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猪链球菌检测技术研究进展

中国生物工程杂志 2020年第4期40卷 84-90页

作者：张玲梅王豪举西南大学动物科技学院兽医传染病学实验室重庆400715

猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是引起猪呼吸系统疾病的一类重要的病原菌,给世界养猪业造成了巨大经济损失;SS也可通过伤口、呼吸道等途径感染人。准确、敏感、快速的SS检测方法有助于在生产实践中及时确诊,进而采取相应的预防、治疗... 详细信息

猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是引起猪呼吸系统疾病的一类重要的病原菌,给世界养猪业造成了巨大经济损失;SS也可通过伤口、呼吸道等途径感染人。准确、敏感、快速的SS检测方法有助于在生产实践中及时确诊,进而采取相应的预防、治疗和综合防控措施。对SS的检测方法包括选择性培养基、PCR技术、免疫学及分子分型方法等的研究进展进行了综述,并比较了这些方法的优缺点及应用情况,为SS标准诊断方法的建立提供了参考资料。

关键词：猪链球菌分子生物学检测免疫学检测分子分型

猪链球菌荚膜多糖合成相关基因簇保守区的克隆与分析

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微生物学报 2012年第5期52卷 573-580页

作者：王楷宬陆承平范伟兴中国动物卫生与流行病学中心青岛266032 南京农业大学动物医学院南京210095

【目的】为了解猪链球菌各血清型荚膜多糖合成相关基因保守区的功能与基因进化关系,【方法】在分析已知的猪链球菌1、2、7、9型荚膜多糖合成相关基因簇序列,及其各orf与猪链球菌33个血清型基因组DNA杂交结果的基础上,提出猪链球菌荚膜... 详细信息

【目的】为了解猪链球菌各血清型荚膜多糖合成相关基因保守区的功能与基因进化关系,【方法】在分析已知的猪链球菌1、2、7、9型荚膜多糖合成相关基因簇序列,及其各orf与猪链球菌33个血清型基因组DNA杂交结果的基础上,提出猪链球菌荚膜多糖合成相关基因簇具有与肺炎链球菌相似的盒样结构的假设。并采用PCR、测序和Southern印迹杂交等方法验证这些假设。【结果】结果显示,猪链球菌的荚膜多糖合成相关基因簇确存在与肺炎链球菌相似的盒样结构,5'端的前4个调节相关基因同源性极高,基因簇两端都有保守的侧翼基因,且在3'端的侧翼序列中找到了适于扩增荚膜多糖合成相关基因簇中血清型特异性区域的下游引物所在基因(aroA)。分析发现,各血清型的orfY、orfX、cpsA、cpsB、cpsC、cpsD和aroA的亲缘关系较近。

关键词：猪链球菌荚膜多糖合成相关基因簇保守基因侧翼基因

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猪链球菌分子流行病学研究方法

微生物学报 2021年第12期61卷 3928-3936页

作者：杨诗鑫卞晨吴宗福南京农业大学动物医学院江苏南京210014 农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210014 世界动物卫生组织猪链球菌病参考实验室江苏南京210014

猪链球菌(Streptococcus suis)是猪重要的细菌性病原,它可以导致猪的脑膜炎、败血症和关节炎等症状,给养猪业带来严重经济损失;同时该菌还可感染人,是一种人畜共患病原菌。应用分子流行病学方法,阐明猪链球菌病的流行病学特征,明确其毒... 详细信息

猪链球菌(Streptococcus suis)是猪重要的细菌性病原,它可以导致猪的脑膜炎、败血症和关节炎等症状,给养猪业带来严重经济损失;同时该菌还可感染人,是一种人畜共患病原菌。应用分子流行病学方法,阐明猪链球菌病的流行病学特征,明确其毒力分型、时空分布、传播途径、传染源,确定传播的遗传决定因素等,将有助于猪链球菌病的防控。目前常用的分子流行病学方法主要有多位点序列分型、脉冲场凝胶电泳、全基因组测序和基于PCR的方法等。本文介绍了上述方法的原理以及在猪链球菌流行病学中的应用,并分析这几种方法的优缺点,从而为更好地揭示猪链球菌流行病学特征、制定猪链球菌病的防控策略提供参考。

关键词：猪链球菌流行病学多位点序列分型脉冲凝胶电泳全基因组测序

猪链球菌1、2、14、1/2型荚膜多糖的单糖组成比较

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微生物学报 2014年第6期54卷 656-662页

作者：王楷宬赵峡陆承平姚火春中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 中国海洋大学医药学院山东青岛266003 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

