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猪小肠抗菌肽对雏鸡的促生长作用及其机理初探

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中国农业科学 2006年第8期39卷 1723-1728页

作者：马卫明佘锐萍胡艳欣靳红彭芳珍山东农业大学动物科技学院中国农业大学动物医学院

目的测定猪小肠抗菌肽对雏鸡生长指标的影响,在结构上初步探讨猪小肠抗菌肽促进雏鸡生长发育的机理。方法选择体重基本一致的雏鸡60只,随机平均分为2组。试验组,在7、14、21、28、35、42日龄每只雏鸡分别肌肉注射猪小肠抗菌肽0.1ml(100... 详细信息

目的测定猪小肠抗菌肽对雏鸡生长指标的影响,在结构上初步探讨猪小肠抗菌肽促进雏鸡生长发育的机理。方法选择体重基本一致的雏鸡60只,随机平均分为2组。试验组,在7、14、21、28、35、42日龄每只雏鸡分别肌肉注射猪小肠抗菌肽0.1ml(100μ***-1);对照组,在相应日龄每只雏鸡分别肌肉注射灭菌生理用水0.1ml,在相同饲养条件下进行6周试验。在7日龄和49日龄,采用组织切片检测鸡十二指肠和空肠的绒毛长度、隐窝深度和黏膜厚度。结果试验组雏鸡平均日耗料量(29.82±1.05)g,对照组雏鸡平均日耗料量(28.85±0.79)g,二者无差异(P>0.05);试验组雏鸡平均日增重为(13.54±0.20)g,对照组雏鸡平均日增重为(11.10±0.19)g,二者差异极显著(P0.05)。结论猪小肠抗菌肽可改善鸡十二指肠和空肠的结构,提高雏鸡生长速度和饲料转化率。

关键词：抗菌肽猪小肠促生长机理雏鸡

以猪小肠黏膜提取物作为α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶Ⅳ的酶活力分析体系的建立

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食品科学 2019年第23期40卷 44-51页

作者：甲承立 Naveed HUSSAIN 董洁王芬李函彤张书文芦晶逄晓阳刘鹭吕加平中国农业科学院农产品加工研究所农业农村部农产品加工重点实验室北京100093 山西农业大学食品科学与工程学院山西晋中030800 天津科技大学食品工程与生物技术学院天津300457 北京市营养源研究所系统营养工程技术研究中心北京100069

α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidase 4,DPP-4)是II型糖尿病治疗中2种重要的靶向酶。这两种商品化酶价格昂贵且主要来源于微生物,难以有效用于两种酶抑制剂的筛选,而这两种酶均普遍存在哺乳动物的小肠中。为了获得经济有... 详细信息

α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidase 4,DPP-4)是II型糖尿病治疗中2种重要的靶向酶。这两种商品化酶价格昂贵且主要来源于微生物,难以有效用于两种酶抑制剂的筛选,而这两种酶均普遍存在哺乳动物的小肠中。为了获得经济有效、来源于哺乳动物体内的α-葡萄糖苷酶和DPP-4,本研究收集新鲜的猪小肠黏膜分泌物及上皮细胞,对比分析了猪小肠不同部位黏膜提取物的α-葡萄糖苷酶和DPP-4的活力。以猪小肠黏膜提取物作为α-葡萄糖苷酶和DPP-4的酶反应体系,并且利用这两种酶的阳性药(阿卡波糖和抑二肽素A(diprotin A,IPI))分别进行了抑制率验证和评价。阿卡波糖对商品和猪回肠源α-葡萄糖苷酶的半数有效抑制质量浓度(median inhibition concentration,IC50)分别是1.1024、0.2447 mg/mL;IPI对商品和猪回肠源DPP-4的IC50分别为19.1197、41.2684μg/mL。通过比较发现,猪回肠黏膜提取物的α-葡萄糖苷酶和DPP-4比活力分别为0.0841、0.0534 U/mg,在3种黏膜提取物中均为最高,因此选择猪回肠黏膜提取物作为商品化α-葡萄糖苷酶和DPP-4的替代物进行抑制剂的筛选。

关键词： α-葡萄糖苷酶二肽基肽酶IV(DPP-4) 猪小肠酶比活力

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猪小肠黏膜下层用于犬板层角膜移植的优点

黑龙江畜牧兽医 2008年第10期 115-116页

作者：李增强于涛王立齐长明牛光斌上海市动物疫病预防控制中心上海201103 中国农业大学动物医学学院北京100094

犬板层角膜移植对于治疗药物难以控制的解膜炎症、角膜表层肿瘤、高度脸球粘连和边缘性角膜变性等具有重要意义.

