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甘蓝夜蛾核多角体病毒活体增殖因子及最佳增殖条件的研究

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中国生物防治学报 2015年第1期31卷 78-84页

作者：于洪春房丹丹邓佳佳赵奎军东北农业大学农学院哈尔滨150030

甘蓝夜蛾核多角体病毒Mamestra brassicae nucleopolyhedrovirus(简称Mabr NPV)是甘蓝夜蛾最重要的昆虫病原微生物。本文采用正交法研究影响Mabr NPV在甘蓝夜蛾体内增殖的主要因子及因子的主次顺序,确定互作因子并筛选病毒增殖最佳条件... 详细信息

甘蓝夜蛾核多角体病毒Mamestra brassicae nucleopolyhedrovirus(简称Mabr NPV)是甘蓝夜蛾最重要的昆虫病原微生物。本文采用正交法研究影响Mabr NPV在甘蓝夜蛾体内增殖的主要因子及因子的主次顺序,确定互作因子并筛选病毒增殖最佳条件。研究结果表明,影响Mabr NPV产量的因子及互作因子主次顺序为C(饲毒虫日龄)>C×D(饲毒虫日龄与收毒时间互作)>B×C(饲毒剂量与饲毒虫日龄互作)>B×D(饲毒剂量与收毒时间互作)>B(饲毒剂量)>D(收毒时间)>A(温度)。明确因子C对病毒产量有极显著影响,因子C和D存在互作且对产量有显著影响。确定Mabr NPV增殖生产的最佳条件为25℃下、以500 PIB/虫的剂量饲喂12日龄幼虫,9 d后提取病毒,平均单虫病毒产量为1.921×109 PIB,幼虫孵化到收集幼虫提取病毒的生产周期为21 d,病毒增殖3.842×106倍。

关键词：甘蓝夜蛾甘蓝夜蛾核多角体病毒病毒产量影响因子增殖条件

甘蓝夜蛾几丁质酶基因cDNA序列的克隆与序列分析

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昆虫知识 2009年第5期46卷 697-702页

作者：贺玉年王晓云韩岚岚樊东东北农业大学农学院哈尔滨150030

昆虫几丁质酶在害虫生物防治中具有很大的发展潜力。以甘蓝夜蛾Mamestra brassicae L.预蛹期幼虫整个虫体为材料提取总RNA,利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(RACE),扩增得到其几丁质酶的cDNA序列。该序列含有2826个碱基,包括1个1689个... 详细信息

昆虫几丁质酶在害虫生物防治中具有很大的发展潜力。以甘蓝夜蛾Mamestra brassicae L.预蛹期幼虫整个虫体为材料提取总RNA,利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(RACE),扩增得到其几丁质酶的cDNA序列。该序列含有2826个碱基,包括1个1689个碱基的开放阅读框,预测编码1个含562个氨基酸的多肽,分子量约为62.6kDa,等电点为5.30。推导得到的氨基酸序列含有2个N-位糖基化位点,22个O-位糖基化位点,氨基酸序列与其他昆虫,尤其是鳞翅目昆虫的几丁质酶高度同源。获得的甘蓝夜蛾几丁质酶基因cDNA序列已经登录GenBank并获得登录号FJ436415。

关键词：甘蓝夜蛾几丁质酶分子克隆序列分析

甘蓝夜蛾和八字地老虎肌动蛋白基因的克隆与序列分析

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昆虫知识 2008年第6期45卷 884-890页

作者：朴冬花贺玉年樊东东北农业大学农学院哈尔滨150030

肌动蛋白是细胞骨架微丝的主要组成成分,在肌肉收缩、细胞骨架形成、细胞移动等方面起重要作用。以鳞翅目夜蛾科昆虫甘蓝夜蛾Mamestra brassicae L.和八字地老虎Agrotis c-nigrum 3龄幼虫整个虫体为材料提取总RNA,利用RT-PCR和cDNA末端... 详细信息

