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溶酶体膜蛋白Sidt2对胰岛素颗粒分泌的影响及机制

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溶酶体膜蛋白Sidt2对胰岛素颗粒分泌的影响及机制

作者：熊钱颖皖南医学院

学位级别：硕士

目的:前期研究发现溶酶体膜蛋白Sidt2剔出小鼠表现出糖代谢紊乱和胰岛素分泌受损,本研究在此基础上围绕胰岛素分泌相关蛋白等的检测来进一步探讨Sidt2影响胰岛素分泌的具体机制,深化对溶酶体膜蛋白Sidt2与糖尿病发病相关性的认识,丰富... 详细信息

目的:前期研究发现溶酶体膜蛋白Sidt2剔出小鼠表现出糖代谢紊乱和胰岛素分泌受损,本研究在此基础上围绕胰岛素分泌相关蛋白等的检测来进一步探讨Sidt2影响胰岛素分泌的具体机制,深化对溶酶体膜蛋白Sidt2与糖尿病发病相关性的认识,丰富糖尿病的发病机制理论。方法:1、将野生型小鼠与Sidt2小鼠合笼,基因型的鉴定采用鼠尾DNA,接着同笼交配子代Sidt2杂合子小鼠,最后选取子代Sidt2雄鼠为实验组,对照组是同窝或者同一个批次出生的Sidt2野生型雄鼠。进行DNA鉴定后行胰岛的光学显微镜和解剖显微镜观察。2、检测Sidt2和Sidt2小鼠的糖耐量。3、对Sidt2和Sidt2小鼠的胰腺组织进行insulin的免疫组化检测。4、在离体水平通过Western blot检测小鼠胰岛中参与胰岛素分泌的关键蛋白:SNAP25、VAMP1、Syntaxin、Syntaxin1的表达。5、运用小干扰RNA技术在INS1细胞水平敲降Sidt2,并通过western blot检测细胞水平中参与胰岛素分泌关键蛋白的表达。6、检测高糖刺激下,Sidt2敲降的INS1细胞的胰岛素分泌情况。7、运用过表达载体在INS1细胞水平过表达Sidt2,并通过western blot检测细胞水平中参与胰岛素分泌关键蛋白的表达。8、Sidt2基因启动子序列设计三对引物,分别以98例2型糖尿病患者和67例正常人血清DNA为模板,进行PCR,并对扩增产物进行测序,寻找单核苷酸突变位点,并对找到的单核苷酸突变位点进行统计学分析。结果:1、从DNA分子水平证明Sidt2基因剔除小鼠模型构造是成功的。2、Sidt2小鼠在生长发育、皮毛的光泽以及应激反应等一般方面相较于野生型均是落后的。光学显微镜和解剖显微镜的观察发现,对照组的胰岛体积较大、形态规则饱满、数量较多;而Sidt2小鼠的胰岛体积较小、形态多不规则、数量较少。3、免疫组化检测发现Sidt2小鼠胰腺组织的insulin表达量相较于对照组的表达量是降低的(P蛋白:SNAP25、VAMP1、Syntaxin的表达在Sidt2小鼠中相较于野生型小鼠是降低的(P溶酶体膜蛋白参与了胰岛素颗粒的分泌过程。Sidt2剔除导致糖代谢紊乱并抑制了胰岛素分泌的关键囊泡蛋白SNAP25、VAMP1、Syntaxin的表达进而阻碍了胰岛素分泌颗粒的正常胞吐,导致胰岛细胞的胰岛素分泌障碍,最终进入糖尿病阶段。3、在细胞的水平进一步验证了Sidt2的缺失对于SNARE蛋白表达的下调作用,并且这种下调作用可以被外源性转入Sidt2后纠正。4、C502A和中国汉族人群2型糖尿病相关,其中CA基因型可能增加中国汉族人群2型糖尿病的患病风险。

关键词： Sidt2基因溶酶体膜蛋白胰岛素分泌 2型糖尿病单核苷酸多态性

下肢深静脉血栓形成患者P-选择素、溶酶体膜蛋白与血小板活化因子的变化及意义

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下肢深静脉血栓形成患者P-选择素、溶酶体膜蛋白与血小板活化因子...

