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大车前苷、苜蓿素、柯伊利素对尿酸钠晶体诱导RAW264.7巨噬细胞炎症模型的影响

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中药药理与临床 2022年第2期38卷 49-53页

作者：郭敏侠欧阳香王陆周睿卿黄小方程虹毓朱继孝江西中医药大学中药资源与民族药研究中心南昌330004 正大天晴药业集团股份有限公司南京211100 江西中医药大学中医学院南昌330004 江西中医药大学人文学院南昌330004

目的:以短穗兔耳草中分离得到的苯乙醇苷类代表化合物大车前苷及黄酮苷元的代表化合物苜蓿素和柯伊利素为研究对象,研究其对尿酸钠结晶(MSU)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型的影响及作用机理。方法:用MSU诱导RAW264.7小鼠单核巨噬细胞... 详细信息

目的:以短穗兔耳草中分离得到的苯乙醇苷类代表化合物大车前苷及黄酮苷元的代表化合物苜蓿素和柯伊利素为研究对象,研究其对尿酸钠结晶(MSU)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型的影响及作用机理。方法:用MSU诱导RAW264.7小鼠单核巨噬细胞建立炎症模型,分为空白对照组、模型对照组、秋水仙碱0.001μmol/L组、大车前苷0.078、0.156μmol/L组、苜蓿素0.078、0.156μmol/L组;柯伊利素0.031、0.062μmol/L组。在药物干预12 h后酶联免疫吸附测定法检测上清液中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;Western blot法检测全细胞提取液中核转录因子κB(NF-κB)、Toll样受体4(TLR4)、TLR2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)和NOD样受体蛋白3(NLRP3)的蛋白表达。结果:与空白对照组相比,模型对照组TNF-α含量及NF-κB、TLR4、TLR2、Caspase-1、NLRP3蛋白表达显著上调(P模型对照组相比,秋水仙碱0.001μmol/L组与3种化合物均能显著降低TNF-α含量(P炎症模型TNF-α炎症因子的释放进而发挥抗炎作用。

关键词：大车前苷苜蓿素柯伊利素巨噬细胞炎症模型

大肠杆菌脂多糖体外诱导羔羊外周血单个核细胞炎症模型的建立

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家畜生态学报 2022年第12期43卷 52-58页

作者：董宁郭洪冉王志超杨雨鑫西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

为了建立大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)体外诱导羔羊外周血单个核细胞炎症模型,该试验探究了不同作用时间(3 h、6 h、12 h)和不同作用浓度(0、0.016、0.08、0.2、0.4、1、2、4、6、8、10、50μg/mL)的大肠杆菌LPS溶液对羔羊... 详细信息

为了建立大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)体外诱导羔羊外周血单个核细胞炎症模型,该试验探究了不同作用时间(3 h、6 h、12 h)和不同作用浓度(0、0.016、0.08、0.2、0.4、1、2、4、6、8、10、50μg/mL)的大肠杆菌LPS溶液对羔羊外周血单个核细胞相对活力和炎症因子相对表达量的影响。结果表明:在处理时间小于12 h时,细胞相对活性没有显著差异,处理浓度高于6μg/mL时,细胞相对活性普遍低于对照组;在处理时间为6 h时,除0.4μg/mL以外其余各组炎症因子IL-1β的相对表达量高于3 h和12 h,均显著高于对照组(P炎症因子表达量普遍较高,结合细胞相对活力结果,应选取浓度为4μg/mL、处理时间为6 h建立LPS体外诱导的羔羊外周血单个核细胞炎症模型,用于后续试验。

关键词：脂多糖外周血单个核细胞炎症模型羔羊

基于猪小肠上皮细胞炎症模型分析产肠毒素大肠杆菌诱导的转录组表达变化

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中国畜牧兽医 2022年第12期49卷 1445-1453页

作者：朱悦刘迎迎李莹慧李培朱凯晴贾垌李妍河北农业大学动物医学院保定071001

【目的】分析产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)炎症反应的主要宿主调控基因及相关分子通路,为进一步揭示ETEC感染引发炎症反应的作用机制提供理论依据。【方法】用感染复数(multipl... 详细信息

