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猪源大肠杆菌O157的分离鉴定及药敏试验

畜牧与兽医 2010年第10期42卷 72-73页

作者：焦凤超李迎晓易本驰何敏陈敏信阳农业高等专科学校动物科学系河南信阳464000

从河南省罗山县某猪场腹泻仔猪肝脏分离到1株革兰阴性杆菌,通过细菌培养特性、细菌形态和生化试验,确定为大肠杆菌。经O血清型鉴定,该分离株为O157。动物试验结果显示,该分离菌株对小鼠有较强的致死性,为致病性大肠杆菌。药敏试验结果显... 详细信息

从河南省罗山县某猪场腹泻仔猪肝脏分离到1株革兰阴性杆菌,通过细菌培养特性、细菌形态和生化试验,确定为大肠杆菌。经O血清型鉴定,该分离株为O157。动物试验结果显示,该分离菌株对小鼠有较强的致死性,为致病性大肠杆菌。药敏试验结果显示,分离菌株对头孢曲松、头孢噻呋、头孢噻肟和丁胺卡那等药物高度敏感,对四环素、强力霉素、诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星等药物产生耐药。

关键词：猪源大肠杆菌分离鉴定试验结果分离菌株致病性大肠杆菌革兰阴性杆菌血清型鉴定药物细菌形态头孢噻肟头孢噻呋头孢曲松生化试验强力霉素培养特性诺氟沙星环丙沙星丁胺卡那猪肝脏致死性

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猪源大肠杆菌对20种抗生素的敏感试验

中国兽医杂志 2007年第8期43卷 8-10页

作者：施奉英郭鑫杨汉春查振林陈艳红中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点开放试验室北京海淀100094

1935年第一个磺胺类药物-百浪多息的出现,开创了抗生素治疗的新纪元.抗生素的应用,对疾病的控制和预防发挥了巨大的作用,然而随着抗菌药物的广泛、持续和不当使用,细菌对抗菌药物的耐药性日趋普遍[1].

关键词：抗生素治疗猪源大肠杆菌敏感试验抗菌药物磺胺类药物耐药性

猪源大肠杆菌O_(20)的分离鉴定及其致病性研究

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中国兽医杂志 2007年第5期43卷 20-21页

作者：宋勤叶宣春龄左玉柱河北农业大学动物科技学院河北保定071001

已知多种血清型的大肠杆菌能够引起仔猪发病,不同地区或同一地区的不同饲养场流行的大肠杆菌优势血清型不同,并且大肠杆菌耐药性普遍,给免疫预防和药物治疗造成困难[1].流行病学调查表明,大肠杆菌病是我国养猪场常见的有重要经济意义的... 详细信息

已知多种血清型的大肠杆菌能够引起仔猪发病,不同地区或同一地区的不同饲养场流行的大肠杆菌优势血清型不同,并且大肠杆菌耐药性普遍,给免疫预防和药物治疗造成困难[1].流行病学调查表明,大肠杆菌病是我国养猪场常见的有重要经济意义的细菌性传染病之一.

关键词：猪源大肠杆菌致病性分离鉴定优势血清型细菌性传染病大肠杆菌病规模化猪场药物治疗

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猪源大肠杆菌血清型耐药性整合子调查

中国兽医杂志 2008年第5期44卷 14-15页

作者：宋立宁宜宝张秀英赵辉杨承槐王琴范学政张纯萍中国农业大学动物医学院北京海淀100193 中国兽医药品监察所北京海淀100081

分别在北京地区采集正常猪泄殖腔拭子50份,河南123份,分离到大肠杆菌150株,分离率为86.7%。菌株血清型分布广,呈地区性、多样性和可变性。北京菌株耐药率低,除对四环素为73.8%外,对其他21种药物耐药率均在16.7%以下;河南地区菌株耐药率... 详细信息