作者：杨小军山西医科大学

学位级别：硕士

研究背景:下肢深静脉血栓形成(LDVT)是常见的周围血管疾病,其发病率约占周围血管疾病的40%,且呈逐年上升的趋势,已成为危害人们健康的常见疾病。目前,初步估计我国LDVT及后遗症病人约为3000万。LDVT在急性阶段如不及时诊断和处理,一些... 详细信息

研究背景:下肢深静脉血栓形成(LDVT)是常见的周围血管疾病,其发病率约占周围血管疾病的40%,且呈逐年上升的趋势,已成为危害人们健康的常见疾病。目前,初步估计我国LDVT及后遗症病人约为3000万。LDVT在急性阶段如不及时诊断和处理,一些患者可因血栓脱落造成肺栓塞,从而严重威胁患者生命。相关文献报道,美国每年死于肺栓塞者约10万人,此外,未能及时处理者,多数不能幸免慢性血栓形成后遗症的发生,造成患者长期病痛,影响生活和工作能力,严重者可致残。因而,在临床工作中研究对LDVT的早期诊断与及时治疗具有十分重要的意义。目的:探讨LDVT患者中血小板CD62P、CD63及PAF水平与健康正常人的差异以及在药物治疗前后含量的变化。方法:选取LDVT患者及正常对照人群,将LDVT患者按照入院顺序随机分为奥扎格雷治疗组和一般治疗组。分别于治疗前、治疗后6天与治疗后10天抽取LDVT患者外周血以及正常对照人群外周血,运用流式细胞术(FCM)以单克隆抗体测定LDVT患者和正常对照人群CD62P、CD63的阳性表达率,应用酶联免疫吸附试验双抗体夹心ELISA法检测PAF含量,于药物干预后在不同时间观察CD62P、CD63阳性表达率及PAF含量的变化。结果:(1)LDVT患者CD62P、CD63阳性表达率及PAF含量均高于对照组(P蛋白溶解处于亢进状态。奥扎格雷能降低血小板活化水平,能有效提高LDVT患者的显效率。通过检测LDVT患者中CD62P、CD63与PAF的变化,可为LDVT的导向诊断和治疗提供崭新的途径。出院后LDVT患者仍是血栓形成的高危人群,需要定期随访。

关键词：下肢深静脉血栓形成 P-选择素溶酶体膜蛋白血小板活化因子

急性白血病细胞中溶酶体膜蛋白LAMP1、TPC1、TPC2的表达情况及其临床意义分析

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急性白血病细胞中溶酶体膜蛋白LAMP1、TPC1、TPC2的表达情况及其...

作者：王祥安徽医科大学

学位级别：硕士

研究背景:急性白血病是一种血液系统恶性增殖性疾病,现对其的治疗方法主要以联合化疗为主,其次则是造血干细胞移植以及过继性免疫细胞治疗等。化疗后的耐药与复发问题一直得不到很好的解决,这也成为了影响患者预后的最主要的因素之一。... 详细信息