关键词：角膜移植猪小肠膜下板犬治疗药物边缘性供体

猪小肠黏膜下层作为板层角膜移植材料的实验研究

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中国兽医杂志 2006年第1期42卷 19-21页

作者：王立齐长明中国农业大学动物医学院北京海淀100094

小肠黏膜下组织(small intestinal submucosa,SIS)是一种新型的具有生物降解性及胶原组织结构的细胞外基质框架,通常取自猪的空肠,SIS中的胶原蛋白、蛋白多糖及糖蛋白构成的细胞外基质框架无抗原性,植入体内仅引起轻微的排斥反应,可以... 详细信息

小肠黏膜下组织(small intestinal submucosa,SIS)是一种新型的具有生物降解性及胶原组织结构的细胞外基质框架,通常取自猪的空肠,SIS中的胶原蛋白、蛋白多糖及糖蛋白构成的细胞外基质框架无抗原性,植入体内仅引起轻微的排斥反应,可以在体内存活,同时为受体自身细胞的生长提供框架。由于SIS具有无免疫原性、抗微生物活性、促进组织再生等特性,因此得到了广泛研究。[第一段]

关键词：猪小肠角膜移植膜下细胞外基质实验材料抗微生物活性组织结构胶原蛋白生物降解性

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猪小肠断端简易吻合法

畜牧与兽医 1996年第2期 93-94页

作者：杨广忠陈仁桃王玉龙盐城市郊龙冈镇畜牧兽医站

猪小肠断端简易吻合法近几年来术者采用薄膜袋充满空气，衬垫在肠管内的简易吻合方法，共收治猪小肠断端１１例。其中２例因腹膜严重感染，引起腹腔积水手术失败外，治愈率达８１．８％，现介绍如下。自制的薄膜袋一只，长３０ｃｍ，直... 详细信息

猪小肠断端简易吻合法近几年来术者采用薄膜袋充满空气，衬垫在肠管内的简易吻合方法，共收治猪小肠断端１１例。其中２例因腹膜严重感染，引起腹腔积水手术失败外，治愈率达８１．８％，现介绍如下。自制的薄膜袋一只，长３０ｃｍ，直径与吻合肠管内径相同。在吻合肠前首...

关键词：猪小肠肠管薄膜袋腹腔积水内翻缝合吻合法

猪小肠黏膜下层(SIS)用于犬板层角膜移植的手术方法探索

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中国兽医杂志 2007年第8期43卷 32-33页

作者：王立李增强于涛齐长明中国农业大学动物医学院北京海淀100094

犬的角膜由外向内分为上皮细胞层、上皮下基膜、基质层、后弹力层和内皮细胞层.板层角膜移植是指移植部分角膜,角膜的切除通常只达基质层.犬板层角膜移植对于治疗药物难以控制的角膜炎症、角膜表层肿瘤、高度睑球粘连和边缘性角膜变性... 详细信息

犬的角膜由外向内分为上皮细胞层、上皮下基膜、基质层、后弹力层和内皮细胞层.板层角膜移植是指移植部分角膜,角膜的切除通常只达基质层.犬板层角膜移植对于治疗药物难以控制的角膜炎症、角膜表层肿瘤、高度睑球粘连和边缘性角膜变性等具有重要意义。[第一段]

