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中国南海四种凯伦藻种间作用与溶血活性初步研究

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海洋与湖沼 2020年第6期51卷 1402-1411页

作者：林雅柔岑竞仪王建艳梁芊艳吕颂辉暨南大学生命科学技术学院赤潮与海洋生物学研究中心广州510632 北京自然博物馆科学研究部北京100010

凯伦藻属种类广布于世界沿海海域甚至大洋,属广域分布种。该属下多个种类曾在全球近岸海域暴发有毒有害赤潮,造成巨大的经济损失,其中不乏由多种凯伦藻同时混合形成赤潮的现象存在。在2016年香港海域的一次凯伦藻赤潮中,本团队从赤潮海... 详细信息

凯伦藻属种类广布于世界沿海海域甚至大洋,属广域分布种。该属下多个种类曾在全球近岸海域暴发有毒有害赤潮,造成巨大的经济损失,其中不乏由多种凯伦藻同时混合形成赤潮的现象存在。在2016年香港海域的一次凯伦藻赤潮中,本团队从赤潮海水中分离出了米氏凯伦藻(Karenia mikimotoi)、长沟凯伦藻(K.longicanalis)、鞍形凯伦藻(K.selliformis)和蝶形凯伦藻(K.papilionacea)4种凯伦藻。本研究以此4种凯伦藻进行单种藻及多种藻混合样品的培养和溶血活性研究,以探究复合型凯伦藻的种间作用及溶血活性。结果表明,4种凯伦藻间存在种间相互作用,长沟凯伦藻会促进蝶形凯伦藻的生长,鞍形凯伦藻和米氏凯伦藻会抑制长沟凯伦藻生长。4种凯伦藻对兔血红细胞均有明显溶血活性,长沟凯伦藻溶血活性最强为46.36%±1.02%。每种凯伦藻与其他凯伦藻混合培养3天后,对兔血的溶血活性会明显增加,其中含4种凯伦藻的混合组溶血活性最高,为57.05%±1.13%。

关键词：蝶形凯伦藻鞍形凯伦藻长沟凯伦藻米氏凯伦藻溶血活性有害赤潮

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创伤弧菌天然溶血素的制备及其活性研究

昆明理工大学学报（自然科学版） 2023年第3期48卷 136-144页

作者：王亚茹凤梓涵李世青徐健皓袁兵王景林刘丽袁媛昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500 军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国人民解放军第96110部队医院疾病预防控制科宁夏银川750021

创伤弧菌溶血素(V.Vulnificus Hemolysin, VVH)是创伤弧菌重要的致病因子之一,但目前国内外重组表达的VVH多为包涵体形式.本研究建立了创伤弧菌培养上清中分泌型溶血素的纯化制备方法,并评价了胆固醇及雌二醇对天然VVH溶血活性的影响,... 详细信息

创伤弧菌溶血素(V.Vulnificus Hemolysin, VVH)是创伤弧菌重要的致病因子之一,但目前国内外重组表达的VVH多为包涵体形式.本研究建立了创伤弧菌培养上清中分泌型溶血素的纯化制备方法,并评价了胆固醇及雌二醇对天然VVH溶血活性的影响,为进一步深入研究VVH蛋白的生物学功能及致病机制奠定了基础.研究采用硫酸铵沉淀法结合脱盐柱、阴离子层析及疏水相互作用纯化制备出天然VVH,用溶血试验验证了蛋白活性,评价了胆固醇、雌二醇对创伤弧菌YJ016培养上清以及天然VVH溶血活性的影响.结果显示:从创伤弧菌培养上清中纯化制备的天然VVH纯度较高,其具有良好的溶血活性(2μg/HU),100μg/mL的胆固醇或雌二醇均能有效抑制VVH的溶血活性.本研究成功建立了制备天然VVH的有效方法,为创伤弧菌重症感染的致病机制、防控与治疗研究奠定了基础,同时对其他致病弧菌溶血素的制备也具有借鉴意义.

