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内热针干预激素性股骨头缺血性坏死模型大鼠抑制破骨及促进新骨形成

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中国组织工程研究 2022年第17期26卷 2642-2648页

作者：田心保许建峰黄媛赖喆蓥李小龙刘小丽林瑞珠朱宁宁夏医科大学宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院中医骨伤科宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院康复医学科宁夏回族自治区银川市750004

背景:出于疾病治疗目的,临床上糖皮质激素被广泛应用,导致该类患者群体患激素性股骨头缺血性坏死的风险增加。然而目前为止,激素性股骨头缺血性坏死的详细发病机制尚不明确。内热针疗法治疗激素性股骨头缺血性坏死在临床上效果良好,但... 详细信息

背景:出于疾病治疗目的,临床上糖皮质激素被广泛应用,导致该类患者群体患激素性股骨头缺血性坏死的风险增加。然而目前为止,激素性股骨头缺血性坏死的详细发病机制尚不明确。内热针疗法治疗激素性股骨头缺血性坏死在临床上效果良好,但对其具体作用机制尚未明晰。目的:探讨内热针疗法对激素性股骨头缺血性坏死股骨头组织中骨保护素、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)表达的影响。方法:随机在30只健康、无特定病原体的SD大鼠中选择10只作为空白组,其余20只采用甲基强的松龙联合大肠杆菌内毒素的方法制备激素性股骨头缺血性坏死模型,造模成功后再随机分为模型对照组和治疗组,每组10只。治疗组对SD大鼠双侧臀部进行1次/周的内热针治疗,20 min/次,设定温度为42℃;空白组和模型对照组均不采取任何处理。干预前后对大鼠进行一般状态和行为学检测实验(测定自主活动次数和抓力);干预4周后对大鼠双侧股骨头取材,采用苏木精-伊红染色观察各组大鼠股骨头骨组织形态学变化并计算空骨陷窝率;分别采用实时荧光定量PCR、免疫组织化学染色和蛋白免疫印迹法检测各组股骨头组织中骨保护素、RANKL的mRNA及蛋白表达。结果与结论:(1)与空白组相比,模型对照组和治疗组大鼠的相关行为学评分明显降低(P 股骨头组织形态学明显恶化且空骨陷窝率升高(P 股骨头组织形态学明显改善且空骨陷窝率降低(P 股骨头组织中的RANKL的蛋白及mRNA表达水平明显升高,骨保护素的蛋白及mRNA表达水平明显降低,差异均有显著性意义(P 股骨头组织中的RANKL的蛋白及mRNA表达水平明显降低,骨保护素的蛋白及mRNA表达水平明显升高,差异均有显著性意义(P <0.05);(4)结果说明,内热针疗法可能通过上调骨保护素的表达和下调RANKL的表达,抑制破骨细胞的功能及活性,从而抑制骨吸收,促进新骨的形成及骨组织修复。

关键词：激素性股骨头缺血性坏死内热针骨重塑破骨细胞骨代谢骨保护素核因κB受体活化因子配体

内热针疗法治疗激素性股骨头缺血性坏死模型大鼠的实验研究

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内热针疗法治疗激素性股骨头缺血性坏死模型大鼠的实验研究

作者：田心保宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的通过观察内热针疗法对激素性股骨头缺血性坏死（Steroid-induced avascular necrosis of the femoral head,SANFH）模型大鼠行为学、股骨头组织的形态学及股骨头组织中骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、核因子κB受体活化因子配体... 详细信息

