检索结果-南通市图书馆

作者：杨瑞山东大学

学位级别：硕士

研究目的酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)是大量饮酒导致的肝脏疾病,包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、肝纤维化、肝硬化,晚期可发展为肝癌。酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver,AFL)是ALD的早期可逆性的病理学表型,也是对ALD... 详细信息

研究目的酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)是大量饮酒导致的肝脏疾病,包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、肝纤维化、肝硬化,晚期可发展为肝癌。酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver,AFL)是ALD的早期可逆性的病理学表型,也是对ALD进行干预的最佳阶段。AFL发病分子机制复杂,涉及到肝细胞内脂肪合成分解代谢的紊乱及肝外脂肪动员等。近年的研究表明肝脏中的Ml型极化的枯否细胞(Kupffer cells,KCs)在ALD的发生中起着重要的作用,调控KCs极化状态被视为一个极具前景的防治ALD的研究方向,然而KCs极化导致AFL的分子机制仍待阐明。肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactorα,TNF-α)是M1型极化的KCs释放的重要的促炎性细胞因子,关于其在AFL发病中作用研究较少且研究结果报道不一。我们前期研究发现,KCs抑制剂GdCl3和TNF-α阻断剂益赛普能够减轻急性酒精暴露导致的肝细胞内脂肪蓄积,其作用主要与抑制TNF-α介导的外周脂肪动员有关。除了动员外周脂肪,细胞实验表明,TNF-α可影响肝细胞内调控脂肪酸合成与分解代谢有关的核转录因子的活化。为了进一步探讨肝外脂肪动员和肝细胞内脂肪酸合成分解代谢紊乱在TNF-α诱导脂肪肝发病中的作用,本研究以雄性ICR小鼠为研究对象,检测给予TNF-α和/或脂肪分解抑制剂N6-苯基异丙基腺苷(N6-phenylisopropyl αdenosine,PIA)后,1.5 h、3 h、6 h、24 h共四个时间点小鼠肝脏内甘油三酯(triglyceride,TG)含量、调控肝脏脂肪合成和分解代谢通路的甾醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulαtoryelement-bindingprotein 1c,SREBP-1c)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferators-activated receptor α,PPAR-α)及其调控关键靶分子的蛋白含量以及附睾脂肪中TG分解限速酶激素敏感性脂肪酶(hormone sensitive lipase,HSL)、脂肪甘油三酯脂酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)和围脂滴蛋白(perilipin)等的蛋白含量;并进一步以HepG2细胞为研究对象,检测给予不同剂量TNF-α后,不同时间点HepG2细胞内调控肝脏脂肪合成和分解代谢通路的SREBP-1c和PPAR-α及其调控关键蛋白的含量;以期进一步阐明TNF-α导致肝脂肪变性的分子机制,为AFL的防治提供可以参考的分子靶点。研究方法1.动物实验SPF级雄性ICR小鼠96只,体重(20±2)g;饲养环境:室温(22±2)℃,湿度40%～70%,12 h昼夜交替。适应性喂养小鼠3天后,将其随机分成对照组、TNF-α 组、PIA 组、TNF-α+PIA 组(n=24)。TNF-α 组小鼠腹腔注射 0.166 mg/kgbw TNF-α,对照组给予等体积的生理盐水,PIA组小鼠腹腔注射给予0.15μmol/kg bw PIA,TNF-α + PIA组小鼠腹腔注射给予同等剂量的TNF-α和PIA(PIA在TNF-α暴露前30min注射)。分别在给药后1.5h、3h、6h和24h共4个时间点每组各处死动物6只,收集血清、肝脏及附睾脂肪组织备用。采用油红O染色观察肝脏冰冻切片中脂肪蓄积;组织细胞TG试剂盒检测肝脏TG含量;游离脂肪酸检测试剂盒检测血清中游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量;糖原PAS染色观察肝脏细胞中的糖原积累;全自动生化分析仪检测血清中TG含量及谷丙转氨酶(alanineaminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的活性;Western blotting检测肝脏中脂肪代谢相关蛋白和附睾脂肪激素敏感性脂肪酶等的蛋白含量。2.体外实验用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基(含1%青霉素、链霉素)培养HepG2细胞,培养环境温度为37℃,二氧化碳含量为5%,3天传代一次。细胞用含0.2%BSA的DMEM无血清培养基饥饿细胞12 h后,分别再给予TNF-α处理0 h、0.5 h、1 h、3 h、6 h、12 h。TNF-α 处理剂量为 10 ng/ml、20 ng/ml、40 ng/ml、80 ng/ml、160ng/ml。TNF-α对HepG2细胞的细胞毒性采用CCK-8试剂盒确定;制备细胞爬片,油红O染色观察细胞爬片中脂肪蓄积;组织细胞TG试剂盒检测细胞内TG含量;Western blotting检测细胞内脂肪代谢相关蛋白的含量。研究结果***-α暴露对小鼠血清转氨酶活性