关键词： VVH 天然蛋白纯化溶血活性胆固醇雌二醇

环境和营养因子对抑食金球藻（Aureococcus anophagefferens）生长及溶血活性的影响

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环境和营养因子对抑食金球藻（Aureococcus anophagefferens）生...

作者：贺凡暨南大学

学位级别：硕士

自1985年夏季在美国东北部海岸及大西洋中部海岸纳拉甘塞特湾(Narragansett Bay)和罗德岛海域(Rhode Island)爆发由抑食金球藻引发的褐潮以来,该类褐潮在事发及邻近海域呈现连续、高频和大面积发生的特点,给当地海域环境和海产养殖带来... 详细信息

自1985年夏季在美国东北部海岸及大西洋中部海岸纳拉甘塞特湾(Narragansett Bay)和罗德岛海域(Rhode Island)爆发由抑食金球藻引发的褐潮以来,该类褐潮在事发及邻近海域呈现连续、高频和大面积发生的特点,给当地海域环境和海产养殖带来毁灭性打击。本文以抑食金球藻为研究对象,研究环境因子(光照、温度、盐度)和营养盐(金属离子)对抑食金球藻的生长及溶血活性的影响,比较氮、磷和铁限制条件下抑食金球藻的脂肪酸成分及相对含量的变化,通过调控光照、温度、盐度条件,分析抑食金球藻叶绿素荧光特征和溶血活性的变化。主要结论如下:低光照强度对抑食金球藻的生长和溶血活性有明显的促进作用。在光照强度60～180μmol·m·s范围内,高光照下抑食金球藻单位体积和单位细胞的溶血活性约为低光照时的50%,提示低光照强度有利于抑食金球藻的生长和增强溶血活性。在温度为15～25℃范围内,抑食金球藻均能正常生长,温度20℃时,细胞密度最大,是抑食金球藻的最佳生长温度。在上述温度范围内,温度对抑食金球藻溶血活性没有明显影响。在盐度20～40范围内,均表现出不同程度的增长。抑食金球藻的最佳生长盐度为25～35,而在盐度30～35生长时单位细胞溶血活性明显高于其它盐度组。温度、盐度和光照强度对抑食金球藻的生长和溶血活性的调控具有一致性,表明抑食金球藻在最适生长的环境条件下,其溶血活性也增强。铜离子浓度对抑食金球藻的生长和单位体积的溶血活性具显著影响。铜离子浓度为1×10mol·L时,抑食金球藻生长密度达到最大。在低浓度下,抑食金球藻对数末期细胞密度较低。高浓度的铜离子对抑食金球藻生长具有促进作用。铜离子浓度在1×10mol·L时,抑食金球藻单位体积溶血活性最高,而单位细胞间的溶血活性没有差异,表明生长与溶血活性的一致性。抑食金球藻可以耐受缺铁离子的环境,对铁离子存在较广的适应性。抑食金球藻在0～1×10 mol·L铁离子浓度的培养基中均能正常生长,并保持同步一致的生长周期和最大细胞密度。尽管铁离子对抑食金球藻的生长无明显影响,但高浓度的铁离子可增加单位体积抑食金球藻细胞的溶血活性。其单位体积的溶血活性存在显著性差异,而单位细胞的溶血活性无明显差异。在锰离子浓度为1×10 mol·L、1×10mol·L、1×10 mol·L的条件下培养,抑食金球藻均能正常生长,在此范围内抑食金球藻的生长不受锰离子浓度影响。在不同锰离子浓度下,抑食金球藻的溶血活性存在显著性差异,高浓度的锰离子浓度对抑食金球藻的溶血活性物质的合成有促进作用。抑食金球藻含有8种不饱和脂肪酸,主要成分为十八碳四烯酸、二十二碳六烯酸(DHA)、亚麻酸和二十碳五烯酸(EPA)。在氮、磷和铁缺乏时,检测出藻细胞含有高比例的饱和脂肪酸棕榈酸。在铁、磷限制时,二十碳五烯酸(EPA)含量占比明显降低,但其单位细胞的溶血活性不受影响,说明EPA可能与抑食金球藻的溶血活性无关。光照强度对抑食金球藻的光合荧光参数Fv/Fm、Yield和ETR值存在显著的影响,在60～180μmol·m·s光强时,低光照强度有利于抑食金球藻的光合速率和增强藻细胞溶血活性。在温度15～25℃时,温度对于抑食金球藻的Fv/Fm、Yield和ETR值均没有明显变化,表明在该温度范围内抑食金球藻均可进行正常的光合作用。盐度在20～40内,抑食金球藻的Fv/Fm、Yield和ETR会发生明显变化,高盐度会降低抑食金球藻的光合速率。叶绿素荧光参数与溶血活性比对分析表明,抑食金球藻的溶血活性与光合作用潜力和效率存在一致性。综合上述实验结果可以发现,抑食金球藻对光照强度、盐度、温度和微量金属元素存在较广泛的适应性,与其它赤潮藻相比,低温、低光强和较高盐度和微量金属元素(铁、铜和锰离子)更适于其生长。抑食金球藻通常在最适生长条件下光合潜能和效率最大,其单位体积或单位细胞的溶血活性增强。

