检索结果-南通市图书馆

猫冠状病毒非结构蛋白3的多克隆抗体制备及亚细胞定位

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

浙江大学学报（农业与生命科学版） 2023年第5期49卷 744-754页

作者：王子仪金子安卢辰赫乔治王圣文颜焰周继勇郑肖娟浙江大学动物医学中心农业农村部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058 浙江大学海南研究院海南三亚572025 浙江大学-帕特诺尔联合研发中心浙江杭州310058

冠状病毒的非结构蛋白3(non-structural protein 3,Nsp3)是复制/转录复合体的组成部分,也是重要的潜在抗病毒靶标之一。本研究在对Nsp3进行跨膜区、信号肽和抗原表位预测的基础上,通过聚合酶链反应扩增Ⅱ型猫冠状病毒(feline coronaviru... 详细信息

冠状病毒的非结构蛋白3(non-structural protein 3,Nsp3)是复制/转录复合体的组成部分,也是重要的潜在抗病毒靶标之一。本研究在对Nsp3进行跨膜区、信号肽和抗原表位预测的基础上,通过聚合酶链反应扩增Ⅱ型猫冠状病毒(feline coronavirus,FCoV)代表毒株(WSU 79-1683)Nsp3蛋白中抗原性较好的区段(第50—550位氨基酸),随后将其亚克隆到pCOLD-TF原核表达载体上。在低温条件下,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导,成功表达分子量约为130 kDa的His-Nsp3重组融合蛋白。在非变性条件下,采用镍柱亲和层析获得了纯度较高的目的重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,制备Nsp3多克隆抗血清(多抗血清),蛋白质印迹法(Western blotting,WB)和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)结果显示,Nsp3多抗血清能特异性识别FCoV感染细胞中的Nsp3蛋白。采用免疫荧光双标法结合激光共聚焦显微镜对FCoV感染细胞中Nsp3蛋白的亚细胞定位进行分析,结果发现,FCoV感染细胞中Nsp3发生聚集现象,并与内质网存在共定位现象。Nsp3蛋白的特异性抗体制备以及亚细胞定位研究为进一步开展Nsp3蛋白的生物学功能分析奠定了基础。

关键词：猫冠状病毒非结构蛋白3 原核表达多克隆抗体亚细胞定位

维普期刊数据库博看期刊

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

猫冠状病毒对猫的致病性研究

中国动物传染病学报 2023年第1期31卷 26-33页

作者：张心琴黄崇强余星莹李修文周华波刘林林郭嘉宁郭金凡曾昊余良政韦祖樟欧阳康黄伟坚陈樱广西大学动物科技学院家畜传染病与分子免疫学实验室南宁530004 南宁市华波宠物医院南宁530004

为了解猫冠状病毒(FCoV)在猫体内感染导致猫传染性腹膜炎(FIP)的临床特征和病变情况。本研究通过猫腹腔攻毒感染试验,验证两株来自患病猫腹水样品的FCoV阳性毒株能否导致猫出现FIP。结果表明,FCoV-GXNN531组攻毒14 d后,猫出现发热(>39.5... 详细信息

为了解猫冠状病毒(FCoV)在猫体内感染导致猫传染性腹膜炎(FIP)的临床特征和病变情况。本研究通过猫腹腔攻毒感染试验,验证两株来自患病猫腹水样品的FCoV阳性毒株能否导致猫出现FIP。结果表明,FCoV-GXNN531组攻毒14 d后,猫出现发热(>39.5℃),食欲逐渐废绝,体内出现严重的腹水(超过原来体重的25%),SAA值最高达到79.65 mg/L,而FCoV-HNZZ527组攻毒猫在感染32 d后出现发热(>39.5℃),厌食、消瘦、鼻眼分泌物增多、拉稀等临床症状,SAA最高到达105.81 mg/L。两株毒株均对实验猫多个脏器造成损伤,以肺脏、肾脏、肝脏较为严重,病理切片显示出不同程度的肺出血、肾小球肾炎、肝细胞变性坏死、脾窦狭窄、白髓萎缩等。RT-PCR检测结果表明两株病毒在肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、膀胱、肠管、腹水均有复制。结果证明临床获得的两株毒株均能引起猫出现较为明显FIP症状,其中FCoV-GXNN531毒株可使猫出现严重腹水,临床表现为严重的腹膜炎。本研究为今后临床上及早诊断和预防FCoV的感染提供了一定的理论指导。

