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沙蜇毒素的提取及溶血活性分析

国际生物医学工程杂志 2009年第3期32卷 153-156页

作者：郭容周玉婷张凤杰朱启忠山东大学威海分校海洋学院威海264209

目的血栓形成是引发严重心脑血管疾病的病理基础，溶栓药物可消除血栓并减轻并发症。本研究从生物组织中提取分离的具有溶血活性的物质，有望成为有效的溶栓制剂，为血栓的治疗提供新方法。方法通过海水自溶、离心、低温研磨等方法从沙... 详细信息

目的血栓形成是引发严重心脑血管疾病的病理基础，溶栓药物可消除血栓并减轻并发症。本研究从生物组织中提取分离的具有溶血活性的物质，有望成为有效的溶栓制剂，为血栓的治疗提供新方法。方法通过海水自溶、离心、低温研磨等方法从沙蜇触手的刺丝囊中提取沙蜇毒素，对沙蜇毒素提取液进行分离纯化，测定了毒素的溶血活性并绘制溶血曲线；深入研究了温度、介质的pH值对其溶血潘陛的影响。结果研究证实：沙蛰毒素具有很强的溶血活性，且对温度敏感，其活性受pH变化影响很大。粗毒素提取液分离出性能完全不同的2个组分，其中仅第一组分有溶血活性，第二组分未检测到溶血活性。结论研究结果提示沙蛰毒素有望用于改善生物材料的抗血栓性能。

关键词：沙蜇刺细胞毒素溶血活性提取纯化

副溶血弧菌tdh基因在毕赤酵母中的表达及溶血活性检测

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海洋科学 2010年第9期34卷 10-14页

作者：赵永刚战文斌萨仁高娃王君玮王志亮中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室山东青岛266003 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 中国科学院海洋研究所海洋地质与环境重点实验室山东青岛266071

通过PCR技术从副溶血弧菌(Vibrio Parahaemolyticus,VP)基因组DNA上扩增耐热溶血素基因tdh,双酶切后定向插入到酵母表达载体pPICZaA中,构建重组表达质粒pPICZaA-tdh,经限制性内切酶SacI线性化后电转化毕赤酵母(Pichia pastoris,P.pastoris)GS115,经PCR和测序鉴定耐热溶血素基因成功整合到毕赤酵母的基因组中。在甲醇诱导下进行tdh的表达,SDS-PAGE分析证明重组TDH(thermostable direct hemolysin,TDH)的分子质量约为23ku,经Western blotting鉴定VP抗体能与表达的TDH发生特异反应,说明tdh基因在毕赤酵母中的表达是准确的。溶血实验证明了表达的TDH具有溶血活性。本研究首次应用毕赤酵母表达耐热溶血素基因tdh,在培养基中获得分泌表达的耐热溶血素,为研究tdh基因的功能奠定了基础。

关键词：耐热溶血素分泌表达毕赤酵母溶血活性

沙蜇刺丝囊毒素的分离提取及其溶血活性稳定性研究

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临床皮肤科杂志 2018年第2期47卷 68-71页

作者：江水陈官芝张鲲鹏葛红芬潘敏郁博许璐璐青岛大学附属医院皮肤科山东青岛266000 青岛大学附属医院医院办公室山东青岛266000

目的:研究沙蜇刺丝囊毒素的提取及其溶血活性稳定性的影响因素。方法 :通过自溶法制备沙蜇刺丝囊细胞,利用超声波破碎细胞提取毒素,再将毒素置于不同温度、不同pH值及不同浓度的乙二胺四乙酸(EDTA)、还原型谷胱甘肽(GSH)及二价金属离子... 详细信息

目的:研究沙蜇刺丝囊毒素的提取及其溶血活性稳定性的影响因素。方法 :通过自溶法制备沙蜇刺丝囊细胞,利用超声波破碎细胞提取毒素,再将毒素置于不同温度、不同pH值及不同浓度的乙二胺四乙酸(EDTA)、还原型谷胱甘肽(GSH)及二价金属离子溶液中孵育后,加入到人血红细胞溶血反应体系中,测定上述理化因素对沙蜇刺丝囊毒素溶血活性稳定性的影响。结果:成功提取到沙蜇刺丝囊毒素,其半溶血率(HU_(50))约为26.38 mg/L;毒素的溶血活性受温度影响较大,37℃时溶血活性最强;溶血活性在弱酸性条件下较稳定,pH4.8时毒素的溶血活性最大;EDTA和GSH对毒素溶血活性具有稳定作用,而二价金属离子Ca^(2+)、Mn^(2+)、Cu^(2+)、Mg^(2+)、Ba^(2+)和Zn^(2+)能不同程度的抑制其活性。结论:沙蜇刺丝囊毒素具有溶血活性,其活性的稳定性受温度、pH值、EDTA、GSH及二价金属离子影响。

