疾病预防控制中心

目的评价泡球蚴持续感染对小鼠肝脏纤维化的影响,为研究泡型棘球蚴病肝纤维化进展及其治疗方法提供参考。方法以泡球蚴感染长爪沙鼠血清(25、50、100μL)和泡球蚴及其生发层细胞、原头节分别对肝星状HSC-T6和LX-2细胞进行体外刺激48 h,... 详细信息

目的评价泡球蚴持续感染对小鼠肝脏纤维化的影响,为研究泡型棘球蚴病肝纤维化进展及其治疗方法提供参考。方法以泡球蚴感染长爪沙鼠血清(25、50、100μL)和泡球蚴及其生发层细胞、原头节分别对肝星状HSC-T6和LX-2细胞进行体外刺激48 h,采用CCK-8法检测细胞增殖,应用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测HSC-T6细胞培养上清中Ⅰ型胶原蛋白(collagen 1,Col1)和α-平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达量。收集泡球蚴感染1、2、4、6、8个月小鼠血清和肝脏,分别采用ELISA法检测血清中Col1和α-SMA含量,采用天狼猩红染色法动态观察肝脏胶原纤维沉积情况。结果泡球蚴感染沙鼠血清体外可诱导HSC-T6和LX-2细胞增殖,不同血清剂量组细胞增殖率差异均有统计学意义(FHSC-T6=126.50、FLX-2=201.50,P均细胞促增殖率最高,HSC-T6和LX-2细胞增殖率分别为(573.36±206.34)%和(940.38±61.65)%。泡球蚴感染沙鼠血清体外刺激后,HSC-T6细胞培养上清中Col1和α-SMA蛋白含量均上升;且以100μL血清刺激后Col1和α-SMA含量最高,分别为(20.99±2.01)ng/m L和(305.52±16.67)pg/mL。泡球蚴及其生发层细胞、原头节均可体外诱导HSC-T6和LX-2细胞增殖,增殖率分别为(142.65±9.17)%和(189.99±7.75)%、(118.55±8.96)%和(122.54±0.21)%、(156.34±17.45)%和(160.59±31.41)%,不同刺激组细胞增殖率差异均有统计学意义(FHSC-T6=11.24、FLX-2=47.72,P均生发层细胞、原头节刺激后,HSC-T6细胞培养上清中Col1和α-SMA含量均增高;且以泡球蚴作用最为明显,Col1和α-SMA含量分别为(4.43±2.23)ng/mL和(285.20±90.67)pg/mL。泡球蚴感染后1~8个月,小鼠肝脏中胶原纤维沉积持续增加;小鼠血清中Col1水平在感染后6个月达最高,为(280.26±23.04)ng/mL;α-SMA水平在感染后8个月达最高,为(33.68±4.45)ng/mL。结论泡球蚴持续感染可促进肝星状细胞体外增殖及小鼠血清中Col1和α-SMA蛋白含量升高,引起小鼠肝脏中胶原纤维沉积增多。泡球蚴感染阶段是引起泡型棘球蚴病肝纤维化的关键期。

关键词：泡球蚴肝星状细胞胶原纤维原头节生发层细胞

氨基醇咔唑化合物BTB3体外抗细粒棘球蚴效果的评价

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2016年第3期34卷 245-248,254页

作者：刘丛珊张皓冰薛剑陶奕胡薇中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、世界卫生组织热带病合作中心、科技部国家级热带病国际联合研究中心、卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025 复旦大学生命科学学院微生物学与微生物工程系上海200433

目的观察氨基醇咔唑化合物BTB3体外抗细粒棘球蚴的效果。方法体外培养羊源细粒棘球蚴原头节和继发感染小鼠来源的生发层细胞,用浓度为1、2、4、8、10和20μg/ml的BTB3作用3 d后,分别采用美兰染色法和CCK-8法检测原头节和生发层细胞的活... 详细信息