关键词：猫冠状病毒猫传染性腹膜炎致病性

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

猫冠状病毒的临床流行特征及其遗传进化分析

动物医学进展 2021年第10期42卷 25-30页

作者：刘林林丁仰保黄崇强李修文张心琴余星莹何剑桥崔柏杨余良政周华波韦祖樟欧阳康黄伟坚陈樱广西大学动物科学技术学院家畜传染病与分子免疫学实验室广西南宁530004 南宁市华波宠物医院广西南宁530004

为了解猫冠状病毒(FCoV)的流行情况,2018年-2020年收集来自广西、河南、广州和江西等地疑似猫传染性腹膜炎(FIP)病例108份。通过RT-nPCR方法对样品进行鉴定和部分S基因扩增和遗传进化分析。108份样品中阳性样品66份,阳性率61.1%,血清型... 详细信息

为了解猫冠状病毒(FCoV)的流行情况,2018年-2020年收集来自广西、河南、广州和江西等地疑似猫传染性腹膜炎(FIP)病例108份。通过RT-nPCR方法对样品进行鉴定和部分S基因扩增和遗传进化分析。108份样品中阳性样品66份,阳性率61.1%,血清型分型均为Ⅰ型。将扩增所获得的57条S基因的分型序列与国内外其他参考毒株序列进行遗传进化分析,发现FCoV具有高度的遗传多样性,其中55个毒株与欧洲、日本和中国毒株都分别在不同分支,它们之间的核苷酸同源性为81.8%~93.7%。来自同一只猫的不同脏器毒株(FCoV GXBH-10)被划分在2个分支中,其中肺脏毒株与美国毒株OH11927亲缘关系较近,核苷酸同源性为93.8%,而其他脏器毒株却在另一个分支,暗示了共感染现象。对S蛋白3′末端19条氨基酸序列进行分析,发现突变位置主要发生在3个区域,分别为D^(1267)H^(1268)→EY/EQ、H^(1444)→N和T^(1454)→N/S,是否这些突变可作为遗传标记,有待进一步验证。论文针对近年来FCoV的流行趋势进行了系统分析,为掌握FCoV流行规律及早期临床诊断提供参考。

关键词：猫冠状病毒临床流行特征遗传进化 S基因

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

猫冠状病毒荧光RT-RAA检测方法的建立

动物医学进展 2021年第6期42卷 36-39页

作者：张安洁张慧殷文婷肖望成王玥魏荣代飞燕李晓成云南农业大学动物医学院云南昆明650201 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

根据猫冠状病毒(FCoV)7b基因序列,设计引物及探针,建立了FCoV荧光RT-RAA检测方法。该方法能够在39℃恒温条件下,20 min内对病原进行快速检测,与猫疱疹病毒、猫杯状病毒、猫细小病毒均无交叉反应;对病毒核酸的最低检测限为1.97×101 fg/... 详细信息

根据猫冠状病毒(FCoV)7b基因序列,设计引物及探针,建立了FCoV荧光RT-RAA检测方法。该方法能够在39℃恒温条件下,20 min内对病原进行快速检测,与猫疱疹病毒、猫杯状病毒、猫细小病毒均无交叉反应;对病毒核酸的最低检测限为1.97×101 fg/μL。用套式PCR与建立的荧光RT-RAA对30份疑似FCoV感染临床样品进行检测,两种方法符合率为93.33%。结果表明,建立的FCoV荧光RT-RAA方法适用于FCoV快速检测。