关键词：沙蜇刺丝囊毒素溶血活性稳定性

理化因子对集胞藻PCC6803溶血素溶血活性的影响

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环境科学研究 2007年第4期20卷 139-143页

作者：赵媛媛王蔚刘云章汝少国中国海洋大学海洋生物系山东青岛266003

研究了保存温度以及添加稳定剂、氧化剂、还原剂、螯合剂和金属离子对集胞藻（Synechocystis sp. PCC6803）野生型菌株产生的溶血素的溶血活性的影响.结果表明,该溶血素在提取初始仅具有较低的溶血活性,但在提取3～6 d后,溶血活性急剧升... 详细信息

研究了保存温度以及添加稳定剂、氧化剂、还原剂、螯合剂和金属离子对集胞藻（Synechocystis sp. PCC6803）野生型菌株产生的溶血素的溶血活性的影响.结果表明,该溶血素在提取初始仅具有较低的溶血活性,但在提取3～6 d后,溶血活性急剧升高,之后随保存时间延长逐渐降低.-20℃低温保存有利于该溶血素活性的维持.添加半胱氨酸盐酸盐、牛血清白蛋白和血红蛋白都能提高其溶血活性,可以作为该溶血素的稳定剂;氧化剂H2O2能显著提高其溶血活性,而还原剂β-巯基乙醇、二硫苏糖醇显著抑制其溶血活性,说明该溶血素为非巯基依赖型溶血素.金属离子Ca^2＋,Co^2＋,Fe^3＋,Ni^2＋,Cu^2＋,Mn62＋和Mg^2＋均会抑制其溶血活性,仅Zn2＋能增加其溶血活性,金属螯合剂EDTA也能增强其溶血活性.

关键词：集胞藻PCC6803 溶血素溶血活性

金黄色葡萄球菌Hla基因的原核表达及其溶血活性鉴定

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动物医学进展 2013年第3期34卷 21-24页

作者：许君艳姚运亮李杰李前瑞田婷婷陈德坤西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

α毒素(Hla)作为重要的毒力因子,在金黄色葡萄球菌感染宿主的过程中具有破坏宿主细胞免疫屏障的效应。通过基因工程手段对金黄色葡萄球菌Hla基因进行克隆与原核表达,分离纯化得到重组Hla融合蛋白,对其进行SDS-PAGE和Western blot检测,... 详细信息

α毒素(Hla)作为重要的毒力因子,在金黄色葡萄球菌感染宿主的过程中具有破坏宿主细胞免疫屏障的效应。通过基因工程手段对金黄色葡萄球菌Hla基因进行克隆与原核表达,分离纯化得到重组Hla融合蛋白,对其进行SDS-PAGE和Western blot检测,并检测其溶血活性。结果显示,重组Hla融合蛋白的大小约为53ku,与预期的蛋白大小一致,纯化后蛋白浓度为0.70mg/mL;重组Hla融合蛋白对山羊血红细胞有良好的溶血活性,溶血指数为92.84%±3.73%。本研究获得有活性的重组Hla融合蛋白,为下一步研究α毒素的作用机制和防御金黄色葡萄球菌的感染提供了有价值的参考资料。

关键词：金黄色葡萄球菌 α毒素原核表达溶血活性

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一管法测定补体C1溶血活性

临床检验杂志 1993年第1期11卷 20-22页

作者：许桦南京铁道医学院附属医院临床免疫室 210009

本文用400.0g/L 聚乙二醇沉淀正常人新鲜血清,制备出C1缺损血清(C_1D),用一管法测定C1溶血活性。经免疫双向扩散等实验证实C_1D 血清仅去除C1,补体其它成份基本不受影响,因而能特异性测定C1溶血活性。经方阵滴定,待检血清与C_1D 最适稀... 详细信息

本文用400.0g/L 聚乙二醇沉淀正常人新鲜血清,制备出C1缺损血清(C_1D),用一管法测定C1溶血活性。经免疫双向扩散等实验证实C_1D 血清仅去除C1,补体其它成份基本不受影响,因而能特异性测定C1溶血活性。经方阵滴定,待检血清与C_1D 最适稀释度为1∶20;本法批内CV=5.5%;与多管法测定结果比较,r=0.9155,p溶血活性,其结果明显低于正常人。本法简便,快速,适于一般实验室应用。