【目的】分析产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)炎症反应的主要宿主调控基因及相关分子通路,为进一步揭示ETEC感染引发炎症反应的作用机制提供理论依据。【方法】用感染复数(multiplicity of infection, MOI)为100的ETEC菌液感染IPEC-J2细胞,18 h后收集细胞上清,通过ELISA方法检测炎性因子白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)的分泌水平。由Illumina PE150测序平台进行高通量转录组测序,通过edgeR v 3.12.1软件对测序结果进行差异表达分析,利用GOseq和KOBAS 2.0软件对得到的差异表达mRNA进行GO功能和KEGG通路富集分析,随机挑选5条差异表达mRNA,利用实时荧光定量PCR对其验证。【结果】试验成功建立了ETEC感染诱导的IPEC-J2细胞炎症模型。与对照组相比,炎症模型组共发现529条差异表达mRNA,其中236条表达上调,293条表达下调,包括HSP90AA1、CGNL1、CADPS2、EHBP1等免疫相关基因。GO功能分析表明,ETEC感染后差异表达mRNA显著富集于细胞组分和生物过程,包括细胞内成分(intracellular part)、细胞质(cytoplasm)、核成分(nuclear part)、胞内膜结合细胞器(intracellular membrance-bounded organelle)、膜结合细胞器(membrance-bounded orgabelle)及细胞进程(cellular process)等。KEGG通路分析表明,炎症模型中差异表达基因大多数被注释到疾病相关通路及Toll样受体信号通路、mTOR信号通路、细胞周期、黏附连接等免疫相关信号通路。利用实时荧光定量PCR验证随机挑选的5条差异表达mRNA,结果与测序报告中差异表达mRNA变化趋势一致,证明测序结果可信。【结论】HSP90AA1、CGNL1、CADPS2和EHBP1等基因可能在ETEC黏附IPEC-J2细胞并诱导炎症反应中发挥关键作用,并通过Toll样受体、mTOR等信号通路进行免疫调控。研究结果为进一步揭示ETEC感染诱导炎症反应的分子机制及相关调控网络提供参考依据。

关键词：产肠毒素大肠杆菌(ETEC) 猪小肠上皮细胞(IPEC-J2) 炎症模型转录组

利用转录组筛选出的差异表达基因建立痤疮炎症模型并进行痤疮治疗药物的初步筛选

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利用转录组筛选出的差异表达基因建立痤疮炎症模型并进行痤疮治疗...

作者：李祎琪大理大学

学位级别：硕士

目的:痤疮是发生于毛囊皮脂腺单位的一种常见的慢性炎症性皮肤病。它的皮损范围广,多分布于额部、面颊及下颌部,也可累及躯干,如前胸部、背部及肩胛部。痤疮炎症性皮损的表现主要以粉刺、丘疹、脓疱较常见,严重时还会导致结节、囊肿、... 详细信息