关键词：抑食金球藻溶血活性环境因素脂肪酸叶绿素荧光

金黄色葡萄球菌α-毒素溶血活性测定方法优化及初步应用

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国际生物制品学杂志 2022年第1期45卷 41-46页

作者：林海涛郭京蓉周继唯袁玉兰国药中生生物技术研究院有限公司金葡课题组北京101111

目的优化金黄色葡萄球菌α-毒素(α-toxin,AT)溶血活性测定方法,用于无毒突变AT(non-toxic mutant AT,mAT)特异性血清抗体体外功能性评价和中和抗体滴度测定。方法使用AT裂解兔红细胞,释放血红蛋白,通过分光光度法检测溶血活性,并对该... 详细信息

目的优化金黄色葡萄球菌α-毒素(α-toxin,AT)溶血活性测定方法,用于无毒突变AT(non-toxic mutant AT,mAT)特异性血清抗体体外功能性评价和中和抗体滴度测定。方法使用AT裂解兔红细胞,释放血红蛋白,通过分光光度法检测溶血活性,并对该方法中的孵育时间、兔红细胞终浓度、Triton X-100浓度进行优化,同时验证方法重复性。对mAT特异性血清抗体进行体外功能性评价,绘制AT溶血曲线,计算AT溶血率50%时的浓度,检测血清半数中和抗体滴度。结果AT溶血活性最适检测条件为:孵育时间90 min,兔红细胞终浓度为2%(V/V),Triton X-100浓度为0.25%。此条件下,分别加入mAT和含mAT的多价抗原血清抗体,对AT溶血活性均起到明显的抑制作用。AT溶血率50%时浓度为1.75μg/ml,变异系数3.75%。mAT和含mAT的多价抗原血清抗体的半数中和抗体滴度初步结果均为1∶64。结论优化的AT溶血活性检测方法重复性良好,且检测时间较短,可用于特异性血清抗体体外功能性评价和中和抗体滴度测定。

关键词：金黄色葡萄球菌 α-毒素溶血活性抗体,中和

沙蜇刺丝囊毒素的分离提取及其溶血活性稳定性研究

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临床皮肤科杂志 2018年第2期47卷 68-71页

作者：江水陈官芝张鲲鹏葛红芬潘敏郁博许璐璐青岛大学附属医院皮肤科山东青岛266000 青岛大学附属医院医院办公室山东青岛266000

目的:研究沙蜇刺丝囊毒素的提取及其溶血活性稳定性的影响因素。方法 :通过自溶法制备沙蜇刺丝囊细胞,利用超声波破碎细胞提取毒素,再将毒素置于不同温度、不同pH值及不同浓度的乙二胺四乙酸(EDTA)、还原型谷胱甘肽(GSH)及二价金属离子... 详细信息