分别在北京地区采集正常猪泄殖腔拭子50份,河南123份,分离到大肠杆菌150株,分离率为86.7%。菌株血清型分布广,呈地区性、多样性和可变性。北京菌株耐药率低,除对四环素为73.8%外,对其他21种药物耐药率均在16.7%以下;河南地区菌株耐药率高,对青霉素类、磺胺甲基异口恶唑高达75.0%以上。北京地区菌株整合子携带率为18.6%,河南地区为75.7%。整合子携带频率与细菌耐药性相关。

关键词：猪源大肠杆菌血清型耐药性整合子

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猪源大肠杆菌tem耐药基因的检测

黑龙江畜牧兽医（下半月） 2016年第8期 106-108页

作者：史秋梅项方郭蕊张召兴张艳英刘玉芹杨彩然杨宗泽高光平高桂生刘立帅河北省预防兽医学重点实验室/河北科技师范学院河北昌黎066600 昌黎县动物疾病预防控制中心河北昌黎066600

为了解和掌握大肠杆菌耐药性的流行情况,从而为控制大肠杆菌的耐药性提供科学依据,用K-B法对临床分离的15株猪源大肠杆菌进行β内酰胺类抗生素药敏试验,以15株分离菌DNA为模板对β内酰胺类抗生素耐药基因tem进行PCR扩增。结果表明:15株... 详细信息

为了解和掌握大肠杆菌耐药性的流行情况,从而为控制大肠杆菌的耐药性提供科学依据,用K-B法对临床分离的15株猪源大肠杆菌进行β内酰胺类抗生素药敏试验,以15株分离菌DNA为模板对β内酰胺类抗生素耐药基因tem进行PCR扩增。结果表明:15株猪源大肠杆菌对β内酰胺类抗生素均耐药,耐药率从高到低分别为头孢哌酮(82%)、头孢噻肟(24%)、头孢他啶(18%)、头孢呋辛(6%)、苯唑西林(6%);PCR扩增均检测到β内酰胺类抗生素耐药基因tem。说明β内酰胺类抗生素耐药基因tem广泛存在于猪源大肠杆菌中,与抗生素敏感性表型一致。

关键词：猪源大肠杆菌耐药性药敏试验 tem耐药基因 β内酰胺类抗生素耐药基因 PCR扩增

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猪源大肠杆菌多重耐药性的检测与分析

中国兽医杂志 2010年第3期46卷 41-43页

作者：薛原张秀英陈建飞王贵霞张彦龙东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150001

大肠杆菌存在于人和动物肠道中,是人及动物体内的主要共生菌,极易产生耐药性.其耐药性是抗菌药物压力的指示器,也是耐药基因的潜在来源库.大肠杆菌病之所以广泛流行,与大肠杆菌中含有的耐药质粒有关.因此开展大肠杆菌耐药性调查十分必要... 详细信息

大肠杆菌存在于人和动物肠道中,是人及动物体内的主要共生菌,极易产生耐药性.其耐药性是抗菌药物压力的指示器,也是耐药基因的潜在来源库.大肠杆菌病之所以广泛流行,与大肠杆菌中含有的耐药质粒有关.因此开展大肠杆菌耐药性调查十分必要,具有重要的公共卫生意义.

关键词：猪源大肠杆菌多重耐药性检测公共卫生意义大肠杆菌病动物肠道动物体内抗菌药物

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猪源大肠杆菌噬菌体的分离、筛选及初步应用

猪源大肠杆菌噬菌体的分离、筛选及初步应用

作者：王行健华中农业大学

学位级别：硕士

致病性大肠杆菌对于生猪养殖业而言是一种重要的病原菌。初生仔猪感染后可能引起仔猪黄痢、仔猪白痢等疾病的发生,感染仔猪出现腹泻症状,影响生长发育,严重情况下导致死亡,造成各类直接、间接经济损失。由于抗生素与抗菌药物的滥用,致... 详细信息

