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牛泡沫病毒反式激活因子在内部启动子上应答元件的研究

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病毒学报 2000年第3期16卷 232-237页

作者：张莉乔文涛刘淑红王金忠陈启民耿运琪南开大学生命科学学院天津300071

泡沫病毒的基因转录依赖至少两个不同的启动子 :LTR调节病毒结构蛋白的表达 ,而内部启动子 (IP)则起始调节蛋白mRNA的转录。牛泡沫病毒 (BFV)在env与 3′LTR之间有两个重叠的开放阅读框架orf 1和orf 2 ,分别编码BFVORF 1、ORF 2等多种... 详细信息

泡沫病毒的基因转录依赖至少两个不同的启动子 :LTR调节病毒结构蛋白的表达 ,而内部启动子 (IP)则起始调节蛋白mRNA的转录。牛泡沫病毒 (BFV)在env与 3′LTR之间有两个重叠的开放阅读框架orf 1和orf 2 ,分别编码BFVORF 1、ORF 2等多种调节蛋白。这些蛋白中BFVORF 1为转录激活因子 ,称为Tas。Tas对LTR及IP均有反式激活作用。BFV中第二类启动子IP的存在反映了泡沫病毒基因调控的复杂性。已从BFV3 0 2 6中国毒株中克隆了基因组区段 85 72～ 95 0 9,并通过测序和功能分析证明该区段包含了BFVIP。为了对IP进行更精确的定位 ,对其进行了进一步的缺失分析 ,将完整的IP定位在 9117～ 940 5之间。该启动子的TATA盒位于 912 80～92 85 ,是IP必不可少的元件之一。杂合启动子和缺失分析表明 ,TATA盒上游 16 0bp的区域内包含了IP的Tas应答元件 (TREIP) ,其功能类似于增强子。Tas对IP具有强烈的激活作用 ,而C端缺失的ORF 1蛋白或ORF 2蛋白均不足以激活IP的表达。

关键词：牛泡沫病毒内部启动子转录反式激活因子 (Tas)

牛泡沫病毒(BSV)3026毒株的分离及分子生物学鉴定

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病毒学报 1997年第2期13卷 140-145页

作者：刘淑红陈荷新陈家童梁栋陈启民耿运琪 Wood.C. 南开大学生命科学学院美国Nebraska大学林肯分校

从一头牛免疫缺陷病毒（ＢＩＶ）检测阳性的３０２６号牛外周血中，分离到一株病毒，即３０２６病毒株。体外细胞培养和反转录分析证明，此病毒是一反转录病毒，可在胎牛肺细胞中引起典型的泡沫样病变，形成合胞体。ＰＣＲ扩增和Ｓｏｕ... 详细信息

从一头牛免疫缺陷病毒（ＢＩＶ）检测阳性的３０２６号牛外周血中，分离到一株病毒，即３０２６病毒株。体外细胞培养和反转录分析证明，此病毒是一反转录病毒，可在胎牛肺细胞中引起典型的泡沫样病变，形成合胞体。ＰＣＲ扩增和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交显示，此病毒的ｃＤＮＡ和ＰＣＲ产物均可与牛泡沫病毒（ＢＳＶ）阳性对照的ＨｉｒｔＤＮＡ杂交。３′ＬＴＲ上游一段３３０ｂｐ的ＰＣＲ产物序列分析表明，３０２６毒株与ＢＳＶ阳性对照相比发生了两个碱基的改变。所有这些表明，３０２６病毒是一株新发现的ＢＳＶ毒株。

关键词：牛病毒牛泡沫病毒分离分子生物学鉴定

牛泡沫病毒BFV3026细胞感染性的确立及包装细胞系的建立

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病毒学报 2003年第4期19卷 330-335页

作者：余荭孔晓红李汀马永钢陈启民耿运琪南开大学生命科学院天津300071

分别将牛泡沫病毒BFV3026接种于胎牛肺细胞(FBL)、牛肺细胞系(BL12)、新生牛肾细胞(NBK)、兔肺细胞(RL)、人乳腺癌上皮细胞(MCF)、293T、HeLa、CV-1、CHO等9种细胞,通过对它们及其传代细胞的病变观察与RT-PCR检测,确立BFV3026对这9种细... 详细信息