目的:痤疮是发生于毛囊皮脂腺单位的一种常见的慢性炎症性皮肤病。它的皮损范围广,多分布于额部、面颊及下颌部,也可累及躯干,如前胸部、背部及肩胛部。痤疮炎症性皮损的表现主要以粉刺、丘疹、脓疱较常见,严重时还会导致结节、囊肿、瘢痕、颅内感染等危害。痤疮是一种损容性的皮肤病,好发于青少年,对青少年的生理、心理和社交自信产生很大的影响。皮脂腺细胞过度分泌油脂,毛囊导管口角质形成细胞的过度增生,细胞因子释放导致的皮损炎症反应,成纤维细胞向瘢痕成纤维细胞转化等都是痤疮发生过程中的重要病理过程。本课题将建立体外炎症模型,通过生物活性药物对痤疮患者血液及皮损中共同差异表达基因的抑制或激活去探索其对炎症因子的表达是否产生影响,进而为痤疮的治疗和预防提供新的思路。方法:1.对重型痤疮患者与正常人对照的血液转录组数据进行统计分析。2.利用NCBI平台提供的GEO数据库获取痤疮皮损的基因表达芯片数据分别为GSE53795和GSE108110。3.分别用DESeq2软件和R语言的limma包对重型痤疮血液转录组数据和GEO数据库获取的两组皮损芯片数据进行差异表达分析并筛选出差异表达基因,使用t检验的统计学算法对差异表达基因的P值和差异倍数进行筛选,标准均设定成P炎症模型,使用Real-time PCR方法检测下列差异基因及炎症因子(CXCL1、CXCL8、G0S2、PROK2、NNMT、OLFM4、PI3、PTX3、TNF-α、IL1α、IL1β、IL6)评估模型的建立。7.参考大量文献发现,S烯丙基L半胱氨酸(S allyl L cysteine,SAC)是大蒜提取物中的一种衍生化合物,具有抗炎作用和多种生物活性。曲格列酮作为过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的激动剂可调节细胞生长、炎症反应和多种皮肤功能。L-丝氨酸可降低TNF-α、IL-6等炎症因子的表达水平,减轻炎症反应。本实验欲验证这三种小分子抗炎药物是否能抑制痤疮发生过程中的炎症反应。8.将这三种生物活性药物作用于痤疮炎症模型,通过Cell Counting Kit-8细胞增殖实验检测药物浓度对THP-1和Ha Ca T的细胞毒性。9.通过Real-time PCR方法检测不同药物浓度影响的痤疮炎症模型中共同差异表达基因及炎症因子m RNA的相对表达水平的变化。结果:1.对重型痤疮血液转录组数据和两组皮损芯片数据(GSE53795皮损组和GSE108110皮损组)进行分析和筛选。重型痤疮患者与正常人对照的血液转录组共筛得966个差异表达基因,其中有809个差异基因在痤疮血液中高表达,157个低表达;GSE53795皮损芯片组经筛选得到572个差异表达基因,其中有318个差异基因呈现高表达趋势,254个呈现低表达趋势;GSE108110皮损芯片组共筛选出72个差异表达基因,其中有67个差异基因呈高表达,5个差异基因呈低表达。***、KEGG和GSEA富集分析显示血液转录组和芯片组数据参与细胞解毒、白细胞粒细胞迁移、细菌因子反应、病毒生命周期的负调控等生物过程和MAPK、TNF-α、NF-κB信号传导、IL-17信号传导等相关信号通路。3.经分析重型痤疮血液转录组、GSE53795和GSE108110皮损芯片数据,最终筛选出8个基因(CXCL1、CXCL8、G0S2、PROK2、NNMT、OLFM4、PI3、PTX3)在痤疮患者血液和痤疮患者皮损中的表达都显著升高。4.在Ha Ca T和THP-1两个细胞株中,TNF-α(25ng/ml,24h)炎症模型构建的结果优于LPS和***的处理,遂最终选取TNF-α这种生物活性细胞因子来构建炎症模型。5.在Ha Ca T痤疮炎症模型中,高浓度SAC可使多数差异基因及炎症因子m RNA的相对表达水平降低,曲格列酮可以使部分差异基因和炎症因子表达降低但趋势不明显,高浓度L-丝氨酸可使所有差异基因和炎症因子m RNA的相对表达水平降低。在THP-1痤疮炎症模型中,高浓度SAC可使除CXCL1之外的所有差异基因及炎症因子表达水平降低,曲格列酮只能使PTX3差异基因m RNA的相对表达水平降低,对其它基

关键词：痤疮差异表达基因炎症模型药物筛选

新视角重探小鼠胶质细胞体外培养技术与炎症模型

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中国药理学通报 2019年第7期35卷 1030-1036页

作者：吴相枝徐铭枝张东伟付洁王伊宋海峰安徽医科大学安徽合肥230032 军事科学院军事医学研究院生命组学研究所特殊环境组学研究室蛋白质药物国家工程研究中心北京102206

目的通过比较新材料与传统材料在胶质细胞培养中的优劣及特点,优化小鼠胶质细胞炎症模型。方法利用qPCR、流式细胞术、免疫荧光等手段,表征胶质细胞组成比例与细胞纯度。在LPS刺激下,从mRNA与蛋白水平,评估不同包被材料对细胞炎症反应... 详细信息