【目的】猪链球菌1、2、14和1/2型间存在单向或双向的交叉抗原性,这种交叉抗原性的产生原因至今未被揭示。【方法】采用Sephacryl S-300凝胶层析柱对猪链球菌14和1/2型荚膜多糖进行分离纯化,经苯酚-硫酸检测和dot-ELISA辅助鉴定,确定荚... 详细信息

【目的】猪链球菌1、2、14和1/2型间存在单向或双向的交叉抗原性,这种交叉抗原性的产生原因至今未被揭示。【方法】采用Sephacryl S-300凝胶层析柱对猪链球菌14和1/2型荚膜多糖进行分离纯化,经苯酚-硫酸检测和dot-ELISA辅助鉴定,确定荚膜多糖成分。采用高效凝胶渗透色谱法测定14和1/2型猪链球菌荚膜多糖分子量分别为487.38 kDa和512.72 kDa。【结果】经柱前衍生高效液相色谱法、荧光标记液相色谱法和核磁共振测定14和1/2型猪链球菌荚膜多糖单糖组成分别为:Glc/Gal/GlcNAc/Rha/Neu5Ac(1∶2.94∶1.35∶0.24∶0.37)和Glc/Gal/GlcNAc/GalNAc/Rha/Neu5Ac(1∶1.67∶1.05∶0.93∶0.72∶0.7)。并与已知的猪链球菌1、2型荚膜多糖的单糖组成进行比较分析,发现4种血清型荚膜多糖都具有Glc、GlcNAc、Gal和Neu5Ac,但单糖组成和比列并无明显相似性,这种交叉抗原性可能是由于荚膜多糖的空间结构相似性和(或)细胞表面的其他成分引起的。

关键词：猪链球菌血清型荚膜多糖单糖组成

猪链球菌2型05ZYH33强毒株srt同源序列及srtA原核表达抗原性的分析

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第5期23卷 399-401,405页

作者：董亚青王长军郑峰潘秀珍范红结唐家琪南京农业大学动物医学院南京军区军事医学研究所江苏南京210002 南京军区军事医学研究所

目的阐明猪链球菌(***)2型人源强毒力株05ZYH33基因组中srt的数量和分布,原核表达srtA,并分析表达产物的抗原性。方法借助生物信息学软件对05ZYH33基因组中Sortase及其相关家族蛋白进行同源性分析,克隆srtA基因,表达的重组蛋白用Western... 详细信息

目的阐明猪链球菌(***)2型人源强毒力株05ZYH33基因组中srt的数量和分布,原核表达srtA,并分析表达产物的抗原性。方法借助生物信息学软件对05ZYH33基因组中Sortase及其相关家族蛋白进行同源性分析,克隆srtA基因,表达的重组蛋白用Western blot检测其抗原活性,制备Sortase鼠多抗血清,间接ELISA检测鼠多抗血清的滴度。结果通过系统的搜索和分析,发现05ZYH33基因组中含有6个Sortase的同源性序列,其中SrtA及Sortase-like归属sortase家族中的A组,SrtBCD和SrtE属B组。srtA基因在原核细胞中得到高效表达,表达产物可与***2型的兔多抗血清发生特异性的反应。以重组蛋白为免疫原制备的多抗血清效价达1∶6400。结论我国***2型强毒力株05ZYH33含有6个srt基因,与国外报道相比新发现一个sortase-like基因。srtA基因可在原核系统高效表达,重组蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究Sortase功能奠定了基础。

关键词：猪链球菌 Sortase 克隆

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猪链球菌生物被膜形成的耐药机制

微生物学报 2021年第7期61卷 1829-1838页

作者：靳曼玉李金朋易力汪洋河南科技大学动物科技学院河南洛阳471003 洛阳师范学院生命科学学院河南洛阳471022

猪链球菌病(Streptococcus suis)是一种严重影响各国养猪业发展和人类健康的人兽共患传染病,可以引起败血症、关节炎、脑膜炎等多种疾病,造成巨大的经济损失。猪链球菌生物被膜的形成是导致其致病性和耐药性增加的主要原因。为了预防和... 详细信息

猪链球菌病(Streptococcus suis)是一种严重影响各国养猪业发展和人类健康的人兽共患传染病,可以引起败血症、关节炎、脑膜炎等多种疾病,造成巨大的经济损失。猪链球菌生物被膜的形成是导致其致病性和耐药性增加的主要原因。为了预防和治疗猪链球菌病以及解析其耐药的可能机制,深入了解和掌握猪链球菌生物被膜的形成和耐药机制具有重要意义。本文综述了猪链球菌生物被膜形成和耐药机制的最新科学知识,着重从生化因素、生理因素、分子机制和环境改变等方面总结讨论猪链球菌生物被膜的耐药机制,进一步为该病的防治提供科学的理论依据。