关键词：猫冠状病毒荧光RT-RAA 快速检测

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

猫冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立

动物医学进展 2024年第3期45卷 16-21页

作者：陈秋阳梁瑞英梁琳汤新明秦彤丁家波中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

猫冠状病毒(FCoV)在全球猫种群中广泛流行,隐形感染的猫导致病毒在猫群中持续传播。提高样本检测率、早预防、早治疗可减少种群中病毒流行率。为建立可以灵敏、准确检测FCoV的Taq Man荧光定量PCR检测方法,根据GenBank公布的FCoV基因片段... 详细信息

猫冠状病毒(FCoV)在全球猫种群中广泛流行,隐形感染的猫导致病毒在猫群中持续传播。提高样本检测率、早预防、早治疗可减少种群中病毒流行率。为建立可以灵敏、准确检测FCoV的Taq Man荧光定量PCR检测方法,根据GenBank公布的FCoV基因片段N保守区域设计了1对特异性引物和1条探针,通过优化反应体系,建立了FCoV Taq Man荧光定量PCR检测方法,对75份临床样品进行检测。结果表明,该方法在1.49×10^(11)~1.49×10^(2) copies/μL之间具有良好的线性关系,特异性强,敏感性高,对FCoV质粒标准品最低检测下限为1.49×10^(0) copies/μL,而普通PCR对FCoV质粒标准品最低检测下限为1.49×10^(5) copies/μL;重复性好,组内变异系数和组间变异系数均小于3%;75份临床样品,阳性率为37.33%。研究建立的FCoV检测方法扩增效率高、特异性强、敏感性好、稳定性高,且实用性好,可以用于FCoV的快速检测,可为流行病学调查提供有效的技术手段。

关键词：猫冠状病毒荧光定量PCR Taq Man探针

猫冠状病毒分子进化、免疫病理机制和疫苗研究进展

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医杂志 2020年第11期56卷 77-80页

作者：刘玉秀黄柏成田克恭国家兽用药品工程技术研究中心河南洛阳471000

猫冠状病毒(Feline coronavirus,FCoV)具有2种血清型(I型和II型),又分为2种生物型或病理型,一种是猫肠道冠状病毒(Feline enteric coronavirus,FECV),主要引起轻度到重度肠炎;另一种是猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus,FIPV),主要引起感染猫腹膜炎、眼膜炎及神经症状等。FIPV被认为是FECV缺失突变体,其在猫群中不存在水平传播,具有抗体依赖性增强特性,接种疫苗后高水平的抗体反应会加快传染性腹膜炎(Feline infectious peritonitis,FIP)的发展。本文对猫冠状病毒的分子生物学、FECV/FIPV突变的组织嗜性改变机制、FIPV感染的病理学成因及免疫效力评估进行了总结,以期为国内猫冠状病毒的防控提供科学依据。