目的通过观察内热针疗法对激素性股骨头缺血性坏死（Steroid-induced avascular necrosis of the femoral head,SANFH）模型大鼠行为学、股骨头组织的形态学及股骨头组织中骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-k B ligand,RANKL）表达的影响。观察内热针疗法对大鼠SANFH的治疗效果,进一步探讨其治疗SANFH的部分作用机制,以便为临床上内热针治疗SANFH提供理论依据。方法1实验动物模型的建立及分组:选择30只健康、无特定病原体的SD大鼠采用随机数字表法,分为空白组10只、造模组20只。采用甲基强的松龙联合大肠杆菌内毒素的方法制备SANFH模型,造模成功后再随机分为模型组10只和治疗组10只。2实验干预及取材:治疗组:对SD大鼠双侧臀部进行每周1次的内热针治疗,每次20分钟,设定温度为42℃,连续治疗4周;空白组和模型组均不采取任何处理。干预4周后对SD大鼠双侧股骨头取材。3观察指标:干预前后对SD大鼠进行一般状态和行为学检测实验（测定自主活动次数和抓力）;采用苏木精-伊红染色观察各组SD大鼠股骨头骨组织形态学变化并计算空骨陷窝率;从分子生物学层面采用免疫组织化学染色和蛋白免疫印迹法（Western blot,WB）检测各组大鼠股骨头组织中OPG、RANKL蛋白的表达;采用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,q RT-PCR）检测各组大鼠股骨头组织中OPG、RANKL m RNA的表达。结果1行为学评分:与空白组相比,模型组和治疗组SD大鼠的相关行为学评分明显降低（P＜0.01）,具有明显统计学差异;干预后,与模型组相比,治疗组SD大鼠的相关行为学评分升高（P＜0.05）,具有统计学差异。2苏木精-伊红染色:空白组骨小梁排列整齐致密,骨小梁内骨细胞清晰可见,脂肪细胞形态正常,成骨细胞丰富,空骨陷窝率较低;与空白组相比,模型组骨小梁减少、骨陷窝排列紊乱、骨髓脂肪细胞体积增大、部分脂肪细胞融合成泡状物等形态异常,空骨陷窝率显著升高（P＜0.001）;治疗组干预后,观察到治疗组骨小梁、骨陷窝、骨髓和脂肪组织均有显著改善;空骨陷窝明显减少,骨小梁内可见核固缩的骨细胞,变薄但不弥散;特别是骨髓腔内有丰富的骨髓细胞和少量的脂肪细胞,空骨陷窝率显著降低（P＜0.05）。3股骨头组织中OPG和RANKL蛋白表达情况:与空白组相比,模型组SD大鼠股骨头组织中的RANKL的蛋白表达水平明显升高,而OPG的蛋白表达水平明显降低,差异均有显著统计学意义（P＜0.001）;经内热针治疗后,与模型组相比,治疗组SD大鼠股骨头组织中的RANKL的蛋白表达水平明显降低,OPG的蛋白表达水平明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。4股骨头组织中OPG和RANKL m RNA表达情况:与空白组相比,模型组SD大鼠股骨头组织中的RANKL的m RNA表达水平明显升高,OPG的m RNA表达水平显著降低,差异均有显著统计学意义（P＜0.001）;经内热针治疗后,与模型组相比,治疗组SD大鼠股骨头组织中的RANKL的m RNA表达水平明显降低,OPG的m RNA表达水平明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论内热针疗法可能通过上调OPG的表达和下调RANKL的表达,抑制破骨细胞的功能及活性,从而抑制骨吸收,促进新骨的形成及骨组织修复。

关键词：激素性股骨头缺血性坏死内热针疗法骨重塑破骨细胞骨代谢 OPG RANKL

中药有效成分干预激素性股骨头缺血性坏死的作用机制

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中国组织化学与细胞化学杂志 2023年第3期32卷 314-322页

作者：陈一新刘建军张晓刚陈欣王志鹏齐鑫甘肃中医药大学中医临床学院兰州730000 甘肃中医药大学附属医院兰州730000

激素性股骨头缺血性坏死(steroid-induced avascular necrosis of the femoral head,SANFH)是一种进行性骨疾病,会导致软骨下骨微骨折和显著疼痛。如治疗不及时,SANFH患者将终身残疾,严重影响患者的生活质量。糖皮质激素是临床上广泛使... 详细信息

