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爪蟾胚胎脊髓胆碱能神经元上两类非去极化激活的钙通道

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生理学报 1991年第5期43卷 436-442页

作者：王晋辉杨世若谢佐平华西医科大学生理学教研室清华大学生物科学与技术系北京100084

用膜片箝方法,在标定的爪蟾胚胎脊髓胆碱能神经细胞膜上记录钙离子单通道电流。结果显示,在静息膜电位时钙通道即有开放活动。根据通道的电导及动力学等特性,我们将其分为两种类型:NS 型钙通道,斜率电导7.5pS,静息膜电位时平均开放时间0... 详细信息

用膜片箝方法,在标定的爪蟾胚胎脊髓胆碱能神经细胞膜上记录钙离子单通道电流。结果显示,在静息膜电位时钙通道即有开放活动。根据通道的电导及动力学等特性,我们将其分为两种类型:NS 型钙通道,斜率电导7.5pS,静息膜电位时平均开放时间0.58ms,其活动受牵张膜片的影响;NL 型钙通道,斜率电导16.7pS,静息膜电位时二级平均开放时间分别是2ms 和19.3ms。鉴于它们在膜静息以及负电位相的显著活动,我们推测这两类钙通道可能参与神经元静息膜电位时钙依赖的细胞活动过程。

关键词：脊髓胆碱能神经元钙通道爪蟾

爪蟾顶盖神经元的大微抑制性突触后电流(mIPSCs)依赖从钙储池释放的钙?

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神经科学通报 2005年第2期21卷 101-110页

作者：王红蔡浩然北京大学第一医院中心实验室北京100034

目的　用影响突触前细胞外钙内流及或细胞内钙储池释放钙的措施,研究大、小微抑制性突触后电流(mIPSCs)的一些特性。方法　采用盲法电压钳全细胞记录技术。结果　①无钙液中加或不加EGTA(200mmol/L)灌流时,均可逆地使大mIPSCs较正常含... 详细信息

目的　用影响突触前细胞外钙内流及或细胞内钙储池释放钙的措施,研究大、小微抑制性突触后电流(mIPSCs)的一些特性。方法　采用盲法电压钳全细胞记录技术。结果　①无钙液中加或不加EGTA(200mmol/L)灌流时,均可逆地使大mIPSCs较正常含钙液灌流时明显增多,小mIPSCs的平均频率明显下降;增加细胞外液钙(4mmol/L)浓度,小mIPSCs的频率增加,大mIPSCs变化不明显。Cd2+ (100μmol/L),仅轻度降低小mIPSCs平均频率至对照组的(87. 3±30. 0)% (n=13)。②carbachol(100μmol/L)使小mIPSCs增加至对照组的315. 63%。然而,无钙液中加carbachol,小mIPSCs不增加。含钙液和无钙液中加carbachol均可使大mIPSCs的比例增加。③Thapsigargin(8μmol/L)可使小mIPSCs的平均频率增加至对照组的(132. 1±27. 4)%。④U73122 (40μmol/L)可使小mIPSCs的平均频率降低至对照组的(74. 7±29. 6)%。⑤Procaine(2mmol/L)及咖啡因(10mmol/L)均可降低小mIPSC的平均频率。较高浓度的兰尼定(30 50μmol/L)也降低小mIPSCs的频率。结论　改变灌流液的钙浓度,小mIPSCs的频率受到明显影响。大mIPSCs的出现或增加主要与钙储池释放Ca2+的机制有关。

关键词：抑制性突触后电流顶盖神经元 carbachol 全细胞记录技术平均频率爪蟾 mIPSC Ca^2+ 对照组无钙液细胞内钙细胞外液钙内流突触前电压钳咖啡因兰尼定钙浓度灌流液

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热带爪蟾bHLH转录因子鉴定与进化分析

遗传 2012年第1期34卷 59-71页

作者：刘武艺阜阳师范学院生命科学学院阜阳236041 阜阳师范学院科研处阜阳236041

爪蟾是重要的生物医学模式动物。文章根据NCBI公布的热带爪蟾(Xenopus tropicalis)基因组数据,利用生物信息学方法提取和鉴定了爪蟾全基因组范围的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)基因信息,应用系统发生方法进行分类并做基因本体论(Gene Ontolog... 详细信息

