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牛膝多糖通过Notch1通路影响骨髓间充质干细胞向髓核样细胞分化的机制

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西安交通大学学报（医学版） 2022年第4期43卷 600-606页

作者：岳宗进刘汝银于露王新立徐向阳河南省中医院/河南中医药大学第二附属医院脊柱科河南郑州450000

目的探讨牛膝多糖(achyranthes bidentata polysaccharides,ABPS)对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)向髓核样细胞分化的影响及机制。方法取5只4周龄SD大鼠,处死后解剖分离BMSCs,反复贴壁纯化,取第3代BMSCs,不同浓度ABPS作用48 h,MTT法检测细胞存活率,选择对BMSCs生长无毒性的ABPS最高浓度进行后续实验。根据处理方式不同将细胞分为对照组(常规培养)、ABPS组(200 mg/L ABPS)、Notch1组(转染Notch1)、Notch1阴性对照组(转染Notch1阴性对照)和ABPS+Notch1组(转染Notch1后加入200 mg/L ABPS)。诱导培养14 d后MTT法检测细胞增殖能力,qPCR和Western blotting分别检测collagenⅡ、聚集蛋白聚糖(aggrecan)、Notch1、Hes1 mRNA和蛋白表达水平,取第1、4、7、10、14天细胞培养基阿尔新蓝法检测葡糖胺聚糖(GAG)。结果400 mg/L ABPS作用BMSCs 48 h,细胞存活率与对照组比较显著降低(P<0.05),浓度≤200 mg/L时,ABPS对BMSCs生长无明显毒性作用,选择200 mg/L ABPS进行后续实验。诱导培养14 d后,与对照组比较,ABPS组细胞A值、培养基内GAG含量、collagenⅡ、aggrecan mRNA和蛋白相对表达量升高,Notch1、Hes1 mRNA和蛋白相对表达量降低;而Notch1组细胞A值、培养基内GAG含量、collagenⅡ、aggrecan mRNA和蛋白相对表达量降低,Notch1、Hes1 mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05);ABPS+Notch1组可部分逆转过表达Notch1对BMSCs向髓核样细胞分化的抑制作用。结论ABPS可以促进BMSCs向髓核样细胞分化,作用机制可能与抑制Notch1通路有关。

关键词：骨髓间充质干细胞髓核样细胞细胞分化牛膝多糖 Notch1通路

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牛膝多糖刺激的DC联合CIK细胞对SW480的杀伤作用研究

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中国中药杂志 2013年第7期38卷 1056-1060页

作者：周智东夏大静台州学院医学院免疫学教研室浙江台州318000 浙江大学医学部公共卫生学院浙江杭州310058

从中药材牛膝中提取牛膝多糖(ABPS),用ABPS和/或SW480肿瘤抗原刺激的树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导的杀伤性细胞(CIK)对结肠癌细胞株SW480进行杀伤试验,研究ABPS刺激的DC联合CIK细胞的抗肿瘤效果。分离人外周血单个核细胞培养成DC和CI... 详细信息

从中药材牛膝中提取牛膝多糖(ABPS),用ABPS和/或SW480肿瘤抗原刺激的树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导的杀伤性细胞(CIK)对结肠癌细胞株SW480进行杀伤试验,研究ABPS刺激的DC联合CIK细胞的抗肿瘤效果。分离人外周血单个核细胞培养成DC和CIK细胞。①把DC分成4个组合:单纯DC组作为对照组,ABPS刺激DC实验组(ABPS刺激的质量浓度为50mg·L-1),SW480肿瘤抗原刺激DC实验组,ABPS(50mg·L-1)和SW480肿瘤抗原联合刺激DC实验组,流式检测比较各组DC细胞表面分子CD80,CD86,CD11c,CD40,HLA-DR的阳性率的差异(每组均为6例样本)。②以上述4个组合的DC与CIK细胞以1:5比例混合共同作为效应细胞;以SW480肿瘤细胞株为靶细胞,设置效靶比分别为30:1,20:1及10:1,进行细胞杀伤活性试验,用CCK-8试剂盒检测、比较各组细胞杀伤活性的差异。③ELISA检测并比较上述细胞杀伤活性试验中效靶比为30:1的实验组各反应孔(3个复孔)上清液中细胞因子IL-2,IL-12p70,IL-17及TNF-α的分泌水平的差异。结果显示:①ABPS和SW480肿瘤抗原联合刺激的DC表面CD80,CD11c,HLA-DR的阳性率显著高于其他实验组的DC(P<0.05);CD86,CD40的阳性率显著高于单纯DC实验组(P<0.05),与其他实验组无显著差异。②在效靶比分别为30:1,20:1及10:1细胞杀伤活性试验中,ABPS刺激的DC+CIK细胞组、SW480肿瘤抗原刺激的DC+CIK细胞组对SW480肿瘤细胞株的杀伤活性显著高于DC+CIK细胞组(P<0.05);ABPS+SW480肿瘤抗原+DC+CIK实验组对SW480肿瘤细胞株的杀伤活性均显著高于其他实验组(P<0.05)。③效靶比为30:1的细胞杀伤活性试验中,ABPS+SW480抗原+DC+CIK细胞组上清液中IL-12p70,TNF-α的分泌水平高于其他实验组,差异具有统计学意义(P<0.05);IL-2,IL-17的分泌水平各组之间无显著差异。说明ABPS刺激的DC+CIK细胞对SW480肿瘤细胞株的杀伤活性显著提高,ABPS和SW480肿瘤抗原共同刺激DC能协同CIK提高对SW480肿瘤细胞株的杀伤活性。