致病性大肠杆菌对于生猪养殖业而言是一种重要的病原菌。初生仔猪感染后可能引起仔猪黄痢、仔猪白痢等疾病的发生,感染仔猪出现腹泻症状,影响生长发育,严重情况下导致死亡,造成各类直接、间接经济损失。由于抗生素与抗菌药物的滥用,致病性大肠杆菌的耐药情况日益严重,抗生素与抗菌药物的治疗效果下降,需要针对这一问题寻求解决方案。噬菌体治疗作为一种不同于抗生素治疗的治疗方案,在解决致病性大肠杆菌耐药性问题上具备良好的研究价值。本研究在仔猪黄、白痢发病猪场分离大肠杆菌并收集发病猪场粪便污水样品进行噬菌体分离,对分离噬菌体进行研究,并通过动物试验验证其对于致病性大肠杆菌所引发腹泻的治疗效果,为应用噬菌体解决抗生素治疗效果下降问题提供生物材料。1.猪源大肠杆菌菌株的分离从湖北武汉、宜昌等地猪场黄白痢粪样中分离鉴定大肠杆菌58株,对所分离大肠杆菌进行毒力基因检测与药敏试验。2.噬菌体的分离、筛选及生物学特性研究从上述猪场收集污水样本150份,进行大肠杆菌噬菌体的分离纯化。共分离32株大肠杆菌噬菌体。以58株大肠杆菌作为指示菌,对所获取32株噬菌体的裂解谱进行检测。综合裂解谱与发酵效率,选择噬菌体TPOW04(终浓度10PFU/m L,裂解率70.69%)进行后续研究。对噬菌体TPOW04进行透射电镜观察显示TPOW04属于肌尾噬菌体家族。对噬菌体TPOW04进行全基因组测序显示噬菌体基因组全长359,183 bp,GC含量为36%,共编码590个CDS,全基因组不含耐药基因与毒力基因。对噬菌体TPOW04进行生物学特性研究,其最佳感染复数为0.001;热稳定性良好,可耐受50℃;在p H 4.0～10.0范围内,噬菌体活性可保持稳定。3.噬菌体应用的研究通过动物试验对噬菌体TPOW04的大肠杆菌腹泻治疗效果进行初步研究。以60只3周龄小鼠进行试验,随机分为6组:空白组、攻毒无治疗组、抗生素治疗组、噬菌体组、噬菌体治疗组、噬菌体预防组。治疗组于攻毒24 h后开始治疗,预防组灌服噬菌体2 h后攻毒。试验结束后,观察各组小鼠的症状,计算各组小组的粪便评分以统计腹泻情况,并对各组小鼠进行剖检以观察病变。结果显示,噬菌体治疗组的粪便计分与攻毒无治疗组相比有显著改善(P0.05);噬菌体预防组与空白组小鼠相比粪便计分无显著差异(P>0.05)。统计腹泻情况,噬菌体治疗组对比攻毒无治疗组的腹泻率明显降低,治愈率和显效率与抗生素治疗组相近。剖检与病变观察显示噬菌体治疗组、噬菌体预防组小鼠与空白对照组相比无明显差异,对比攻毒无治疗组无明显病变。综上所述,噬菌体TPOW04对小鼠腹泻具备良好的治疗与预防效果。

关键词：猪源大肠杆菌噬菌体仔猪黄痢仔猪白痢

猪源大肠杆菌O145的分离鉴定及疫苗的免疫保护性研究

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猪源大肠杆菌O145的分离鉴定及疫苗的免疫保护性研究

作者：吴佳桐沈阳农业大学

学位级别：硕士

仔猪腹泻是引起仔猪死亡的重要原因。仔猪黄、白痢就是由致病性的大肠杆菌引起的仔猪最常见的一种细菌性腹泻疾病,发病率和死亡率都很高,严重威胁着养猪业的发展。抗生素是临床上治疗仔猪大肠杆菌病最常见的方法,但是由于抗生素的大量使... 详细信息