关键词：角膜移植手术方法猪小肠板犬膜下上皮细胞内皮细胞

猪小肠黏膜下层用于犬板层角膜移植的效果观察

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中国兽医杂志 2008年第12期44卷 67-68页

作者：李增强于涛王立齐长明牛光斌上海市动物疫病预防控制中心上海长宁201103 中国农业大学动物医学院北京海淀100193

犬的角膜由外向内分为上皮细胞层、上皮下基膜、基质层、后弹力层和内皮细胞层,角膜基质层由上皮层平行排列的纤维薄板组成,所以又称板层。板层角膜移植是指移植部分角膜,角膜的切除通常只达基质层。犬板层角膜移植对于治疗药物难以控... 详细信息

犬的角膜由外向内分为上皮细胞层、上皮下基膜、基质层、后弹力层和内皮细胞层,角膜基质层由上皮层平行排列的纤维薄板组成,所以又称板层。板层角膜移植是指移植部分角膜,角膜的切除通常只达基质层。犬板层角膜移植对于治疗药物难以控制的角膜炎症、角膜表层肿瘤、高度睑球粘连和边缘性角膜变性等具有重要意义。21世纪初,Griguer以猪小肠黏膜下层(SIS)为植片进行了兔的板层角膜移植,[第一段]

关键词：角膜移植纤维薄板猪小肠膜下犬上皮细胞基质层内皮细胞

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猪小肠微血管内皮细胞的分离培养与纯化

中国兽医杂志 2019年第1期55卷 36-38,43,I0003页

作者：施晓杰马维超邓昱晨邓伟张倩冯波穆祥北京农学院动物科技学院兽医学(中医药)北京市重点实验室北京昌平102206 中国农业大学动物医学院北京海淀100193

旨在建立简单高效的获取猪小肠微血管内皮细胞(PIMVECs)的方法。将SPF新生仔猪麻醉处死后取空肠,经酶消化后用免疫磁珠分选获得纯化的PIMVECs,并对纯化后的细胞进行免疫荧光鉴定,采用WST-1法分析传代PIMVECs的增殖情况。分离纯化的PIMV... 详细信息

旨在建立简单高效的获取猪小肠微血管内皮细胞(PIMVECs)的方法。将SPF新生仔猪麻醉处死后取空肠,经酶消化后用免疫磁珠分选获得纯化的PIMVECs,并对纯化后的细胞进行免疫荧光鉴定,采用WST-1法分析传代PIMVECs的增殖情况。分离纯化的PIMVECs呈短梭形或多角形,单层贴壁生长,汇合后呈铺路石样,血管内皮细胞特异性标志物VIII因子相关抗原表达阳性,且复苏后传代细胞增殖情况良好。采用免疫磁珠分选法可以快速直接获得纯化的猪小肠微血管内皮细胞,且细胞活性良好。

关键词：微血管内皮细胞猪小肠体外分离免疫磁珠

猪小肠黏液中钙蛋白酶-1抵抗猪流行性腹泻病毒入侵及其机制的探究

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猪小肠黏液中钙蛋白酶-1抵抗猪流行性腹泻病毒入侵及其机制的探究

作者：王秀羽南京农业大学

学位级别：硕士

许多猪传染病病毒都通过其肠道黏膜入侵,所以肠道黏膜表面的黏液屏障至关重要。肠道黏液中主要的蛋白成分是黏蛋白2（Mucin 2,Muc2）,可以聚合成凝胶来保护肠道上皮。此外,黏液中还存在许多活性物质来增强肠道黏膜屏障的保护作用,但目... 详细信息