研究背景:急性白血病是一种血液系统恶性增殖性疾病,现对其的治疗方法主要以联合化疗为主,其次则是造血干细胞移植以及过继性免疫细胞治疗等。化疗后的耐药与复发问题一直得不到很好的解决,这也成为了影响患者预后的最主要的因素之一。溶酶体广泛存在于真核细胞中,参与多种细胞活动如细胞死亡,信号传导,免疫与应激,近年来有相关研究证明其与多种肿瘤相关,在肿瘤的增殖、凋亡与存活中起着至关重要的作用。通过靶向溶酶体从而治疗血液系统恶性肿瘤具有巨大潜力,且溶酶体上存在多种膜蛋白及离子通道蛋白,它们对于溶酶体功能调控具有重要意义,溶酶体膜蛋白相关的新治疗方法或可弥补现有疗法的局限性。目的:溶酶体上存在多种相关膜蛋白及离子通道蛋白,它们与溶酶体功能的有十分密切的关系。现今已有许多溶酶体相关疾病与肿瘤的研究报道,而关于其溶酶体膜蛋白在肿瘤中的作用的研究还十分有限,特别是血液肿瘤,急性白血病与溶酶体膜蛋白之间的关系与其临床意义尚不明确。本研究旨在揭示溶酶体膜蛋白LAMP1、TPC1、TPC2在急性白血病细胞中的表达变化与其临床指征之间的关系,初步探讨三种膜蛋白在AL发生发展中的可能作用及临床意义,为进一步研究白血病的发病机制、诊断及治疗提供可靠的理论和实验依据。试验方法:1、利用western-blot、qRT-PCR检测各血液系统恶性肿瘤细胞系(HL-60、NB4、Raji、Ramos)中Lamp1、TPC1、TPC2的表达水平与CD34造血干细胞的区别。2、共收集骨髓标本85例,其中急性白血病患者74例(按FAB分型,M1 6例,M2 15例,M3 6例,M4 9例,M5 21例,B-ALL 17例),其中初治患者54例(急性髓细胞白血病44例、急性淋巴细胞白血病10例),难治复发患者20例(急性髓细胞白血病13例、急性淋巴细胞白血病7例),男女比例为5:4,年龄为16-77岁,中位年龄50岁。对照组为造血干细胞移植供者骨髓11例。3、分离骨髓单个核细胞并提取总RNA,逆转录成cDNA后,采用实时荧光定量PCR方法检测目的基因及相关内参的表达得其CT值,用公式2-△△Ct计算目的基因LAMP1、TPC1、TPC2的mRNA的表达量相对值。4、采用SPSS22.0统计软件分析,计量资料呈非正态分布,在各组间的差异分析采用Kruskal-Wallis检验及Mann-Whitney U检验,分类数据采用卡方检验,相关性分析采用有序logit回归。检验水准取ɑ=0.05,P膜蛋白及离子通道蛋白的表达水平差异与急性血液病病种、临床指征及预后等的关系。结果:1、急性髓系白血病细胞系HL-60、NB4及淋巴瘤细胞系Raji、Ramos中LAMP1、TPC1的表达水平明显高于正常造血干细胞(HSC),且NB4的LAMP1表达水平升高最为显著。TPC2表达水平在HSC与血液肿瘤细胞系间的比较中未发现显著差异。2、相比于正常供者骨髓单个核细胞(BMMNCs),AML及ALL患者骨髓单个核细胞(BMMNCs)中LAMP1、TPC1和TPC2的表达水平均明显增高。进一步比较CD34+的HSC和CD34+原代AL的细胞(患者骨髓CD34+细胞比例大于90%)中LAMP1、TPC1、TPC2的表达,结果发现相比于CD34+HSC,CD34+AML、CD34+ALL细胞中LAMP1、TPC1、TPC2表达水平亦明显上升。3、将急性白血病人分为初治组、难治复发组和正常人的对照组,结果分析表明,急性白血病患者(初治组,难治复发组)中LAMP1、TPC1、TPC2的表达水平相比于正常人均升高,差异有统计学意义(P膜蛋白在初治组与难治复发组间无统计学差异(P>0.05)。4、初治B-ALL患者的三种膜蛋白表达水平均高于正常人,差异有统计学意义(P膜蛋白在不同病种与亚型间比较未发现统计学差异(P>0.05)。5、LMAP1及TPC1的表达水平与AL患者外周血白细胞数呈正相关性,即患者外周血白细胞高时其LAMP1表达量随之增高(P膜蛋白与患者骨髓原始细胞比例、血红蛋白、血小板间均未发现明显相关性(P>0.05)。AL患者各膜蛋白表达水平与年龄性别之间无明显相关性(P>0.05)。6、LAMP1与TPC2被发现与初治病人一个疗程化疗后的缓解情况存在相关性,其中骨髓内LAMP1的表达量低的患者一个疗程化疗后易达到完全缓解(CR);骨髓内TPC2的表达量高的患者一个疗程化疗后易达到完全缓解

关键词：急性白血病溶酶体膜蛋白 LAMP1 TPC1 TPC2

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溶酶体膜蛋白Sidt2对血糖代谢的影响

皖南医学院学报 2015年第6期34卷 518-521页

作者：王李卓章尧余翠熊钱颖谭凤彪蒋雪陆晓华夏礼斌陆美琴陈月平张斌华凌烈峰高家林皖南医学院生物化学教研室安徽芜湖241002 皖南医学院活性生物大分子研究安徽省重点实验室安徽芜湖241002 皖南医学院第一附属医院弋矶山医院内分泌科安徽芜湖241001 皖南医学院机能实验中心安徽芜湖241002