仔猪腹泻是引起仔猪死亡的重要原因。仔猪黄、白痢就是由致病性的大肠杆菌引起的仔猪最常见的一种细菌性腹泻疾病,发病率和死亡率都很高,严重威胁着养猪业的发展。抗生素是临床上治疗仔猪大肠杆菌病最常见的方法,但是由于抗生素的大量使用,导致细菌耐药现象越来越严重,往往造成治疗无效。疫苗是预防和控制病毒、细菌等病原微生物感染最有效的途径,具有经济高效的特点。本试验对辽宁省某规模化种猪场7日龄内腹泻仔猪进行了大肠杆菌分离鉴定,并以此菌株为抗原,制备了大肠杆菌氢氧化铝佐剂灭活苗和蜂胶佐剂灭活苗,以期为规模化猪场仔猪大肠杆菌病的防控提供技术支撑。本试验首先对辽宁省某规模化种猪场腹泻仔猪肝脏进行了细菌鉴别培养、生化试验、16Sr DNA PCR扩增、测序及序列对比、基因进化树分析、药物敏感性试验。结果:细菌鉴定培养特性、形态学观察以及生化检验结果均符合大肠杆菌特征;经PCR扩增、测序及序列比对分析,与CP031919.1(其血清型为O145)大肠杆菌同源性最高,为99.44%;遗传进化分析所用的辽宁猪源大肠杆菌菌株与南京、扬州、湖南以及河北猪源大肠杆菌亲缘关系较近。药敏试验的结果显示,该分离菌耐药现象严重,除了对头孢噻肟敏感和对阿米卡星中敏之外,对多粘菌素B、头孢唑啉、阿奇霉素、阿莫西林、大观霉素、环丙沙星、红霉素、多粘菌素E、利福平、复方新诺明、强力霉素等多种抗生素均耐药。检测分离菌毒力基因,结果显示,分离菌株携带iss、iuc D、Fim H毒力基因;致病性试验取SPF级小鼠20只,分为对照组和试验组,试验组小鼠每只腹腔注射0.3 m L浓度为2.5×10CFU/ml菌液,对照组小鼠腹腔注射0.3 m L/只无菌PBS液。结果,试验组小鼠腹腔注射活菌液12 h开始出现死亡,至第30 h全部死亡,而对照组小鼠健康存活,说明分离菌株为强致病性大肠杆菌。以分离菌株为抗原,进行了氢氧化铝佐剂灭活疫苗和蜂胶佐剂灭活疫苗制备,并对其进行了安全性、免疫原性和动物攻毒保护性试验。结果:两种不同佐剂疫苗对小鼠强毒菌株攻毒均具有一定保护作用,其中氢氧化铝佐剂疫苗的保护率为70%,蜂胶佐剂疫苗的保护率为80%,说明蜂胶佐剂疫苗的保护率优于氢氧化铝佐剂疫苗。免疫球蛋白检测结果显示:蜂胶佐剂组与氢氧化铝佐剂组同对照组相比,免疫后14 d、21 d、28 d、35 d和42 d,免疫组(蜂胶佐剂组与氢氧化铝佐剂组)与对照组相比小鼠血清中Ig A抗体含量均显著提高,差异极显著(P猪场腹泻仔猪群中成功分离出致病性大肠杆菌,所制备的氢氧化铝佐剂疫苗和蜂胶佐剂疫苗对小鼠均有很好的免疫原性和保护性,其中蜂胶佐剂疫苗的保护率优于氢氧化铝佐剂疫苗,该疫苗为有效防控仔猪大肠杆菌病奠定了基础。

关键词：猪源大肠杆菌分离鉴定耐药性致病性免疫原性

猪源大肠杆菌对氟苯尼考的耐药性分析及其floR基因研究

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猪源大肠杆菌对氟苯尼考的耐药性分析及其floR基因研究

作者：陈阳阳吉林农业大学

学位级别：硕士

猪源大肠杆菌病是目前集约化养猪场普遍发生的一种流行病，主要以仔猪黄痢、仔猪白痢和猪水肿病三种类型发生。由于大肠杆菌血清型众多，因此,目前尚无理想的疫苗可用于临床防治。抗生素在预防和治疗该病中起着十分重要的作用。近几年... 详细信息