许多猪传染病病毒都通过其肠道黏膜入侵,所以肠道黏膜表面的黏液屏障至关重要。肠道黏液中主要的蛋白成分是黏蛋白2（Mucin 2,Muc2）,可以聚合成凝胶来保护肠道上皮。此外,黏液中还存在许多活性物质来增强肠道黏膜屏障的保护作用,但目前猪小肠黏液中具有直接抗病毒活性的物质及其作用机制尚不清楚。本实验室前期研究发现,猪小肠黏液中分子量约为70 k Da的蛋白组分可直接作用于猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）以抑制其感染。根据液相色谱串联质谱（Liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）结果,本研究检测了猪小肠黏液70 k Da蛋白组分中的3个候选蛋白的抗病毒作用,其中钙蛋白酶-1（Calpain-1,CAPN 1）具有很强的抗病毒活性。此外,本研究发现Calpain-1在猪小肠中与Muc2阳性细胞存在共定位现象,因此,我们认为Calpain-1可能由杯状细胞分泌。Calpain-1是一种受Ca活化的半胱氨酸蛋白酶,具有水解蛋白的活性,本研究进一步发现PEDV纤突（Spike,S）蛋白的S1结构域的297和337氨基酸之间的区域是Calpain-1发挥水解作用的关键区域。氨基酸序列比对表明,PEDV经典毒株和突变毒株的S1蛋白的该结构域是其保守区域（氨基酸同源性>92.5%）,这提示Calpain-1在临床上预防PEDV感染的广谱作用。我们进一步利用真核表达系统表达并纯化了重组猪Calpain-1（p-calpain-1）,通过仔猪攻毒保护试验证明了p-calpain-1在仔猪体内的保护效果。最后,本研究还发现新生仔猪口服枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis,***）有利于提高小肠黏液层中Calpain-1的表达与活性。本研究内容具体分为以下四个部分:1、猪小肠黏液中新型抗病毒蛋白的筛选鉴定及其分布特点本实验室前期研究发现,育肥猪小肠黏液中分子量约为70 kDa的蛋白组分可以抑制PEDV的感染。为了确定该蛋白组分中具有直接抗病毒活性的新型保护性分子,本研究利用LC-MS/MS进行蛋白定性分析,通过Uni Prot-Sus数据库,根据肽段覆盖率、得分值及可分泌性选择出三种候选蛋白。空斑减少中和试验（Plaque reduction neutralization test,PRNT）以及荧光定量PCR（RT-q PCR）评估了三个候选蛋白的抗病毒作用,其中Calpain-1具有很强的抗病毒活性;进一步使用钙蛋白酶抑制剂Calpeptin处理后反向验证了Calpain-1的保护效果。此外,本研究通过Western blot试验分析了育肥猪与新生仔猪的不同肠段中Calpain-1的表达水平,与肠道黏液的产生和分泌特征相似,育肥猪肠道组织中Calpain-1的表达水平高于新生仔猪,且空肠中Calpain-1的表达水平最高。免疫荧光（Immunofluorescence,IF）结果显示在猪小肠黏膜上皮和黏液层中有大量Calpain-1的分布且与Muc2阳性细胞存在共定位现象,因此,我们认为Calpain-1可能由杯状细胞合成并分泌到黏液层中。2、猪钙蛋白酶-1抗病毒机制的探究PEDV的S蛋白决定并介导该病毒入侵靶细胞。Calpain-1具有水解蛋白的活性并且可以直接抑制PEDV入侵。鉴于这两种蛋白的特性,我们推测Calpain-1可能影响PEDV S蛋白结构的稳定性从而阻止病毒与靶细胞表面受体的结合。本研究首先采用GPS-CCD软件、分子对接（蛋白-蛋白）和表面等离子体共振（Surface plasma resonance,SPR）技术分析了二者之间互作的可能性;体外水解试验进一步证明了Calpain-1对PEDV S1蛋白的水解作用。为了确定Calpain-1结合并水解PEDV S1蛋白的关键作用位点,本研究根据分子对接结果构建PEDV S1蛋白片段缺失突变体及特定位点突变体,然后分别与猪Calpain-1进行体外水解试验。结果表明PEDV S1蛋白的H298、E329、A337位点可能是猪Calpain-1潜在的关键结合位点,分别与Calpain-1的A204、V257、Q109形成氢键作用力。氨基酸序列比对表明,PEDV经典毒株和突变毒株的S1蛋白的该结构域是其保守区域（氨基酸同源性>92.5%）,这提示Calpain-1在临床上预防PEDV感染的广谱作用。3、猪钙蛋白酶-1体内抗病毒效果的评价本研究利用人胚胎肾脏（Human embryonic kidney,HEK）-293F细胞和GS115毕赤酵母菌两种真核表达系统分别对重组猪Calpain-1（p-calpa

关键词：猪小肠黏液钙蛋白酶-1 猪流行性腹泻病毒杯状细胞