激素性股骨头缺血性坏死(steroid-induced avascular necrosis of the femoral head,SANFH)是一种进行性骨疾病,会导致软骨下骨微骨折和显著疼痛。如治疗不及时,SANFH患者将终身残疾,严重影响患者的生活质量。糖皮质激素是临床上广泛使用的药物,一直是诱发非创伤性股骨头坏死的主要原因。中医药在防治股骨头坏死方面历史悠久,能够发挥积极作用。近年来,针对中药有效成分治疗股骨头坏死进行了大量的研究,发现中药有效成分黄酮类、皂苷类、酚类、多糖类、生物碱类等多种化学成分,通过改善微循环调节炎症反应、促进血管再生、调节骨代谢等多种作用机制改善激素性股骨头缺血性坏死。本文将常用中药的有效成分治疗激素性股骨头缺血性坏死的机制研究进展做一综述,以期为激素性股骨头缺血性坏死的临床治疗及基础研究提供思路。

关键词：中药有效成分激素性股骨头缺血性坏死治疗

基于网络药理学、分子对接和实验验证探讨壮药生骨汤治疗激素性股骨头缺血性坏死的作用机制

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基于网络药理学、分子对接和实验验证探讨壮药生骨汤治疗激素性股...

作者：王伟伟广西中医药大学

学位级别：硕士

目的:运用Meta分析系统评价壮药生骨汤治疗激素性股骨头缺血性坏死的临床疗效,利用网络药理学和分子对接技术对其作用机制进行初步探索,并通过动物实验进行验证,从而为壮药生骨汤的进一步研究提供一些参考。方法:1.Meta分析:检索相关数... 详细信息

目的:运用Meta分析系统评价壮药生骨汤治疗激素性股骨头缺血性坏死的临床疗效,利用网络药理学和分子对接技术对其作用机制进行初步探索,并通过动物实验进行验证,从而为壮药生骨汤的进一步研究提供一些参考。方法:1.Meta分析:检索相关数据库,查找对象为生骨汤治疗激素性股骨头缺血性坏死的随机对照试验研究,并按照制定好的纳入标准以及排除标准对其进行筛选,随后采用Rev Man 5.3软件对最终纳入的文献进行质量评价以及Meta分析,最终对其临床疗效进行系统评价。2.网络药理学:运用网络药理学筛选生骨汤成分、靶点以及激素性股骨头缺血性坏死靶点,并进行映射,对映射结果进行“复方-活性成分-靶点-疾病”网络关系图构建及蛋白质-蛋白质相互作用网络图构建,并进一步进行GO、KEGG富集分析;另外,筛选关键成分和核心靶点进行分子对接,验证其结果。3.动物实验:按照随机数字表法将成年雄性SD大鼠分为对照组、模型组、生骨汤组和仙灵骨葆胶囊组,每组10只。通过注射用甲泼尼龙琥珀酸钠联合脂多糖制备激素性股骨头坏死模型。造模成功后,对照组和模型组大鼠每日二次等量生理盐水灌胃,生骨汤组以生骨汤煎剂(11.6g·kg)每日二次灌胃,仙灵骨葆胶囊组以仙灵骨葆胶囊混悬液(0.27g·kg)每日二次灌胃,连续灌胃6周后采集大鼠血清并取出双侧股骨头。采用苏木精-伊红染色法观察各组大鼠股骨头组织病理变化情况;酶联免疫吸附试验检测各组大鼠血清VEGFA、Src、PLG表达水平;实时荧光定量PCR法检测各组大鼠股骨头组织VEGFA、MMP9、MMP2的m RNA表达水平。结果:1.Meta分析结果:（1）共纳入5篇中文文献和394例样本,其中试验组199例和对照组195例。（2）纳入文献均提及“随机”字样,其中2篇文献采用随机数字表法,剩余3篇文献只描述为随机,未明确随机序列产生方法;另外,所用纳入文献均未提及分配隐藏和盲法,均未发现重复发表或发表偏倚,均含有明确结局指标,其他偏倚则均未知。（3）结局指标结果显示,生骨汤可显著提高临床总有效率和综合疗效评分,降低患者空骨陷窝概率。2.网络药理学结果:（1）共得到活性成分40个,生骨汤靶点620个,SANFH疾病靶点505个。（2）生骨汤作用靶点与SANFH疾病靶点取交集,得到共有靶点94个。（3）网络关系图结果显示,关键成分为木犀草素、去甲汉黄芩素、牵牛花色素、2’-羟基染料木素、染料木素,核心靶点为Src、VEGFA、MMP9、PLG、MAPK14;结合蛋白质-蛋白质相互作用网络图和关键蛋白模块图结果,选取Src、VEGFA、MMP9、MMP2、PLG基因用于进行动物实验验证。（4）GO、KEGG富集分析结果显示,生骨汤通过以上关键核心靶点影响PI3K/Akt、HIF-1、MAPK等主要信号通路,集中调控蛋白水解、信号传导、胶原分解代谢等生物过程来发挥治疗激素性股骨头缺血性坏死的作用。（5）分子对接结果显示,关键活性成分与核心靶点结合能均小于参考值,具有较好结合活性。3.动物实验结果:（1）HE染色结果显示,模型组软骨表面欠光滑,骨小梁面积明显减少且存在狭窄,骨细胞核固缩,空骨陷窝数明显增多,骨髓腔内大量脂肪细胞浸润;仙灵骨葆胶囊组较模型组骨小梁面积增多,骨细胞空骨陷窝减少,骨髓腔脂肪细胞浸润显著减少;生骨汤组形态与对照组接近,骨小梁致密整齐,骨髓腔内无脂肪细胞浸润,偶见少量空骨陷窝;另外,模型组大鼠空骨陷窝率明显高于对照组（P0.05）。（3）实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,模型组大鼠股骨头组织中MMP2、MMP9 m RNA表达明显增高（P股骨头组织中VEGFA m RNA表达显著上调（P0.05）。结论:（1）相较于仙灵骨葆胶囊,生骨汤可显著提高临床总有效率和综合疗效评分,降低患者空骨陷窝概率。（2）壮瑶药生骨汤关键成分木犀草素、去甲汉黄芩素、牵牛花色素、2’-羟基染料木素、染料木素可能是通过调节Src、VEGF