关键词：肿瘤坏死因子α 脂肪动员甘油三酯激素敏感性脂肪酶甾醇调节元件结合蛋白1c 过氧化物酶体增殖物活化受体α

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hsl外显子4-4A/G多态性与遵义地区汉族人群2型糖尿病的相关性研究

hsl外显子4-4A/G多态性与遵义地区汉族人群2型糖尿病的相关性研究

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作者：冷雪峰遵义医学院

学位级别：硕士

目的:进一步研究遵义地区人群激素敏感脂肪酶(HSL)基因第4外显子多态性与2型糖尿病的关系,为上述疾病的发病机理和临床治疗补充相关理论依据。方法:采用两种实验设计,收集357例2型糖尿病患者和268例正常人血凝块各3毫升,碱裂解法提取... 详细信息

目的:进一步研究遵义地区人群激素敏感脂肪酶(HSL)基因第4外显子多态性与2型糖尿病的关系,为上述疾病的发病机理和临床治疗补充相关理论依据。方法:采用两种实验设计,收集357例2型糖尿病患者和268例正常人血凝块各3毫升,碱裂解法提取血液细胞DNA;运用聚合酶链反应(PCR)扩增hsl第4外显子;结合单链构象多态性(SSCP)技术与RFLP技术对hsl第4外显子多态性进行进一步检测;实验结果进行统计学分析。结果: 1.进一步验证了hsl第4外显子在遵义地区人群中具有多态分布。 2.所选样本基因型频率经Hardy-Weinburg遗传平衡定律检验达到平衡,具有群体代表性。 ***外显子4-4A/G位点,所有样本:T2DM组检出GG基因型者51人,基因型频率为11.4%;AG基因型者157人,基因型频率为42.7%;AA基因型者149人,基因型频率为45.9%;对照组中,GG基因型者检出16人,基因型频率5.9%;AG基因型检出119人,基因型频率为44.3%;AA基因型检出133人,基因型频率为49.6%。随机病例-对照样本:T2DM组检出GG基因型者41人,基因型频率为13.5%;AG基因型者136人,基因型频率为44.2%;AA基因型者130人,基因型频率为42.3%;对照组中,GG基因型者检出10人,基因型频率4.7%;AG基因型检出98人,基因型频率为44.9%;AA基因型检出110人,基因型频率为50.4%。两组间三种基因型和两种等位基因的分布均存在显著性差异(P＜0.05);且GG基因型者占总人数的比列两组间比较差异显著(χ=9.027,P＜0.05和χ=8.46,P＜0.005);T2DM组人群GG基因型比例较高。 4.在病例和家系对照组中,GG基因型者检出率分别为10人和6人,AG基因型者检出均为21人,AA基因型者检出率分别为19人和23人。结果无统计学差异(χ=1.381, P＞0.05)。 5.将具有高脂血症者基因型和血脂正常组比较,经χ检验,两组基因型频率(χ=9.188, P＜0.05)和等位基因频率(χ=4.996,P＜0.05)差异显著,说明两组基因型和等位基因分布不同;且GG基因型人数占总人数的比例在高脂血症者和血脂正常两组间比较差异显著,高脂血症者组人群GG基因型比例较高(χ=7.129,P＜0.05)。 6.将腰臀比异常与腰臀比正常组基因型比较,经χ检验,两组基因型频率(χ=8.886,P＜0.05)和等位基因频率(χ=4.164,P＜0.05)差异显著,说明两组基因型和等位基因分布不同;且GG基因型人数占总人数的比例在腰臀比异常与腰臀比正常两组间比较差异显著,腰臀比异常组人群GG基因型比例较高(χ=7.523,P＜0.05)。结论: 1.遵义地区汉族人群hsl外显子4具有多态性分布。 ***基因型是遵义地区汉族人群T2DM的遗传易感基因型。 ***基因型和携带有等位基因G者可能是高脂血症、腹部脂肪堆积的一个危险因素。

关键词：激素敏感性脂肪酶 hsl 2型糖尿病基因多态性

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高强度间歇训练缓解肥胖小鼠脂肪细胞儿茶酚胺抵抗改善脂解的机制研究

高强度间歇训练缓解肥胖小鼠脂肪细胞儿茶酚胺抵抗改善脂解的机制...