目的通过比较新材料与传统材料在胶质细胞培养中的优劣及特点,优化小鼠胶质细胞炎症模型。方法利用qPCR、流式细胞术、免疫荧光等手段,表征胶质细胞组成比例与细胞纯度。在LPS刺激下,从mRNA与蛋白水平,评估不同包被材料对细胞炎症反应的影响。结果 LPS(100 μg·L^-1 )刺激48 h,混合胶质细胞炎症因子表达量明显高于小胶质细胞,如PDL包被时,混合胶质细胞TNF-α表达量为(903.8±322.2)ng·L^-1 ,明显高于小胶质细胞(565.4±159.8)ng·L^-1;Matrigel包被时,混合胶质细胞表层的小胶质细胞状态更佳。而小胶质细胞在未包被时,对LPS更为敏感,TNF-α水平为(6861.4±1606.6)ng·L^-1 。结论 Matrigel包被培养的混合胶质细胞,可最大程度模拟体内环境,为建立胶质细胞炎症模型的最佳条件;评估炎症模型应以蛋白水平检测结果为主要指标。

关键词：乳鼠培养分选小胶质细胞混合胶质细胞炎症模型

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毛细管电泳对大鼠炎症模型的代谢组学研究

四川大学学报（医学版） 2011年第4期42卷 560-563页

作者：刘羽洁苗文娟尹海林叶利明陈聪张志荣四川大学华西药学院药物分析教研室成都610041 四川大学实验动物中心成都610041 四川大学华西药学院药物靶向重点实验室成都610041

目的建立尿液代谢物组的毛细管电泳分析方法,了解炎症模型大鼠的尿液代谢物轮廓变化。方法基于代谢组学方法,利用毛细管区带电泳分析正常大鼠、炎症模型大鼠尿液代谢物数据,用计算机辅助相似度评价系统进行峰匹配和数据分析,结合主成分... 详细信息

目的建立尿液代谢物组的毛细管电泳分析方法,了解炎症模型大鼠的尿液代谢物轮廓变化。方法基于代谢组学方法,利用毛细管区带电泳分析正常大鼠、炎症模型大鼠尿液代谢物数据,用计算机辅助相似度评价系统进行峰匹配和数据分析,结合主成分分析方法,研究炎症模型大鼠的尿液代谢轮廓。结果大鼠尿液毛细管电泳图谱经主成分分析显示炎症大鼠尿液与正常大鼠尿液代谢物表型不同,并且不受性别差异、个体差异、昼夜差异、日间差异的影响。结论基于毛细管电泳的代谢组学技术可以为炎症模型的尿液代谢物轮廓分析提供研究手段,为炎症疾病及药物代谢组学的进一步研究奠定了基础。

关键词：毛细管电泳尿液代谢轮廓炎症模型主成分分析

一种用于化妆品原料筛选的人原代角质细胞炎症模型的建立和应用

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日用化学品科学 2022年第12期45卷 14-18页

作者：孙方卉宋肖洁霍刚欧诗漫生物股份有限公司研发中心浙江湖州313000

通过系统性地研究脂多糖(LPS)对人原代角质细胞的细胞活性、IL-1α、IL-8及ROS等与皮肤炎症密切相关指标的影响,开发了一种基于人原代角质细胞的皮肤炎症模型。结果显示,0.01~100µg/mL LPS对人原代角质细胞活性没有较大影响,100µg/mL ... 详细信息

通过系统性地研究脂多糖(LPS)对人原代角质细胞的细胞活性、IL-1α、IL-8及ROS等与皮肤炎症密切相关指标的影响,开发了一种基于人原代角质细胞的皮肤炎症模型。结果显示,0.01~100µg/mL LPS对人原代角质细胞活性没有较大影响,100µg/mL LPS能同时诱导人原代角质细胞产生大量IL-1α和IL-8,0.01µg/mL LPS能诱导产生大量ROS。因此,建立了对不同炎症指标使用LPS进行差异化诱导的人原代角质细胞皮肤炎症模型,同时用此模型对样品OSM2021041301进行检测,发现样品OSM2021041301能显著抑制LPS诱导升高的IL-1α、IL-8水平,而对LPS诱导升高的ROS水平有较弱的抑制作用,说明此样品对LPS及其类似物诱导的IL-1α、IL-8及ROS升高而引起的炎症具有一定的抗炎作用。