关键词：壮药生骨汤激素性股骨头缺血性坏死 Meta分析网络药理学动物实验

激素性股骨头缺血性坏死及其高压氧治疗的研究进展

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中华航海医学与高气压医学杂志 2003年第3期10卷 187-189页

作者：高春锦王国忠首都医科大学附属北京朝阳医院高压氧科北京100020

股骨头缺血性坏死(avascular necrosis of the femoral head,ANFH)是指由于不同原因使股骨头发生部分或完全性缺血，导致骨细胞、骨髓造血细胞及脂肪细胞坏死的病理过程。其病因众多，临床上可分为创伤性和非创伤性两大类：前者主要见... 详细信息

股骨头缺血性坏死(avascular necrosis of the femoral head,ANFH)是指由于不同原因使股骨头发生部分或完全性缺血，导致骨细胞、骨髓造血细胞及脂肪细胞坏死的病理过程。其病因众多，临床上可分为创伤性和非创伤性两大类：前者主要见于股骨颈骨折、髋关节脱位等，后者多为激素滥用酒精中毒所致~[1]，好发年龄30-50岁，半数以上为双侧发病，病程多呈进展性。1988年日本成年非创伤性ANFH病人高达2500-3000例~[1]。1957年Pietrograndi和Mastro-marino首次报道糖皮质激素诱发ANFU，此后该病引起了国内外学者的广泛应用，激素性ANFH患病者人数呈逐年增多的趋势.