关键词：补体C1 C1缺损血清溶血活性

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一种定量测定副溶血弧菌溶血活性的方法

军事医学 2013年第4期37卷 307-310页

作者：姜汉雯王开功张义全黄倩胡小许杨瑞馥周冬生贵州大学动物疫病研究所动物科学学院贵阳550025 北京微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立定量评价副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)溶血活性的实验方法。方法以大耳白兔红细胞为靶细胞,野生型VP标准株RIMD2210633(J5421)、opaR敲除株、toxR敲除株的菌体细胞为效应细胞,通过调节感染菌量及孵育时间来优化条件... 详细信息

目的建立定量评价副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)溶血活性的实验方法。方法以大耳白兔红细胞为靶细胞,野生型VP标准株RIMD2210633(J5421)、opaR敲除株、toxR敲除株的菌体细胞为效应细胞,通过调节感染菌量及孵育时间来优化条件,从而建立溶血活性评价模型。结果与结论 VP最佳溶血活性条件为红细胞终浓度5%条件下,用约3×106CFU的菌量感染靶细胞,37℃孵育2.5 h。opaR负调控VP的溶血活性,而ToxR正调控VP的溶血活性。本研究成功建立了定量测定VP溶血活性的方法。

关键词：副溶血弧菌溶血活性 opaR toxR

发形霞水母毒素分离产物溶血活性的比较及其影响因素分析

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第二军医大学学报 2008年第1期29卷 83-86页

作者：聂菲肖良张静贺茜樊军文李玥张黎明第二军医大学海军医学系防化医学教研室上海200433 第二军医大学药学院药理学教研室上海200433 第二军医大学长海医院妇产科上海200433

目的:分离发形霞水母刺丝囊毒素(nematocyst venom,NV)与无刺丝囊触手提取物(tentacle-only extract,TOE),比较二者的溶血活性,分析其影响因素。方法:采用自溶、离心方法分离发形霞水母NV和TOE,比较二者的溶血活性,观察提取物浓度、温度... 详细信息

目的:分离发形霞水母刺丝囊毒素(nematocyst venom,NV)与无刺丝囊触手提取物(tentacle-only extract,TOE),比较二者的溶血活性,分析其影响因素。方法:采用自溶、离心方法分离发形霞水母NV和TOE,比较二者的溶血活性,观察提取物浓度、温度和pH值等因素对二者溶血活性的影响。结果:成功分离到NV与TOE;二者浓度相关溶血活性曲线均呈"S"形,溶血分数50%时所对应的质量浓度(HU50)分别为8μg/ml和67μg/ml,前者溶血活性强度约为后者的8.4倍;温度对二者溶血活性影响较大,最大溶血活性都出现在40℃;pH值对二者溶血活性也有影响,在pH8处二者都具有最大的溶血活性,但后者较前者更为敏感。结论:发形霞水母毒素分离产物NV和TOE均具有溶血活性,且前者强于后者;二者溶血活性受浓度、温度和pH值的影响。

关键词：发形霞水母刺丝囊毒素无刺丝囊触手提取物溶血活性

菜豆皂苷溶血活性与品种的关系及稳定性的研究

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食品工业科技 2009年第12期30卷 169-171,175页

作者：李笑梅张娜哈尔滨商业大学食品工程学院黑龙江哈尔滨150076

以7个品种菜豆为原料,采用超声-乙醇提取、大孔树脂纯化菜豆皂苷。以溶血反应程度及皂苷含量为指标,评价菜豆品种与溶血活性的关系及影响溶血稳定性的因素水平。结果表明,菜豆品种的皂苷含量由高到低依次为:黄金勾、大马掌、豇豆、几豆... 详细信息

以7个品种菜豆为原料,采用超声-乙醇提取、大孔树脂纯化菜豆皂苷。以溶血反应程度及皂苷含量为指标,评价菜豆品种与溶血活性的关系及影响溶血稳定性的因素水平。结果表明,菜豆品种的皂苷含量由高到低依次为:黄金勾、大马掌、豇豆、几豆、家雀蛋、将军、架豆王。加热温度、加热时间、pH、Fe3+浓度对皂苷溶血稳定性和含量均有不同程度的影响,加热时间对其影响最大,加热到100℃仍具有明显溶血活性,但煮沸至20min后基本失去溶血活性。

关键词：莱豆皂苷溶血活性品种稳定性