爪蟾是重要的生物医学模式动物。文章根据NCBI公布的热带爪蟾(Xenopus tropicalis)基因组数据,利用生物信息学方法提取和鉴定了爪蟾全基因组范围的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)基因信息,应用系统发生方法进行分类并做基因本体论(Gene Ontology,GO)功能富集分布分析,以期从整体上探讨爪蟾bHLH转录因子基因家族的分类及功能。结果表明,在热带爪蟾基因组数据库中发现了70个bHLH转录因子,其中69个可以分别归到6大组(A^F)的34个亚家族中,另一个为"孤儿因子"(Orphan)基因。GO富集分布统计发现有51个显著富集分布的GO注释语句,其中转录调控活性、转录调控、DNA结合、RNA代谢过程调控、DNA依赖的转录调控、转录和转录因子活性等出现频率很高,表明这些GO术语是爪蟾bHLH基因最常见的功能;许多bHLH转录因子在一些重要的发育或生理过程中发挥调控作用,如肌肉组织和器官(横纹肌、骨骼肌、眼部和咽部肌肉)的分化和发育、消化系统发育、咽部和感觉器官的发育、碱基和核苷及核酸的代谢调控、生物合成过程调控、DNA结合和蛋白质异聚化活性等。另外,还有一些重要信号通路(Signaling pathway)的GO术语显著地富集。文章还对Hes转录因子家族做了进化分析。这些结果为热带爪蟾bHLH基因的进一步研究打下了很好的基础。

关键词：爪蟾系统发生分析转录因子基因本体论

爪蟾卵母细胞抽提物可诱导牛胎儿成纤维细胞发生部分重编程

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畜牧兽医学报 2015年第9期46卷 1549-1556页

作者：杜卫华范宗兴王皓宇郝海生刘岩赵学明秦彤朱化彬中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

应用非洲爪蟾卵母细胞抽提物处理和牛胎儿成纤维细胞(Japanese Black cattle fetal fibroblasts,JBCFF),观察处理前后细胞的形态学变化,同时用免疫荧光染色法检测组蛋白的乙酰化状态和OCT4蛋白的表达,并对其多能性标志基因的mRNA表达水... 详细信息

应用非洲爪蟾卵母细胞抽提物处理和牛胎儿成纤维细胞(Japanese Black cattle fetal fibroblasts,JBCFF),观察处理前后细胞的形态学变化,同时用免疫荧光染色法检测组蛋白的乙酰化状态和OCT4蛋白的表达,并对其多能性标志基因的mRNA表达水平进行定量分析。结果表明,与未处理细胞相比,经抽提物处理和牛胎儿成纤维细胞组蛋白H3K9乙酰化程度与未处理组无显著差异;培养5~6d后细胞聚集形成'克隆簇'中碱性磷酸酶和Oct4蛋白染色阳性;同时也检测到Oct4和Nanog基因在其中的表达,而Sox2基因未见表达;且Oct4、Nanog基因表达量随处理后细胞培养时间的延长(4、5、6d)而呈依次上升趋势。可见,爪蟾卵母细胞抽提物能诱导和牛胎儿成纤维细胞发生部分重编程,恢复其发育全能性,这对牛诱导性干细胞制备方法的探索和体细胞克隆及转基因克隆牛效率的提高具有一定的借鉴意义。

关键词：爪蟾卵母细胞抽提物牛胎儿成纤维细胞重编程多能性基因

鲫鱼视网膜谷氨酸受体和GABA受体在爪蟾卵母细胞中的表达

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生理学报 1996年第4期48卷 401-404页

作者：包永德朱辉朱幸中国科学院上海生理研究所

我们以两栖类卵母细胞为功能表达系统，通过注射鲫鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓｃａｒａｓｓｉｕｓ）视网膜ｍＲＮＡ，利用电压箝及药物灌流手段，系统地研究了鲫鱼视网膜内氨基酸受体的类型和特征，结果如下：（１）Ｇｌｕ受体：ＫＡ可以诱... 详细信息