关键词：激素性股骨头缺血性坏死高压氧疗法研究进展临床表现临床分期早期诊断

巨噬细胞移动抑制因子对激素性股骨头缺血性坏死血管修复影响的体外实验研究

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中国修复重建外科杂志 2016年第8期30卷 998-1005页

作者：马骏张晨张二洋班文瑞吕雷锋党晓谦王坤正西安交通大学第二附属医院骨一科西安710004

目的通过检测体外缺氧/激素作用下内皮细胞(endothelial cells,ECs)增殖、迁徙以及巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)和VEGF的表达变化,探讨激素性股骨头缺血性坏死(steroid-induced avascular necrosis of femoral head,SANFH)血管修复障碍发生机制。方法取第3代人脐静脉ECs(human umbilical vein ECs,HUVECs)进行分组干预。正常对照组(A组)细胞不作任何干预;地塞米松组(B组):用含1.0×10^(-6) mol/L地塞米松的完全培养液干预;缺氧培养组(C组):细胞在低氧细胞培养罐内培养;地塞米松+缺氧培养组(D组):细胞在低氧细胞培养罐内培养,同时用含1.0×10^(-6) mol/L地塞米松的完全培养液干预。干预培养后24 h,行Alamar Blue细胞活性检测及活/死细胞染色观测细胞增殖情况,细胞骨架染色观察细胞骨架形态;采用划痕实验比较各组细胞迁徙能力,ELISA法检测各组细胞MIF及VEGF表达水平。结果干预培养后24 h,Alamar Blue细胞活性检测及活/死细胞染色示C组细胞活性最好且活细胞数多,D组细胞活性最差、活细胞数最少,组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论缺氧条件下ECs增殖及迁徙能力增强,MIF及VEGF分泌增加;而高浓度地塞米松会抑制上述过程,引发血管修复障碍,导致SANFH发生、发展。

关键词：激素性股骨头缺血性坏死巨噬细胞移动抑制因子血管修复体外实验

应用基因芯片技术对激素性股骨头缺血性坏死差异表达基因筛选的初步研究

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中国修复重建外科杂志 2014年第5期28卷 586-590页

作者：程相国胡斌盛加根张长青上海交通大学附属第六人民医院骨科上海200233

目的通过与正常个体相比,应用基因芯片技术筛选激素性股骨头缺血性坏死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)差异表达基因。方法取3例激素性ONFH男性患者自愿捐赠的坏死股骨头组织,年龄分别为25、31、38岁;另1例正常股骨头组织取... 详细信息

目的通过与正常个体相比,应用基因芯片技术筛选激素性股骨头缺血性坏死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)差异表达基因。方法取3例激素性ONFH男性患者自愿捐赠的坏死股骨头组织,年龄分别为25、31、38岁;另1例正常股骨头组织取自因交通意外死亡的26岁健康男性捐献者尸体。4例标本进行HE染色,观察组织学形态;抽提标本总RNA,测定其纯度;并逆转录合成cDNA探针,与芯片杂交后获得荧光信号,分析ONFH骨组织与正常骨组织中差异表达的基因。结果正常股骨头组织可见完整骨单位由连续完整的板层骨构成,围绕血管呈同心圆排列,骨小梁陷窝内可见正常骨细胞;激素性ONFH标本可见髓腔内脂肪组织、脂肪细胞增多,并充填于髓腔,微血管受挤压,骨小梁内骨细胞数量减少,核染色质深染,细胞核固缩、裂解或消失,部分骨陷窝中骨细胞消失,骨小梁变细、稀疏、中断,单位视野内骨组织面积减小。总RNA抽提电泳图显示,4个样本总RNA 28S、18S的条带清晰,亮度比约为2∶1,提示总RNA质量好。基因芯片技术筛选出44条差异表达基因,其中上调基因28条,下调基因16条,涉及差异表达的基因归为7大类:细胞代谢基因、信号转导基因、基因与蛋白表达基因、细胞分裂基因、细胞防御基因、细胞结构/细胞运动基因以及未分类基因。结论应用基因芯片技术筛选出44条激素性ONFH差异表达基因,为进一步研究ONFH发病机制提供了依据。