关键词：猫冠状病毒抗体反应神经症状免疫效力水平传播组织嗜性血清型缺失突变体

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

猫冠状病毒的检测和基因的分子进化研究

猫冠状病毒的检测和基因的分子进化研究

作者：夏红月沈阳农业大学

学位级别：硕士

猫冠状病毒(Feline coronavirus,FCo V)是猫群中广泛流行的一种病毒,分为猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus,FIPV)和猫肠道冠状病毒(Feline enteric coronavirus,FECV)两个生物型,FECV通常只引起轻微的肠炎,而FIPV是家猫和野猫致死性疾病猫传染性腹膜炎(Feline infectious peritonitis,FIP)的病原。为了探究不同地域FCo V的病毒序列是否受到了选择压力,我们对来自国内以及其他国家的FCo V序列的关键基因进行了分析,为FCo V的分子进化机制及致病机制的研究提供了基础。S蛋白是一类具有信号肽的膜糖蛋白,用于受体结合和病毒进入;ORF1ab编码复制酶多聚蛋白,与病毒的复制相关;N蛋白是病毒的核衣壳蛋白;而7b基因与病毒的毒性相关。因此,我们对FCo V的上述基因进行了扩增、测序,并且与NCBI数据库中其他国家的病毒序列进行了系统发育分析,结果显示来自中国大陆的所有FCo V序列都聚集在一起,形成了一个单独的分支,来自荷兰的一些序列也与中国的FCo V序列聚在一起,来自比利时、美国和荷兰的其他序列则聚在一起形成不同的分支,只有来自英国的序列形成了一个单独的分支,该分支不包括来自任何其他国家的序列,因此,上述国家的FCo V基因序列重建的进化树没有显现出明显的地域性。因为病毒的重组会影响序列选择压力的分析,我们首先用GARD方法对病毒序列进行了重组分析,结果显示没有明显的重组证据,并且其对选择压力分析的影响较小。应用PAML软件对序列进行选择压力分析后,结果显示英国的序列的进化速率不同于其他国家的序列,并且来自英国的序列其进化速率略小。应用PAML和Data Monkey软件进行位点的选择压力分析后,我们检测到nsp12-14中有4个正选择位点,S基因中有10个正选择位点,N基因中有4个正选择位点,7b基因中有4个正选择位点,此外,先前报道的可以将96%的FIPV与FECV毒株序列区分开的S基因的245位点也是一个正选择位点。Data Monkey软件中的FEL和REL方法在不同的基因中都发现了相同的负选择位点。这些位点可能是相对稳定、对病毒至关重要的。在nsp12-14基因中检测到了106个负选择位点,这可能是病毒基因组复制所必需的。在S基因中检测到了168个负选择位点,这可能是病毒与宿主细胞结合或进入宿主细胞的关键。在N基因中检测到25个负选择位点,这可能是病毒的核衣壳蛋白的关键。在7b基因中检测到了17个负选择位点,这可能是病毒毒性的关键。在我们分析的所有基因中,检测到的负选择位点多于正选择位点,这表明这些基因相对保守。而少量的位点发生正选择可能有助于这些病毒在新的环境或有害条件下适应环境以维持生存,可以将96%的FIPV与FECV区分开的S基因的245位点也发生了正选择,提示这些正选择位点可能与FIPV的发生有关。

关键词：猫冠状病毒基因序列选择压力

猫冠状病毒和猫传染性腹膜炎病毒RT-PCR检测方法的建立

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧与兽医 2006年第11期38卷 32-34页

作者：李健陈沁王权张建武胡永强上海出入境检验检疫局上海200135 上海大学生命科学学院上海200436 中国农科院上海家畜寄生虫病研究所上海200032

本文利用A-72细胞繁殖猫冠状病毒(FCV)和猫传染性腹膜炎病毒(FIPV),用蔗糖密度梯度离心纯化,根据病毒S基因序列设计引物,初步建立了检测FCV和FIPV的RT-PCR方法。采用此方法对人工攻毒猫组织进行检测,结果特异灵敏。

关键词：猫冠状病毒猫传染性腹膜炎病毒 RT—PCR

猫冠状病毒检测方法的建立、分离鉴定及纳米抗原制备

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

猫冠状病毒检测方法的建立、分离鉴定及纳米抗原制备

作者：陈秋阳中国农业科学院

学位级别：硕士

猫冠状病毒(Feline coronavirus,FCo V)属于冠状病毒科、α冠状病毒属,是一种猫科动物中常见的病原,可跨物种传播,于世界各地均有广泛分布。FCo V分为FCo V I型和FCo V II型两种血清型,FCo V I型在体外难以培养,FCo V II型可以在猫巨噬... 详细信息