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作者：梁计国河北师范大学

学位级别：硕士

研究目的:众多研究发现高强度间歇训练(HIIT)与中等强度持续训练(MICT)相比,具有相同甚至更好的减脂效果,特别是HIIT在减少内脏脂肪方面效果更好,但内在机制尚未明确。肥胖会造成脂肪细胞对儿茶酚胺等脂解类激素的抵抗状态,使脂肪分解困... 详细信息

研究目的:众多研究发现高强度间歇训练(HIIT)与中等强度持续训练(MICT)相比,具有相同甚至更好的减脂效果,特别是HIIT在减少内脏脂肪方面效果更好,但内在机制尚未明确。肥胖会造成脂肪细胞对儿茶酚胺等脂解类激素的抵抗状态,使脂肪分解困难,加重肥胖。MICT已被证实可改善肥胖造成的脂解抵抗状态,这是MICT具有减肥效果的关键机制之一。HIIT相比MICT改善脂解抵抗的作用是否更显著,从而达到更好的减肥效果,有待进一步探索。因此本研究首先对C57BL/6雌性小鼠高脂膳食饲养14周,建造肥胖模型,之后分别进行为期12周的HIIT和MICT干预,进而分离成熟脂肪细胞进行离体肾上腺素刺激,观察脂肪细胞中脂肪水解酶的活性和脂键断裂情况,反映HIIT对脂肪细胞脂解抵抗的改善效果,探寻HIIT具有良好减肥效果的内在机制。研究方法:3周龄C57BL/6雌性小鼠(体重14.4?0.97g),适应性喂养1周后,随机分为普通膳食组(C组,n=12只)和高糖高脂膳食组(H组,n=70只)。H组进行14周的高糖高脂膳食喂养(高糖高脂饲料:60%标准饲料、16%白砂糖、5%猪油、18%蛋黄粉和1%胆酸钠),复制肥胖小鼠模型。C组小鼠进行普通膳食喂养。H组小鼠体重大于C组体重均值10%的视为单纯饮食诱导肥胖小鼠。随后,从肥胖小鼠抽取36只随机分成高脂膳食饲养组(HFD组)、中等强度持续训练组(MICT组)和高强度间歇训练组(HIIT组)。MICT组和HIIT组小鼠进行为期12周的跑台训练(每周运动5次)。具体方案为:MICT组小鼠以50%0%峰值摄氧量强度运动45分钟,HIIT组小鼠以90%10%峰值摄氧量强度运动1分钟,以50%0%峰值摄氧量强度运动2分钟,循环进行12次高强度间歇运动,两组小鼠每次运动的总距离相等。12周训练周期结束后,测量小鼠体重、皮下和内脏脂肪重量;采用HE染色方法观察小鼠皮下和内脏脂肪细胞体积;分离小鼠原代脂肪细胞,进行肾上腺素孵育刺激,蛋白免疫印迹法测试皮下和内脏脂肪细胞HSL-ser563蛋白水平;采用傅立叶变换红外光谱法检测小鼠内脏及皮下脂肪细胞中脂键数量。实验数据均以“均数±标准差”表示,体重指标采用单因素方差分析;FITR光谱图AUC指标和不同脂肪组织重量及HSLser563蛋白表达指标采用双因素方差分析。P脂肪重量和子宫周围内脏脂肪重量均低于HFD组,差异具有显著性(P脂肪重量低于MICT组,差异具有非常显著性(P脂肪重量无显著性差异。(2)HIIT和MICT组小鼠的皮下和内脏脂肪细胞体积均明显小于HFD组。(3)Western Blot结果显示经肾上腺素刺激后,HIIT组小鼠内脏脂肪细胞的HSLser563蛋白表达高于HFD组和MICT组,且差异均具有非常显著性(P脂肪细胞HSLser563蛋白表达之间无显著性差异;HIIT组和MICT组小鼠的皮下脂肪细胞HSLser563蛋白表达均高于HFD组,差异均具有非常显著性(P脂肪细胞的脂键数量均少于HFD组,分别具有非常显著性差异(P脂肪细胞的脂键数量也均少于HFD组,分别具有非常显著性差异(P脂肪细胞脂解抵抗的改善效果强于12周MICT,且HIIT对内脏脂肪细胞脂解抵抗的改善效果强于皮下脂肪细胞,这是HIIT减脂效果更好,特别是减少内脏脂肪效果更好的关键机制之一。

关键词：高强度间歇训练中等强度持续训练脂肪细胞肾上腺素激素敏感性脂肪酶

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HSL基因对鲤脂肪沉积的影响及其调控机制初探

HSL基因对鲤脂肪沉积的影响及其调控机制初探

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作者：党红阳上海海洋大学

学位级别：硕士

脂肪含量是评价鱼类品质的重要指标之一。适宜的肌内脂含量可以提高肌肉嫩度和多汁性,有利于改善肉质和口感,而腹腔脂肪的大量沉积不仅会造成鱼体代谢紊乱、免疫力和应激耐受力下降,而且会导致鱼类生长性能下降,饲料利用率降低,从而降... 详细信息