关键词：激素性股骨头缺血性坏死基因芯片技术差异表达基因

感觉神经肽在激素性股骨头缺血性坏死发病机制中的作用研究

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中国修复重建外科杂志 2010年第9期24卷 1078-1081页

作者：王磊王坤正张利朱六龙王春生西安交通大学医学院第二附属医院骨科西安710004 杭州市第一人民医院骨科西安交通大学宗廉书院87班

目的通过观察兔激素性股骨头缺血性坏死(avascular necrosis of the femoral head,ANFH)模型,探讨感觉神经肽降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)、P物质(substance P,SP)在激素性ANFH发生中的作用。方法 24月龄雌性日本兔55只,体重约3kg,随机分为2组,实验组(n=45)肌肉注射甲泼尼龙琥珀酸钠(4mg/kg)制备激素性ANFH模型后,分别于给药后3d及1、2周采用空气栓塞法处死动物取双侧股骨头标本,行组织学观察骨坏死情况,免疫组织化学染色观察CGRP、SP表达及其阳性染色积分吸光度(IA)值;对照组(n=10)不予激素注射,作为正常对照,检测处理同实验组。结果实验动物均存活至实验完成。组织学观察示实验组3d时无骨坏死发生,ANFH发生率为0;1、2周时镜下见骨膜不完整,空骨陷窝,细胞数目及网状结构较正常稀疏等骨坏死改变,分别有5、8只兔发生骨坏死,ANFH发生率为33%及53%。实验组1、2周时ANFH发生率与3d时比较,差异有统计学意义(P0.05)。免疫组织化学染色观察,实验组CGRP免疫反应强度呈先升高后降低的趋势,1周时达峰值;实验组1周时IA值明显高于3d及对照组(P激素影响,导致骨代谢失衡、骨内微循环发生与调节紊乱、保护性痛觉传递减弱或缺失,从而在激素性ANFH发生中起重要作用。

关键词：激素性股骨头缺血性坏死感觉神经肽降钙素基因相关肽 P物质兔

维生素E对大鼠早期激素性股骨头缺血性坏死的作用及机制研究

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中国修复重建外科杂志 2018年第11期32卷 1421-1428页

作者：黎牧帆张二洋吕雷锋班文瑞党晓谦张晨西安交通大学第二附属医院骨一科西安710004

目的探讨维生素E防治大鼠早期激素性股骨头缺血性坏死(steroid-induced avascular necrosis of femoral head,SANFH)的可能性及作用机制。方法取雄性SD大鼠72只,随机分为对照组、模型组和干预组,每组24只。对照组大鼠不作处理;模型组及... 详细信息

目的探讨维生素E防治大鼠早期激素性股骨头缺血性坏死(steroid-induced avascular necrosis of femoral head,SANFH)的可能性及作用机制。方法取雄性SD大鼠72只,随机分为对照组、模型组和干预组,每组24只。对照组大鼠不作处理;模型组及干预组采用脂多糖联合激素法制备SANFH模型,干预组在注射激素的同时每天肌肉注射维生素E 40 mg/kg,连续7 d。末次激素注射后2、4、8周取股骨头,HE染色观察骨坏死发生情况,计算空骨陷窝率;TUNEL染色观察细胞凋亡情况,计算细胞凋亡指数;免疫组织化学染色及Western blot检测观察胱天蛋白酶9(Caspase-9)、Caspase-3、细胞色素-c(cytochrome-c,Cyt-c)蛋白表达情况。结果组织学观察示,干预组空骨陷窝率仅8周时与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),4、8周时与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);干预组细胞凋亡指数各时间点均低于模型组(P<0.05),8周时与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学染色及Western blot观察示,干预组各时间点Cyt-c、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达显著低于模型组(P<0.05),8周时与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论维生素E可通过减轻线粒体依赖性骨细胞凋亡来延缓大鼠早期SANFH病程发展。

关键词：激素性股骨头缺血性坏死维生素E 细胞凋亡大鼠