目的观察氨基醇咔唑化合物BTB3体外抗细粒棘球蚴的效果。方法体外培养羊源细粒棘球蚴原头节和继发感染小鼠来源的生发层细胞,用浓度为1、2、4、8、10和20μg/ml的BTB3作用3 d后,分别采用美兰染色法和CCK-8法检测原头节和生发层细胞的活性。用扫描电镜观察10μg/ml BTB3对生发层细胞造成的损伤。体外培养细粒棘球蚴囊,用浓度为1、5和10μg/ml的BTB3作用2周后,观察其对囊的影响,并用扫描电镜观察囊内部结构的变化。结果 10μg/ml和20μg/ml BTB3组原头节的死亡率分别为(100.0±0.0)%和(85.2±7.2)%。但当浓度降低后,原头节死亡率均低于10%。生发层细胞经8、10和20μg/ml BTB3作用后,其细胞活性抑制率均达100%,其余低浓度BTB3组的抑制率随浓度的降低而降低。扫描电镜观察发现,BTB3可使生发层细胞发生脱落、皱缩以及空腔化。10μg/ml BTB3作用于棘球蚴囊14 d后,全部囊均出现塌陷。其超微结构显示,BTB3作用后棘球蚴内囊中出现了细胞脱落和不均匀的现象。结论 BTB3对体外培养的细粒棘球蚴原头节、生发层细胞和棘球蚴囊均有较强的作用,是一种潜在的抗棘球蚴药物。

关键词：细粒棘球蚴原头节生发层细胞棘球蚴囊氨基醇咔唑化合物

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中药验方APD-10治疗包虫病的临床观察

中国地方病学杂志 2003年第2期22卷 178-180页

作者：李永祥王月琴尹铁飞张辉刘振中潘晓玲石河子大学医学院病原生物学与免疫学室新疆石河子832000 新疆昌吉州玛纳斯县人民医院外科新疆玛纳斯832200

目的　探讨中药验方APD 10治疗包虫病的疗效及机理。方法　对确诊的 12 0例包虫病患者经口服APD 10煎剂后 ,对治疗前后的各项临床指标与术后病理检查结果进行对比。结果　服药后症状、体征减轻 ,62例服药 90d临床治愈 ,42例服药 12 0 15... 详细信息

目的　探讨中药验方APD 10治疗包虫病的疗效及机理。方法　对确诊的 12 0例包虫病患者经口服APD 10煎剂后 ,对治疗前后的各项临床指标与术后病理检查结果进行对比。结果　服药后症状、体征减轻 ,62例服药 90d临床治愈 ,42例服药 12 0 15 0d临床治愈 ,16例有效。治疗后B超、肺部X线片及病理检查均显示囊壁变性皱缩 ,囊壁纤维层断裂 ,角质层厚薄不均 ,生发层细胞浊肿明显 ,囊腔内有大量坏死物质。结论　用APD

关键词：中药验方临床观察临床治愈包虫病患者肺部X线片生发层细胞检查结果术后病理临床指标治疗前后病理检查服药后治疗后纤维层囊壁

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他克林体外抗细粒棘球蚴作用研究

中国人兽共患病学报 2018年第7期34卷 608-612页

作者：刘丛珊尹建海姚嘉青薛剑陶奕张皓冰中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室科技部国家级热带病国际联合研究中心世界卫生组织热带病合作中心上海200025

目的研究乙酰胆碱酯酶抑制剂他克林体外抗细粒棘球蚴的作用效果。方法体外分离和培养细粒棘球蚴原头节和生发层细胞,经浓度为4、8、10、20和40μg/mL的他克林作用3d后经0.1%亚甲基蓝染色观察,记录死活原头节的数目以计算原头节死亡率,... 详细信息