我们以两栖类卵母细胞为功能表达系统，通过注射鲫鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓｃａｒａｓｓｉｕｓ）视网膜ｍＲＮＡ，利用电压箝及药物灌流手段，系统地研究了鲫鱼视网膜内氨基酸受体的类型和特征，结果如下：（１）Ｇｌｕ受体：ＫＡ可以诱发明显的去极化电流，而且Ｄｉａｚｏｘｉｄｅ能增强ＫＡ诱导的反应，这提示鲫鱼视网膜内某些Ｃｌｕ受体是ＡＭＰＡ选择性亚型（ＡＭＰＡ－ｐｒｅｆｅｒｒｉｎｇｓｕｂｔｙｐｅ）。（２）ＣＡＢＡ受体：ＧＡＢＡ能诱发一个快速、光滑的内向电流，绝大部分对ＧＡＢＡ的反应可被ｂｉｃｕｃｕｌｌｉｎｅ所压抑，而ＧＡＢＡ＿Ｂ受体的激动剂ｂａｃｌｏｆｅｎ则无任何作用，这提示，鲫鱼视网膜内大部分是ＧＡＢＡ＿Ａ受体。

关键词：鲫鱼神网膜爪蟾卵母细胞谷氨酸 γ氨基丁酸

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爪蟾胚胎发生中角蛋白的表达

北京大学学报（自然科学版） 1992年第4期28卷 498-504页

作者：于豪建池恩喜李梅王朝晖生物学系

本文应用二株抗角蛋白单克隆抗体(MAb D10为抗爪蟾角蛋白,MAb AF5为抗人角蛋白)对爪蟾卵母细胞、受精卵、不同发育期胚胎作免疫转移印迹观察,研究其角蛋白多肽亚单位的组成。发现不同发育期胚胎角蛋白表达有变化。同时应用免疫组织化学... 详细信息

本文应用二株抗角蛋白单克隆抗体(MAb D10为抗爪蟾角蛋白,MAb AF5为抗人角蛋白)对爪蟾卵母细胞、受精卵、不同发育期胚胎作免疫转移印迹观察,研究其角蛋白多肽亚单位的组成。发现不同发育期胚胎角蛋白表达有变化。同时应用免疫组织化学染色技术研究角蛋白在胚胎中的分布。发现角蛋白分布于表皮、脊索、嗅板、垂体原基、粘腺、咽上皮、神经管内表面等部位。

关键词：爪蟾胚胎发育角蛋白单克隆抗体

爪蟾卵非细胞体系诱导凋亡与27kD凋亡相关核酸酶的发现

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北京大学学报（自然科学版） 1998年第2期34卷 324-331页

作者：蒋争凡朱山翟中和北京大学生命科学学院

通过向正常爪蟾卵提取物Ｓ－１５０中加入ｄＡＴＰ和细胞色素ｃ，得到能有效诱导外源细胞核凋亡的非细胞体系。温育在上述非细胞体系中的小鼠肝细胞核表现出明显的凋亡特征。细胞核的绝大部分染色质ＤＮＡ凝集并排出，只在核膜边缘残留... 详细信息

通过向正常爪蟾卵提取物Ｓ－１５０中加入ｄＡＴＰ和细胞色素ｃ，得到能有效诱导外源细胞核凋亡的非细胞体系。温育在上述非细胞体系中的小鼠肝细胞核表现出明显的凋亡特征。细胞核的绝大部分染色质ＤＮＡ凝集并排出，只在核膜边缘残留一些ＤＮＡ成分，而温育体系中充满高度凝集的凋亡小体。这种凋亡小体产生的过程以往工作未见描述。同时，小鼠肝细胞核在卵提取物中发生的形态变化伴随着染色质ＤＮＡ被降解成ＤＮＡｌａｄｄｅｒ。进一步研究发现，卵提取物经ｄＡＴＰ与细胞色素ｃ诱导后，表现出凋亡相关的核酸酶活性，并确认该核酸酶为一２７ｋＤ的蛋白。研究表明，利用爪蟾卵提取物研究细胞核凋亡是一个很好的实验模式。