脂肪含量是评价鱼类品质的重要指标之一。适宜的肌内脂含量可以提高肌肉嫩度和多汁性,有利于改善肉质和口感,而腹腔脂肪的大量沉积不仅会造成鱼体代谢紊乱、免疫力和应激耐受力下降,而且会导致鱼类生长性能下降,饲料利用率降低,从而降低养殖效率。因此,了解脂肪沉积分子机制可为鱼类肉质改良改善、生产效率提高提供理论依据,具有较大的实际意义。脂肪沉积是一个复杂的生理和生化过程,由代谢酶调节,受到脂肪摄取、合成和分解等信号通路中相关基因的调控。正确了解脂肪代谢中的关键基因及信号通路在脂肪沉积过程中的作用机制是我们进行脂肪沉积调控,进而改善肉类品质的基础。激素敏感脂肪酶(hormone-sensitive lipase,HSL or LIPE)是脂肪动员的关键酶和限速酶,它能够将甘油三酯分解成游离脂肪酸,对细胞内调节甘油三酯含量起重要作用,是影响动物脂肪沉积的关键酶之一。本研究以鲤为研究对象,从HSL基因入手,探究其时空表达特征及其与脂肪沉积的关系,探讨其对鲤脂肪沉积的影响,进一步采用基因敲除技术研究HSL基因对脂肪代谢的影响,探讨其可能的生物学功能及在脂肪代谢调控通路中的作用机制,旨在为深入研究鲤脂肪沉积分子调控机制和鲤鱼品质改良奠定基础。主要结果如下:(1)本研究利用RACE(rapid-amplification of c DNA ends))技术,分别获得鲤HSL基因两个亚型HSL1和HSL2全长c DNA序列。HSL1基因c DNA全长3379 bp,包括230 bp的5’非翻译区(5’-UTR)、1067 bp的3’非翻译区(3’-UTR)和编码693个氨基酸的开放阅读框。HSL2基因c DNA全长2732 bp,包括52 bp的5’-UTR、136 bp的3’-UTR和编码847个氨基酸的开放阅读框。多重序列比对显示,鲤HSL1和HSL2与斑马鱼、大西洋鲑和牙鲆HSL1和HSL2氨基酸序列相似性分别为88.2%和90.0%、64.1%和72.3%、64.6%和73.1%,HSL1和HSL2两者之间氨基酸序列相似性为60.6%,HSL1和HSL2都由N端和C端组成,由谷氨酰胺(Gln316)和天冬氨酸(Asp317)分隔。(2)利用实时荧光定量PCR技术,检测了HSL1和HSL2基因在鲤不同组织和不同发育时期的表达情况。结果表明,HSL1和HSL2基因在组织中广泛表达,但有明显的组织表达差异。所检测的10组织中HSL1 m RNA相对表达水平从高到低分别为:腹腔脂肪、腹部肌肉、肠、脑、背部肌肉、心脏、脾、肝、肾、血液。腹腔脂肪组织HSL1 m RNA的相对表达量与腹部肌肉、肠、脑组织差异不显著(P>0.05),与其他组织相比差异极显著(P脂肪、腹部肌肉、脑、心脏、背部肌肉、肾、脾、血液、肠、肝。腹腔脂肪组织HSL2 m RNA相对表达量相较其他组织差异极显著(P脂肪含量极高和极低两组鲤检测基因表达与脂肪含量关系,结果显示:腹腔脂肪组织中,HSL1在低脂组中m RNA的表达量显著高于高脂组,而HSL2在低脂组中m RNA表达量显著低于高脂组,且差异均为极显著水平(P0.05),而HSL2表达量差异呈极显著水平(P脂肪含量呈正相关,但差异不显著(P>0.05),与腹腔脂肪量呈负相关,且差异极显著(P脂肪和腹腔脂肪含量均呈正相关,且差异均极显著(P脂肪沉积过程中存在不同机制。(4)以斑马鱼为模型,探索HSL2基因敲除对脂肪沉积的影响。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建斑马鱼HSL2(lipeb)基因突变纯系(-80/+4 bp),表型结果显示,纯合突变型HSL2斑马鱼胚胎发育、早期生长均无异常,2月龄HSL2与野生型相比,体长和体重无显著差异(P脂肪沉积无明显异常。肌肉中脂肪代谢相关指标显示,对照野生型,HSL2斑马鱼总脂肪

关键词：鲤鱼(Cyprinus carpio) 激素敏感性脂肪酶脂肪沉积基因编辑技术调控机制

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耐力训练对大鼠腓肠肌、比目鱼肌ATGL，HSL，CGI-58，Perilipin基因表达影响的研究

耐力训练对大鼠腓肠肌、比目鱼肌ATGL，HSL，CGI-58，Perilipin基...