目的研究乙酰胆碱酯酶抑制剂他克林体外抗细粒棘球蚴的作用效果。方法体外分离和培养细粒棘球蚴原头节和生发层细胞,经浓度为4、8、10、20和40μg/mL的他克林作用3d后经0.1%亚甲基蓝染色观察,记录死活原头节的数目以计算原头节死亡率,另外用CCK-8试剂盒检测药物对生发层细胞活性的影响并计算细胞活性抑制率。同时用透射电镜和扫描电镜分别观察药物对细粒棘球蚴原头节和生发层细胞超微结构造成的影响。结果经20μg/mL和40μg/mL的他克林体外作用3d后,原头节的死亡率高达100%,其中死亡原头节的体壁出现轻微肿胀且伴随着外部轮廓的消失,同时超微结构亦发生明显改变,原头节体壁组织中出现了大量的空泡和脂肪滴。当他克林浓度为40μg/mL时,可造成生发层细胞全部死亡。细粒棘球蚴生发层细胞粘附于培养介质的基质消失、细胞发生聚集且数目减少。扫描电镜可观察到他克林作用3d后的细胞出现塌陷或者萎缩。结论他克林可直接影响体外培养的细粒棘球蚴原头节和生发层细胞的活性,是潜在的包虫病治疗药物。

关键词：他克林细粒棘球蚴原头节生发层细胞

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多房棘球绦虫OCT4基因的克隆及功能鉴定

多房棘球绦虫OCT4基因的克隆及功能鉴定

作者：商桂华厦门大学

学位级别：硕士

泡球蚴病是由多房棘球绦虫幼虫(泡球蚴)寄生于人畜等中间宿主肝脏等部位引起的寄生虫病,是世界性最危险的人畜共患寄生虫病之一。泡球蚴生发层细胞类似于哺乳动物胚胎干细胞,具有很强的自我更新能力和分化能力,它在泡球蚴的生长发育以... 详细信息

泡球蚴病是由多房棘球绦虫幼虫(泡球蚴)寄生于人畜等中间宿主肝脏等部位引起的寄生虫病,是世界性最危险的人畜共患寄生虫病之一。泡球蚴生发层细胞类似于哺乳动物胚胎干细胞,具有很强的自我更新能力和分化能力,它在泡球蚴的生长发育以及生活史循环中起着关键作用。生发层细胞多潜能性的维持是一个复杂的调控系统,其中OCT4基因是维持干细胞多潜能性的内源性因子。因此我们希望通过对泡球蚴内源性基因OCT4的研究,探讨泡球蚴生长发育的内在机制。本项目研究利用RACE技术获得了泡球蚴中编码OCT4同源基因的全长序列,利用生物信息学技术对基因结构进行分析,结果显示该基因编码的蛋白包含POU功能域,并且该功能域具有高度保守性。在此基础上,我们对泡球蚴OCT4可能同源性基因编码的蛋白(暂命名为EmOCT4)进行一系列功能分析。实验中,我们通过原核表达技术获得重组抗体,通过免疫组化技术对EmOCT4进行表达定位,结果表明EmOCT4蛋白在细胞核中表达。我们通过逆转录病毒载体介导的方法,将泡球蚴EmOCT4基因与鼠SOX2、KLF4、cMYC基因一同导入鼠成纤维细胞中,将其重编程,并且成功诱导出多能干细胞(iPSC)。这一结果表明EmOCT4在诱导鼠成纤维细胞中发挥了重要作用,是鼠OCT4蛋白的功能同源物,实验结果为进一步探讨EmOCT4在泡球蚴生发层细胞多潜能性维持中的作用提供了帮助。

关键词：泡球蚴 EmOCT4 多潜能性生发层细胞免疫定位

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素质教育题型的设计

中学生物教学 1997年第2期 44-45页

作者：陈邦强贵州绥阳儒溪中学

素质教育题型的设计贵州绥阳儒溪中学（５６３３０５）陈邦强本人已从事素质教育一年有余，在大胆探索教学方法的基础上，进一步探讨了素质教育的题型设计，下面就是１套我校初二生物中期考试的素质教育题型，现介绍给同行供参考。一、... 详细信息

素质教育题型的设计贵州绥阳儒溪中学（５６３３０５）陈邦强本人已从事素质教育一年有余，在大胆探索教学方法的基础上，进一步探讨了素质教育的题型设计，下面就是１套我校初二生物中期考试的素质教育题型，现介绍给同行供参考。一、选择题：（注：括号内为参考答案）１...

关键词：素质教骨骼肌贵州绥阳电刺激动脉血管人体皮肤教学方法胸锁乳突肌生发层细胞层次结构