目的:通过模式动物研究溶酶体膜蛋白Sidt2与糖代谢的关系。方法:利用Lox P-Flox-Lox P系统,通过基因重组及打靶技术获得Sidt2剔除小鼠模型。检测成年小鼠的空腹血糖及葡萄糖耐量,评估Sidt2基因剔除对小鼠糖代谢的影响。同时通过HE染色观... 详细信息

目的:通过模式动物研究溶酶体膜蛋白Sidt2与糖代谢的关系。方法:利用Lox P-Flox-Lox P系统,通过基因重组及打靶技术获得Sidt2剔除小鼠模型。检测成年小鼠的空腹血糖及葡萄糖耐量,评估Sidt2基因剔除对小鼠糖代谢的影响。同时通过HE染色观察Sidt2-/-小鼠胰岛形态结构改变。结果:通过对Sidt2剔除模型小鼠的Sidt2 mRNA及蛋白水平鉴定,确定Sidt2基因剔除小鼠模型成功构建。对小鼠末梢血糖检测发现,Sidt2-/-成年小鼠表现出空腹血糖增高及糖耐量受损的糖尿病表现。对Sidt2-/-小鼠胰岛形态检测发现,其胰岛出现结构紊乱,胰岛空泡变性及部分细胞出现肥大等病理改变。结论:溶酶体膜蛋白Sidt2与糖代谢密切相关。

关键词：溶酶体膜蛋白 Sidt2 糖代谢糖尿病

葛根素对不稳定型心绞痛患者血小板颗粒膜蛋白、溶酶体膜蛋白及血浆纤溶酶原激活物抑制物和C-反应蛋白的影响

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中医学报 2015年第12期30卷 1818-1820页

作者：吕松林南阳市第二人民医院河南南阳473012

观察葛根素对不稳定型心绞痛患者血小板颗粒膜蛋白(CD63)、溶酶体膜蛋白(CD62P)、血浆纤溶酶原激活物抑制物(plasma plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)和C-反应蛋白(C-Reactive Protein,CRP)的影响。方法:将60例不稳定型心绞痛... 详细信息

观察葛根素对不稳定型心绞痛患者血小板颗粒膜蛋白(CD63)、溶酶体膜蛋白(CD62P)、血浆纤溶酶原激活物抑制物(plasma plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)和C-反应蛋白(C-Reactive Protein,CRP)的影响。方法:将60例不稳定型心绞痛患者随机分为治疗组和对照组,每组30例,治疗组采用葛根素治疗,对照组采用力抗栓治疗,经过4周连续治疗后,统计两组患者血小板CD63、CD62P、血浆PAI-1、C-RP的水平,并行统计学分析。结果:连续治疗4周后,两组患者观察指标均有显著改善,但治疗组患者各指标的改善幅度明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在不稳定型心绞痛发生及发展过程中,血小板的活化、纤溶的机制异常的炎症反应物起着十分重要作用,而在抗血小板活化、改善纤溶活性及减轻炎症反应方面,葛根素具有十分突出的作用。本次实验证实:草根素治疗不稳定型心绞痛疗效显著。

关键词：不稳定型心绞痛葛根素力抗栓血小板颗粒膜蛋白溶酶体膜蛋白血浆纤溶酶原激活物抑制物 C-反应蛋白

血小板溶酶体膜蛋白血小板颗粒膜蛋白对进展性脑梗死早期诊断的作用

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中国药物与临床 2012年第2期12卷 175-176页

作者：陈智玲马静萍山西医科大学第一医院神经内科太原030001

本研究旨在通过流式细胞仪对血小板溶酶体膜蛋白（CD62P）、血小板颗粒膜蛋白（CD63）的测定为临床提供一个进展性脑梗死的早期诊断的客观参考值。1资料和方法1.1临床资料：选择2006年3月至12月本院神经内科30-80岁脑梗死患者103例。