关键词：牛膝多糖细胞因子诱导的杀伤细胞树突状细胞人结肠癌细胞株(SW480) 细胞因子细胞毒作用

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牛膝多糖硫酸酯的合成及其抗病毒活性

药学学报 1995年第2期30卷 107-111页

作者：田庚元李寿桐宋麦丽郑民实李文中国科学院上海有机化学研究所江西医学院

从中药牛膝中提取得到的一种新多糖化合物一牛膝多糖，用不同的硫酸化试剂合成牛膝多糖硫酸酯。研究了最佳反应条件，其产物水溶性好，呈中性，最高产率达８２．１１％，取代度（Ｄｓ）···达到三以上，硫含量达２１％以上。根据牛膝... 详细信息

从中药牛膝中提取得到的一种新多糖化合物一牛膝多糖，用不同的硫酸化试剂合成牛膝多糖硫酸酯。研究了最佳反应条件，其产物水溶性好，呈中性，最高产率达８２．１１％，取代度（Ｄｓ）···达到三以上，硫含量达２１％以上。根据牛膝多糖的分子结构，多糖分子中的羟基已最大限度地被酯化。体外抗病毒试验初步表明牛膝多糖硫酸酯有很强的抑制乙型肝炎病毒ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的活性，对Ｉ型单纯性疱疹病毒也有明显的抑制力。

关键词：牛膝多糖多糖硫酸酯抗病毒合成牛膝

牛膝多糖对链佐星诱导性糖尿病小鼠的保护作用(英文)

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中国药理学与毒理学杂志 2010年第1期24卷 1-7页

作者：李金贵袁楷刘学忠刘宗平扬州大学兽医学院江苏扬州225009

目的研究牛膝多糖(ABP)对链佐星诱导性糖尿病小鼠的保护作用。方法将雄性ICR小鼠分为正常对照组、糖尿病模型组、ABP50和***-1(ip,每天1次,共15d)治疗组。分别于给药前,给药8和15d时用血糖测量仪检测血糖水平,并进行血糖耐受试验。末次... 详细信息

目的研究牛膝多糖(ABP)对链佐星诱导性糖尿病小鼠的保护作用。方法将雄性ICR小鼠分为正常对照组、糖尿病模型组、ABP50和***-1(ip,每天1次,共15d)治疗组。分别于给药前,给药8和15d时用血糖测量仪检测血糖水平,并进行血糖耐受试验。末次给药第2天测量小鼠体重,处死,测量心、肝、脾和肾脏器官重量,同时制备血清,采用放射免疫分析试剂盒检测血清胰岛素水平,比色法测定血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、钙(Ca)和磷(P)含量及谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)和碱性磷酸酶(ALP)活性。采用ELISA检测血清瘦素、脂联素、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的浓度。结果与正常对照组相比,糖尿病模型组小鼠体重下降,血清胰岛素水平降低,血糖升高(P<0.05,P<0.01)。ABP50和***-1在血糖耐受试验中能较好地调节血糖水平,其血糖在15d时分别比模型组下降了27.4%和16.3%(P<0.05,P<0.01)。***-1治疗组小鼠脾和肾脏指数,血糖、血清TG和TC浓度,GOT,GPT和ALP活性均显著低于糖尿病模型组(P<0.05),血清瘦素水平下降并接近正常水平,血清脂联素、TNF-α和IL-6水平均显著高于模型组(P<0.05,P<0.01);***-1对血清TC和TG水平及ALP和GPT活性无明显作用,对上述其他指标的作用与***-1相似。各组血清胰岛素浓度及Ca和P含量均无明显变化。结论ABP对链佐星诱导的糖尿病小鼠具有一定的保护作用。