肌动蛋白是细胞骨架微丝的主要组成成分,在肌肉收缩、细胞骨架形成、细胞移动等方面起重要作用。以鳞翅目夜蛾科昆虫甘蓝夜蛾Mamestra brassicae L.和八字地老虎Agrotis c-nigrum 3龄幼虫整个虫体为材料提取总RNA,利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(RACE),分别扩增得到2种昆虫的肌动蛋白的cDNA序列,甘蓝夜蛾肌动蛋白的cDNA序列含有1441个碱基,而八字地老虎肌动蛋白的cDNA序列含有1411个碱基。2种昆虫的该基因的cDNA序列均包括1个1131个碱基的开放阅读框,编码1个含376个氨基酸的蛋白。甘蓝夜蛾肌动蛋白分子量约为41.8kDa;八字地老虎肌动蛋白分子量约为41.9kDa。Prosite软件分析结果表明,甘蓝夜蛾和八字地老虎肌动蛋白氨基酸序列中存在3个肌动蛋白特征片段。GenBank数据库搜索及序列比对结果表明,甘蓝夜蛾肌动蛋白属于肌肉特异型肌动蛋白,八字地老虎肌动蛋白属于细胞质特异型肌动蛋白。2个基因的cDNA序列已经登录GenBank并获得登录号,甘蓝夜蛾肌动蛋白cDNA序列登录号为EU035314,八字地老虎肌动蛋白cDNA序列登录号为EU035315。利用RT-PCR技术在八字地老虎4龄、5龄、6龄幼虫、蛹期4个不同发育阶段和6龄期的肠道、体壁、脂肪体3种不同组织中都检测到了肌动蛋白基因在mRNA水平的表达。

关键词：克隆序列分析肌动蛋白甘蓝夜蛾八字地老虎

甘蓝夜蛾Mamestra brassicae Linnaeus飞行能力研究

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应用昆虫学报 2016年第3期53卷 595-603页

作者：吴晓付晓伟赵新成吴孔明河南农业大学植物保护学院郑州450002 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193

【目的】测定日龄、性别、交配等因素对农业迁飞性害虫甘蓝夜蛾Mamestra brassicae Linnaeus飞行能力的影响,为其迁飞行为研究和异地测报提供理论依据。【方法】在气温为（24±1）℃、相对湿度为75%±5%的实验室环境下,利用飞行磨系统... 详细信息

【目的】测定日龄、性别、交配等因素对农业迁飞性害虫甘蓝夜蛾Mamestra brassicae Linnaeus飞行能力的影响,为其迁飞行为研究和异地测报提供理论依据。【方法】在气温为（24±1）℃、相对湿度为75%±5%的实验室环境下,利用飞行磨系统对甘蓝夜蛾实验室种群1~5日龄未交配个体、已交配的3日龄个体以及野外迁飞种群分别进行连续24 h吊飞测试,记录其累计飞行时间、累计飞行距离、平均飞行速率等参数。【结果】甘蓝夜蛾实验室种群的飞行能力随日龄增长而变化,初羽化时即具有较强的飞行能力,2~3日龄达到峰值,4~5日龄的飞行能力显著下降;雌性甘蓝夜蛾的飞行能力强于雄性甘蓝夜蛾;交配的甘蓝夜蛾平均飞行速率显著小于处女甘蓝夜蛾,但二者的平均飞行时间和飞行距离均无显著差异。此外,渤海湾迁飞种群中晚季节南迁种群的飞行能力显著强于早季节北迁种群和过渡种群。【结论】日龄和交配状态是影响甘蓝夜蛾飞行能力的关键因素。

关键词：甘蓝夜蛾飞行能力飞行磨羽化交配状态

甘蓝夜蛾CYP9A90基因的克隆及溴氰菊酯对其诱导表达

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植物保护 2017年第1期43卷 54-60,82页

作者：刘月庆樊星周夏钱金杨文庆杨静樊东东北农业大学农学院哈尔滨150030 东北农业大学资源与环境学院哈尔滨150030

P450 CYP9A家族基因与昆虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性相关。为证实溴氰菊酯对甘蓝夜蛾CYP9A基因的诱导效果,本研究采用RT-PCR和RACE技术克隆获得甘蓝夜蛾CYP9A基因,real-time PCR检测该基因在甘蓝夜蛾不同组织中的表达差异及溴氰菊酯... 详细信息