关键词：脂多糖人原代角质细胞炎症模型 IL-1α IL-8 ROS

基于人呼吸道上皮细胞炎症模型的连翘提取物抗炎活性实验研究

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天然产物研究与开发 2015年第7期27卷 1248-1253,1265页

作者：刘建洲张立伟山西大学分子科学研究所太原030006

通过复制LPS诱导的BEAS-2B炎症模型，探讨连翘提取物对炎症反应中炎性因子分泌的作用。采用MTT法检测BEAS-2B细胞活力，筛选连翘乙醇提取物（FSEE）、60%连翘酯苷A（60% FTA）、90%连翘酯苷A（90% FTA）最佳给药浓度；采用倒置显微镜观... 详细信息

通过复制LPS诱导的BEAS-2B炎症模型，探讨连翘提取物对炎症反应中炎性因子分泌的作用。采用MTT法检测BEAS-2B细胞活力，筛选连翘乙醇提取物（FSEE）、60%连翘酯苷A（60% FTA）、90%连翘酯苷A（90% FTA）最佳给药浓度；采用倒置显微镜观察连翘提取物对细胞作用后的细胞形态；采用Griess Reagent法检测细胞培养上清NO含量；流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）的水平。毒性试验结果表明，连翘提取物浓度小于128 μg/mL时，对BEAS-2B细胞没有产生毒性；浓度在128-256 μg/mL时，60% FTA与90% FTA均表现出对细胞的毒性。抗炎结果表明，在给药浓度设置为25、50、100 μg/mL时，三种提取物均表现出减少NO分泌的效果（P〈0.01），90% FTA组存在剂量依赖关系；三种提取物可显著降低LPS诱导的BEAS-2B细胞胞内活性氧的水平（P〈0.05），且呈量效关系。另外，FSEE、60% FTA、90% FTA组间的治疗效果也逐渐增强。由此得出，90% FTA为连翘提取物抗炎作用的主要活性部位，其抗炎活性成分可能为连翘酯苷A，这将为连翘抗炎活性的进一步研究提供基础。

关键词：连翘提取物连翘酯苷A 呼吸道上皮细胞炎症模型 LPS

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脂肪干细胞的急慢性炎症模型的建立

武汉大学学报（医学版） 2019年第4期40卷 580-585页

作者：邬娟徐之良武汉大学人民医院儿科

目的:在体外建立脂肪干细胞的急慢性炎症模型,为研究microRNAs在成体干细胞免疫功能中的调控作用及信号机制的研究提供实验模型。方法:对所分离的脂肪干细胞进行流式细胞仪表面抗原鉴定。加入3个浓度(1,10,100 mg/L)的脂多糖(LPS)于不... 详细信息

目的:在体外建立脂肪干细胞的急慢性炎症模型,为研究microRNAs在成体干细胞免疫功能中的调控作用及信号机制的研究提供实验模型。方法:对所分离的脂肪干细胞进行流式细胞仪表面抗原鉴定。加入3个浓度(1,10,100 mg/L)的脂多糖(LPS)于不同时间(2,6,12 h)刺激脂肪干细胞建立急性炎症模型,用LPS(1 mg/L)间断刺激脂肪干细4周建立慢性炎症模型,对照组加完全培养液。CCK8测定细胞增殖活性,ELISA法检测上清液中IL-6、TNF-α、IL-1β含量,Western Blot检测TLR2、TLR4蛋白表达,qPCR检测上述相关分子基因水平表达。结果:流式细胞仪分析脂肪干细胞的细胞表型:CD29、CD44、CD105阳性,CD34、CD45为阴性。与对照组比较,上述检测结果差异均具有统计学意义(P炎症模型,间断刺激4周人脂肪干细胞可以建立慢性炎症模型。

关键词：脂肪干细胞脂多糖炎症模型