目的:研究沙蜇刺丝囊毒素的提取及其溶血活性稳定性的影响因素。方法 :通过自溶法制备沙蜇刺丝囊细胞,利用超声波破碎细胞提取毒素,再将毒素置于不同温度、不同pH值及不同浓度的乙二胺四乙酸(EDTA)、还原型谷胱甘肽(GSH)及二价金属离子溶液中孵育后,加入到人血红细胞溶血反应体系中,测定上述理化因素对沙蜇刺丝囊毒素溶血活性稳定性的影响。结果:成功提取到沙蜇刺丝囊毒素,其半溶血率(HU_(50))约为26.38 mg/L;毒素的溶血活性受温度影响较大,37℃时溶血活性最强;溶血活性在弱酸性条件下较稳定,pH4.8时毒素的溶血活性最大;EDTA和GSH对毒素溶血活性具有稳定作用,而二价金属离子Ca^(2+)、Mn^(2+)、Cu^(2+)、Mg^(2+)、Ba^(2+)和Zn^(2+)能不同程度的抑制其活性。结论:沙蜇刺丝囊毒素具有溶血活性,其活性的稳定性受温度、pH值、EDTA、GSH及二价金属离子影响。

关键词：沙蜇刺丝囊毒素溶血活性稳定性

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海洋卡盾藻(香港株)溶血活性特征研究

环境科学 2011年第10期32卷 2920-2925页

作者：江涛王锐吴霓江天久暨南大学赤潮与水环境研究中心广州510632 华南师范大学生命科学学院广州510630

研究了海洋卡盾藻香港株(Chattonella marina,Hong Kong strain,CMHK)在不同生长阶段和营养条件下的溶血活性特征.根据海洋卡盾藻的生长曲线,分别收集对数生长期、稳定期、衰亡期的藻细胞进行溶血毒性的测定;采用不同营养元素结构的培... 详细信息

研究了海洋卡盾藻香港株(Chattonella marina,Hong Kong strain,CMHK)在不同生长阶段和营养条件下的溶血活性特征.根据海洋卡盾藻的生长曲线,分别收集对数生长期、稳定期、衰亡期的藻细胞进行溶血毒性的测定;采用不同营养元素结构的培养基对CMHK进行培养,对不同培养条件下的藻细胞进行溶血活性的测定;采用对数生长初期(5 d)、对数期末期(13 d)、稳定期(15 d)和衰亡期(17 d)的CMHK藻液对卤虫进行急性毒性试验.结果表明,培养5 d时对数生长初期单个藻细胞的溶血活性最强,达到1.80×10-7HU/cell,此后随培养时间的增加而逐渐降低;不同生长时期CMHK单位体积藻细胞的溶血活性与生长曲线基本吻合,对数生长末期最强,达到5.32 HU/L;Fe限制虽然能够显著抑制藻细胞的生长,但藻细胞的溶血活性明显增强,单个藻细胞的溶血活性达到8.37×10-7 HU/cell,为正常培养条件下溶血活性值(1.33×10-7 HU/cell)的6.3倍.另外,N限制可使藻细胞的溶血活性值达到6.67×10-7HU/cell;Mn和P限制也能够导致藻细胞溶血活性增强.不同生长期的CMHK对卤虫的毒性试验结果显示,对数生长末期的CMHK藻液对卤虫的毒性作用最强,卤虫暴露在藻密度为4.0×104cells/mL的藻液48 h后,死亡率达到77%,而对数生长初期藻液毒性最弱,48 h卤虫死亡率为20%.

关键词：海洋卡盾藻溶血毒素溶血活性卤虫营养盐限制急性毒性试验

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旱莲草凝血和溶血活性成分的研究

天然产物研究与开发 2014年第8期26卷 1161-1164页

作者：陈锐许群陈昱李汉全杨建远过七根张炳火九江学院生命科学学院九江332000

研究旱莲草中的凝血和溶血活性物质,为旱莲草的开发和利用提供依据。分离到6个化合物,分别为eclalbasaponinⅠ(1)、eclalbasaponinⅣ(2)、eclalbasaponinⅤ(3)、3,4,5-trihydroxy-6-(2-hydroxy-3-(palmitoyloxy)propoxy)-etrahydro-2H-pyran-yl)methanesul-fonic acid(4)、蟛蜞菊内酯(5)和异去甲蟛蜞菊内酯(6),其中化合物4首次从旱莲草中分离到。体外溶血活性实验表明,化合物2~4具有很强溶血活性,在浓度为0.6μg/mL时,对红细胞的溶解率分别达到(93.52±1.56)%、(82.55±2.72)%和(94.99±0.68)%。体外凝血活性研究表明,化合物5、6具有很强的凝血活性,它们既能直接使红细胞凝聚成团,也能通过先使纤维蛋白原转变为纤维蛋白,再通过纤维蛋白使红细胞凝聚成团。