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作者：莫伟彬广西师范大学

学位级别：硕士

脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)是新发现的脂肪水解关键酶。脂肪甘油三酯的水解是一系列有序调控的过程,在不同的过程中有不同的酶参与。运动时肌内甘油三酯(IMTG)有水解氧化为肌肉收缩供能的作用。因此,它的表达调控很受关注。在大鼠腓肠肌... 详细信息

脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)是新发现的脂肪水解关键酶。脂肪甘油三酯的水解是一系列有序调控的过程,在不同的过程中有不同的酶参与。运动时肌内甘油三酯(IMTG)有水解氧化为肌肉收缩供能的作用。因此,它的表达调控很受关注。在大鼠腓肠肌、比目鱼肌中ATGL mRNA,HSL mRNA,CGI-58 mRNA,Perilipin mRNA的表达与维持机体能量的动态平衡和代谢健康密切相关。同时运动训练对引起快、慢肌的IMTG水解调节基因表达变化有很大的影响。因此,本实验以雄性Sprague-Dawley大鼠为研究对象,按随机原则,将大鼠分为低强度递增负荷耐力训练组、中等强度递增负荷耐力训练组和大强度递增负荷耐力训练组。运动负荷采用Bedford设定的大鼠运动强度等级,大鼠在跑台上进行不同递增负荷耐力训练;5周耐力训练结束后,宰杀大鼠。通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)研究了腓肠肌、比目鱼肌ATGL,HSL,CGI-58,Perilipin mRNA表达,取得以下主要结果:*** mRNA在三种耐力训练中,结果显示,在中等强度递增负荷耐力训练时,腓肠肌和比目鱼肌中ATGL mRNA表达达到最多(P0.05)。结果表明中等强度递增负荷耐力训练对快、慢肌的影响最大,同时提示快、慢肌ATGL mRNA表达对递增负荷耐力训练的反应有一致性。*** mRNA在三种耐力训练中,结果显示,递增负荷耐力训练引起大鼠腓肠肌和比目鱼肌HSL mRNA表达出现差异。腓肠肌和比目鱼肌中HSL mRNA在大强度递增负荷耐力训练时表达达到最多,但腓肠肌和比目鱼肌在相同训练方式下不存在差异(P>0.05)。结果表明肌肉中HSL mRNA表达与不同的运动强度有关。3.本研究中腓肠肌和比目鱼肌在相同训练方式下,在最大负荷耐力训练时腓肠肌CGI-58 mRNA表达达到最多,并且其显著高于比目鱼肌(P0.05)。结果表明,腓肠肌与比目鱼肌中CGI-58 mRNA表达与运动强度的敏感性有关。提示CGI-58mRNA表达的快、慢肌差异只会在高负荷耐力训练时出现。4.在本实验研究中,以快、慢肌纤维为主的腓肠肌和比目鱼肌在递增负荷耐力训练方式引起大鼠腓肠肌和比目鱼肌Perilipin mRNA相对表达量无显著性变化。同样腓肠肌和比目鱼肌在相同训练方式下,两种肌肉Perilipin mRNA表达差异也不明显(P>0.05)。结果表明快、慢肌Perilipin mRNA表达对递增负荷耐力训练的反应有一致性。

关键词：耐力训练脂肪甘油三酯脂肪酶激素敏感性脂肪酶比较基因鉴定-58 脂滴包被蛋白

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雌激素对脂肪细胞甘油三酯代谢的影响及机制探讨

雌激素对脂肪细胞甘油三酯代谢的影响及机制探讨

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作者：黄文钰中南大学

学位级别：硕士

目的本实验旨在研究17p-雌二醇(17β-E2)对脂肪细胞甘油三酯(TG)代谢的影响,观察正常和炎症状态下17β-E2对脂肪细胞TG代谢的影响,并探讨其可能的机制。方法3T3-L1前体脂肪细胞促分化成熟后,分为以下三组：(1)雌激素组：分别予以0mol/L... 详细信息