关键词：爪蟾卵非细胞体系细胞凋亡核酸酶

p21活化激酶2在爪蟾卵母细胞的细胞质分裂过程中的作用

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解剖学报 2007年第4期38卷 476-480页

作者：程大也梁彬李丰中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室

目的研究p21活化激酶2(PAK2)在爪蟾卵母细胞的细胞质分裂中的作用。方法以爪蟾卵母细胞为模型,利用特异性抑制PAK2活性的PAK2-N端(PAK2-NT)片段,显微注射爪蟾卵母细胞。荧光显微镜下比较PAK2-NT mRNA注射组和对照组卵母细胞生发泡破裂... 详细信息

目的研究p21活化激酶2(PAK2)在爪蟾卵母细胞的细胞质分裂中的作用。方法以爪蟾卵母细胞为模型,利用特异性抑制PAK2活性的PAK2-N端(PAK2-NT)片段,显微注射爪蟾卵母细胞。荧光显微镜下比较PAK2-NT mRNA注射组和对照组卵母细胞生发泡破裂的发生。激光扫描共焦显微镜下,时间延迟摄影法观察两组卵母细胞的细胞质分裂过程中肌动蛋白和纺锤体的变化。结果PAK2-NT mRNA注射组卵母细胞与对照组卵母细胞生发泡破裂发生相似,但PAK2-NT mRNA注射组卵母细胞未见细胞质分裂。结论PAK2可能参与爪蟾卵母细胞的细胞质分裂过程。

关键词： p21活化激酶卵母细胞细胞质分裂显微注射激光扫描共焦显微镜爪蟾

爪蟾胚胎致畸实验(FETAX)在检测污染物发育毒性中的应用

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安全与环境学报 2009年第4期9卷 24-28页

作者：钱丽娟刘青坡郭素珍曹庆珍刘俊奇施华宏华东师范大学资源与环境学院环境科学系上海市城市化过程与生态恢复重点实验室上海200062

爪蟾胚胎致畸实验(FETAX)是一种用于检测污染物发育毒性的有效方法。用CuSO_4、CdCl_2和三丁基锡(TBTCl)对热带爪蟾(Xenopus tropicalis)胚胎进行48 h暴露。结果表明,对照组胚胎均未出现死亡或畸形现象,Cu^(2+)、Cd^(2+)和TBTCl对胚胎... 详细信息

爪蟾胚胎致畸实验(FETAX)是一种用于检测污染物发育毒性的有效方法。用CuSO_4、CdCl_2和三丁基锡(TBTCl)对热带爪蟾(Xenopus tropicalis)胚胎进行48 h暴露。结果表明,对照组胚胎均未出现死亡或畸形现象,Cu^(2+)、Cd^(2+)和TBTCl对胚胎的半致死质量浓度(LC_(50))分别为0.38 mg/L、4.28 mg/L和3.18μg/L。48 h后,各暴露组胚胎出现颅面缺陷、眼睛突出、漏斗形嘴、肠道蜷曲、尾巴弯曲、水肿和色素沉着等多种畸形现象。Cu^(2+)、Cd^(2+)和TBTCl对胚胎的半致畸质量浓度(EC_(50))分别为0.16 mg/L、2.16 mg/L和2.98 μg/L,致畸指数分别为2.38、1.98和1.04。用脱碘酶抑制剂碘番酸(IOP)对非洲爪蟾胚胎进行暴露。36 h后,暴露组胚胎主要出现眼睛异常发育甚至消失等现象,这表明IOP对眼的发育有特定的毒性作用。研究表明,运用热带爪蟾胚胎检测污染物发育毒性的灵敏性并不高于非洲爪蟾(***)胚胎致畸实验,运用FETAX进行污染物发育毒性的检测并未显示出明显优势,其实验方案还有待进一步改进,但爪蟾胚胎模型在研究污染物特定的毒性机理方面具有较大潜力。鉴于爪蟾胚胎很适合进行分子操作,在现有FETAX实验的基础上增加一些分子生物学指标,将不仅能提高发育毒性效应检测的灵敏性,而且也增加了对污染物特定毒作用模式的解析功能。

关键词：生态毒理学爪蟾胚胎致畸发育毒性