猪源大肠杆菌病是目前集约化养猪场普遍发生的一种流行病，主要以仔猪黄痢、仔猪白痢和猪水肿病三种类型发生。由于大肠杆菌血清型众多，因此,目前尚无理想的疫苗可用于临床防治。抗生素在预防和治疗该病中起着十分重要的作用。近几年来，临床上广泛使用氟苯尼考治疗猪大肠杆菌病。但是，随着氟苯尼考广泛且不规范用药的增多，使得该抗生素对致病菌的敏感性降低甚至丧失，并引起动物源多重耐药菌株的出现与广泛传播，不仅严重影响养殖业生产中动物疫病的有效防控，而且对动物源食品安全和人类健康构成严重威胁。1．氟苯尼考对于35株猪源大肠杆菌临床分离株的MIC、MPC、MSW的测定以及缩小部分菌株MSW的研究应用琼脂二倍稀释法,肉汤法富集1011cfu/mL细菌测定氟苯尼考对35株猪源大肠杆菌临床分离株的最小抑菌浓度（MIC）、防耐药选择突变浓度（MPC），并进一步算出它们的耐药选择突变窗（MSW），对于耐药选择突变窗比较大的菌株S19，S22，S23进行氟苯尼考联合多西环素用药，并在联合用药后测定其MPC和MSW。从吉林省地区分离的35株猪源大肠杆菌对氟苯尼考的耐药检出率为为42.86%;MPC大于100μg/mL的占到42.86%。对于耐药选择窗开放较大的菌株S19、S22、S23，采用氟苯尼考联合多西环素用药，联合指数分别为0.75、0.09、0.4375，均呈现相加或协同作用。联合用药可使氟本尼考对S19，S22，S23菌株的MPC分别由原来的256μg/mL、128μg/mL、460.8μg/mL，变为8μg/mL、8μg/mL、16μg/mL，均关闭或缩小了耐药选择突变窗。2．耐药基因floR的检测、初步定位以及质粒结合的验证为了检测耐药基因floR，以及对其初步定为定位，进行了以菌体为模板的聚合酶链式反应试验、分别采用以提取菌体的质粒、基因组为模板的PCR反应试验;为了初步得到探究floR的传递频率，进行了质粒结合试验。得出如下结论：均未在本实验采集分离的菌株的基因组中扩增到floR基因;但在MIC≥32μg/mL的8株菌的菌液和质粒中扩增得到目的片段，经测序，片段大小为1031bp，与预期大小一致，与已经报道的大肠杆菌内氟苯尼考抗性基因floR基因序列（DQ206638.1）的同源性高达98%以上，并且floR基因可以通过质粒结合进行传递，传递频率为5.1×10-7。3．整合子耐药基因盒中floR基因的检测通过PCR反应，凝胶电泳，胶回收，连接，转化，双酶切验证，测序等试验，得出如下结果：35株猪源大肠杆菌分离株中,Ⅰ型整合酶的阳性率为94%,Ⅰ型整合子的阳性率为13.9%;Ⅱ型整合酶的阳性率为27.8%，Ⅱ型整合子的阳性率为25%;Ⅰ型整合子测序结果分别与已经报道的大肠杆菌Ⅰ型整合子耐药基因盒（dfrA12-aadA2）的基因序列（GU001949.1）同源性高达99%;与已经报道的大肠杆菌Ⅰ型整合子耐药基因盒(dfrA1-aadA1)基因序列（FJ807900.1）同源性达100%。所有的Ⅱ型整合子同源性高达99.58%，基本确定为同一序列，与已报道的大肠杆菌Ⅱ型整合子基因盒（dfr1-sat-1）基因序列（AM745943.1）的同源性高达99%，但在整合子的耐药基因盒中并未检出floR基因。综上，临床猪源大肠杆菌对氟苯尼考产生了一定程度的耐药性，MPC和MSW测定表明，大肠杆菌对氟苯尼考容易产生耐药性，且不易恢复。采用联合用药的方式可缩小MSW，减少耐药性的产生。耐药基因floR检测表明，在本实验的分离菌株中floR基因主要定位于质粒上，在基因组及整合子的耐药基因盒中均没有检测到floR基因。定位于质粒上的floR基因可通过接合的方式进行传递。

关键词：氟苯尼考猪源大肠杆菌耐药性分析耐药基因floR 整合子