关键词：旱莲草凝血活性溶血活性

溶藻弧菌溶血活性检测及溶血素基因、启动子区功能

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微生物学通报 2013年第7期40卷 1138-1144页

作者：苏婷罗鹏陈偿任春华胡超群中国科学院南海海洋研究所中国科学院海洋生物资源可持续利用重点实验室广东省应用海洋生物学重点实验室广东广州510301

【目的】研究溶藻弧菌的溶血现象,溶血素基因vah的分布及vah基因、vah启动子区对溶藻弧菌溶血活性的贡献。【方法】对46株分离自华南沿海水生动物体内和海水的溶藻弧菌环境株及溶藻弧菌标准株1.1587进行溶血实验;比较具有溶血活性的溶... 详细信息

【目的】研究溶藻弧菌的溶血现象,溶血素基因vah的分布及vah基因、vah启动子区对溶藻弧菌溶血活性的贡献。【方法】对46株分离自华南沿海水生动物体内和海水的溶藻弧菌环境株及溶藻弧菌标准株1.1587进行溶血实验;比较具有溶血活性的溶藻弧菌野生株ZJ051、vah基因大肠杆菌BL21重组表达株、vah缺失突变株和基因回补株间溶血能力的差异;检测vah基因在溶藻弧菌中的分布,比较溶血株与非溶血株vah基因及上游启动子区的序列差异。【结果】47.8%的溶藻弧菌菌株产生溶血活性,因此溶血现象普遍存在于溶藻弧菌环境株中;vah基因的表达产物具有溶血活性,vah基因缺失突变株不具有溶血活性,而vah基因回补株恢复溶血活性。vah基因普遍存在于溶藻弧菌中,且基因序列非常相似,氨基酸序列完全相同,然而不同菌株的启动子区第188?190碱基位点存在差异。【结论】溶藻弧菌vah基因是造成溶藻弧菌溶血的直接原因,但溶藻弧菌溶血能力的差异并非是由vah基因本身差异决定,极有可能与启动子区第188?190碱基位点相关。

关键词：溶藻弧菌溶血活性溶血素基因缺失突变

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旱莲皂苷的溶血活性及构效关系研究

江西师范大学学报（自然科学版） 2023年第6期47卷 594-598页

作者：刘怀叶向荣过七根张炳火九江学院附属医院江西九江300201 九江学院药学与生命科学学院江西九江332005

从旱莲草中分离到7个单体化合物,经波谱数据分析,鉴定为旱莲皂苷eclalbasaponinsⅠ~Ⅵ(缩写为E-Ⅰ~E-Ⅵ)和β-香树素,其中E-Ⅰ~E-Ⅴ有溶血活性,活性强弱依次为E-Ⅱ>E-Ⅳ>E-Ⅴ>E-Ⅰ>E-Ⅲ.构效关系分析结果表明:C-28位的游离羧基对旱莲皂... 详细信息

从旱莲草中分离到7个单体化合物,经波谱数据分析,鉴定为旱莲皂苷eclalbasaponinsⅠ~Ⅵ(缩写为E-Ⅰ~E-Ⅵ)和β-香树素,其中E-Ⅰ~E-Ⅴ有溶血活性,活性强弱依次为E-Ⅱ>E-Ⅳ>E-Ⅴ>E-Ⅰ>E-Ⅲ.构效关系分析结果表明:C-28位的游离羧基对旱莲皂苷的溶血活性强弱至关重要,C-3位葡萄糖基的数量或硫酸酯化对其溶血活性也有影响.

关键词：旱莲草旱莲皂苷溶血活性构效关系