P450 CYP9A家族基因与昆虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性相关。为证实溴氰菊酯对甘蓝夜蛾CYP9A基因的诱导效果,本研究采用RT-PCR和RACE技术克隆获得甘蓝夜蛾CYP9A基因,real-time PCR检测该基因在甘蓝夜蛾不同组织中的表达差异及溴氰菊酯处理甘蓝夜蛾5龄幼虫不同时间后该基因相对表达量变化,研究结果可为甘蓝夜蛾对溴氰菊酯的抗性治理提供依据。结果表明:克隆得到甘蓝夜蛾CYP9A基因cDNA全长序列,该序列包含1 828bp,包括1个125bp的5′非编码区,1个104bp的3′非编码区和1个1 599bp的开放阅读框,编码532个氨基酸,分子量约为61.1kDa,等电点为8.84,GenBank登录号为KR676343,被国际P450命名委员会命名为CYP9A90。Real-time PCR分析结果表明,该基因在甘蓝夜蛾5龄幼虫6个组织中表达情况不同,其中在脂肪体中表达量最高。低剂量溴氰菊酯作用后不同时间点CYP9A90mRNA总体呈现诱导表达趋势。

关键词：甘蓝夜蛾 P450 基因克隆溴氰菊酯表达

甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫剂的制备及田间防治试验

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植物保护 2000年第2期26卷 6-8页

作者：李长友张履鸿李国勋郑桂玲宋捷许少甫高洪祥魏淳芳东北农业大学哈尔滨150030 大庆经济学校

应用活体增殖病毒 ,制备甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫剂乳剂 ,室内对 4龄甘蓝夜蛾幼虫的毒力测定 ,其LD50 为 9 4 2× 1 0 3 PIB/头。田间防治效果表明 ,采用 1 0× 1 0 11PIB/hm2 和 3 0× 1 0 11PIB/hm2 的剂量防治甘蓝夜蛾的效果... 详细信息

应用活体增殖病毒 ,制备甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫剂乳剂 ,室内对 4龄甘蓝夜蛾幼虫的毒力测定 ,其LD50 为 9 4 2× 1 0 3 PIB/头。田间防治效果表明 ,采用 1 0× 1 0 11PIB/hm2 和 3 0× 1 0 11PIB/hm2 的剂量防治甘蓝夜蛾的效果都在 70 %以上。乳液的稳定性较好。

关键词：甘蓝夜蛾核型多角体病毒防治效果杀虫剂

甘蓝夜蛾信息素类似物的设计合成及初步活性研究

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合成化学 2020年第5期28卷 435-440页

作者：马好运王安佳翁爱珍王留洋梅向东折冬梅宁君中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193

甘蓝夜蛾隶属鳞翅目夜蛾科,主要危害甘蓝、西兰花、萝卜等十字花科蔬菜。与传统的化学农药防治相比,昆虫信息素防治具有专一性强、灵敏度高、绿色环保、同时不会误伤天敌等优点。但天然信息素易降解、持效期短,长期单一使用会诱导昆虫... 详细信息

甘蓝夜蛾隶属鳞翅目夜蛾科,主要危害甘蓝、西兰花、萝卜等十字花科蔬菜。与传统的化学农药防治相比,昆虫信息素防治具有专一性强、灵敏度高、绿色环保、同时不会误伤天敌等优点。但天然信息素易降解、持效期短,长期单一使用会诱导昆虫产生抗性等问题。针对这些问题,本文设计并合成了4种结构新颖的信息素类似物:反-11-十六碳烯-3-氯丙酸酯(G1)、反-11-十六碳烯-2-溴丙酸酯(G2)、11,12-二氟十六烷基-1-醇(G3)、11,12-二氟十六烷基乙酸酯(G4),并表征了其结构。通过触角电生理试验(EAG)初步测试了G1~G4的室内生物活性。

关键词：甘蓝夜蛾信息素类似物合成综合防治触角电生理试验

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甘蓝夜蛾核型多角体病毒连续传代的研究

吉林农业大学学报 1998年第4期20卷 26-28页

作者：席景会潘洪玉李国勋解放军农牧大学农学农机系长春130062 东北农业大学昆虫系哈尔滨150030

对甘蓝夜蛾核型多角体病毒（ＭｂＮＰＶ）在同源寄主细胞系ＮＥＡＵＭｂ９３１１０４（Ｍｂ９３１１０４）中的生长特性进行了研究。结果表明，无包涵体游离病毒（ＭｂＮＰＶ＿ＮＯＶ）在接种后１４ｈ达到吸收高峰，病毒滴... 详细信息