关键词：血小板颗粒膜蛋白溶酶体膜蛋白进展性脑梗死早期诊断临床资料流式细胞仪脑梗死患者神经内科

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儿童严重脓毒症溶酶体膜蛋白分子变化及意义

中国妇幼健康研究 2018年第1期29卷 76-78页

作者：常海霞张丽波张中馥河北省儿童医院急诊科河北石家庄050031 河北省军区门诊部内科河北石家庄050081

目的探讨儿童严重脓毒症溶酶体膜蛋白分子水平的变化及其临床意义。方法选取河北省儿童医院自2015年3月至2016年3月收治的小儿脓毒症患儿90例,按照病情严重程度分为一般脓毒症组和严重脓毒症组,每组各45例,另选择健康体检儿童40例作为... 详细信息

目的探讨儿童严重脓毒症溶酶体膜蛋白分子水平的变化及其临床意义。方法选取河北省儿童医院自2015年3月至2016年3月收治的小儿脓毒症患儿90例,按照病情严重程度分为一般脓毒症组和严重脓毒症组,每组各45例,另选择健康体检儿童40例作为对照组。采用流式细胞术对小儿外周血溶酶体膜蛋白分子水平进行检测,采用全自动血球分析仪对血小板(PLT)的参数进行测量,并对结果进行分析。结果一般脓毒症组、严重脓毒症组与对照组比较外周血CD63水平和PLT水平差异均具有统计学意义(F值分别为7.021、5.362,均P溶酶体膜蛋白分子在儿童严重脓毒症中具有较高的水平,促进了PLT参数水平的降低,可能加重了脓毒症的病情。

关键词：儿童严重脓毒症溶酶体膜蛋白血小板计数临床意义

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正常大鼠肾脏细胞溶酶体膜的构成蛋白

中国组织化学与细胞化学杂志 1992年第1期1卷 85-87,143页

作者：安劬李曼黄敏温冰四川省计划生育科研所

溶酶体是细胞内对其吞噬之物质溶解及消化之主要场所,同时也是细胞自噬作用的主要细胞器。为了进一步了解此细胞器的功能与结构,我们采用免疫荧光标记法,通过5种针对大鼠肝细胞溶酶体膜蛋白的特异性单克隆抗体,对大鼠正常肾脏细胞溶酶... 详细信息

溶酶体是细胞内对其吞噬之物质溶解及消化之主要场所,同时也是细胞自噬作用的主要细胞器。为了进一步了解此细胞器的功能与结构,我们采用免疫荧光标记法,通过5种针对大鼠肝细胞溶酶体膜蛋白的特异性单克隆抗体,对大鼠正常肾脏细胞溶酶体膜蛋白进行了标记,并通过NH_4Cl溶液对溶酶体作了膜膨胀处理,结果显示:(1)细胞内溶酶体膜蛋白是由多种蛋白所构成,其各种蛋白的含量是不同的;(2)所有溶酶体膜蛋白均表达于该细胞器之表面;(3)NH_4Cl溶液能有效地使溶酶体扩张,这将有和于进一步研究溶酶体的结构。

关键词：肾脏细胞溶酶体溶酶体膜蛋白

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溶酶体与神经退行性疾病

生物学杂志 2022年第1期39卷 1-10页

作者：曲莉丽仓春蕾中国科学技术大学基础医学院合肥230026

溶酶体是真核细胞内发挥降解功能的主要细胞器,它的功能异常与多种疾病密切相关。综述溶酶体与神经退行性疾病相关的研究进展,并重点从溶酶体酶、溶酶体pH调控和V-ATPase、溶酶体膜蛋白、溶酶体的细胞内定位等方面阐述溶酶体功能异常与... 详细信息

溶酶体是真核细胞内发挥降解功能的主要细胞器,它的功能异常与多种疾病密切相关。综述溶酶体与神经退行性疾病相关的研究进展,并重点从溶酶体酶、溶酶体pH调控和V-ATPase、溶酶体膜蛋白、溶酶体的细胞内定位等方面阐述溶酶体功能异常与神经退行性疾病的关系,为理解神经退行性疾病的机制提供新的视角,同时展望以溶酶体为靶点进行神经退行性疾病治疗和药物开发的广阔前景。

关键词：溶酶体神经退行性疾病溶酶体贮积症溶酶体酶溶酶体膜蛋白