关键词：牛膝多糖链佐星糖尿病胰岛素

牛膝多糖对哮喘大鼠信号转导子和转录激活子6表达的影响

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中国应用生理学杂志 2006年第2期22卷 210-214页

作者：李昌崇叶乐平苏苗赏胡晓光张维溪罗运春温州医学院附属育英儿童医院呼吸内科浙江温州325027

目的:研究牛膝多糖(ABPS)对支气管哮喘大鼠支气管信号转导子和转录激活子6(STAT6)及其mRNA表达的影响。方法:雄性SD大鼠30只随机分为正常对照组、哮喘组和哮喘+牛膝多糖组(ABPS组)。留取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞总数、嗜酸性粒细... 详细信息

目的:研究牛膝多糖(ABPS)对支气管哮喘大鼠支气管信号转导子和转录激活子6(STAT6)及其mRNA表达的影响。方法:雄性SD大鼠30只随机分为正常对照组、哮喘组和哮喘+牛膝多糖组(ABPS组)。留取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)和分类计数;并测定BALF和血清中白细胞介素4(IL-4)浓度;采用免疫组化法和原位杂交法分别检测STAT6蛋白和STAT6 mRNA的表达。结果:①哮喘组BALF中细胞总数、EOS绝对值和EOS占细胞总数的百分比(EOS%)均高于对照组(P牛膝多糖有抑制哮喘气道EOS性炎症的作用,下调STAT6及其mRNA表达,使IL-4合成减少可能为其重要作用机制。

关键词：哮喘信号转导子和转录激活子6 牛膝多糖

牛膝多糖对幼年哮喘大鼠气道壁嗜酸性粒细胞和肥大细胞的影响

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中国药理学通报 2006年第6期22卷 735-738页

作者：张海燕方军胡小光黄爱民温州医学院第二附属医院病理科浙江温州325027

目的观察幼年哮喘大鼠气道壁嗜酸性粒细胞(EOS)及肥大细胞(MC)的变化并探讨牛膝多糖(ABPS)对其的影响。方法清洁级♂SD大鼠50只,随机分为5组:哮喘组(A)、正常对照组(C)、牛膝多糖(ABPS)治疗组(T1、T2、T3),每组10只。采用鸡卵清蛋白(OVA... 详细信息

目的观察幼年哮喘大鼠气道壁嗜酸性粒细胞(EOS)及肥大细胞(MC)的变化并探讨牛膝多糖(ABPS)对其的影响。方法清洁级♂SD大鼠50只,随机分为5组:哮喘组(A)、正常对照组(C)、牛膝多糖(ABPS)治疗组(T1、T2、T3),每组10只。采用鸡卵清蛋白(OVA)复制幼年大鼠哮喘模型。将动物处死后取肺组织,石蜡切片,HE及甲苯氨蓝染色,镜下观察EOS及MC数量、MC脱颗粒等情况,TUNEL法检测气道壁EOS的凋亡情况。结果①哮喘组(A)气道壁炎症细胞总数和EOS数为最多(EOS的百分率达73.4%±8.5%),ABPS治疗组T1、T3明显减少(EOS的百分率为56.1%±19.3%、57.3%±18.2%),与A组相比差异有显著性(P牛膝多糖能减少哮喘大鼠气道EOS和MC的数量,促进EOS的凋亡,抑制MC颗粒的释放,从而达到治疗哮喘作用。

关键词：哮喘嗜酸性粒细胞肥大细胞凋亡脱颗粒牛膝多糖

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牛膝多糖对抗原诱导的肥大细胞活化的影响

中国药理学通报 2008年第10期24卷 1302-1305页

作者：黄丰童晓云张荣华蔡宇暨南大学药学院广东广州510632 广州中医药大学第一附属医院广东广州510632

目的观察牛膝多糖(achyranthes bidentata polysaccha-rides,ABPS)对肥大细胞活化脱颗粒的影响。方法运用大鼠被动皮肤过敏反应(PCA)实验,用比色测定法检测ABPS在体内对肥大细胞(MC)影响;体外实验将ABPS分为高、中、低3个剂量组,然后分... 详细信息