对甘蓝夜蛾核型多角体病毒（ＭｂＮＰＶ）在同源寄主细胞系ＮＥＡＵＭｂ９３１１０４（Ｍｂ９３１１０４）中的生长特性进行了研究。结果表明，无包涵体游离病毒（ＭｂＮＰＶ＿ＮＯＶ）在接种后１４ｈ达到吸收高峰，病毒滴度降到最低值５－７９ ×１０２ＴＣＩＤ５０／ｍＬ，接种病毒９６ｈ，病毒滴度达到最高值２－１３ ×１０５ＴＣＩＤ５０／ｍＬ，在ＮＯＶ（ｎｏｎｏｃｃｌｕｄｅｄｖｉｒｕｓ）连续传递２０代的过程中，ＭｂＮＰＶ＿ＮＯＶ毒力随传递代数的增加而减低，并且多角体的毒力也发生了显著的变化，前几代能使甘蓝夜蛾幼虫死亡率在９０％以上，传递到１５代以后产生的多角体对甘蓝夜蛾的幼虫几乎没有毒力。

关键词：甘蓝夜蛾核型多角体病毒连续传代细胞系

甘蓝夜蛾细胞色素P450CYP4M及CYP6AB基因的克隆与表达研究

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甘蓝夜蛾细胞色素P450CYP4M及CYP6AB基因的克隆与表达研究

作者：高艳玲东北农业大学

学位级别：硕士

细胞色素P450(cytochrome P450或CYP450,简称P450)是一种广泛存在于细菌、真菌、植物和动物体内的氧化酶系,由数量众多、功能复杂的一类血红蛋白酶组成。在昆虫中,P450分布在昆虫的各个组织器官中,参与昆虫生长、发育、繁殖等重要的生... 详细信息

细胞色素P450(cytochrome P450或CYP450,简称P450)是一种广泛存在于细菌、真菌、植物和动物体内的氧化酶系,由数量众多、功能复杂的一类血红蛋白酶组成。在昆虫中,P450分布在昆虫的各个组织器官中,参与昆虫生长、发育、繁殖等重要的生理活动,例如昆虫体内蜕皮激素与保幼激素等内源化合物的合成降解。它们对异生物质的代谢作用导致了昆虫对杀虫剂的抗药性和对植物毒素的耐受性。P450酶通过NADPH获得电子起末端氧化的作用,由P450催化的反应不仅包括氧原子的转移,同时P450酶还具有氧化酶、还原酶、异构酶及脱氢酶的活性。分离昆虫P450基因并研究其特征是明确P450如何参与虫体内重要的代谢过程的第一步,研究在很大程度上发现了昆虫抗药性形成的机理,以及使用杀虫剂对昆虫生物学和生理学的影响。本研究针对昆虫P450基因在昆虫体内不同时期不同组织的存在着差异性,确定了在其活性较高的五龄幼虫期提取mRNA,进一步通过***等技术克隆了甘蓝夜蛾P450CYP4M以及CYP6AB基因全长序列。 CYP4McDNA序列含有1909个碱基,包括一个1572个碱基的开放阅读框,编码一个含523个氨基酸的多肽,分子量约为60.9kDa,等电点为8.65。基因的cDNA序列已经登录GenBank并获得登录号JF731346。利用Expasy molecular biology server的Scanprosite facility对推导的甘蓝夜蛾CYP4M氨基酸的结构域进行预测,蛋白序列中含有P450酶的特征结构FxxGxxxCxG(461-470)血红蛋白结合域,与其它昆虫CYP4M基因有较高的同源性。将得到的CYP4M基因利用表达载体pET21b转入受体BL21中进行原核表达,经异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,分别获得与预测蛋白大小相同的蛋白条带。 CYP6AB cDNA序列含有1966个碱基,包括一个1539个碱基的开放阅读框,编码一个含512个氨基酸的多肽,分子量约为58.8kDa,等电点为8.43。获得的甘蓝夜蛾CYP6AB基因cDNA序列已经登录GenBank并获得登录号JQ901385。使用生物学软件分析甘蓝夜蛾的cDNA序列的分子特性,蛋白序列中同样含有P450酶的特征结构FxxGxxxCxG (446-455)血红蛋白结合域。构建原核表达载体,完成甘蓝夜蛾CYP6AB基因在大肠杆菌表达系统中的表达。

关键词：甘蓝夜蛾 P450 CYP4M CYP6AB 克隆表达