目的本实验旨在研究17p-雌二醇(17β-E2)对脂肪细胞甘油三酯(TG)代谢的影响,观察正常和炎症状态下17β-E2对脂肪细胞TG代谢的影响,并探讨其可能的机制。方法3T3-L1前体脂肪细胞促分化成熟后,分为以下三组：(1)雌激素组：分别予以0mol/L、10-9mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L浓度的17β-E2干预48小时;(2)选择性雌激素受体(ER)拮抗剂组：分别予以选择性ER α受体拮抗剂(MPP)、选择性ER β受体拮抗剂(PHTPP)提前干预细胞1小时,设立空白对照,然后加入10-6mol/L17β-E2干预48小时;(3)脂多糖(LPS)组：先给予100ng/ml的LPS干预24小时,然后加入10-6mol/L17β-E2干预48小时,以单纯LPS干预为对照。用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测脂肪细胞内TG含量和LPS组细胞上清中白细胞介素-6(IL-6)的浓度。用蛋白印迹法(Western blot)检测脂肪细胞激素敏感性脂肪酶(HSL)、脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)、围脂滴蛋白(perilipin)的蛋白表达。结果1.随着17β-E2浓度增加成熟脂肪细胞内TG含量有减少趋势,尤以10-6mol/L17β-E2干预48小时后降低最明显,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。2.17β-E2组和17β-E2+PHTPP组成熟脂肪细胞内TG含量较对照组明显减少(P分别为P0.05)。***组和17β-E2+LPS组成熟脂肪细胞内TG含量与对照组比较无明显差异(P均>0.05)。与对照组相比,LPS组和17β-E2+LPS组细胞上清中IL-6浓度明显增高(P分别为P0.05)。4.用Western blot检测17β-E2组、17β-E2+MPP组、17β-E2+PHTPP组、LPS组、17β-E2+LPS组和对照组成熟脂肪细胞ATGL、HSL和perilipin的蛋白表达,17β-E2+PHTPP组ATGL蛋白表达较对照组和17β-E2+MPP组明显升高(P均0.05)。各组间HSL和perilipin蛋白表达无明显差异(P均>0.05)。结论17β-E2可能通过ER α上调ATGL表达,从而促进脂肪细胞内TG的分解代谢。在炎症状态下,雌激素调节脂肪细胞TG代谢的作用可能减弱或消失。

关键词：脂肪细胞 17β-雌二醇甘油三酯激素敏感性脂肪酶脂肪甘油三酯脂肪酶围脂滴蛋白

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HIIT对肥胖小鼠不同部位脂肪组织脂肪水解酶类的激活作用

HIIT对肥胖小鼠不同部位脂肪组织脂肪水解酶类的激活作用

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作者：梅佳顺河北师范大学

学位级别：硕士

研究目的:肥胖全球流行,危害人类健康,防肥减肥势在必行。传统的减肥方法采用中等强度持续运动增加能量消耗。而新近的高强度间歇运动因其时间短有间歇,同样具有减肥的效果而被广泛应用。研究发现克服相同机械功的前提下,高强度间歇运... 详细信息

研究目的:肥胖全球流行,危害人类健康,防肥减肥势在必行。传统的减肥方法采用中等强度持续运动增加能量消耗。而新近的高强度间歇运动因其时间短有间歇,同样具有减肥的效果而被广泛应用。研究发现克服相同机械功的前提下,高强度间歇运动不仅可以减少皮下脂肪,还可以减少腹部内脏脂肪量,其内在机制尚不明确。本实验采用C57BL/6小鼠模拟高强度间歇运动方式,通过观察高强度间歇运动对不同部位白色脂肪组织内脂肪水解酶的激活作用,探究其减少内脏脂肪量的可能机制。研究方法:3周龄C57BL/6雌性小鼠(体重9.67?1.12g),适应性喂养1周后,随机分为普通膳食组(C组,n=10只)和高糖高脂膳食组(H组,n=60只)。H组进行15周的高脂膳食喂养(高糖高脂饲料:60%标准饲料、16%白砂糖、5%猪油、18%蛋黄粉和1%胆酸钠),每周记录小鼠的体重和饮食量。肥胖小鼠模型成模标准:H组小鼠体重大于C组体重均值10%的视为单纯饮食诱导肥胖性小鼠。随后,从肥胖小鼠中抽取30只随机分成肥胖安静对照组(HDF组)、中等强度持续运动组(MICT组)和高强度间歇运动组(HIIT组)。MICT组和HIIT组小鼠进行为期12周的跑台运动(每周运动5次)。具体方案为:MICT组以50%0%最大摄氧量峰值强度运动45分钟,HIIT组以90%10%最大摄氧量峰值强度运动1分钟,以50%0%最大摄氧量峰值强度运动2分钟,循环进行12次高强度间歇运动,两组小鼠每次运动的总距离相等。12周运动干预后,测量小鼠身体重量、Lee’s指数、皮下和内脏脂肪重量;采用比色法检测血清甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白水平;采用蛋白免疫印迹法测试皮下和内脏脂肪组织ATGL、HSL、HSL-ser660、HSL-ser563和HSL-ser565蛋白水平,组间重量、Lee’s指数、皮下脂肪重量、内脏脂肪重量、血清甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白水平指标进行协方差分析;组间HSL、HSL-ser563、HSL-ser565、HSL-ser660和ATGL指标进行单因素方差分析。P0.05)。HIIT组小鼠Lee’s指数显著小于HFD组(P0.05)。HIIT组小鼠内脏脂肪重量小于HFD组和MICT组(P0.05)。HIIT组和MICT组小鼠皮下脂肪重量小于HFD组(P0.05)。(2)12周运动干预后,实验小鼠三组之间HDL-C、TG和TC无显著性差异(P>0.05),而HIIT组小鼠的LDL-C水平低于HFD和MICT组(P脂肪和皮下脂肪HSL蛋白表达均无显著性差异(P>0.05)。HIIT组小鼠内脏脂肪HSL-ser563磷酸化表达显著高于HFD组和MICT组(P0.05)。MICT组内脏脂肪HSL-ser660磷酸化表达显著高于HFD组(P脂肪HSL-ser660磷酸化表达显著高于HFD组和HIIT组(P脂肪HSL-ser565、皮下脂肪HSL-ser563和ser565磷酸化表达均无显著性差异(P>0.05)。(4)实验小鼠三组之间内脏脂肪ATGL蛋白表达均无显著性差异(P>0.05)。而MICT组和HIIT组皮下脂肪ATGL蛋白表达显著高于HFD组(P脂肪量,并且HIIT运动可以改善血脂异常同时减少肥胖小鼠内脏脂肪量。12周HIIT和MICT运动均可以通过上调皮下脂肪组织ATGL和HSL-ser660蛋白表达激活皮下脂肪ATGL和HSL活性,但是仅HIIT运动可以通过上调内脏脂肪组织HSL-ser563蛋白表达激活内脏脂肪HSL活性。HIIT激活内脏脂肪HSL可能是其减少内脏脂肪量的机制之一,相关细胞信号通路的变化仍需要进一步探究。