分别将牛泡沫病毒BFV3026接种于胎牛肺细胞(FBL)、牛肺细胞系(BL12)、新生牛肾细胞(NBK)、兔肺细胞(RL)、人乳腺癌上皮细胞(MCF)、293T、HeLa、CV-1、CHO等9种细胞,通过对它们及其传代细胞的病变观察与RT-PCR检测,确立BFV3026对这9种细胞的感染。并以BFV3026原病毒DNA为模板,通过PCR构建以pcD NA3 1(-)为载体的gag-pol、env真核表达质粒共转染BL12细胞,经G418持续筛选,获得8个NeoR细胞克隆。RT-PCR及包装实验证实:其中7个细胞克隆能有效行使包装辅助功能。

关键词：牛泡沫病毒 BFV3026细胞感染性包装细胞系

牛泡沫病毒BFV3026 gag基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达(英文)

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南开大学学报（自然科学版） 2003年第1期36卷 84-90页

作者：余荭孔晓红马永刚李汀王金忠陈启民耿运琪南开大学生命科学学院天津300071

从牛泡沫病毒 BFV3 0 2 6感染的胎牛肺细胞中提取 Hirt DNA,PCR扩增 BFV3 0 2 6gag基因 .序列分析确证后 ,将其克隆于原核表达载体 p ET3 2 A,重组质粒转化大肠杆菌 BL2 1 (DE3 ) ,经 IPTG诱导 ,使 Gag蛋白得以高效表达 .SDS-PAGE及 Wes... 详细信息

从牛泡沫病毒 BFV3 0 2 6感染的胎牛肺细胞中提取 Hirt DNA,PCR扩增 BFV3 0 2 6gag基因 .序列分析确证后 ,将其克隆于原核表达载体 p ET3 2 A,重组质粒转化大肠杆菌 BL2 1 (DE3 ) ,经 IPTG诱导 ,使 Gag蛋白得以高效表达 .SDS-PAGE及 Western blot证实 :表达蛋白占菌体总蛋白的 40 % .本工作的完成为 Gag蛋白功能的研究奠定基础 .

关键词：牛泡沫病毒 BFV3026 gag基因基因克隆基因表达序列分析大肠杆菌

牛泡沫病毒调节蛋白功能及其在LTR上应答元件的研究

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病毒学报 2000年第2期16卷 141-149页

作者：刘佳建王世珍张莉乔文涛陈启民耿运琪南开大学生命科学学院天津300071

牛泡沫病毒 (BFV)具有复杂的基因组结构 ,其基因组除编码反转录病毒共有的 gag、pol、env 三个结构基因之外 ,在其env和 3′LTR之间有两个重叠的读码框 (ORF - 1和ORF - 2 ) ,编码Borf- 1、Borf- 2、Bet等多种调节蛋白 ,其中Borf- 1(2 4... 详细信息

牛泡沫病毒 (BFV)具有复杂的基因组结构 ,其基因组除编码反转录病毒共有的 gag、pol、env 三个结构基因之外 ,在其env和 3′LTR之间有两个重叠的读码框 (ORF - 1和ORF - 2 ) ,编码Borf- 1、Borf- 2、Bet等多种调节蛋白 ,其中Borf- 1(2 49aa)为BFV反式激活因子 (Tas)。为研究Borf - 1的结构与功能 ,Borf - 1在LTR上的应答元件及作用机制 ,Borf- 2、Bet等调节蛋白在BFV基因表达调控中的作用 ,本研究以本室分离鉴定的BFV30 2 6中国毒株为材料 ,克隆Borf- 1等基因片段构建系列质粒 ,与带有luc报告基因的LTR系列缺失质粒共转染 ,作瞬时表达分析。结果表明 ,Borf- 137aa～ 114aa、C端 2 18aa～ 2 49aa为其行使激活功能所必需区域 ;Tas在BFVLTR上的应答元件 (TRE)位于 - 983/ - 6 6 8(TREI)、- 470 / - 140 (TREII)和RU5区 ,其中TREI、TREII均位于U3区 ,为正调控元件 ,RU5区为负调控元件。进一步研究证明 ,TREII能在异源启动子 (BIVLTR)上行使功能 ,且与其自身的方向无关 ,类似于增强子元件。此外还发现 ,RU5区具有抑制其下游基因表达的功能 ,该区在异源启动子 (BIVLTR)之后使其下游基因表达量降低。计算机分析结果表明 ,BFVRU5区的负调控作用可能是因为该区mRNA具有稳定的二级结构。