目的观察牛膝多糖(achyranthes bidentata polysaccha-rides,ABPS)对肥大细胞活化脱颗粒的影响。方法运用大鼠被动皮肤过敏反应(PCA)实验,用比色测定法检测ABPS在体内对肥大细胞(MC)影响;体外实验将ABPS分为高、中、低3个剂量组,然后分别将其加入抗原致敏的RBL-2H3细胞中(大鼠嗜碱性粒细胞白血病细胞,国际公认的MC研究模型细胞),观察ABPS对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响。结果ABPS能明显抑制大鼠PCA、RBL-2H3细胞脱颗粒,并能抑制RBL-2H3细胞释放组胺、肿瘤坏死因子α及白细胞介素4;抑制RBL-2H3细胞中Akt和p38的磷酸化。结论ABPS的抗过敏作用与抑制肥大细胞的脱颗粒及炎性物质释放有关;ABPS抑制肥大细胞的活化与抑制Akt和p38的活性相关。

关键词：牛膝多糖被动皮肤过敏反应肥大细胞脱颗粒

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牛膝多糖的化学研究

药学学报 1990年第7期25卷 526-529页

作者：方积年张志花刘柏年中国科学院上海药物研究所上海200031

我国传统的中草药牛膝经沸水提取,去游离蛋白质,透析,沉淀,依次进行Cellex D和Sephadex G-150柱层析,得到有免疫活性的肽多糖ABAB,分子量2.3×10~4。是由D-葡萄糖酸,D-半乳糖,D-半乳糖酸,L-阿拉伯糖和L-鼠李糖组成,摩尔比为12:2:3:1:1... 详细信息

我国传统的中草药牛膝经沸水提取,去游离蛋白质,透析,沉淀,依次进行Cellex D和Sephadex G-150柱层析,得到有免疫活性的肽多糖ABAB,分子量2.3×10~4。是由D-葡萄糖酸,D-半乳糖,D-半乳糖酸,L-阿拉伯糖和L-鼠李糖组成,摩尔比为12:2:3:1:1。经羧基还原,甲基化反应,过碘酸盐氧化,Smith降解,IR分析,证明它有(1→4)-D-葡萄糖酸和(1→4)-D-半乳糖酸残基组成的主链。ABAB中肽的含量为24.7％,主要有甘氨酸,谷氨酸,门冬氨酸和丝氨酸组成。

关键词：牛膝牛膝多糖化学结构

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牛膝多糖对草鱼免疫和抗氧化功能的影响

水生生物学报 2013年第2期37卷 351-357页

作者：王红权唐德约赵玉蓉王小娜金柏涛张凯肖调义湖南农业大学动物科学技术学院长沙410128 大通湖天泓渔业股份有限公司益阳413207

为探讨在饲料中添加牛膝多糖(ABP)对草鱼免疫和抗氧化功能的影响,选取平均体重(88.13±0.76)g的健康草鱼375尾,随机分成5个处理,即基础饲料组、0.05%、0.10%、0.20%、0.40%ABP添加组,每个处理3个重复,每个重复25尾鱼,饲养65 d。结果表明... 详细信息

为探讨在饲料中添加牛膝多糖(ABP)对草鱼免疫和抗氧化功能的影响,选取平均体重(88.13±0.76)g的健康草鱼375尾,随机分成5个处理,即基础饲料组、0.05%、0.10%、0.20%、0.40%ABP添加组,每个处理3个重复,每个重复25尾鱼,饲养65 d。结果表明,在饲料中添加ABP对草鱼头肾体指数影响不显著(P>0.05),对脾体指数影响显著(P0.05)、28.00%(P0.05)和13.14%(P>0.05);血液中NBT阳性细胞数随着ABP添加量的增加呈增加的趋势,但各组间差异不显著(P>0.05);在饲料中添加ABP对草鱼血清白蛋白、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)含量和过氧化氢酶活影响不显著(P>0.05),显著影响草鱼血清总蛋白(TP)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LZM)、α-肿瘤坏死因子(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量(P0.05)、21.33%(P0.05)。饲料中随着ABP添加量的增加,各组草鱼血清TNF-α含量变化规律不明显,但与对照组相比,0.20%添加组TNF-α含量显著增加(P牛膝多糖可以提高草鱼的免疫和抗氧化能力,建议添加量为0.20%。

关键词：草鱼牛膝多糖免疫功能抗氧化功能