关键词：猪链球菌生物被膜抗生素耐药机制

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猪链球菌致化脓性脑膜炎1例

中国感染与化疗杂志 2018年第2期18卷 201-202页

作者：马惠东金亮万凤英张惠杰张丽娜赵运胜李秋平秦皇岛市第一医院检验科河北秦皇岛066000

人感染猪链球菌病是由猪链球菌（Streptococcus suis）引起的一种人畜共患疾病，属于急性细菌性感染[1]，人感染猪链球菌病在我国江苏和四川曾引起过暴发流行[2-3]，我国其他省份也有散发病例，但在河北省未见报道，我院于2017年2月7日... 详细信息

人感染猪链球菌病是由猪链球菌（Streptococcus suis）引起的一种人畜共患疾病，属于急性细菌性感染[1]，人感染猪链球菌病在我国江苏和四川曾引起过暴发流行[2-3]，我国其他省份也有散发病例，但在河北省未见报道，我院于2017年2月7日自患者脑脊液中分离培养出猪链球菌Ⅱ型1例，现报道如下。1临床资料患者男，66岁，主因头痛、发热5 d，加重2 d于2017年2月3日入院。患者于2017年1月27日无明显诱因出现头痛、高热，伴寒战，体温最高达39℃，无头晕，无抽搐，伴有恶心，未呕吐，无胸闷气短，无咳嗽咯痰，就诊于当地诊所，给予输液治疗（具体不详），病情略好转，2017年2月1日再次出现上述症状并持续加重，体温持续在38～39℃。

关键词：猪链球菌感染脑膜炎

猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白诱导上皮细胞融合和凋亡

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微生物学报 2003年第3期43卷 407-412页

作者：曾巧英陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

猪链球菌 2型 (SS2 )溶菌酶释放蛋白 (MRP)的致病作用迄今不明 ,为此 ,以HEp 2细胞为上皮细胞体外模型 ,将纯化的MRP溶液和细胞共孵育 ,光镜观察 ,发现MRP可诱导细胞发生两种典型形态学变化 :一是诱导细胞融合形成多核巨细胞 ,随后巨细... 详细信息

猪链球菌 2型 (SS2 )溶菌酶释放蛋白 (MRP)的致病作用迄今不明 ,为此 ,以HEp 2细胞为上皮细胞体外模型 ,将纯化的MRP溶液和细胞共孵育 ,光镜观察 ,发现MRP可诱导细胞发生两种典型形态学变化 :一是诱导细胞融合形成多核巨细胞 ,随后巨细胞发生凋亡 ;二是诱导单个细胞凋亡。透射电镜观察和流式细胞分析确证MRP具有诱导上皮细胞凋亡的功能 ,凋亡率达 1 8%。证明MRP可单独作为SS2的毒力因子。

关键词：猪链球菌溶菌酶释放蛋白诱导上皮细胞融合细胞凋亡

猪链球菌2型Δ0948互补株构建及对溶血素分泌和毒力的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第5期41卷 374-379页

作者：骈亚亚聂晶晶高振祥陶凤蓉胡继红北京医院国家老年医学中心国家卫生健康委临床检验中心中国医学科学院老年医学研究院 100730 北京医院检验科国家老年医学中心中国医学科学院老年医学研究院100730

目的:构建猪链球菌2型Δ0948互补株,验证对溶血素分泌和毒力的影响。方法:PCR扩增带启动子的SSU05_0948基因序列并连接至pAT18载体构建互补株,Western blot验证表达情况;绘制生长曲线比较互补株和野生株、突变株在不同时期的生长情况;CD... 详细信息

目的:构建猪链球菌2型Δ0948互补株,验证对溶血素分泌和毒力的影响。方法:PCR扩增带启动子的SSU05_0948基因序列并连接至pAT18载体构建互补株,Western blot验证表达情况;绘制生长曲线比较互补株和野生株、突变株在不同时期的生长情况;CD1小鼠攻毒模型验证互补株能否恢复突变株毒力;溶血素(SLY)溶血活性及Western blot比较互补株和野生株、突变株不同时间点对SLY蛋白分泌的影响。结果:互补株构建成功但SSU05_0948基因的表达低于野生株;互补株在对数生长期的生长速度明显慢于野生株和突变株,但在平台期一致;CD1小鼠毒力试验证明互补株可以基本恢复突变株毒力;SLY蛋白溶血活性及Western blot实验证明SSU05_0948在对数期早中期可以抑制SLY蛋白的分泌,而在对数期晚期及平台期则不影响SLY蛋白的分泌,互补株可以恢复SLY蛋白的分泌。结论:猪链球菌互补株CΔ0948能够恢复突变株Δ0948的毒力,SSU05_0948影响SLY蛋白的分泌,为猪链球菌防治提供新思路。

关键词：猪链球菌互补株溶血活性 SLY蛋白