关键词：高强度间歇运动脂肪组织激素敏感性脂肪酶甘油三酯脂肪酶

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蚂蟥内源脂肪对其性腺发育影响的初步研究

蚂蟥内源脂肪对其性腺发育影响的初步研究

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作者：郭丽媛南京农业大学

学位级别：硕士

蚂蟥Whitmania pigra Whitman又名宽体金线蛭,是2020年版《中国药典》药材水蛭的来源之一,属于常用的活血化瘀类中药,具有破血通经、逐瘀消癥的功效。蚂蟥是“同步性雌雄同体”动物,具有独立的雌雄生殖系统,雄性腺先于雌性腺发育,冬眠... 详细信息

蚂蟥Whitmania pigra Whitman又名宽体金线蛭,是2020年版《中国药典》药材水蛭的来源之一,属于常用的活血化瘀类中药,具有破血通经、逐瘀消癥的功效。蚂蟥是“同步性雌雄同体”动物,具有独立的雌雄生殖系统,雄性腺先于雌性腺发育,冬眠后同步成熟。通过蚂蟥生殖腺转录组和蛋白组分析发现,DAGPKC通路是介导蚂蟥雄性腺发育的重要通路,在蚂蟥雄性腺发育的不同时期,与甘油三酯合成相关的酶(甘油二酯酰基转移酶)显著上升,因此初步判断脂肪与性腺发育相关。研究表明脂肪对动物性腺的发育具有重要作用,然而脂肪对蚂蟥性腺发育的影响鲜见报道。本文首先对冬眠期间蚂蟥体内脂肪变化与性腺发育情况进行研究,随后克隆蚂蟥激素敏感性脂肪酶(HSL)基因分析其表达模式并研究内源脂肪对蚂蟥性腺生殖细胞发育和脂肪代谢、DAG-PKC通路相关基因和酶的影响,结果可为蚂蟥生殖发育机理的研究提供参考和指导。研究结果如下:(1)通过石蜡切片HE染色、冰冻切片油红O染色、实时荧光定量PCR等技术对冬眠过程中蚂蟥性腺的发育及性腺脂肪的变化情况进行研究。结果表明:冬眠后期蚂蟥体重、特定生长率和体脂肪含量显著降低,雌雄性腺指数均显著升高(P脂肪代谢相关酶基因和蚂蟥蛋白激酶C(Wp-PKC)基因在冬眠后期蚂蟥性腺内显著上调(P激素敏感性脂肪酶基因(HSL)进行生物信息学预测分析,并对HSL基因在蚂蟥不同组织和不同发育阶段性腺中的时空表达模式进行分析。结果显示:克隆得到的Wpi-hsl全长2492 bp,ORF区编码787个氨基酸;Wpihsl编码的蛋白是非分泌蛋白,无跨膜结构域,预测属于亲水性蛋白;二级结构中α-螺旋占比最多,达41.8%,其次是无规则环,占比41.42%;同源性分析发现Wpi-HSL包含3个HSL保守结构域,与Helobdella robusta亲缘关系最近,氨基酸序列相似度为49%;Wpi-HSL在丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基上存在98个磷酸化修饰位点;Wpi-hsl在蚂蟥肌肉中表达最高,性腺中表达最低;在休眠期雄性腺中的表达显著低于生长期雌性腺中的表达,在成熟期雄性腺中的表达显著高于成熟期雌性腺中的表达(P酶C(PKC)、脂肪代谢相关酶和基因、性腺发育相关基因及蚂蟥性腺发育指标表达水平进行测定。结果表明:胰岛素促进蚂蟥性腺TAG积累,降低HSL酶活性,上调HSL、MGAT、ACC基因的相对表达量;胰高血糖素减少蚂蟥性腺TAG含量,提高HSL酶活性,下调HSL、MGAT、ACC的表达水平;蚂蟥性腺中DAG、PKC表达水平正相关,DAG、TAG水平正相关,雄性腺PKC水平与初级精母细胞比例极显著正相关,雌性腺PKC水平与无卵黄期细胞比例极显著正相关(P脂肪向性腺转移的现象,提示性腺脂肪对蚂蟥性腺发育至关重要,Wpi-hsl对蚂蟥性腺特别是雄性腺的生长发育具有重要作用,DAG-PKC通路与蚂蟥雄性腺的发育密切相关,脂肪可能通过TAG-DAG-PKC通路影响蚂蟥性腺的生长发育。本研究结果可为蚂蟥生殖发育机理的研究提供重要参考。