关键词：牛泡沫病毒调节蛋白 Borf-1 基因表达表达调控

牛泡沫病毒内部启动子上顺式作用元件具有增强子特性

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科学通报 2002年第7期47卷 534-539页

作者：乔文涛郭春光王书晖王金忠陈启民耿运琪南开大学生命科学学院天津300071

以牛泡沫病毒（bovine foamy virus,BFV）中国毒株 BFV3026为材料,研究env基因内部启动子（internal promoter,IP）上顺式作用元件的功能特点.用PCR方法进行系列缺失,将IP中BFV反式激活因子 Tas应答元件（TREIP）精确定位于 TATA盒近上... 详细信息

以牛泡沫病毒（bovine foamy virus,BFV）中国毒株 BFV3026为材料,研究env基因内部启动子（internal promoter,IP）上顺式作用元件的功能特点.用PCR方法进行系列缺失,将IP中BFV反式激活因子 Tas应答元件（TREIP）精确定位于 TATA盒近上游的 72bp区段中（9205～9276）.发现此段可激活同源及异源启动子,具有典型增强子特性;此区段与已知SFV-1TREIP近启动子区和 SFV-3 TREIP序列同源性高,都具有核因子 NF-1（nuclear factor1）的结合位点,位置相同,推测此类顺式作用元件具有相似功能特点.

关键词：牛泡沫病毒内部启动子上顺式作用元件增强子特性 env基因

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牛泡沫病毒内部启动子的克隆及功能分析

病毒学报 2000年第3期16卷 227-231页

作者：张莉王世珍刘佳建刘淑红陈启民耿运琪南开大学生命科学学院天津300071

以该实验室分离并鉴定的牛泡沫病毒 (BFV)中国毒株 (BFV3 0 2 6)为材料 ,用PCR方法首次克隆了位于 env 基因 3′端的内部启动子 ,经序列分析后 ,引入luc基因作瞬时表达分析。结果表明 ,该内部启动子不但基础活性高于LTR ,而且转录活性在... 详细信息

以该实验室分离并鉴定的牛泡沫病毒 (BFV)中国毒株 (BFV3 0 2 6)为材料 ,用PCR方法首次克隆了位于 env 基因 3′端的内部启动子 ,经序列分析后 ,引入luc基因作瞬时表达分析。结果表明 ,该内部启动子不但基础活性高于LTR ,而且转录活性在Tas参与下被大大激活 ,其激活活性也远远高于LTR。同源分析表明 ,非灵长类泡沫病毒内部启动子之间的同源性高于其与灵长类泡沫病毒内部启动子之间的同源性。

关键词：牛泡沫病毒 env基因内部启动子 LTR

牛泡沫病毒长末端重复序列在大肠杆菌中的启动子功能

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病毒学报 2002年第2期18卷 181-184页

作者：郭春光乔文涛胡文治王金忠陈启民耿运琪南开大学生命科学学院天津300071

The long terminl repeat(LTR) of the bovine foamy virus(BFV) contains the viral promoter,which is responsible for viral gene expression in eukaryotic cells We have demonstrated that BFV LTR linked to the luciferase gene can express the enzyme efficiently upon transformation into bacteria Deletion analysis and sequence comparison showed that the BFV LTR has a sequence(from-125 to-90)which is greatly homologous to the model bacteria promoter And the proposed transcriptional starting site is at the thymine of-91 or the cytosine of -92 Besides,being fully functional in E coli,the BFV LTR can also be specifically trans activated by BFV tas gene product,Borf-1 protein The responsive element lies between base -310 and -140,which is in accordance with the responsive region in eukaryotic cells The trans-activation of BFV LTR by Borf 1 protein in bacteria offers a useful system to investigate further the specific interaction between Borf-1 protein with BFV LTR and the mechanism of the trans

关键词：牛泡沫病毒长末端重复序列大肠杆菌启动子功能

牛泡沫病毒内部启动子的克隆、结构和功能分析

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云南大学学报（自然科学版） 1999年第S3期21卷 235-236页

作者：张莉乔文涛王金忠刘淑红耿运琪陈启民南开大学生命科学学院天津300071