猫冠状病毒(Feline coronavirus,FCo V)属于冠状病毒科、α冠状病毒属,是一种猫科动物中常见的病原,可跨物种传播,于世界各地均有广泛分布。FCo V分为FCo V I型和FCo V II型两种血清型,FCo V I型在体外难以培养,FCo V II型可以在猫巨噬细胞(Felis catus whole fetus,FCWF-4)和猫肾细胞(Candell-Rees feline kidney cell,CRFK)中增殖,常作为FCo V病毒研究的模型毒株。每种血清型根据其致病性又可分为两种生物型:猫肠道冠状病毒(Feline enteric coronavirus,FECV)和猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus,FIPV)。FECV感染一般无症状或导致动物发生腹泻,FIPV感染则会导致动物腹腔积液、发烧、腹泻、共济失调等症状,严重者可致命。由于FCo V具有高传染性与高致病性,甚至可能致死,因此,建立快速、准确检测FCo V的检测方法,以便疾病早发现,早治疗。本研究建立了可以灵敏、准确检测FCo V的Taq Man荧光定量PCR检测方法,根据Gen Bank公布的FCo V N基因片段的保守区域设计了1对特异性引物和1条探针,优化反应体系和反应程序,成功建立FCo V Taq Man荧光定量PCR检测方法,并对75份临床样品进行了检测。实验结果表明,该方法在1.49×10～1.49×10 copies·μL之间具有良好的线性关系;特异性强,对猫细小病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)、猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)、猫疱疹病毒(Feline herpesvirus,FHV)基因不会产生非特异性扩增;敏感性好,最低可检测到1.49×10 copies·μL的基因;重复性好,组内变异系数和组间变异系数均小于3%;检测75份临床样品,阳性率为29.33%,远高于普通RT-PCR 1.33%的检出率。由此表明,本研究建立的检测方法特异性强、敏感性好、稳定性高,可以用于FCo V的快速诊断,为流行病学调查提供了有效的技术手段。本研究利用建立的荧光定量PCR检测方法诊断方法,将临床检测阳性样本接种CRFK细胞,进行病毒分离培养,经巢氏PCR方法进行鉴定与分型,结果显示成功分离培养获得FCo VⅡ型病毒一株,TCID为10/100μL。对该病毒分离株N基因进行全长扩增并测序,结果显示该病毒分离株属于FCo VⅡ型,其与FCo V参考毒株N基因的核苷酸同源性为87.8%～99.9%。对N基因编码的N蛋白的生物信息学分析显示该蛋白具有较好的亲水性,其二级结构主要由α螺旋、延伸链、β转角和无规卷曲组成;无信号肽区域和跨膜结构域,存在45个磷酸化位点;含有10个潜在的B细胞抗原表位、2个CTL优势表位和2个Th优势表位,这些表位是疫苗设计的优势区域。传统技术研发的疫苗可能会引发抗体依赖性增强效应(Antibody-dependent enhancement,ADE)。纳米疫苗是一种新兴的疫苗开发系统,它具有尺寸可调节、负载能力高、表面修饰可调节、抗原稳定性强等优点,随着纳米颗粒与疫苗技术的研究日益深入,铁蛋白重组纳米颗粒疫苗技术逐渐被应用于许多疫苗的开发。有研究表明冠状病毒纳米疫苗可预防冠状病毒感染,并且避免了ADE效应。FCo V的受体结合区域(Receptor Binding Domain,RBD)具有良好的抗原性,因此本研究针对FCo V的RBD区域,利用铁蛋白的自组装特性设计纳米抗原,利用原核表达系统表达了SRBD-Fe纳米颗粒,经过分子筛层析柱纯化后使用透射电镜观察,确认重组蛋白已经自组装形成笼状结构。综上所述,本研究成功建立了FCo V的Taqman荧光定量PCR检测方法,为该病毒的诊断防控提供方法;同时,分离培养得到一株FCo VⅡ型病毒,并针对其N基因序列进行了遗传进化分析和生信分析;原核表达了SRBD-Fe自组装蛋白纳米颗粒,经透射电镜观察确认重组蛋白经自组装形成笼状结构,为FCo V的防控提供了一种新的疫苗开发思路。

关键词：猫冠状病毒 Taqman荧光定量PCR 分离鉴定铁蛋白纳米疫苗