关键词：蚂蟥脂肪性腺发育激素敏感性脂肪酶 DAG-PKC通路

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代综方对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的作用研究

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世界中西医结合杂志 2015年第2期10卷 175-178页

作者：朱晓云王朋倩刘喜明中国中医科学院广安门医院北京100053 中国中医科学院研究生院北京100700

目的研究代综方(DZF)对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的作用及可能的调控机制。方法分化成熟的脂肪细胞给予不同浓度DZF或对照药物罗格列酮(Ros)干预48 h,检测培养上清中葡萄糖消耗量、甘油、游离脂肪酸(NEFA)浓度及胞内甘油三酯(TG)含量;应... 详细信息

目的研究代综方(DZF)对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的作用及可能的调控机制。方法分化成熟的脂肪细胞给予不同浓度DZF或对照药物罗格列酮(Ros)干预48 h,检测培养上清中葡萄糖消耗量、甘油、游离脂肪酸(NEFA)浓度及胞内甘油三酯(TG)含量;应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测葡萄糖转运体4(GLUT-4)、脂滴包被蛋白(perilipin)、激素敏感性脂肪酶(HSL)的mRNA表达。结果 DZF使培养上清中葡萄糖消耗量增加(P0.05),DZF使胞内TG降低(P0.05);DZF各组能不同程度上调GLUT-4、HSL的mRNA表达,显著下调Perilipin的mRNA表达(P脂肪细胞葡萄糖消耗和胞内TG分解,改善脂质合成与分解的动态平衡,其作用机制与Ros增加胞内TG积累不同。

关键词：代综方 3T3-L1 葡萄糖转运体4 激素敏感性脂肪酶脂滴包被蛋白

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HSL基因启动子-60C>G多态性与2型糖尿病高脂血症的相关性研究

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国际检验医学杂志 2011年第14期32卷 1558-1560页

作者：刘环宇刘博洋宁乐平湖北省黄石二中湖北黄石435003 华中师范大学第一附属中学武汉430223 武汉大学中南医院基因诊断中心武汉430071

目的探讨激素敏感性脂肪酶(HSL)基因启动子-60C>G多态性与2型糖尿病(T2DM)高脂血症患者血浆脂质水平的相关性。方法采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)和DNA测序法对94例健康对照者、77例T2DM高脂血症患者的HSL基因启动子-... 详细信息

目的探讨激素敏感性脂肪酶(HSL)基因启动子-60C>G多态性与2型糖尿病(T2DM)高脂血症患者血浆脂质水平的相关性。方法采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)和DNA测序法对94例健康对照者、77例T2DM高脂血症患者的HSL基因启动子-60C>G多态性进行分析,并检测空腹血糖和血脂水平。结果试验组空腹血糖和TC、TG、LDL-C水平均显著高于健康对照组,HDL-C水平明显低于健康对照组(P0.05);试验组CC型血浆TC、TG、LDL-C水平均明显高于健康对照组CC型、CG型(P0.05)。结论 HSL基因启动子-60C>G多态性与湖北地区汉族人群中T2DM高脂血症的血脂水平无明显关联。

关键词：糖尿病 2型高脂血症血脂激素敏感性脂肪酶多态性

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